红细胞生成素对高糖诱导肾小管细胞凋亡的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）是否可以抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡及其相关机制。 方法 传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、渗透浓度对照组（OC组）、高糖组（HG组）、高糖+EPO 50 U/ml组（E1组）和高糖+EPO 100 U/ml组（E2组）。免疫荧光检测NRK-52E细胞有无EPO受体（EPOR）表达。Western印迹检测高糖对EPOR表达的影响。流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡指数。荧光探针CM-H2DCFDA检测细胞内活性氧（ROS）的水平。RT-PCR检测bcl-2、bax、capases-3 mRNA的表达。 结果 （1）NRK-52E细胞表达EPOR,且高糖可刺激EPOR表达增加。（2）高糖可诱导NRK-52E细胞凋亡,与葡萄糖相同渗透浓度的甘露醇不能明显诱导细胞凋亡。E1、E2组细胞早、晚期凋亡率显著低于HG组（P < 0.05）。（3）高糖刺激 NRK-52E细胞后,细胞内ROS产生增多,bcl-2 mRNA的表达下调,bax、caspase-3 mRNA的表达上调。EPO可以抑制细胞内ROS的产生,上调bcl-2 mRNA 表达,下调bax、caspase-3 mRNA 表达。 结论 EPO可能通过EPOR的介导,缓解高糖诱导的氧化应激,上调bcl-2 mRNA表达,下调bax、caspase-3 mRNA表达,抑制NRK-52E细胞凋亡。     

姜黄素保护大鼠肾小管上皮细胞对抗氧化应激引起的损伤作用

目的 探讨姜黄素对氧化应激诱导大鼠近端肾小管上皮细胞 (NRK-52E) 损伤作用的影响。 方法 用不同浓度的H2O2处理NRK-52E细胞,建立氧化应激损伤NRK-52E的实验模型。应用Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞的形态学改变;PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹法检测Bcl-2蛋白的表达。 结果 H2O2在100~500 μmol/L浓度范围内处理NRK-52E细胞24 h,呈浓度依赖性地增加细胞的凋亡率;500 μmol/L H2O2能显著抑制NRK-52E细胞Bcl-2的表达（P < 0.05）。20 μmol/L和40 μmol/L姜黄素能显著阻断H2O2对NRK-52E细胞的致凋亡作用[（32.9±8.1）%、（22.23±9.3）%比（72.7±10.5）%,均P < 0.05],并能显著拮抗H2O2对Bcl-2蛋白表达的下调作用（P < 0.05）。40 μmol/L姜黄素本身也能上调Bcl-2蛋白的表达（P < 0.05）。 结论 姜黄素能保护NRK-52E细胞对抗氧化应激引起的细胞凋亡,此肾小管上皮细胞保护作用可能与其抑制H2O2对Bcl-2蛋白表达的下调作用有关。     

血红素加氧酶1对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨血红素加氧酶1（HO-1）对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响及其可能机制。 方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）为正常对照。白蛋白对照组加去脂的小牛血清白蛋白（BSA）30 g/L共同培养。干预组先加钴卟啉（Cobalt protoporphyrin IX,CoPP,血红素加氧酶1诱导剂）5 μmol/L,0.5 h后再加入BSA 30 g/L,作用24 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测CoPP对BSA抑制NRK-52E细胞增殖的影响。细胞免疫荧光染色检测细胞凋亡率。RT-PCR法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax mRNA表达情况。 结果 与正常对照组比较,BSA对细胞增殖具有抑制作用并诱导细胞凋亡,差异有统计学意义（P < 0.05）,而CoPP对BSA引起的细胞毒性作用具有保护作用（P < 0.05）;BSA对照组HO-1 mRNA表达增加（0.44±0.06比0.39±0.05,P < 0.05),差异有统计学意义（P < 0.05）。CoPP预处理后,HO-1 mRNA表达（0.50±0.06）较BSA对照组增加（P < 0.05）。BSA可上调Bax mRNA表达(0.87±0.04比0.67±0.03,P < 0.05）及下调Bcl-2 mRNA的表达（0.25±0.04比0.42±0.02,P < 0.05),当加入CoPP预处理后可抑制上述改变（Bax mRNA：0.75±0.07,Bcl-2 mRNA：0.36±0.03,均P < 0.05）。 结论 BSA可显著增加细胞的凋亡率并直接调控凋亡相关蛋白mRNA的表达,CoPP可抑制上述BSA的作用。HO-1对BSA所致肾小管上皮细胞凋亡具有保护作用,可以抑制细胞凋亡。     

