HE染色切片褪色后免疫组织化学染色抗原修复方法

经甲醛固定的组织,由于各种交联键的形成,引起蛋白质的空间结构的改变,最终导致部分或全部的抗原决定簇被封闭,从而影响免疫组织化学检测的敏感性。因此,进行免疫组织化学检测时,绝大多数抗体需要进行抗原修复,以达到最理想的检测效果。为了防止脱片,用于免疫组织化学检测的组织切片几乎都是硅化玻片捞贴的,而普通玻片（即未经APES胶或多聚赖氨酸处理的玻片）捞贴的并已做HE染色的组织切片能否用于免疫组织化学检测？其处理方法与硅化玻片捞贴的组织切片是否一致？我们在这方面做了些尝试,现总结如下。     

不同抗原修复液对抗原微波修复结果的影响

免疫组织化学染色中，组织经福尔马林固定，使大量抗原决定簇被封闭，为获得满意结果，对组织切片进行抗原修复以暴露抗原决定簇十分必要。抗原修复的方法较多，其中微波修复法是目前应用最广的方法之,一但不同组织、不同抗原其所用微波强度、作用时间及选用缓冲液等均对结果影响甚大。我们对临床外检中多种组织和常用抗体的微波处理条件进行了摸索，现报道如下。     

微波抗原修复法在免疫组织化学双标记技术中的应用

微波抗原修复法在免疫组织化学双标记技术中的应用孙保存赵秀兰章明放林建韶随着免疫组织化学方法的普及，双标记技术的应用日益增多。但该技术操作复杂，影响因素多，不易获得满意结果。利用微波辐射对组织抗原进行修复可明显提高免疫组化染色效果。我们在对克隆病组织中...     

盐酸在免疫组化染色中的应用

免疫组化染色已成为临床病理诊断的重要手段之一,由于在常规制片过程中,常因组织标本经甲醛固定后,抗原被封闭,使染色效果不理想。目前,国内外报道多采用微波辐射、高压加热等方法来修复组织抗原,而应用盐酸水解的方法则较少报道,作者应用盐酸水解法来修复组织抗原,获得满意效果,介绍如下。１　材料和方法１－１　材料　本院手术送检的食管、胃、肠、乳腺、卵巢等肿瘤组织。均经４％甲醛固定、石蜡包埋,连续４μｍ厚切片,６０℃恒温箱烤片１～２４ｈ。载玻片先用多聚赖氨酸处理。１－２　试剂　１ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸水解液（配制…     

pH9.0 Tris-EDTA 和pH6.0 Citrate在抗原修复中的应用

甲醛是形态学和免疫组织化学的标准固定液。但是,经甲醛固定的组织常引起蛋白质空间结构的改变而导致抗原决定簇的封闭。抗原决定簇是否充分暴露,是免疫组织化学成败的关键因素之一。抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色中是一种简单有效的增强方法,但目前尚没有单一的化学物质既能作为基本的修复液又能作为最佳的抗原修复液,为了确定理想的修复液,我们采用“组合实验”的方法,比较了0．05mol／LTris＋0．001mol／L EDTApH9．0（简称pH9．0Tris-EDTA）和0．01mol／LpH6．0Citrate微波热修复及不修复的情况下,免疫组织化学染色的表达效果。     

三种粘片剂及不同烘烤温度和时间对免疫组化切片的影响

免疫组织化学染色过程中 ,因步骤多、微波高温修复、37℃孵育等因素 ,常出现脱片问题 ,造成染色的失败 ,浪费人工及试剂。为了解决脱片问题 ,同时又不使抗原或抗体受到破坏 ,我们选取了经免疫组化染色确定为强、中、弱三种反应强度的标本 ,分别用硌矾明胶、APES( 3- Amino PropyltriethoxySilane)、多聚赖氨酸 ( Poly- L - L ysine)三种粘片剂处理切片 ,再将切片经 37℃、5 0℃、6 0℃三种烘烤温度分别烤片 1 hr、2 hr、3hr、4hr及 1 2 hr,使用同样方法及程序染色 ,观察切片的肉眼观、粘贴程度及抗原抗体保存情况 ,结果为 :1.三种粘片剂…     

