兔心肌缺血再灌注损伤中内皮细胞功能变化与参麦复方的干预效应

背景:一氧化氮和内皮素是近年心肌缺血再灌注损伤研究的热点。中药在保护心肌缺血再灌注损伤中有其独特的作用。目的:观察兔心肌缺血再灌注损伤中内皮功能改变及参麦注射液的干预作用。设计:随机对照动物实验。单位:中国医科大学附属第一医院。材料:实验于2002-09/2003-01在中国医科大学实验动物部、基础医学院生化教研室、第二电镜室完成。健康雌性日本大耳白兔21只,体质量1.5～2.5kg;参麦注射液由雅安三九药业有限公司提供(010110)。方法:①分组:实验动物随机分3组,每组7只。假手术对照组:只穿线不结扎冠状动脉。心肌缺血再灌注模型组和心肌缺血再灌注 参麦注射液治疗组:冠状动脉左室支结扎40min后放开40min建立心肌缺血再灌注模型。②给药:心肌缺血再灌注模型组耳缘静脉注射生理盐水20mL(于左室支结扎前10min注射1/3量,再灌注时注射2/3量)。心肌缺血再灌注 参麦注射液治疗组,耳缘静脉注射参麦注射液(按1.5mL/kg,用生理盐水稀释至20mL),给药时间同心肌缺血再灌注模型组。③观察指标:于结扎前、缺血40min、再灌注40min取静脉血4mL,其中2mL分离血清采用硝酸还原酶法检测一氧化氮代谢产物含量;另2mL采用放免法检测血浆内皮素含量。于实验结束后,取心肌组织检测一氧化氮代谢产物、内皮素,采用黄嘌呤氧化酶法检测总超氧化物歧化酶活性,采用硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛含量。透射电镜观察心肌超微结构。主要观察指标:①结扎前、缺血40min、再灌注40min血清一氧化氮、血浆内皮素的含量。②心肌组织一氧化氮代谢产物、内皮素、丙二醛的含量和总超氧化物歧化酶活性。③心肌超微结构。结果:21只日本大耳白兔均进入结果分析。①血清一氧化氮代谢产物含量:缺血40min、再灌注40min心肌缺血再灌注模型组明显低于假手术对照组(P<0.01),心肌缺血再灌注 参麦注射液治疗组显著高于心肌缺血再灌注模型组(P<0.01)。②血浆内皮素含量:缺血40min、再灌注40min心肌缺血再灌注模型组显著高于假手术对照组(P<0.01),心肌缺血再灌注 参麦注射液治疗组明显低于心肌缺血再灌注模型组(P<0.01)。③缺血40min、再灌注40min一氧化氮代谢产物含量与内皮素含量呈显著负相关(P<0.05,P<0.01)。④心肌组织一氧化氮代谢产物含量、总超氧化物歧化酶活性:再灌注40min后心肌缺血再灌注模型组明显低于假手术对照组(P<0.01),心肌缺血再灌注 参麦注射液治疗组显著高于心肌缺血再灌注模型组(P<0.01)。⑤内皮素,丙二醛含量:心肌缺血再灌注模型组显著高于假手术对照组(P<0.01),心肌缺血再灌注 参麦注射液治疗组明显低于心肌缺血再灌注模型组(P<0.01)。⑥一氧化氮代谢产物含量与总超氧化物歧化酶活性呈显著正相关(P<0.05),与丙二醛含量呈显著负相关(P<0.05),内皮素含量与总超氧化物歧化酶活性呈显著负相关(P<0.05),与丙二醛含量呈显著正相关(P<0.05)。结论:心肌缺血再灌注导致血管内皮功能紊乱;参麦注射液能够改善缺血再灌注时的内皮功能,减轻心肌缺血再灌注损伤。     

