Fas基因转导大肠癌细胞株的表达

目的建立表达外源性Fas基因的大肠癌细胞株,观察Fas基因在转导前后的表达。方法采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆位点之间,以脂质体介导法将Fas基因导入受体细胞LoVo,用G418筛选克隆细胞。以dot blotting,Western blotting检测转导细胞Fas基因的表达。结果成功建立了Fas基因表达株。转导株在RNA及其蛋白水平表达均明显高于非转导株,转导细胞增殖速度、倍增时间、对数生长期等均比非转导株更为缓慢,但无显著性差异,在Fas抗体作用下,转导株细胞生长明显受到抑制,有非常显著性差异。结论Fas基因在大肠癌细胞中处于低表达状态;通过真核表达载体介导,Fas基因在RNA及其蛋白水平能有效表达。Fas表达株在Fas抗体作用下可明显抑制体外培养的大肠癌细胞的生长增殖。     

Fas转导大肠癌细胞诱导其凋亡的实验研究

目的：观察Fas转导大肠癌细胞株诱导大肠癌细胞凋亡效应，可望为进一步研究大肠癌的Fas基因治疗提供实验依据。方法：以流式细胞术(FCM)及琼脂糖凝胶电泳法捡测Fas转导大肠癌细胞调亡效应。实验分四组：a.LoVo细胞组b．LoVo细胞 Fas抗体组c.LOVo转导细胞组dLoVo转导细胞 Fas抗体组。结果：Fas转导大肠癌细胞株 Fas抗体组(d)细胞凋亡率明显高于a,b,c组。结论：Fas表达细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径。     

大肠癌组织Fas抗原表达的临床生物学意义

目的：探讨凋亡相关基因Fas抗原在大肠癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法：采用SABC免疫组化方法对32例大肠癌和16例正常大肠组织中的Fas抗原进行检测,结果L大肠癌中Fas抗原阳性率降低53．1％,与正常组织比较差异有显著性（P＜0．01）,Fas抗原表达阳性率与大肠癌组织学分类及肝转换相关（P＜0．05）。结论：Fas抗原可能是反映大肠癌临床病理特征、生物学行为和预后的重要标记物。     

Fas在大肠癌及癌旁组织的不同表达及意义

目的研究Fas在人体大肠癌及癌旁组织中的表达. 方法应用SP免疫组化方法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法）对49例大肠癌及癌旁组织中的Fas基因的表达进行检测. 结果凋亡基因Fas在大肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）,且高分化腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）,但在不同分级的大肠癌及其癌旁组织之间的阳性率无明显差异. 结论分化低的大肠腺癌癌旁组织中的细胞凋亡活动较活跃,有利于肿瘤的浸润与破坏.     

细胞凋亡和相关基因Fas和bax在食管癌中的表达

目的：探讨细胞凋亡和相关基因Fas和bax蛋白在食管癌发生发展中的作用。方法:应用DNA末端标记、流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测70例食管鳞癌组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas和bax蛋白的表达。结果:凋亡指数与肿瘤病理分级和淋巴结转移密切相关(P＜O．05)。Fas蛋白的表达与肿瘤病理分级密切相关(P＜O．05)。凋亡指数与Fas和bax蛋白表达呈正相关(P＜O.05)。结论:细胞凋亡及相关基因Fas和bax和蛋白异常表达在食管癌发生发展中起重要作用。     

大肠癌Fas、FasL表达、突变与肝转移关系的研究

目的：探讨Ｆａｓ、ＦａｓＬ系统表达、突变与大肠癌转移的关系;方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测大肠癌原发灶、肝转移灶、癌旁肠粘膜、门静脉 Ｆａｓ、ＦａｓＬ表达、突变。结果：在８６例大肠癌原发灶、肝转移灶、癌旁肠粘膜、门静脉血淋巴细胞中Ｆａｓ表达率分别为６７．４％、６３．２％,４１．９％,８７．２％。Ｆａｓ突变率分别为５０．０％。７０．８％,２５％,８．９％。在大肠癌栽⒃睢⒏巫圃钪校     

