ApoE基因敲除鼠12周游泳运动前后纤溶激活功能的改变

目的：探讨ＡｐｏＥ在长期有氧运动中影响纤溶激活作用中的有关机制。方法：以ＡｐｏＥ基因敲除（ＡｐｏＥ－／－）鼠为实验组、以相同遗传背景的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ鼠为对照组建立运动模型。结果：１２周游泳后，对照组鼠ＴＧ（０．９６±０．３０ｖｓ０．５４±０．０７０ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）和ＰＡＩ（０．９２±０．０７ｖｓ０．８０±０．０９ＡＵ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５）降低，ｔＰＡ升高（０．６０±０．１２ｖｓ１．０４±０．２３ＩＵ／ｍｌ，Ｐ＜０．０１）；而ＡｐｏＥ－／－鼠的ＴＧ（１．２８±０．３４ｖｓ１．２９±０．３２ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＞０．０５）和ＰＡＩ（０．７４±０．１０ｖｓ０．７９±０．０４ＡＵ／ｍｌ，Ｐ＞０．０５）均没有显著变化，ｔＰＡ（０．７１±０．１５ｖｓ０．９７±０．１７ＩＵ／ｍｌ，Ｐ＜０．０１）升高。结论：长期有氧运动使对照小鼠纤溶激活作用明显改善，其机制与ＴＧ和含ＡｐｏＥ脂蛋白水平降低导致ＬＲＰ清除ｔＰＡ－ＰＡＩ作用加强、ＰＡＩ抑制作用减弱及ｔＰＡ合成水平增加有关。Ａｐ ｏＥ－／－鼠运动后，ＰＡＩ水平稳定而ｔＰＡ活性增加，提示ｔＰＡ合成作用增强。     

高压氧治疗重型颅脑损伤后临床、脑电地形图、血浆内皮素、经颅多普勒超声的研究

目的研究高压氧（ＨＢＯ）治疗重型颅脑损伤（ＳＥＩ）的疗效及机制。方法治疗组３５例,对照组２０例,观察ＨＢＯ前后脑电地形图（ＢＥＡＭ）血浆内皮素（ＥＴ）及经颅多普勒超声（ＴＣＤ）查大脑中动脉收缩期流速,平均流速及搏动指数（ＭＣＡ－Ｖｓ,Ｖｍ,ＰＩ）等７项参数。结果治疗组的临床（ＧＣＳ）,ＢＥＡＭ,预后（ＧＯＳ）均明显迅速改善,与对照组有显著性差异。治疗组在ＨＢＯ１疗程后的ＥＴ值从（９１．２４±１２．１８）ｎｇ／Ｌ降到（６８．８８±１４．３７）ｎｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）,与对照组相应时相比较,ＥＴ降至（８３．１２±１２．２２）ｎｇ／Ｌ,也有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。相应的ＴＣＤ的ＭＣＡ－Ｖｍ从（６４．２±４．８）ｃｍ／ｓ降至（５１．６±４．２）ｃｍ／ｓ（Ｐ＜０．０１）,ＭＣＡ－Ｖｓ,ＰＩ的下降同样有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＢＯ能迅速改善重型颅脑损伤者的意识状态、ＢＥＡＭ异常率及生存质量。研究表明与急性期血浆ＥＴ下降和ＭＣＡ血管痉挛缓解有关,表现在ＭＣＡ血流速度和血管阻力的改善,从而减轻脑缺血缺氧,降低颅压,这是ＨＢＯ改善预后的重要机制之一。     

阳江高本底地区居民中免疫水平与对病毒免疫反应的研究

探讨在天然高本底电离辐射作用下机体的免疫水平与对病毒的免疫反应。方法利用单克隆抗体ＡＰＡＡＰ法检测白细胞介素－２分泌细胞（ＩＬ－２ＳＣ）；利用间接免疫酶法检测抗ＥＢ病毒抗原抗体水平（ＶＣＡ／ＩｇＡ，ＶＣＡ／ＩｇＧ，ＥＡ／ＩｇＡ，ＥＡ／ＩｇＧ）；采用酶标免疫吸附沉淀法检测乙型肝炎（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ），表面抗原抗体（ＨＢｓＡｂ）和核心抗体（ＨＢｃＡｂ）。结果高本底地区（ＨＢＲＡ）居民外周血淋巴细胞ＩＬ－２ＳＣ频数显著高于对照（ＣＡ）；ＶＣＡ／ＩｇＡ、ＶＣＡ／ＩｇＧ、ＥＡ／ＩｇＧ抗体水平均高于ＣＡ，但仅ＶＣＡ／ＩｇＧ抗体滴度水平存在差异显著性，两地区ＶＣＡ／ＩｇＡ≥１５阳性检出率均显著高于广东地区的平均水平；ＨＢＶ感染率与ＨＢｓＡｂ阳性率为ＨＢＲＡ高于ＣＡ（Ｐ＞０．０５）。结论提示长期低水平电离辐射作用机体免疫功能有增强的趋势。     