抗原修复技术研究发展的新起点

7年多前，我们曾经受贵刊编辑部之邀发表过“抗原修复技术研究进展”一文［1］。在那篇文章里，尽管已经有片言只语提到可以应用抗原修复技术原则从石蜡切片中提取蛋白质和核酸。但是，全文的主题与绝大部分内容还是局限在免疫组织化学染色的问题方面。转瞬过去的7年在后基因组时代的舞台上大放异彩，高通量检测数以千计的蛋白质组学分析技术的开发以及各种形形色色的蛋白质质谱分析技术的开发，在探讨人类疾病的多种相关生物标志物及其在诊断治疗上，正在扮演着先锋作用的重要角色［2-4］。图像质谱分析是最近开发出来的一门新技术，它是建立在质谱分析法特别是通过基质辅助激光解析（ matrix-assisted laser desorption ionization ）技术或者次级离子质谱分析法（ secondary ion mass spectrometry ）能够在一张组织切片上进行蛋白质、脂质等细胞组成成分在组织结构内的质谱分析。1997年，离子质谱分析法（ IMS ）最早由Caprioli的实验室发表。此后不久即开始用于临床研究，如癌组织中HER2表达以及分布等的研究显示出颇具魅力的发展前景。但是，这些新兴的技术从开始起步就面临着和20多年前免疫组织化学在常规甲醛固定石蜡包埋（ FFPE ）组织切片染色上同样的尴尬局面：必须依赖新鲜组织冷冻切片。随着抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色的广泛推广，人们从数以万计的近代有关加热抗原修复技术的文章中，毫不怀疑地认识到，加热抗原修复技术在免疫组织化学染色等方面取得的优异成果，开启了如何把现代分子生物学技术用于FFPE组织科研宝库的途径。继免疫组织化学染色之后，加热抗原修复技术的基本原理已经成功地被用于包埋前、后免疫电镜染色，核酸原位杂交，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记，从石蜡包埋组织中提取蛋白质或核酸等一系列的重要成绩。2008至2011年期间，意大利的Ronci等［5］、澳大利亚的Gustafsson等［6］、美国的Casadonte和Caprioli［7］相继发表了他们经过反复试验、成功地采用加热抗原修复技术方法，使得IMS能够用于常规FFPE组织切片的文章，由于从事IMS技术开发的科学家们逐渐从与日俱增的加热抗原修复在免疫组织化学染色等方面令人瞩目的成绩中，认识到FFPE人体组织是不可取代的极为宝贵的科学研究资源，任何一种现代化的分子生物学技术都不能够仅仅局限于新鲜组织冷冻切片。必须千方百计地寻求一种能够克服FFPE处理给予组织内高分子成分带来的负面影响的有效方法。于是，一切从事与常规FFPE组织标本相关联的科学研究和技术开发都顺理成章地归结到加热抗原修复技术。有力地证明这一极为简单的加热修复方法的确提供了解放石蜡组织中的蛋白质等高分子结构成分的坦途，开启了为病理学家和形态学家步入分子病理学、形态学的大门。     

微波辐射DAB胶体银免疫酶染色增敏法

微波辐射ＤＡＢ胶体银免疫酶染色增敏法张谷孙文勇免疫组织化学技术应用于肿瘤相关抗原标记，尤其是淋巴瘤的癌基因或受体等检测时，由于组织制备过程中抗原的破坏、丢失，或者组织本身仅有微量抗原，其最终的细胞免疫反应结果往往很弱。这给肿瘤明确诊断带来很大的困难。...     