知母总皂苷对脑缺血再灌注损伤的保护机制

目的:评价知母总皂苷对于大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,观察其对内皮素1及内皮型一氧化氮合酶的影响。方法:实验于2004年在南方医科大学药理学实验室进行,大鼠132只数字表法随机分为5组:①知母总皂苷50,100mg/kg组(n=30):灌胃相应剂量的知母总皂苷,1次/d,连续7d,7d后线栓法制备急性局灶缺血模型。②己酮可可碱组(n=12,仅进行神经功能评分及脑梗死体积测定):灌胃45.88mg/(kg·d)己酮可可碱,连续7d,7d后同前造模。③模型组(n=30):灌胃等量生理盐水7d,7d后同前造模。④假手术组(n=30):灌胃等量生理盐水7d,7d后手术,但不插线栓塞血管。造模24h观察大鼠神经功能损害并评分,取缺血侧脑组织用TTC染色后比较脑梗死体积,用放射免疫法测定缺血脑组织中内皮素1含量,免疫组织化学法比较脑组织中内皮型一氧化氮合酶阳性表达。结果:87只大鼠进入结果分析。①脑组织梗死体积百分比:知母总皂苷50,100mg/kg组和己酮可可碱组均小于模型组[(21.56±5.03)%,(23.80±3.59)%,(18.50±3.74)%,(28.61±2.76)%,P<0.05,0.01]。②神经功能评分:知母总皂苷50,100mg/kg组和己酮可可碱组均低于模型组(P<0.05,0.01)。③脑组织内皮素1含量:模型组显著高于对照组[(0.68±0.19),(0.31±0.11)ng/g,P<0.01];知母总皂苷50,100mg/kg组均低于模型组[(0.43±0.06),(0.36±0.20)ng/g,P<0.05,0.01],但2组间比较差异无显著性意义。④内皮型一氧化氮合酶阳性表达:知母总皂苷50,100mg/kg组阳性细胞数增多、表达强度增强。结论:知母总皂苷对于脑缺血再灌注后引起的脑损伤具有确定的保护作用,其保护机制可能涉及减少内皮素1的释放、增强内皮型一氧化氮合酶表达、改善缺血脑组织中血管内皮功能及血供有关。     

胱抑素C与家兔肾小球滤过率的相关性研究

目的评价胱抑素C与家兔肾小球滤过率（GFR）的相关性研究。方法家兔12只,随机平均分2组,氨茶碱组家兔耳缘静脉注射0.5 g/2 ml氨茶碱2 ml/kg和生理盐水10 ml/kg,对照组家兔耳缘静脉注射12 ml/kg的生理盐水,对各组进行尿量测定,同时测定家兔血清胱抑素C浓度,血肌酐浓度和内生肌酐清除率。结果氨茶碱组家兔的血Cystatin C浓度与血肌酐浓度呈正相关,其回归方程为y=0.0102x-0.0344,r=0.9861（P〈0.01）,并与尿肌酐排出量呈负相关,其回归方程为y=-1.0212x＋1.412,r=-0.9004（P〈0.01）。结论氨茶碱组家兔肾小球滤过率显著增高,测定血清Cystatin C也是评价实验动物的GFR快速、精确及简便的方法 。     

维生素C和辅酶Q10对饲喂乙醇兔血浆一氧化氮及其合酶和丙二醛含量的影响

目的观察维生素C和辅酶Q10对饲喂乙醇兔血浆一氧化氮及其合酶和丙二醛含量的影响.方法实验于2004-02在山东省菏泽市立医院中心试验室完成.将30只白色獭兔随机分为3组正常对照组、饲喂乙醇组和干预治疗组,每组10只.正常对照组给予普通饲料喂养30 d,饲喂乙醇组饲喂乙醇30 d,干预治疗组饲喂乙醇30 d停喂乙醇加喂维生素C、辅酶Q1015 d,疗程结束后抽血检测一氧化氮、丙二醛含量及一氧化氮合酶活性.乙醇给药方法为每天清晨饲喂3 mL/kg,稀释比例为每3 mL乙醇加入10 mL蒸馏水.维生素C 200 mg/kg,辅酶Q100.5 mg/kg,同一时间,同一地点,一次灌胃.应用分光光度计检测一氧化氮、丙二醛的含量及一氧化氮合酶的活性. 结果30只白色獭兔均进入结果分析.①一氧化氮合酶活性正常对照组明显高于干预治疗组[(391.58±45.57,313.06±411.67)nkat/g,(P＜0.05)].②一氧化氮含量饲喂酒精组明显低于干预治疗组[(36.62±9.50,58.39±10.32)μmol/L,(P＜0.05)].③丙二醛含量正常对照组明显低于饲喂酒精组[(2.68±0.57,4.43±0.91)μmol/L,(P＜0.01)]. 结论乙醇可以降低兔血浆中一氧化氮含量及一氧化氮合酶的活性,提高兔血浆中丙二醛的含量.维生素C和辅酶Q10可提高一氧化氮含量,增强一氧化氮合酶活性,降低丙二醛含量,其作用可能与抑制氧自由基损伤,减轻脂质过氧化反应有关.     