高压氧对实验兔海水型呼吸窘迫综合征的预防作用

目的　观察高压氧（ＨＢＯ）对海水淹溺肺水肿（ＰＥ－ＳＷＤ）的预防作用。方法　复制ＰＥ－ＳＷＤ动物模型后,３２ 只兔随机分为ＰＥ－ＳＷＤ对照组、药物治疗组和ＨＢＯ组。对３ 组兔的动脉血气酸碱指标、Ｃａ２＋ 沉淀反应颗粒、ｃ－ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ和ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ 等进行自动检测和定量分析比较,并观察分析３组兔的存活时间和海水型呼吸窘迫综合征（ｓｅａｗ ａｔｅｒ－ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍ ｅ,ＳＷ－ＲＤＳ）发生率。结果　ＨＢＯ组兔ＰａＯ２ ,ＳａＯ２ 和ｐＨ ３ 项指标比药物组显著升高（Ｐ＜ ０．０１）,动物存活时间［（４３．０３±７．１９）小时］比药物组［（２３．５８±１．４９）小时］明显延长,Ｃａ２＋ 沉淀反应颗粒,ｃ－ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ,ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ和ＳＷ－ＲＤＳ发生率ＨＢＯ组则明显低于药物组（Ｐ＜ ０．０１）。结论　ＨＢＯ可明显提高ＰａＯ２ 和ＳａＯ２,有效改善低氧血症和代谢性酸中毒,减轻ＰＥ－ＳＷＤ时肺组织的损伤,从而可防止ＰＥ－ＳＷＤ向ＳＷ－ＲＤＳ转化。     

bcl－2蛋白在乳腺癌组织中表达的临床病理意义

应用ＬＳＡＢ免疫组化法，观察乳腺癌组织中ｂｃｌ－２蛋白表达，探讨其临床病理意义。结果显示，ｂｃｌ－２表达的阳性率为４２．７％，阳性反应物质位于细胞浆或核膜上，胞核中偶有表达。ｂｃｌ－２在乳腺癌组织中的表达与病人年龄、月经情况、肿瘤大小及淋巴结转移无明显关系（Ｐ＞０．０５）。浸润性小叶癌及浸润性导管癌之间，ｂｃｌ－２表达串的差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。观察还发现，ｂｃｌ－２表达与显示预后好的某些病理形态学特征关系密切，浸润性导管癌不同病理分级组间，ｂｃｌ－２表达率有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）；核分裂≥２１／１０高倍视野组，ｂｃｌ－２表达率明显低于０～１０／１０高倍视野组（Ｐ＜０．０１）；有肿瘤坏死者的ｂｃｌ－２表达率明显低于无肿瘤坏死者（Ｐ＜０．０１）。另外还观察到，ｂｃｌ－２与ｐ５３表达之间呈负相关（Ｐ＜０．０１），与ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＭＤＲ１、ＧＳＴ－、ｎｍ２３及ＰＣＮＡ之间均无显著关系（Ｐ＞０．０５）。     

肾综合征出血热患者血清及尿液中TNF与SIL－2R的动态研究

采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，对３０例肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者９６份血清及９６份尿液中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）及可溶性白细胞介素２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）水平进行了动态检测。结果显示：ＨＦＲＳ患者各期尿液及血清ＴＮＦ与ＳＩＬ－２Ｒ水平均高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），且与临床病程密切相关，尿液与血清变化水平有密切的正相关性（γ＝０．５７５２，Ｐ＜０．００１；γ＝０．５４２７，Ｐ＜０．０１），尿液中含量与尿蛋白含量呈正相关（γ＝０．３４２５，Ｐ＜０．０１；γ＝０．４４８５，Ｐ＜０．０１），血、尿中ＴＮＦ与血、尿中ＳＩＬ－２Ｒ的变化呈正相关（γ＝０．６４２５，Ｐ＜０．０１，γ＝０．６５９６，Ｐ＜０．０１）。提示：ＴＮＦ及ＳＩＬ－２Ｒ是参与ＨＦＲＳ发病机理的重要介质。     