Fas基因在人月经周期形成中的作用

目的研究凋亡诱导因子Fas基因与正常妇女月经周期性变化的关系。方法用免疫组化ABC法检测了40例正常月经周期各时限子宫内膜组织中Fas基因蛋白的表达情况。结果Fas基因蛋白在增生期子宫内膜中的表达评分(149.20±87.80)明显低于分泌期子宫内膜中Fas蛋白的表达评分(251.80±63.70);Fas蛋白在增生早期子宫内膜中表达评分(210.00±52.90)明显高于增生晚期子宫内膜中的表达评分(99.50±79.80),P<0.01;Fas蛋白在分泌早期子宫内膜中表达评分(260.60±66.80)与分泌晚期子宫内膜表达评分(244.50±63.40)相差无显著性,P>0.05。结论Fas基因蛋白的表达可能参与了子宫内膜的周期性变化,并参与月经周期的形成。     

Fas抗原表达与慢性乙型肝炎关系的进展

细胞凋亡为近年来国内外医学界研究的热门课题 ,有其进展日新月异之感觉。研究认为 ,肝细胞凋亡和肝细胞坏死有非常密切的关系。肝内细胞毒性Ｔ细胞 (ＣＬＴ)包括ＣＤ 4及ＣＤ 8,其ＣＴＬ可以通过释放穿孔素 ,颗粒酶以及ＦａｓＬ系统引起肝细胞凋亡及坏死。国内外许多学者发现乙型肝炎患者肝细胞表达Ｆａｓ及ＦａｓＬ。肝内侵润的Ｔ细胞表达的ＦａｓＬ ,肝内Ｆａｓ及ＦａｓＬ表达程度和病情轻重程度相关。肝内表达ＦａｓＬ可以自身导致肝细胞凋亡 ,也可能做活化Ｔ细胞形成免疫耐受[1 ] 。1　Ｆａｓ系统与细胞凋亡Ｆａｓ是人体多种细胞的一种…     

Fas基因在卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的：检测Ｆａｓ基因表达并观察转染Ｆａｓ基因对卵巢癌细胞凋亡的影响,探讨其在卵巢癌发生、发展中的作用。方法：经流式细胞术、ＲＴ－ＰＣＲ方法检测６种卵巢癌细胞Ｆａｓ的表达水平。构建ｐｃＤＮＡ３－Ｆａｓ真核表达载体。经脂质体转染细胞,通过流式细胞仪检测Ｆａｓ基因表达变化。应用ＰＩ染色经流式细胞术检测观察转染Ｆａｓ基因对３ＡＯ细胞凋亡的影响。结果：６种卵巢癌细胞均表达Ｆａｓ均属中低表达,经ｐｃＤＮＡ３－     

5-氟尿嘧啶对大肠癌Fas蛋白表达的调控作用

目的：探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）对大肠癌细胞Fas蛋白表达水平的调控作用。方法：采用流式细胞术检测了培养的9株细胞（6株为大肠癌细胞）Fas蛋白的表达情况,并观察了5-Fu（260mol/L）处理后大肠癌细胞Fas蛋白表达水平的变化。结果：在检测的6株人大肠癌细胞中,有5株肿瘤细胞表面表达Fas蛋白;用临床浓度的5-Fu处理后,HCT-116和WiDr的Fas蛋白的表达水平显上调。结论：5-Fu可上调肿瘤细胞Fas表达水平,由此可能增加其对Fas介导的机体免疫监视作用的敏感性。     