活性氧介导醛固酮诱导的足细胞凋亡

目的 观察醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对足细胞活性氧（ROS）产生及凋亡的影响,并探讨其可能机制。 方法 体外培养条件的永生化小鼠足细胞系,分为空白对照组、ALD组、SPI组、ALD+SPI组;用荧光分光光度计检测足细胞内ROS水平;间接免疫荧光检测nephrin表达;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;RT-PCR、Western 印迹法检测bax、bcl-2 mRNA及蛋白表达。同时观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对上述效应的阻断作用。 结果 与对照组相比,ALD诱导足细胞ROS产生增多（P < 0.05）,该作用可被SPI阻断（P < 0.05）。ALD可诱导足细胞nephrin表达降低及足细胞凋亡（P < 0.05）,同时伴有bax mRNA、蛋白表达升高及bcl-2 mRNA、蛋白表达降低（P < 0.05）,SPI及NAC可阻断这一变化（P < 0.05）。 结论 ALD通过ROS途径作用于盐皮质激素受体上调促凋亡因子bax表达,下调抑凋亡因子bcl-2表达,进而诱导足细胞凋亡。     

马兜铃酸促进肾小管上皮细胞转分化的发生及温阳活血方干预作用研究

目的：探讨马兜铃酸（aristolochic acid,AA）在大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）转分化中的可能作用,及温阳活血方拮抗转分化机制。方法：（1）MTT法检测不同浓度温阳活血方含药血清对NRK-52E细胞增殖的影响。（2）免疫细胞化学法检测不同浓度AA（0、5、10、20、40μg/ml）对NRK-52E细胞表达α-平滑肌肌动蛋白的影响。（3）ELISA法检测AA刺激下Col-Ⅰ的表达及温阳活血方对其调控作用。（4）Real-Time PCR法检测温阳活血方对TGF-β1mRNA、ET-1mRNA、VEGF mRNA等肾间质纤维化相关因子的调控作用。结果：（1）AA5μg/ml、AA10μg/ml、AA20μg/ml、AA40μg/ml均可刺激NRK-52E表达α-平滑肌肌动蛋白,AA10μg/ml浓度下α-平滑肌肌动蛋白表达较强。（2）AA刺激NRK-52E细胞12h、24h、48h后,Col-Ⅰ的表达水平随着时间的延长而增强。（3）马兜铃酸刺激NRK-52E细胞24h后,TGF-β1mRNA表达上调（P〈0.05）,VEGF mRNA表达显著下调（P〈0.01）,ET-1mRNA的表达显著上调（P〈0.01）,Col-Ⅰ表达水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,温阳活血方干预下,TGF-β1mRNA表达下调（P〈0.05）,VEGF mRNA表达显著上调（P〈0.01）,ET-1mRNA有下调趋势,Col-Ⅰ表达水平显著下调。结论：（1）马兜铃酸可促进肾小管上皮细胞转分化的发生。（2）温阳活血方具有拮抗肾小管上皮细胞转分化作用。     

促红细胞生成素抑制过氧化氢诱导的肾小管细胞凋亡

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）是否可以抑制过氧化氢（H2O2）诱导的氧化应激和细胞凋亡及其抑制凋亡的相关机制。方法传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、H1组（1mmol／L H2O2）、H2组（5mmol／LH2O2、E组（H2U＋EPO组）。细胞免疫荧光检测NRK-52E细胞是否表达EPO受体（erythropoietin receptor,EPOR）。荧光探针氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（CM—H2DCFDA）标记检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。流式细胞仪AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡指数。RTPCR检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤／白血病-2（B-cell lymphoma／L eukemia-2,Bcl-2）家族中Bcl-2和BaxmRNA的表达。结果NRK52E细胞表达EPOR。H2O2引起NRK-52E细胞内ROS水平升高,上调BaxmRNA表达、下凋Bcl-2mRNA表达,诱导NRK-52E细胞凋亡。EPO可以抑制H2O2诱导的ROS水平升高、Bcl2mRNA表达下调、BaxmRNA表达上调及NRK-52E细胞凋亡。结论EPO可以缓解H2O2诱导的氧化应激、上调Bcl-2mRNA表达、下调BaxmRNA表达,抑制H2O2诱导的NRK52E细胞凋亡,发挥肾小管细胞保护效应。     