用杂交F1小鼠制备单克隆抗体腹水的研究

用ＢＡＬＢ／ｃ×ＬＡＣＡＦ＿１和ＢＡＬＢ／ｃ×Ｃ＿（５７）Ｆ＿１杂交小鼠与纯系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠生产腹水制备单克隆抗体，观察各种小鼠对杂交瘤细胞的耐受性，产生腹水的能力及腹水中蛋白质含量和抗体效价。ＢＡＬＢ／ｃ×ＬＡＣＡＦ＿１鼠的平均腹水产量，雄鼠为ＢＡＬＢ／ｃ鼠的２～３倍，雌鼠为１．４倍左右。对杂交瘤细胞的耐受性，腹水中蛋白质含量及抗体效价与ＢＡＬＢ／ｃ小鼠比较均无显著差异。ＢＡＬＢ／ｃ×Ｃ＿（５７）Ｆ＿１小鼠的腹水产量明显低于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，而且死亡率较高。ＢＡＬＢ／ｃ×ＬＡＣＡＦ＿１小鼠生长快，易于饲养繁殖，价格便宜，腹水产量高，是一种替代ＢＡＬＢ／ｃ小鼠生产单克隆抗体腹水较理想的鼠种。     

脑外伤后外周血淋巴细胞产生白介素-2能力与急性期蛋白变化的相关性研究

对２２例中重型脑外伤病人（ＧＣＳ３～１２分）外周血淋巴细胞产生白介素－２能力（ＰＢＬＩＬ－２Ｐ），急性期蛋白（ＡＰＲＰｓ）包括血浆铜兰蛋白（ＣＰ）、α１－酸性糖蛋白（α１－ＡＧ）、α１－抗胰蛋白酶（α１－ＡＴ）、Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）、纤维结合蛋白（Ｆｎ）和补体Ｃ３成份Ｃ片段（Ｃ３ｃ）等指标进行了观察研究．结果发现：中重型脑外伤后ＰＢＬＩＬ－２Ｐ（代表细胞免疫功能状态）下降，而ＡＰＲＰｓ中ＣＰ、α１－ＡＧ、α１－ＡＴ、ＣＲＰ升高，Ｆｎ和Ｃ３ｃ降低．相关性分析结果：ＰＢＬＩＬ－２Ｐ的降低与ＣＰ、α１－ＡＧ、α１－ＡＴ及ＣＲＰ的增高均呈直线负相关（ｒ＝－０．６５，－０．６３，－０．５８，－０．５７），且均相关显著（Ｐ＜０．０１），与Ｆｎ、Ｃ３ｃ的降低均呈直线正相关（ｒ＝０．６９，０．７１），且相关显著（Ｐ＜０．０１）．表明ＡＰＲＰｓ对细胞免疫功能有一定调控作用．     

茶多酚对飞行人员球结膜微循环的作用

目的观察茶多酚（ｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，ＴＰ）对飞行人员球结膜微循环（ｂｕｌｂａｒｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，ＢＣＭ）的影响，为飞行员选择合适的天然药品，以提高其健康水平。方法４０名健康疗养飞行人员随机分为两组，试验组服ＴＰ６００ｍｇ／ｄ×２０ｄ，对照组服安慰剂，于２０ｄ后检查ＢＣＭ。结果与对照组相比，试验组微血管数明显增加（Ｐ＜０．０１）；微血流速度明显加快（Ｐ＜０．０５）；红细胞聚集明显减轻（Ｐ＜０．０５）；缺血区明显减少（Ｐ＜０．０１）；Ａ／Ｖ比值明显变小（Ｐ＜０．０１）。结论ＴＰ可明显改善飞行人员的微循环功能状态。     

国家集训队教练员载脂蛋白A－I基因多态性及其与血浆脂质水平关系的研究

为从分子遗传水平探讨教练员高脂血症及潜在的动脉粥样硬化（Ａｓ）或冠心病（ＣＨＤ）的病因，我们通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交法，用人载脂蛋白Ａ－ＩｃＤＮＡ探针，对５１名优秀运动员出身的国家集训队教练员进行载脂蛋白Ａ－Ｉ基因ＰｓｔＩ位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）分析。杂交结果出现２．２ｋｂ和３．３ｋｂ两条与文献报道近似的杂交带，５１名教练员中Ｐ＿２等位基因（３．３ｋｂ）频率为０．１３。与一文献报道的在中国人群中所作的类似研究比较，Ｐ＿２等位基因频率，教练员接近陈旧性心梗患者（Ｐ＿２频率＝０．２０，Ｐ＞０．０５），而显著高于正常对照人群（Ｐ＿２频率＝０．０２，Ｐ＜０．０１）。提示优秀运动员出身的教练员和／或优秀运动员具有某些遗传特异性，尤其值得重视的是潜在的Ａｓ或ＣＨＤ易感性。本研究中，具有或不具Ｐ＿２等位基因的教练员，ＴＧ、ＴＣ、ＨＤＬ－ｃ、ａｐｏＡ－Ｉ、ａｐｏＢ等五种血脂水平无显著差异。     