c-FLIP mRNA在大肠癌细胞中的表达及其与Fas抗原表达的相关性

目的:探讨cFLIP(细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白) mRNA在大肠癌细胞中的表达及其与Fas抗原(CD95)表达的相关性.方法:应用RT-PCR方法检测3株人大肠癌细胞株中c-FLIP mRNA的表达,采用间接免疫荧光标记流式细胞术检测大肠癌细胞Fas抗原表达.结果:SW1116及SW620细胞株 c-FLIP mRNA 表达阳性并相对高水平表达Fas抗原,而LoVo细胞株c-FLIP mRNA表达阴性并低水平表达Fas抗原.结论:在大肠癌细胞中,c-FLIP mRNA的表达趋势与Fas抗原一致,提示c-FLIP可能在抑制Fas抗原诱导的细胞凋亡中发挥重要作用.     

结直肠癌和息肉中Caspase通路上基因表达水平

目的:检测结直肠正常黏膜-结直肠息肉-结直肠癌中Caspase凋亡通路上相关基因的mRNA表达水平,探讨其在结直肠癌发生、发展中的作用.方法:收集了19例结直肠癌患者的肿瘤组织、86例结直肠息肉患者的息肉组织和10例正常对照的结直肠黏膜组织.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT.PCR)测定结直肠正常黏膜、结直肠息肉、结直肠癌中Caspase通路上基因(Caspase-2、-3、-6、-7、-8、-9和.10)的mRNA表达水平.结果:年龄、性别等人口学特征在正常对照、息肉及结直肠癌病例组问分布均衡;与正常黏膜组比较,除Caspase-3在结直肠癌中表达升高外,其它基因mRNA表达均下降,但都没有达到统计学上的显著性水平;此外,除Caspase-9外,这些Caspase基因相互间mRNA表达水平存在显著的的正相关关系.结论:未发现Caspase凋亡通路上相关基因mRNA表达水平在肿瘤形成过程中发生显著变化;Caspase通路上基因相互之间表达水平呈显著相关.     

MiR-182在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞迁移能力的影响

目的 检测miR-182在结直肠癌中的表达情况及与临床病理参数的关系,探讨其对结直肠癌细胞迁移能力的影响。方法 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测86例患者结直肠癌与对应癌旁组织中miR-182的表达情况,分析其与结直肠癌临床病理参数之间的关系。体外用miR-182 mimics和阴性对照转染结直肠癌HT-29细胞,将实验分为miR-182组、阴性对照组和空白组,transwell小室实验观察 miR-182对HT-29细胞迁移能力的影响。结果 MiR-182在结直肠癌的表达显著高于癌旁(P<0.001),其表达水平与患者的浸润程度(P=0.028)、淋巴结转移(P=0.003)、远处转移(P=0.006)和临床分期(P=0.005)密切相关, 而与年龄、性别、肿瘤类型、肿瘤大小和分化程度无相关性(P均>0.05)。体外实验进一步表明,miR-182过表达的HT-29细胞迁移数显著高于阴性对照组和空白组(P均<0.05)。结论 MiR-182在结直肠癌中高表达且与肿瘤的转移及进展有关,体外能增强结直肠癌细胞的迁移能力,提示miR-182可作为预防和治疗结直肠癌转移的潜在靶点。     

Fas、FasL在婴幼儿血管瘤内皮细胞的表达

目的:检测培养的婴幼儿血管瘤内皮细胞Fas和Fas Ligand(FasL)的表达量.方法:采用组织块结合酶消化法培养婴幼儿血管瘤内皮细胞,细胞培养成功后,分别运用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和荧光定量聚合酶链反应(fluores-cent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)2△△CT法检测培养的血管瘤内皮细胞Fas、FasL和Fas、FasL mRNA表达量,并分别与阳性对照人Jurkat细胞和阴性对照人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)进行比较.结果:FCM检测培养的血管瘤内皮细胞Fas表达率为(90.97±2.36)%,阳性对照Jurkat细胞Fas表达率为(93.87±7.60)%,两者相比无显著差异(P>0.05),但高于阴性对照HUVEC(25.07±7.60)%;FQ-PCR结果显示,血管瘤内皮细胞Fas mRNA的表达量为(1.26±0.72),与阳性对照Jurkat细胞的表达量(1.448±0.059)比值为0.87,差异无显著性(P>0.05),与阴性对照HUVEC的表达量(0.354±0.170)之比为3.56,差异具显著性(P<0.01).FCM和FQ-PCR检测FasL和FasL mRNA在血管瘤内皮细胞、Jurkat细胞和HUVEC表达量均很低,没有生物学意义.结论:Fas在婴幼儿血管瘤内皮细胞呈高度表达,而FasL的表达量很低.血管瘤内皮细胞凋亡和Fas高表达相关.     