肾上腺髓质素对缺氧复氧诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)对缺氧复氧(HR)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的影响及其机制.方法 体外培养的NRK-52E细胞,随机分为4组:正常对照组、HR组、空质粒+HR组、ADM质粒+HR组.采用Fugene HD转染试剂,将pcDNA3.1-myc-his B空质粒和ADM真核表达质粒分别转染至NRK-52E细胞内,应用免疫细胞化学的方法检测转染效率,转染成功48 h后制作HR模型.锥虫蓝摄取法进行细胞计数并计算细胞存活率,分光光度法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量评价细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测ADM、Bax、Bcl-2、Fas的mRNA表达;Western印迹法检测活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8、9(Caspase-3、8、9)的蛋白表达.结果 HR组ADM的表达显著高于正常对照组(P＜0.05).ADM质粒+HR组的ADM表达显著高于空质粒+ HR组(P＜0.05).与正常对照组相比,HR组活细胞计数和细胞存活率显著降低,LDH含量及细胞凋亡率显著升高,Bax、Bcl-2、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著上调,Bax上调更明显,故Bax/Bcl-2升高(均P＜0.05).与HR组相比,ADM质粒+HR组活细胞计数和细胞存活率显著升高,LDH含量及细胞凋亡率显著降低,Bax、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著下调,Bcl-2表达进一步上调,Bax/Bcl-2降低(均P＜0.05).空质粒+HR组和HR组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ADM在NRK-52E细胞中的高表达可以减轻HR诱导的细胞凋亡,其机制至少部分是通过抑制线粒体通路和死亡受体通路实现的.     

血管紧张素Ⅱ通过TLR4-MyD88途径诱导大鼠肾小管上皮细胞炎性因子释放

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激肾小管上皮细胞（NRK-52E）后肿瘤坏死因子α（TNF-α）和热休克蛋白47（HSP47）的表达,分析Toll样受体4（TLR4）信号通路的变化与上述因子的关联,探讨AngⅡ促进NRK-52E细胞炎性反应、纤维化的天然免疫机制。 方法 细胞同步化后,将其分为4组：对照组、AngⅡ（10-7 mmol/L）组、坎地沙坦（10-5 mmol/L）+AngⅡ组、TLR4阻断剂（20 mg/L）+AngⅡ组,培养6 h后RT-PCR法检测TLR4及转接信号髓分化因子88（MyD88）mRNA表达水平;12 h后免疫荧光法检测细胞表面TLR4蛋白表达;24 h后以ELISA法检测细胞上清液TNF-α及HSP47的浓度。 结果 与对照组相比,AngⅡ显著上调NRK-52E细胞 TLR4、MyD88 mRNA和TLR4蛋白表达（均P < 0.01）,并诱导细胞TNF-α和HSP47的释放（均P < 0.01）。与AngⅡ组相比,TLR4阻断剂和坎地沙坦干预均显著抑制 AngⅡ对细胞TLR4、MyD88的刺激效应（均P < 0.01）;坎地沙坦抑制AngⅡ诱导的细胞 TNF-α、HSP47的释放（均P < 0.01）,TLR4阻断剂对细胞 TNF-α、HSP47的下调呈剂量依赖性。 结论 AngⅡ对NRK-52E细胞天然免疫信号TLR4、MyD88具有激活效应,该信号激活可能是AngⅡ促进肾小管细胞炎性相关因子释放的重要机制之一。坎地沙坦抑制肾小管细胞炎性因子的体外效应也与其调节该信号通路有关。     

氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞核因子κB活性的影响

目的 观察氟伐他汀对血管紧张素（Ang）Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）内核因子（NF）κB活性的影响。 方法 将NRK-52E细胞分为（1）对照组;（2）不同浓度及时间AngⅡ组;（3）AngⅡ（10-6 mol/L）+SB203580（10 μmol/L）组;（4）AngⅡ（10-6 mol/L）+不同浓度氟伐他汀（10-7、10-6、10-5 mol/L）组;(5)AngⅡ（10-6 mol/L）+氟伐他汀（10-5 mol/L）+甲羟戊酸（10-4 mol/L）组。电泳迁移率变动分析法（EMSA）检测NF-κB活性变化。Western印迹方法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化水平。RT-PCR方法检测单核细胞趋化因子（MCP-1）mRNA表达。 结果 AngⅡ呈剂量依赖性上调NF-κB DNA结合活性、p38MAPK的磷酸化水平以及MCP-1 mRNA表达（P < 0.01）。AngⅡ(10-6 mol/L) 刺激5 min即可增加p38MAPK蛋白磷酸化水平（P < 0.01）。AngⅡ刺激30 min后NF-κB活性显著升高（P < 0.01）,2 h达高峰（P < 0.01）。p38MAPK 特异性抑制剂SB203580可阻断AngⅡ对NF-κB的激活作用（P < 0.01）。氟伐他汀可呈剂量依赖性下调AngⅡ诱导的NRK-52E细胞内p38MAPK磷酸化和NF-κB活化,以及其下游趋化因子MCP-1表达（P < 0.05）。甲羟戊酸（10-4 mol/L）可逆转氟伐他汀的作用（P < 0.05）。 结论 氟伐他汀可能通过抑制p38MAPK信号转导通路,下调AngⅡ诱导的NRK-52E细胞内NF-κB的活化。甲羟戊酸可部分逆转氟伐他汀的作用。     