桃核承气改良方对兔血管内膜剥脱术后内皮素和一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

背景:大量的研究结果已证实,内皮细胞如能够早期覆盖受损的血管内膜层,则可避免血管内再狭窄的发生.目的:通过与西药作用对比,观察中药桃核承气改良方对兔血管损伤后内皮细胞生长及功能的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-04/11在辽宁中医药大学和中国医科大学完成.材料:健康新西兰大耳白兔40只,体质量2.0～2.5kg,高酯饲料喂养4周行腹主动脉内膜剥脱造模,制备动脉粥样硬化模型.桃核承气改良方为辽宁中医药大学附属第一医院制剂产品;舒降之为杭州默沙东制药有限公司产品:阿司匹林为拜尔药业集团有限公司产品.方法:40只兔随机数字表法分为4组.造模后模型组、中药组、西药组正常饲料喂养,中药组予桃核承气改良方13.5mL/kg灌胃4周,西药组予舒降之、阿司匹林混合液13.5mL/kg灌胃4周,模型组、空白组予生理盐水13.5mL/kg灌胃4周.主要观察指标:①造模后1,28d采用硝酸还原法法和比色法测定血浆内皮素1、血清一氧化氮含量.②免疫组织化学法测定血管中内皮素1、内皮型一氧化氮合酶蛋白表达.结果:32只新两兰大耳白兔进入结果分析,模型组(n=8)、中药组(n=10)、西药组(n=8)和空白组(n=6).①与空白组相比,其他3组造模后1d血浆内皮素1升高,血清一氧化氮含量下降(P＜0.05).造模后28d兔中药组、西药组血浆内皮素1较模型组明显降低,血清一氧化氮明显升高(P＜0.05).②血管中内皮素1表达模型组明显高于其他3组(P＜0.05);中药组、西药组较模型组显著减弱(P＜0.05).模型组内皮型一氧化氮合酶表达明显低于其他3组(P＜0.05);中药组、西药组较模型组显著增强(P＜0.05).结论:桃核承气改良方能够促进内皮素与一氧化氮之间的平衡协调,有利于血管内皮细胞的修复.     