抗原修复技术研究进展

自从应用抗原修复技术的文章于1991年发表后,抗原修复技术（煮沸石蜡切片于水溶液中）迅速、广泛应用于常规甲醛固定、石蜡包埋组织切片的免疫组织化学染色,从而打开了从传统形态学迈向分子形态学的大门。抗原修复技术被誉为免疫组织化学技术的革命性突破旧。Gown在评价抗原修复技术所取得的成就时,指出“在过去十多年里,抗原修复技术在诊断性免疫组织化学分析方面造成了如此深远的影响,使得这方面的文献分为2个时代：抗原修复技术前与抗原修复技术后时代。20世纪90年代初抗原修复技术的问世就是这两个阶段的分水岭”。     

c－erbB－2癌基因产物在胃癌中表达及预后意义的免疫组织化学研究

ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因产物在胃癌中表达及预后意义的免疫组织化学研究孙秀梅，刘国永，乔思杰一、材料与方法选用１９８４年以来本院６４例胃癌与４９例良性病变胃粘膜组织的石蜡标本重新包埋。５μｍ厚连续切片，进行免疫组化染色。ｕｎｉ—ｐａｋ试剂盒为德国Ｅ．Ｍｅ...     

抗原微波热修复对乳腺癌雌激素受体和孕激素受体免疫组织化学检测结果的影响

免疫组织化学是目前乳腺癌激素受体检测的常规方法,但免疫组织化学检测易受多种因素的影响,其标准化程度令人担忧.英国国家免疫细胞化学外部质量评估方案(NEQAS-ICC)曾评估200余个实验室对同一例乳腺癌组织进行的雌激素受体(ER)染色,发现仅36%的实验室获得准确的检测结果[1],提示抗原修复是影响免疫组织化学检测结果最主要的因素,而激素受体水平低的癌组织进行免疫组织化学染色更易受到各种因素的影响.     

VEGF、bFGF、PCNA和P53在人脑星形胶质瘤的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、增殖性细胞核抗原(PCNA)和抑癌基因蛋白(P53)在人脑星形胶质瘤中的表达。方法采用免疫组织化学(S-P)法,检测120例人脑胶质瘤标本中VEGF、bFGF、PCNA、P53的表达。结果在正常脑组织VEGF和PCNA无表达,bFGF和P53呈微量表达。Ⅰ~Ⅳ级人脑胶质瘤中VEGF、bFGF、PCNA、P53的阳性表达率随人脑胶质瘤病理分级的增加而增多,Ⅳ级>Ⅲ级>Ⅱ级>Ⅰ级(P<0.05)。结论VEGF、bFGF、PCNA、P53的过表达与人脑星形胶质瘤的恶性度呈正相关。     

制备硅化玻片技术方法的改进

防止组织切片或细胞涂片在染色过程中组织或细胞脱落 (简称脱片 )是免疫组织化学及原位分子杂交技术中的重要环节。为此 ,通常采用载玻片涂胶或硅化处理后再裱贴组织切片的方法来防止脱片。在众多的玻片涂胶和硅化方法当中 ,我们对一些方法进行了改进和探讨 ,总结出一种使玻片处理的操作更加简单 ,防止脱片效果更好的方法。一、材料与方法1.材料 :普通载玻片 ,3 氨丙基三乙氧基硅烷(3 Ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｉｔｒｉｅｔｈｏｘｙｓｓｉｃａｎｅ ,ＡＰＥＳ)试剂 ,为美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,多聚赖氨酸 (ｐｏｌｙ ｌｙｓｉｎ)和免疫组织化学试…     

免疫组织化学染色微波抗原修复的研究

免疫组织化学染色微波抗原修复的研究倪灿荣（上海第二军医大学病理学教研室，上海２００４３３）本实验室三年来对千余例各种肿瘤标本的石蜡切片进行抗原修复的研究．并选择部分标本分别作冰冻切片，常规石蜡切片进行抗原修复与不修复的对比研究，以观察经抗原修复后阳性...     

免疫组织化学抗原修复处理方法的改进

免疫组织化学抗原修复处理方法的改进韩昱晨贾心善（中国医科大学分子病理研究室沈阳１１０００１）免疫组化染色的成败，很大程度上取决于组织内抗原的保存及暴露，在用１０％福尔马林固定组织时，由于蛋白质的交联反应而导致了组织内蛋白抗原被封闭，以致影响抗原的显露...     