JNK-c-Jun信号通路下调连接蛋白43的表达引起肾小管上皮细胞转分化

目的 观察c-Jun氨基末端激酶（JNK）-c-Jun通路对连接蛋白43（Cx43）表达的影响及在转化生长因子（TGF）β1诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）中的作用。 方法　大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）随机分成3组：对照组、TGF-β1（10 μg/L）组和TGF-β1（10 μg/L）+JNK选择性抑制剂SP600125（50 μmol/L）组。用免疫细胞化学、Western印迹检测JNK、c-Jun、连接蛋白43（Cx43）、上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）和肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达。用RT-PCR检测Cx43的mRNA水平。用激光共聚焦显微镜荧光漂白恢复（FRAP）技术检测NRK-52E细胞间通讯功能。 结果 TGF-β1引起肾小管上皮细胞α-SMA、JNK、c-Jun表达上调（均P < 0.05）,Cx43、E-cadherin表达下调（均P < 0.05）,Cx43的mRNA水平下降（P < 0.05）,细胞间通迅功能下降 （P < 0.05）。JNK抑制剂处理后,上述改变明显减轻。 结论 TGF-β1引起肾小管上皮细胞内JNK表达上调,增加c-Jun活性,从而抑制Cx43的表达和降低细胞间通迅功能,导致TEMT。     

肝细胞生长因子下调Smurf2拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化

目的 通过观察肝细胞生长因子( HGF)对正常大鼠肾上皮细胞(NRK-52E)转化生长因子β1( TGF-β1)诱导的Smad泛素化调节因子2(Smurf2)表达的影响,探讨HGF拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的分子机制.方法 以NRK-52E细胞为研究对象,给予TGF-β1(5μg/L)处理0～24 h;或部分细胞经HGF(20 μg/L)预处理30 min后,再予TGF-β1(5μg/L)处理1h或48 h;另外部分细胞予以Smurf2质粒表达载体或Smurf2 siRNA 转染24 h后,再予HGF处理24 h.应用Western印迹及间接免疫荧光染色方法检测Smurf2、SnoN、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)的表达.结果 与对照组相比,TGF-β1处理后迅速上调NRK-52E细胞中Smurf2蛋白表达(P＜0.01);同时显著诱导FN和α-SMA蛋白表达,并下调E-cadherin表达.而予HGF预处理细胞后,可快速抑制TGF-β1诱导的Smurf2表达上调(P＜0.01);并逆转TGF-β1介导的SnoN(P＜0.01)、E-cadherin(P＜0.05)、α-SMA(P＜0.01)和FN(P＜0.01)表达变化.此外,在NRK-52E细胞中过表达Smurf2蛋白可部分抑制HGF诱导的SnoN蛋白上调;而抑制Smurf2表达则可进一步促进HGF诱导的SnoN蛋白表达.结论 在肾小管上皮细胞中,HGF可能通过下调Smurf2表达抑制SnoN蛋白发生泛素-蛋白酶体依赖性降解,进而拮抗TGF-β1介导EMT形成.     

Sonic hedgehog signaling is involved in aristolochic acid-induced renal tubular epithelial cells injury in vitro