实验性动脉粥样硬化家兔主动脉鞘磷脂酶活性与神经酰胺含量变化和大黄素的干预作用

背景神经酰胺信号转导途径可能在致血管内皮细胞凋亡、进而引起泡沫细胞的形成,与平滑肌细胞增殖等动脉粥样硬化发生、发展过程中起重要作用.目的观察家兔实验性动脉粥样硬化发生时主动脉鞘磷脂酶活性、神经酰胺含量的变化以及大黄素的干预作用,并与阳性药物非诺贝特进行对照.设计完全随机对照设计.单位中山大学药学院药理毒理实验室.材料实验于2003-07/12在中山大学药学院药理毒理实验室完成,选择新西兰雄性家兔48只,用高胆固醇饮食复制动脉粥样硬化模型40只,另设8只为正常对照组,模型动物随机分为模型组、大黄素5 mg/kg组、大黄素10 mg/kg组、大黄素20 mg/kg组、非诺贝特25 mg/kg组,每组8只.方法各组在模型复制的第7周起开始用药.大黄素各组每日分别灌胃5 mg/kg,10 mg/kg,20 mg/kg大黄素;非诺贝特25 mg/kg组每日灌胃25 mg/kg非诺贝特,各药用2 mL生理盐水制成混悬剂,1次/d,正常对照组及模型组灌胃等剂量生理盐水,共4周.每只家兔给予喂养食物限制在135～150g/d,动物分笼饲养.主要观察指标[1]各组家兔主动脉内膜脂质斑块面积.[2]各组家兔血清总胆固醇、三酰甘油含量.[3]各组家兔血浆超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量.[4]各组家兔主动脉壁鞘磷脂酶活性和神经酰胺含量.结果48只家免均进入实验分析.[1]主动脉内膜脂质斑块面积百分率模型组血管内膜脂质斑块面积(48.87±15.5)%,大黄素各组均小于模型组(P＜0.05或0.01),以大黄素10 mg/kg组作用明显(22.19±12.9)%.非诺贝特25 mg/kg组与模型组基本一致(P＞0.05).[2]血清总胆固醇及三酰甘油含量正常对照组家兔主动脉内膜光滑;大黄素各组血清总胆固醇及三酰甘油含量与模型组基本一致(P＞0.05).非诺贝特25 mg/kg组显著低于模型组(P＜0.05).[3]血浆超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量大黄素各组家兔血超氧化物歧化酶活性显著高于模型组(P＜0.05,P＜0.01),丙二醛含量大黄素10 mg/kg,20 mg/kg组均显著低于模型组(P＜0.05).非诺贝特25 mg/kg组与模型组基本一致(P＞0.05).[4]主动脉鞘磷脂酶活性与神经酰胺含量模型组明显高于正常对照组,大黄素5,10,20 mg/kg组明显低于模型组.非诺贝特25 mg/kg组与模型组基本一致(P＞0.05).[5]相关性分析主动脉鞘磷脂酶活性与血胆固醇含量呈正相关(r=0.542,P＜0.01)、与血丙二醛水平呈正相关(r=0.789,P＜0.01),与血超氧化物歧化酶活性呈负相关(r=-0.936,P＜0.01);神经酰胺含量与血胆固醇含量呈正相关(r=0.433,P＜0.05),与血丙二醛水平呈正相关(r=0.673,P＜0.01),与血超氧化物歧化酶活性呈负相关(r=-0.876,P＜0.01).结论大黄素降低总胆固醇、三酰甘油含量的作用不明显,但通过抗氧化、抑制神经酰胺通路的激活、降低鞘磷脂酶活性与神经酰胺的含量,保护了血管内皮细胞,动脉内膜脂质斑块面积明显减少,提示大黄素抗实验性动脉粥样硬化作用与调节神经胺信号转导途径密切相关.     

小剂量乙醇长期摄入对生长期小鼠松质骨代谢的影响

目的:观察小剂量乙醇摄入对生长期小鼠松质骨代谢的影响。方法:实验于2004-10/2005-03在本校动物中心完成。取清洁级6周龄昆明种小鼠30只,体质量25～30g,随机数字表法分成①基础对照组:实验开始时麻醉动物后处死取材。②正常对照组:给予蒸馏水10mL/(kg·d)灌胃。③乙醇组:给予体积分数为0.5的乙醇(根据预实验结果选用),按4g/(kg·d)剂量灌胃,换算成60kg体质量成人相当于摄入乙醇约30g/d,连续灌胃60d。实验结束麻醉后处死全部小鼠,取胫骨上段进行不脱钙骨制片,经计算机自动图像分析系统对骨代谢相关指标进行骨组织形态计量学分析。结果:纳入小鼠30只,均进入结果分析。①乙醇对小鼠胫骨上段静态参数及动态参数的影响:与正常对照组比较,乙醇组小鼠的骨小梁面积百分率明显降低[(9.77±3.30)%,(3.31±0.94)%,P<0.05];骨形成率降低[(27.46±4.55)%,(17.97±6.91)%,P<0.05];骨小梁分离度增加[(430.20±177.91),(1115.37±320.45)μm,P<0.05];单位骨小梁周长破骨细胞数有增加趋势。②乙醇对小鼠骨生物力学参数的影响:乙醇组的最大抵抗应力及股骨颈结构强度值均显著低于正常对照组[最大抵抗应力:(46.93±11.70),(128.93±10.48)MPa;股骨颈结构强度:(20.80±2.42),(29.48±2.52)N;P<0.01]。结论:小剂量乙醇摄入可造成生长期小鼠骨形成的降低,骨量的丢失。     