Ⅰ抗孵育时间对免疫组织化学实验结果的影响

众所周知，抗原与抗体之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学技术应用这一原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究。在神经科学领域，此项技术是不可缺少的。免疫组织化学染色方法有多种类型，但在染色过程中都需要采取一些基本的技术方法，以增强抗原、抗体的特异性反应，降低或消除非特异性反应，     

加热法修复抗原的方法和应用进展

加热法修复抗原的方法和应用进展石砚综述李甘地刘卫平审校作者单位：华西医科大学病理学教研室，成都６１００４１免疫组织化学在日常病理诊断中的作用越来越重要。但常规福尔马林液固定、石蜡包埋的组织，因固定液中甲醛的影响许多抗原失去了活性，导致假阴性的染色结果...     

福尔马林固定后Bcl-6抗原失活的修复及其机制

检测位于 3q2 7原癌基因 bcl- 6表达蛋白 Bcl- 6对淋巴瘤诊断及鉴别诊断有重要价值。我室发现活检组织经 10 %中性福尔马林或 4%多聚甲醛磷酸盐固定 2 4h后 ,Bcl- 6的抗原活性基本遮蔽或消失。关于 Bcl- 6抗原的修复方法 ,国外报道不一。本研究室用免疫组织化学方法比较了 1m mol/ L p H8.0EDTA、10 mm ol/ L p H6 .0枸橼酸、15 mm ol/ L p H8.0碳酸钠和去离子水 (美国 Milipore制纯水器生产 ) 4种常用而修复机制不同的修复液 ,分别配合高压 (切片置压力锅内 ,加热至压力阀喷气后 1min,凉水冷却至室温 )、微波 (医用微波炉中低档修复 …     

肾移植后多瘤病毒相关性肾病

背景：多瘤病毒感染是导致多瘤病毒相关性肾病和移植肾失功的重要原因之一。 目的：观察分析多瘤病毒相关性肾病的临床特征及其病理学特点。 方法：121例患者移植肾活检行多瘤病毒大T抗原染色,发现9例阳性诊断为多瘤病毒相关性肾病,利用SV-40 大 T 抗原免疫组织化学染色,对确认为多瘤病毒相关性肾病患者进行临床、病理、免疫荧光、免疫组织化学观察。 结果与结论：多瘤病毒相关性肾病组肾活检时检测霉酚酸-AUC 0-12和他克莫司血药浓度均明显高于同期非多瘤病毒相关性肾病组(P < 0.05)。9例活检组织经SV-40 大T抗原染色,肾皮质和髓质均可见散在的肾小管多瘤病毒阳性。免疫荧光IgG,IgM,IgA,C3,C4,C1q和C4d全阴性,所有肾组织病理均可见肾间质大量聚集的CD3,CD4,CD8,CD68阳性细胞,1例合并排斥反应者,人白细胞DR抗原和白细胞介素2受体高表达;不合并排斥者人白细胞DR抗原和白细胞介素2受体表达多小于5%。9例多瘤病毒相关性肾病患者随访均超过半年,移植肾失功1例,3例好转,2例稳定,3例恶化。结果表明,多瘤病毒相关性肾病的诊断主要依赖于移植肾活检组织病理;利用SV-40 大T 抗原免疫组织化学染色可提高多瘤病毒相关性肾病的诊断率;移植肾组织C4d、白细胞介素2受体和人白细胞DR抗原检测对多瘤病毒感染相关性肾病的鉴别诊断具有极其重要的临床价值。     

口腔淋巴瘤的临床病理、免疫表型与分型的研究

一、材料和方法材料来源于我院病理科 1984～ 2 0 0 0年活检诊断为原发口腔淋巴瘤 2 6例 ,所有病例均详细观察临床症状、体征、局部病变。全部标本均 4 %甲醛固定 ,石蜡包理切片 ,ＨＥ染色 ,同时应用上皮膜抗原 (ＥＭＡ)、白细胞共同抗原 (ＬＣＡ)、ＣＤ2 0、ＣＤ4 5ＲＯ、ＣＤ3、ＣＤ5 6、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、к与λ链抗体作ＳＰ法免疫组织化学染色。抗体来自美国ｍａｘｉｎ公司。以正常淋巴结和已知Ｂ、Ｔ细胞淋巴瘤切片作对照。全部病例重新按ＷＨＯ 1997淋巴瘤新分类进行诊断分型。二、结果1 临床特点 :2 6例中男 9例 ,女 17例。年…