流行性出血热灭活疫苗免疫小鼠细胞免疫应答状况的研究

为阐明流行性出血热灭活疫苗的细胞免疫保护性机制，对地鼠肾细胞培养灭活疫苗免疫小鼠的脾细胞增殖，产生白细胞介素－２（ＩＬ－２）和γ干扰素（ＩＦＮγ）的能力进行了研究，结果表明，疫苗免疫小鼠脾细胞对Ｃｏｎ Ａ及ＥＨＦ毒抗原的刺激指数均显著高于正常小鼠，两组小鼠脾细胞在ＣｏｎＡ刺激下产生ＩＬ－２和ＩＦＮγ的水平无显著差异，但免疫小鼠受ＥＨＦ病抗原刺激后产生的ＩＬ－２水平明显高于正常对照组；１５只免疫小鼠     

NDV/IL-2治疗小鼠H_(22)腹水瘤的生存期结果分析

目的:探讨NDV/IL—2联合治疗小鼠H_(22)腹水瘤的协同增效作用,以提高对肿瘤的治疗效果。方法:将H_(22)腹水瘤细胞接种小鼠腹腔后分成Hanks液,IL—2,NDV,NDV/IL—2组,每组10只,分别用Hanks液,IL—2,NDV,NDV/IL—2治疗。结果:Hanks液组平均存活14.3d,存活率0.0％,IL-2组存活15.4d,存活率0.0％,NDV组存活23.5d,存活率20.0％,NDV/IL—2组存活23.6d,存活率30.0％。结论:NDV与NDV/IL—2组治疗小鼠H_(22)腹水瘤,疗效无显著差异(P>0.05),二者协同增效作用较差。     

动物狂犬病中和性抗体竞争ELISA检测试剂盒的研制

目的研制一种能够定量检测狂犬病血清中和抗体的直接竞争ELISA试剂盒,以满足我国动物狂犬病免疫监测的需要。方法以表达狂犬病病毒糖蛋白的真核细胞培养物为包被抗原,捕获抗体为具有病毒中和活性的酶标单克隆抗体,标准血清为经荧光抗体病毒中和试验（FAVN）准确定量的犬血清。结果本试剂盒的最低检测限为0.25U/ml,线性检测范围为0.25～8U/ml,标准曲线的平均板内变异系数为2.8%,板间平均变异系数为4.9%,在4℃下至少可以存放6个月。结论本研究提供了一种操作安全、定量准确的动物狂犬病中和抗体检测试剂盒,具有良好的实际应用前景。     

马尔堡病毒GP蛋白高抗原性片段筛选及免疫性研究

目的 从马尔堡病毒GP蛋白上寻找与GP免疫原性相当的小片段用于疫苗设计,以克服全长蛋白缺陷.方法 基于GP(aa:1～681)结构及功能分区,构建3个片段[GP1△(aa:25～239)、GPM(aa:250～520)、GP2△(aa:436～648)],经原核表达后免疫小鼠,不同时间检测血清特异抗体滴度,检测脾淋巴细胞增殖指数及测定细胞因子浓度.结果 ELISA检测结果显示,GP2△组与GP混合组(GP1△+ GPM+GP2△)产生体液免疫能力相当,明显高于GP1△与GPM组(P<0.05);ConA非特异刺激后,GP2△组脾淋巴细胞的SI值高于GP混合组(P<0.05),GP混合组特异刺激后,GP2△组脾淋巴细胞的刺激指数(SI)值低于GP混合组(P<0.05);细胞因子检测中,GP2△组的白细胞介素2(IL-2)及干扰素γ(IFN-γ)浓度均高于对照组,低于GP混合组(P<0.05).结论 马尔堡病毒GP2△片段免疫小鼠能诱导与完整GP蛋白相当的体液免疫,同时也能诱导一定的细胞免疫, 可用来替代完整GP用于疫苗设计.     

