沉默circ_0000745通过靶向 miR-296-5p对结直肠癌细胞增殖及转移的影响

摘要:目的 探讨circ_0000745对结直肠癌细胞增殖及转移的影响及其可能的作用机制。方法 收集2013年3月 ~2016年7月在四川省人民医院确诊的结直肠癌及癌旁组织65例,采用实时定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌组 织、癌旁组织中circ_0000745与 miR-296-5p表达,分析circ_0000745与 miR-296-5p表达与结直肠癌患者预后的关系。 将人结直肠癌细胞 HCT-116分为si-NC组、si-circ_0000745组、miR-NC组、miR-296-5p过表达组、si-circ_0000745+anti-miR-NC组、si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组;采用 CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测各组细 胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0000745与 miR-296-5p的靶向关系;采用 Western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果 与癌旁组织比较,结直肠癌组 织中circ_0000745的表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05);随访5年,65例患者中死亡9例,存活56 例,与存活患者相比,死亡患者的circ_0000745明显增高(P<0.05),miR-296-5p明显降低(P<0.05)。与 HT-29细胞 相比,HCT-116细胞的circ_0000745mRNA 表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05),选择 HCT-116细 胞进行下一步研究。与si-NC组比较,si-circ_0000745组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵 袭细胞数减少(均P<0.05);circ_0000745可靶向调控 miR-296-5p的表达;与 miR-NC组比较,miR-296-5p过表达组细 胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均 P<0.05);与si-circ_0000745+anti-miRNC组比较,si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成数、迁移及侵袭 细胞数增多(均P<0.05)。结论 结直肠癌组织中circ_0000745呈高表达,miR-296-5p呈低表达,高表达circ_0000745 及低表达 miR-296-5p可用于评估结直肠癌患者预后,circ_0000745通过靶向 miR-296-5p促进结直肠癌细胞增殖及转 移,沉默circ_0000745可为结直肠癌治疗提供新思路。     

circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的探讨circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制。方法选取33例胃癌组织及癌旁组织标本,实时荧光定量PCR检测circ_0001178和miR-1179的表达水平;将胃癌细胞株AGS随机分为si-NC组、si-circ_0001178组、miR-NC组、miR-1179组、si-circ_0001178+anti-miR-NC组、si-circ_0001178+anti-miR-1179组;采用克隆形成实验检测克隆形成数,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0001178和miR-1179的靶向关系。结果胃癌组织中circ_0001178表达水平明显高于癌旁组织,而miR-1179表达水平明显低于癌旁组织（P < 0.01）。抑制circ_0001178表达或过表达miR-1179,AGS细胞克隆形成数减少,细胞活性降低,AGS细胞凋亡率升高,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达水平均升高（P < 0.05）。结论抑制circ_0001178表达可能通过靶向上调miR-1179抑制胃癌AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

circ_0000515靶向miR-1258调控结肠癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨circ_0000515调控结肠癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取41例结肠癌病人癌组织及癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测circ_0000515和miR-1258的表达水平;结肠癌细胞SW620分为si-circ_0000515组、si-NC组、miR-1258组、miR-NC组、si-circ_0000515+anti-miR-NC组、si-circ_0000515+anti-miR-1258组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测SW620细胞活性;流式细胞术检测SW620细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测circ_0000515和miR-1258的靶向关系。结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中circ_0000515表达水平升高,miR-1258表达水平降低（P < 0.01）。抑制circ_0000515表达或过表达miR-1258,SW620细胞活性降低,SW620细胞的凋亡率升高（P < 0.01）。circ_0000515靶向调控miR-1258;干扰miR-1258表达逆转了抑制circ_0000515表达对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的作用。结论抑制circ_0000515表达通过靶向上调miR-1258抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡。     

干扰整合素转接激酶表达对口腔鳞癌细胞迁移侵袭影响研究

目的 研究干扰整合素转接激酶(ILK)表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 以口腔鳞癌SCC-25细胞为研究对象,细胞转染小干扰RNA阴性对照(siRNA control)和ILK小干扰RNA(ILK siRNA)分别记为si-NC组和ILK siRNA组,同时以没有转染的SCC-25细胞作为对照组。RT-PCR和Western blot法检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 si-NC组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目以及细胞中的MMP-9、MMP-2蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK siRNA组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显低于对照组和si-NC组(P<0.05)。结论 干扰ILK能够下调口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

circ_0001588靶向miR-1286调控人胃癌AGS细胞糖酵解、增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circ_0001588对人胃癌AGS细胞糖酵解、增殖、迁移及侵袭的影响及可能机制.方法 采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织、人胃癌细胞株中circ_0001588、miR-1286表达;将人胃癌细胞分为si-NC组、si-circ_0001588组、miR-NC组、miR-1...     