Objective To investigate the molecular mechanism of aristolochic acid (AA)-induced renal tubular epithelial cells (NRK-52E) injury, and to elucidate possible role of sonic hedgehog (Shh) signaling in this process. Methods The proliferation inhibition rate was measured by WST-1 assay in vitro after NRK-52E cells were treated with AA (1, 10, 100 mg/L) for 12, 24, and 48 h, respectively. Cell apoptosis was determined by Hoechst 33258 staining. mRNA expressions of Smo, Ptch1, α-SMA, E-cadherin, TGF-β1, and type III collagen were detected by real-time PCR. The levels of Shh and TGF-β1 were detected by ELISA assay. The expressions of bcl-2, bax, α-SMA, and E-cadherin were examined by Western blotting. Results WST-1 assay showed that AA significantly inhibited the proliferation of NRK-52E cells after 24 h, which was in a dose-dependent pattern (r＝0.817, P＝0.047). Evidence from Hoechst 33258 staining revealed that lower concentration (1, 10 mg/L) AA induced cell apoptosis, but higher concentration (100 mg/L) AA induced cell necrosis. In AA-treated cells (10 mg/L), apoptosis was induced, which was partly mediated by the mitochondrial pathway with decreased bcl-2 and enhanced bax expression. The over-expression of Shh protein and Smo mRNA, and down-regulation of Ptch1 mRNA expression were found, indicating that Shh signaling was activated. In addition, the expressions of α-SMA, TGF-β1, and type Ⅲ collagen were significantly increased, but E-cadherin expression was decreased, suggesting that epithelial-to-mesenchymal transition and fibrosis occurred. Conclusions AA can significantly inhibit proliferation, and induce apoptosis and necrosis in NRK-52E cells. In this process, Shh signaling is activated, which promotes epithelial-to-mesenchymal transition and fibrosis.     

High uric acid induces phenotypic transition of renal tubular cells via PI3K/Akt signaling pathway

Objective To investigate the effect and the mechanism of epithelial-mesenchymal transition (EMT) in renal tubular cells induced by uric acid. Methods Normal rat kidney tubular cell line (NRK-52E) were exposed to different concentrations of uric acid (100, 200, 400, 600, 800 μmol/L UA) for 48 hours to induce EMT. Morphological changes of the NRK-52E cells were examined under an inverted phase contrast microscope. The protein expression of E-cadherin, α-SMA, p-Akt and Akt were detected by Western blotting. The distribution of E-cadherin and α-SMA were detected by immunofluorescence. NRK-52E cells were pretreated by different concentrations of LY294002(0, 2.5, 5, 10, 15 μmol/L), the inhibitor of PI3K/p-Akt signaling pathway, and then processed by uric acid (400 μmol/L) for 48 hours. Western blotting was used to detect the protein expression of p-Akt and Akt. NRK-52E cells were then divided into four groups: normal group (N), uric acid group (UA), LY294002 group (LY), uric acid with LY294002 group (UA+LY). The protein expression of E-cadherin and α-SMA were detected by Western blotting, the distribution of E-cadherin, α-SMA and p-Akt were detected by immunofluorescence. Results There was abundant cellular expression of E-cadherin in unstimulated renal tubular cells whereas its expression was significantly decreased in uric acid-stimulated cells (P＜0.05). In addition, uric acid induced de novo expression of α-SMA in contrast to almost negative staining in untreated cells (P＜0.05). p-Akt were obviously increased in high uric acid group (P＜0.05) and Akt changed not significantly (P＞0.05). NRK-52E cells transformed into elongated fibroblast-like cells from cuboidal clustered epithelial cells. These indicated that uric acid has induced EMT and activated PI3K/p-Akt signaling pathway in NRK-52E cells. However, the above effects of uric acid were abolished when p-Akt was blocked by the PI3K inhibitor (10, 15 μmol/L LY294002), indicated that LY294002 has reversed the trend of EMT. Conclusions High uric acid induces phenotypic transition of renal tubular cells probably via activating PI3K/Akt signaling pathway.     

小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α加重缺氧状态肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死

目的 探讨沉默缺氧诱导因子1α （HIF-1α）对缺氧状态肾小管上皮细胞增殖、凋亡和坏死的影响。 方法 利用氯化钴模拟缺氧状态,并应用小分子RNA干扰（siRNA）技术沉默HIF-1α基因表达。将细胞分成5组,分别是正常培养组、缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组。用MTT试验检测细胞的生长抑制率;用TUNEL法、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（aspase）-3蛋白定量法检测细胞的凋亡率;检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力来测定细胞的坏死情况;用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞HIF-1α、HIF-2α、葡萄糖转运蛋白1（Glut-1）、血管内皮生长因子（VEGF） mRNA和蛋白表达水平。 结果 （1）siRNA的细胞转染效率为95%～100%。在常氧条件下,终浓度100 nmol/L 的HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率为70%;在缺氧条件下,HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率达到97%。（2）HIF-1α siRNA组细胞的生长抑制率显著高于其它组（P < 0.05）;细胞凋亡率在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）;HIF-1α siRNA组细胞培养液中LDH水平显著高于缺氧培养组、转染试剂组和阴性对照组（P < 0.05）。（3）HIF-1α siRNA组细胞的HIF-1α、Glut-1、VEGF mRNA和蛋白表达量显著低于缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组（P < 0.05）;而HIF-2α mRNA和蛋白表达在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞Glut-1和VEGF表达,加重缺氧状态下肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死。