RNF2在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨环指蛋白2（RNF2）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞生物学行为的影响。方法 采用免疫组织化学法检测RNF2在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达，并利用过表达的慢病毒转染HCT116细胞构建过表达RNF2的HCT116细胞系，通过CCK-8法、划痕实验、Transwell实验检测过表达RNF2对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。结果 结直肠癌组织中RNF2阳性表达率高于癌旁正常组织（P <0.05）；不同年龄、组织学类型、分化程度、Dukes分期、淋巴结转移的结直肠癌患者的RNF2表达阳性率比较，差异有统计学意义（P <0.05）；HCT116组、HCT116-control组、HCT116-RNF2组HCT116细胞增殖、迁移能力及侵袭能力比较，差异有统计学意义（P <0.05）；HCT116-RNF2组细胞增殖速度、迁移能力及侵袭能力均高于HCT116-control组和HCT116组（P <0.05）。结论 RNF2在结直肠癌中呈高表达，且过表达RNF2可促进结直肠癌细胞迁移、增殖、侵袭能力，可为结直肠癌治疗提供新的治疗靶点。     

miR-139在结直肠癌组织中的表达及其对癌细胞生长的影响

目的 探讨miR-139 在结直肠癌组织中的表达以及上调miR-139表达对结直肠癌细胞生长的影响. 方法 应用实时定量PCR法检测miR-139在20例大肠癌组织及癌旁组织中的表达, HT29 细胞转染 miR-139 mimics 后,通过MTT、Softagar方法检测miR-139对大肠癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测miR-139对大肠癌细胞迁移和侵袭的影响. 结果 miR-139 在结直肠癌组织中表达量明显低于癌旁组织(P<0. 01). 转染miR-139 mimics的HT29 MTT实验中第1天至第5 天的吸光度( OD)值与对照组相比显著减低. Softagar实验中计数对照组每个视野( 41 ± 5 ) , miR-139每个视野(72 ±5),差异有统计学意义(P<0. 01). Transwell小室实验显示,与阴性对照相比,转染 miR-139 mimics 后, HT29细胞的迁移及侵袭能力明显下降. 结论 miR-139在结直肠癌组织中低表达,miR-139表达上调可抑制HT29 生长、迁移及侵袭能力,miR-139有潜在抑癌作用.     

DCC和MKK4基因在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨结直肠癌缺失基因(DCC)和丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)在人结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白质印记(Western-blot)法、免疫组织化学法,对60例结直肠癌组织及对应癌旁组织中的DCC、MKK4基因表达水平进行检测,并结合患者临床病理因素分析DCC、MKK4表达与临床病理特征的关系。结果:结直肠癌组织中DCCmRNA、MKK4mRNA基因表达水平均低于癌旁组织(P<0.05);结直肠癌组织中DCC、MKK4蛋白表达水平均低于癌旁组织(P<0.05);结直肠癌组织中DCC、MKK4蛋白表达的阳性率低于癌旁组织(P<0.05);结合患者临床病理参数发现,DCC、MKK4蛋白表达水平均与肿瘤分化程度、淋巴转移、远处转移有显著相关性(P<0.05)。结论:DCC、MKK4是结直肠癌的抑制基因,在结直肠癌的发生、发展及转移等过程中发挥一定作用。