抗登革病毒单抗的独特型抗体的制备与鉴定

从19种抗登革病毒单克隆抗体(简称单抗)中筛选出4种具有中和活性的单抗。经过纯化免疫新西兰大白兔制备多克隆抗独特型抗体(Ab2)。制备的4种抗独特型抗体血清有很高的特异性,其中具有全交叉反应的3种单抗的抗血青中Ab2的水平较高。采用简便的去除抗血清中的同种型和同种异型抗体的方法,用夹心ELISA法检测Ab2的水平取得了满意的结果。     

膀胱癌IL—2基因瘤苗诱导的抗肿瘤免疫反应

探讨以白细胞介素２（ＩＬ－２）基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗治疗膀胱癌的应用价值。旨质体介导法将携带ＩＬ－２基因的逆转录病毒载体转染入膀胱癌细胞系ＢＴＴ７３９中，流式细胞仪行细胞ＤＮＡ周期分析表明ＩＬ－２基因的地入及表达地ＢＴＴ７３９细胞的增殖无影响，放线灭活后ＢＴＴ７３９／ＩＬ－２细胞丧失增殖能力，但仍能维持一定水平的ＩＬ－２分泌活性达２周左右。先用灭活的基因瘤苗免疫小鼠，可诱导免疫保护，３周后接种     

登革病毒感染后小鼠细胞免疫功能的动态变化

从登革Ⅱ型病毒感染成年ＢＡＬＢ／ｃ小鼠为模型，观察感染后不同时间机体细胞免疫反应的变化。结果表明：感染后７－１４ｄ免疫功能处于激活状态，表现为腹腔巨噬细胞的吞噬功能和脾淋巴细胞对ＣｏｎＡ的反应及ＩＬ－２产生水平都明显高于对照组，感染２１ｄ后免疫功能则转为抑制状态，上棕免疫反应明显低于对照组，脾中的Ｌ３Ｔ４＾＋细胞亚群的百分比逐渐下降；相反，ＬＹＴ２＾＋细胞亚群的百分比逐渐升高，这种抑制现象可维持到     

人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体片段基因的构建与表达

目的 构建人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv（dsFv）抗体基因,并在原核系统中实现高效表达,制备有活性的人源抗狂犬病毒dsFv抗体片段。方法采用PCR定点突变的方法,构建抗狂犬病毒dsFv抗体的重、轻链（VH、VL）突变基因,NdeⅠ和NotⅠ双酶切后分别插入pET-22b（＋）表达质粒中,转化E.coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达。将VL、VH包涵体蛋白经盐酸胍变性,按比例混合在复性折叠缓冲液中,使二者折叠形成dsFv抗体片段。并以其母本抗体scFv作对照,对其抗原特异性和稳定性进行初步评价。结果 在VH的第44位氨基酸和VL的第100位氨基酸引入了半胱氨酸,成功构建了抗狂犬病毒dsFv抗体基因,并在原核系统中实现了对二者的高效表达,VH、VL蛋白在复性缓冲液中正确折叠形成了dsFv抗体片段。结论 对筛选获得的抗狂犬病毒scFv成功进行了稳定性改构,制备了有活性的dsFv抗体片段,改构以后的dsFv保持了对狂犬病毒的特异结合活性,而其在血清中的稳定性有明显改进,而且其热稳定性和抵抗尿素化学变性的能力亦大大改进。     

登革2型病毒中国分离株感染性全长cDNA克隆的构建与鉴定

目的：构建登革2型病毒中国分离株（DEN2-43）的感染性全长cDNA克隆.方法：根据我室测定的DEN2-43株病毒全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR技术扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,通过电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒.结果与结论：构建的DEN2-43基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及小鼠乳鼠神经毒力,且可稳定传代.该感染性克隆的构建为深入探讨登革病毒的致病机制及研制新型登革疫苗奠定了基础.     

治疗型HBV DNA疫苗肌注-电转染法免疫恒河猴的效果及安全性观察

为观察肌注—电转染法接种治疗型HBVDNA疫苗对恒河猴的免疫效果，对健康恒河猴采用肌注—电转染法接种治疗型HBV DNA疫苗，剂量分别为0．2mg／只、1mg／只和2mg／只；前3次给药时间间隔1个月，主要观察免疫效果；此后6次给药为每天1次，观察重复给药的安全性。结果显示肌注—电转染法接种疫苗后，不同剂量组均可有效诱导恒河猴产生HBsAg特异性抗体(抗—HBs)；重复给药未见明显的各系统毒副反应及血液学和血生化异常，血清抗核抗体(ANA)阴性。表明治疗型HBV DNA疫苗用肌注—电转染法免疫可显著增强恒河猴的免疫效果；多次重复接种该疫苗未见恒河猴的毒性反应，疫苗具有安全性。