慢病毒载体介导的circ_0091581通过靶向miR-1256调控肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的机制

目的 探讨circ_0091581对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响及分子机制.方法 选取武汉市第四医院20例肝癌患者的癌组织及癌旁组织,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0091581和miR-1256的表达水平.Huh7细胞分为si-NC组、si-circ_0091581组、miR-NC组、mi...     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

Hedgehog信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移作用及机制探讨

目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移的作用及其机制.方法:环靶明特异性阻断Hh信号通路后,Transwell小室和划痕实验检测SCC-7901细胞侵袭和迁移的能力;RT-PCR检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达;细胞免疫化学检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:阻断Hh信号通路能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力(P＜0.05).MMP-2和MMP-9的mRNA以及蛋白表达亦显著降低(P＜0.05).结论:Hh信号通路可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达促进SCC-7901细胞侵袭、迁移.     

LncRNA UCA1通过调节miR-206/PTP1B轴影响宫颈癌细胞增殖迁移及侵袭

【摘要】 目的 探讨LncRNA UCA1通过miR-206 / PTP1B轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 将细胞培养后随机分为对照组、si-NC组（转染si-NC）、si-UCA1组（转染si-UCA1）、si-PTP1B组（转染si-PTP1B）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-206组（转染miR-206）、anti-miR-206组（转染anti-miR-206）、miR-NC+si-NC组（转染miR-NC 和si-NC）、miR-206+si-NC组（转染miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-NC组（转染anti-miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-UCA1组（转染anti-miR-206和si-UCA1）、miR-NC+si-PTP1B组（转染miR-NC和si-PTP1B）、anti-miR-206+si-PTP1B组（转染anti-miR-206和si-PTP1B）。qRT-PCR检测宫颈癌细胞UCA1和miR-206的表达;Western blot检测宫颈癌细胞PTP1B的表达;荧光素酶报告基因实验验证UCA1与miR-206、miR-206与PTP1B的靶向关系;CCK-8检测宫颈癌细胞活力;流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡;Transwell实验检测宫颈癌细胞迁移和侵袭能力。 结果 与人正常宫颈上皮细胞相比,宫颈癌细胞中UCA1表达显著升高（P＜0.01）,miR-206表达显著降低（P＜0.05）。与si-NC组相比,si-UCA1组细胞UCA1表达、细胞活力、迁移和侵袭能力均显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。UCA1和miR-206间存在相互调控作用;与miR-NC+si-NC组相比,miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）,anti-miR-206+si-NC组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-UCA1组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。miR-206靶向调控PTP1B;与miR-NC+si-NC组相比,anti-miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,miR-NC+si-PTP1B组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-PTP1B组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。 结论 LncRNA UCA1通过调节miR-206 / PTP1B轴促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p、肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的探讨溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p及肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法将肺癌A549细胞分为对照组、溪黄草(20、40、80 mg/L)组、si-circ_0091579组、si-NC组、pcDNA-circ_0091579组、pcDNA组、溪黄草+pcDNA-circ_0091579组。CCK-8、平板克隆实验、流式细胞术检测A549细胞抑制率、克隆形成数以及凋亡率。qRT-PCR检测circ_0091579和miR-515-5p表达。双荧光素酶报告实验验证circ_0091579和miR-515-5p相互作用。 结果溪黄草显著降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调及circ_0091579下调,且呈质量浓度依赖性。下调circ_0091579可降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调。上调circ_0091579可逆转溪黄草对A549细胞的增殖抑制和凋亡促进功能。circ_0091579和miR-515-5p直接特异性结合。 结论溪黄草可抑制肺癌细胞A549增殖,诱导其凋亡,其机制与下调circ_0091579/miR-515-5p途径有关。     