一种草药氯仿萃取水相提取物止血作用的实验研究

目的:观察一种促凝血草药氯仿萃取水相提取物HB的止血作用。方法:实验于2003-12/2004-12在解放军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所国家重点实验室完成。健康家兔18只,体质量2.5～3.0kg;健康雄性Wistar大鼠70只,体质量(250±10)g;雄性昆明种小鼠78只,体质量(25±5)g。制备HB氯仿萃取-水相提取物后给动物腹腔注射。①将70只大鼠随机分为空白对照组(n=10,30mg/kg腹腔注射生理盐水)、阳性对照组(n=10,云南白药按2mg/(kg·d)灌胃)、HB高剂量给药组(n=30,分别选取10只动物按5,10,20mg/kg剂量腹腔注射)、HB低剂量给药组(n=20,分别选取10只动物按0.5,1mg/kg剂量腹腔注射)。观察给药10d后实验动物的血生化指标(凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原含量、凝血酶时间)及血小板计数;②将39只小鼠随机分为空白对照组、云南白药对照组(云南白药0.5mg/(kg·d)灌胃)和用药组(HB0.5mg/kg),每组13只。观察给药10d后小鼠的出血时间、同样的分组和干预方法观察小鼠的凝血时间。③将待试药设氯仿萃取水相提取物用药组、云南白药阳性对照组、生理盐水阴性对照组。18只家兔各取6只分别用于观察体表、肝脏及股动脉创面的止血实验,观察局部创面(皮肤、肝脏、股动脉)止血时间。结果:纳入健康家兔18只、健康雄性Wistar大鼠70只、雄性昆明种小鼠78只,均进入结果分析。①氯仿萃取水相提取物对大鼠血凝四项及血小板计数的影响:与空白对照组相比,HB氯仿萃取水相提取物腹腔注射可显著提高大鼠的血小板计数;HB高剂量给药组大鼠的凝血酶原时间明显缩短。②对小鼠出血时间及凝血时间的影响:与云南白药对照组及空白对照组相比,HB氯仿萃取水相提取物可显著缩短小鼠的出血时间[(250.2±53.3),(234.5±61.3),(100.2±27.9)s,P<0.01]及凝血时间[(202.5±50.2),(255.5±27.8),(141.8±37.6)s,P<0.01]。③对家兔局部创面的止血作用:家兔创面止血时间显著短于生理盐水阴性对照组及云南白药阳性对照组[皮肤:(41.20±6.21),(84.10±5.32),(74.80±4.73)s;肝脏:(50.20±3.39),(87.60±6.24),(74.50±5.19)s;股动脉:(62.60±4.50),(103.60±4.35),(98.20±6.07)s;P<0.01)。结论:HB氯仿萃取水相提取物具有良好的体内、外促凝血及创面止血作用。     

强肌健力口服液对脾虚小鼠RNA合成的影响

目的:观察强肌健力口服液对实验性脾虚证小鼠RNA合成的影响,探讨该方治疗脾胃虚损型重症肌无力的作用途径。方法:实验于2005-10/11在广州中医药大学核医学实验室完成。①采用随机抽签法将4周龄健康雄性NIH小鼠68只分为5组:正常对照组(n=13)、脾虚模型组(n=16)、强肌健力口服液高剂量组(n=13)、强肌健力口服液中剂量组(n=13)、四君子汤组(n=13)。②采用利血平复制脾虚证动物模型,正常对照组动物腹腔注射生理盐水0.1mL/d,同时灌服蒸馏水0.5mL/d;脾虚模型组动物腹腔注射利血平0.2mg/(kg·d),并灌服蒸馏水0.5mL/d;强肌健力口服液高剂量组及中剂量组动物腹腔注射利血平0.2mg/(kg·d),并灌胃强肌健力口服液(由北芪、党参、升麻、白术、甘草等组成,含生药120.4g/L),给药剂量分别为26g/kg及13g/kg,1次/d;四君子汤组动物腹腔注射利血平0.2mg/(kg·d),并灌服四君子汤(由党参、白术、茯苓、灸甘草组成)。26g/kg,1次/d,连续用药16d。测定各组动物脾脏、肾脏、胸腺、肝脏、心肌、小肠等组织RNA水平的变化,以及各组动物造模前后体质量和脾、肾、胸腺、肝脏、心肌组织质量体质量比值的变化。结果:在实验过程中因灌胃失误及造模等原因引起动物死亡,其中脾虚模型组4只,强肌健力口服液高剂量组3只,强肌键力口服液中剂量组织1只,四君子汤组1只,最终进入结果分析为59只。①与正常对照组比较,脾虚模型组动物脾脏、肾脏、胸腺、肝脏、心肌、小肠组织中RNA含量均显著降低(Q=5.07～18.92,P均<0.01);用药16d后强肌健力口服液26g/kg组能使脾脏、肾脏、肝脏、小肠组织中RNA含量显著升高(Q=4.45～6.11,P<0.05或0.01);强肌健力口服液13g/kg组能使肾脏、胸腺、肝脏、小肠组织RNA含量显著升高(Q=3.47～5.24,P<0.05或0.01);②实验前各组小鼠体质量差异不显著(P=0.863);实验结束后脾虚模型组小鼠体质量明显比正常对照组减轻(Q=17.08,P<0.01);强肌健力口服液和四君子汤组小鼠体质量比脾虚模型组显著升高(Q=4.73～7.76,P均<0.01)。③脾虚模型组小鼠脾脏、肾脏、胸腺、肝脏、心肌组织质量比正常对照组减轻(Q=6.36～12.83,P均<0.01),且脾脏、肾脏、胸腺组织比值比正常对照组显著降低(Q=3.01～5.13,P<0.05或0.01);强肌健力口服液和四君子汤组能使小鼠脾脏、肾脏、胸腺、心肌、肝脏组织质量增加(Q=3.57～10.51,P<0.05或0.01),同时能升高脾脏、肾脏、胸腺、心肌组织比值(Q=3.01～7.28,P<0.05或0.01)。结论:脾虚证的发生与RNA合成减少有关,强肌健力口服液对RNA合成有促进作用,从而发挥其健脾益气、强肌健力作用。     

前列腺素E1对腹主动脉球囊损伤大鼠血管内膜、中膜增生及血浆相关因子水平的影响

目的:观察前列腺素E1对腹主动脉球囊损伤大鼠血管内膜、中膜增生及对血浆内皮素、血小板颗粒膜蛋白和D-二聚体的干预作用,并了解其作用是否有剂量依赖性。方法:实验于2003-03/2004-04在郑州大学医学院药理学教研室心血管实验室进行。①取雄性Wistar大鼠160只随机分为假手组、模型组、前列腺素E18,24,72μg/kg组5组,每组32只;每组又分术后6,24h、10,21d共4个时间点,每个时间点8只。②前列腺素E18,24,72μg/kg组大鼠连续5d经尾静脉给予前列腺素E18,24,72μg/kg,其他两组给予等容积生理盐水。③最后一次给药24h后进行大鼠腹主动脉球囊损伤手术,假手术组仅作左颈总动脉结扎。④各组动物于术后6h取血,测定血浆中血小板颗粒膜蛋白、D-二聚体水平;于术后6,24h、10,21d各时间点心脏取血测定血浆中内皮素水平;并在以上4个时间点取出腹主动脉下段,进行病理分析。结果:160只大鼠进入结果分析。①球囊损伤术后可使血管内皮剥脱,内弹力板断裂,模型组术后21d可见受损血管内膜、中膜明显增厚,狭窄形成。前列腺素E13个剂量组内膜及中膜增生程度均较模型组有不同程度的减轻,前列腺素E124,72μg/kg组与模型组比较差异显著(P<0.01)。②血浆内皮素:模型组术后6,24h显著高于假手术组(P<0.01),前列腺素E124,72μg/kg组术后6,24h,10d显著低于模型组(P<0.01,0.05),前列腺素E18μg/kg组仅在术后24h,10d显著低于模型组(P<0.01,0.05)。③模型组术后6h血浆血小板颗粒膜蛋白和D-二聚体水平显著高于假手术组(P<0.01),前列腺素E1各组均低于模型组(P<0.01)。结论:前列腺素E1对球囊损伤术后腹主动脉血管内膜、中膜增生有干预作用,其作用与降低血浆内皮素水平、血小板颗粒膜蛋白和D-二聚体水平有关,且与用药剂量有关。