脱落细胞DNA定量分析在口腔潜在恶性疾病诊断中的准确性

目的:探讨口腔黏膜脱落细胞DNA定量分析在筛查口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)及口腔潜在恶性疾病(oral potential malignant disorders, OPMDs)的准确性。方法:对203例口腔黏膜病患者进行组织病理学检查和DNA定量分析检测,以组织病理学检查为金标准,评价DNA定量分析诊断的灵敏度、特异度、Youden指数、阳性似然比、阴性似然比、阳性预测值、阴性预测值等。结果:共纳入组织病理学检查为OSCC和原位癌 (tumor in situ, TIS)的患者46例,白斑(oral leukoplakia, OLK)上皮异常增生患者39例,疣状白斑伴基底细胞增生活跃1例,白斑单纯增生29例,口腔扁平苔藓(oral lichen planus, OLP)83例,炎症5例。以组织病理学诊断结果为金标准,以OSCC、TIS和上皮异常增生为阳性组,其他为阴性组,DNA定量分析系统诊断的灵敏度为79.07%,特异度为81.20%,准确度为80.30%;诊断OSCC和TIS的灵敏度95.65%,特异度81.20%,诊断准确度为85.28%;诊断上皮异常增生时,DNA定量分析系统诊断的灵敏度60.00%,特异度81.20%,诊断准确度为75.8%。结论:DNA定量分析诊断操作微创,简便,可以作为OSCC及OPMDs的筛查方法以及OSCC术后随访的辅助监测手段。     

口腔原虫感染与口腔疾病关系的研究

目的:探讨口腔原虫感染与口腔疾病的的关系。方法:从口腔疾病患者牙周组织或龈隙挑取渗出物,生理盐水涂片后镜检。结果:病人齿龈内阿米巴感染率为76％,齿龈内阿米巴与口腔毛滴虫混合感染率为6％,总计口腔原虫感染率为82％。疾病有龋齿、牙周炎、冠周炎及牙髓炎4组,4组疾病齿龈内阿米巴感染率分别为59.52％、85.29％、100％及88.24％,总计口腔原虫感染率分别为61.90％、97.06％、100％及94.12％。经统计学处理龋齿与后3组疾病之间有显著差异,而后3组疾病之间差别不显著。结论:3组疾病与齿龈内阿米巴及口腔原虫感染有密切关系。     

口腔健康教育对改善医学专科院校新生口腔健康知识及行为的效果评价

目的：评价3种口腔健康教育形式对改善医学专科院校新生口腔健康意识、行为及口腔卫生的效果。方法：选取医学专科院校新生1022名,将其随机分为4组,相同内容用不同形式进行口腔健康教育,即第1组开展知识讲座（讲座组）、第2组播放宣教视频录像（视频组）、第3组组织学生现场自学（自学组）、第4组为对照组;分别在健康教育前和2个月后,采用问卷调查和牙菌斑染色的方法评价不同教育形式前后新生口腔健康意识和行为知晓率的变化及菌斑指数对比。结果：经过不同形式的口腔健康教育,观察对象在口腔健康行为和知识方面大部分有改善（ P ﹤0.05）,讲座组和视频组菌斑指数较干预前有改善（ P ﹤0.05）,自学组与对照组无变化（ P ﹥0.05）。3个组间效果比较,讲座组效果最明显（ P ﹤0.05）,且有最多的学生愿意接受该种方式。结论：口腔健康教育对医学专科院校新生的口腔健康状况、口腔健康意识和行为有积极的促进作用。     

Livin基因在口腔粘膜白斑与口腔癌中的表达

目的:探讨Livin基因基因在口腔粘膜白斑、口腔癌的表达相关性.方法:应用免疫组化(S-P)法检测Livin基因在48例口腔粘膜白斑(轻度增生l2例,中度增生l8例,重度增生l8例)、口腔癌32例中的表达.结果:在口腔粘膜白斑轻、中度不典型增生组织中Livin基因呈弱表达(1/12, 3/18);在口腔粘膜白斑重度不典型增生中表达率明显增高(13/18,72.2%),口腔癌中Livin基因表达率很高(29/32,90.6%),口腔粘膜白斑的轻、中度不典型增生与重度不典型增生的表达比较有显著的意义(P＜0.05),但与癌的表达无显著意义(P＞0.05).结论:Livin基因的表达与增生的程度有关,Livin基因的表达可能与口腔癌的发生有关.     

神经重症监护病房(NICU)患者口腔舒适护理的探讨

目的:在口腔护理的同时增加患者口腔的舒适感。方法:对2009年4月至2010年1月入住NICU的患者随机分成两组,每组各50例。将进行生理盐水口腔护理者作为对照组,生理盐水口腔护理+应用一次性喷瓶口腔粘膜湿化者作为实验组。结果:实验组患者的口腔清洁度、湿润性及舒适性明显提高;同时口腔炎症、异味发生率明显降低。结论:应用一次性喷瓶口腔粘膜湿化能改善患者的口腔舒适度。     

半乳化和非乳化双相漱口水清除口臭效果的比较研究

目的:比较非乳化、半乳化双相漱口水和氯已定漱口水对口臭的治疗效果.方法:将52例受试者随机分入安慰剂组、氯已定组、半乳化组和乳化组,采用嗅觉法计分和检测挥发性硫化物(VSC)水平评估1周内的抗口臭和VSC水平效果.结果:第1、3天氯己定组、半乳化组和乳化组的抗口臭和降低VSC水平的效果比安慰剂组强(P＜0.01),而在...     

口腔毛滴虫感染与口腔疾病之间相关性分析

目的探讨口腔毛滴虫感染情况及其与口腔疾病之间的相关性。为防治口腔毛滴虫感染提供依据。方法选取2018年11月1日-2019年10月31在某医院(附属口腔医院)口腔修复科门诊接受诊治的440例患者作为研究对象,采用探针取牙周袋内牙垢,生理盐水直接涂片后镜检,同时进行口腔疾病检查,观察440患者口腔毛滴虫感染情况,分析口腔毛滴虫感染与发病特点、口腔疾病及口腔唾液PH值之间的关系。结果440例就诊患者中口腔毛滴虫感染53例,感染率为12.05%。男女发病率无差异,20岁以下感染率较低,60岁以上者感染率高。牙龈炎发病人数多,但感染毛滴虫的比率低,为8.59%,患有牙髓炎、牙周炎的感染率较高,分别为15.79%、14.29%。口腔唾液PH值<6.7的感染率高,为19.80%;口腔酸性环境者感染率高,差异具有统计学意义。结论年龄因素、口腔酸性环境及口腔疾病和口腔毛滴虫感染的发生发展之间存在一定相关性,保持口腔卫生和提高免疫力是治疗口腔疾病的关键。     

氟尿嘧啶化疗患者口腔溃疡的护理干预

目的：探讨冰冻漱口液预防绒毛膜癌化疗患者口腔溃疡的效果。方法：将65例绒毛膜癌化疗患者随机分为观察组和对照组,分别为30、35例,观察组使用冰冻碳酸氢钠或硼酸漱口液,对照组使用生理盐水。两组均于化疗第l天开始每天按要求执行口腔护理计划,连续10 d。结果：观察组口腔溃疡Ⅰ～Ⅳ级发生率均低于对照组（P〈0.05）。结论：冰冻碳酸氢钠或硼酸漱口液可显著降低绒毛膜癌化疗患者口腔溃疡的发生率。     

某大学教职工口腔健康状况调查及口腔保健对策

目的:对教职工口腔体检结果进行分析,了解教职工口腔健康现状,提出指导口腔保健。方法:利用教职工体检的形式,口腔医生专科检查,并列表统计检查情况,对结果进行分析统计。结果:1 273例健康体检者中,口腔查出异常率:①患龋率24.35%;②牙龈炎6.86%;③牙周炎8.17%;④牙结石22.78%;⑤牙缺未补10.05%。男女患病率女性高于男性。年龄段对比,41岁以上患病率明显高于40岁以下。体检过程中发现口腔其他病变患病程度同样严重,共发现479例口腔病变患者,其中牙结石患者290例,牙龈炎85例,牙周炎104例,牙结石和牙龈炎男性明显高于男性,牙周炎女性高于男性。结论:口腔健康要做到预防为主,定期检查,患病早治疗。     

老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓关系的临床研究

目的探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性,为临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据。方法 32例病例样本来源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织,为研究组;另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例,为对照组;进行样本制备和垂直电泳处理,观察两组样本的CK阳性情况。结果研究组患者CK2、CK4和CK5阳性率明显低于对照组,而研究组CK10、CK13和CK14的阳性表达率明显高于对照组（P〈0.05）。结论口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓的发病有一定相关性,CK2、CK4、CK5的浅表达和CK10、CK13、CK14的过表达,影响上皮细胞组织的增殖、分裂、角化等,进而影响OLP的发病。