下瘀血汤通过Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smad信号串联干预肾纤维化大鼠的机制

目的 观察下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠的保护作用及其对Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路的影响。方法 50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,氯沙坦组（9 mg·kg^-1）,下瘀血汤低、高剂量组（2.43,4.86 g·kg^-1）,采用腺嘌呤灌胃（250 mg·kg^-1）诱导肾纤维化大鼠模型,造模连续24 d,随后给予相应药物,给药连续30 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松（Masson）染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;免疫组化法（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）测定大鼠肾脏Wnt5a,Wnt5b,β-catenin,TGF-β₁,Smad4,Smad7蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr和BUN水平显著升高（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后SCr和BUN水平显著降低（P<0.01）;HE和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾间质损伤严重且肾间质胶原大量沉积,给予下瘀血汤干预后肾间质损伤减轻,胶原物质沉积减少;IHC和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达上调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达下调（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达下调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达上调（P<0.01）,且下瘀血汤低、高剂量组间差异无统计学意义。结论 下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠具有保护作用,其机制与抑制Wnt/β-catenin和TGF-β₁/Smad信号通路串联相关。     

三黄糖肾康对糖尿病大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察三黄糖肾康对糖尿病大鼠骨组织Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。方法 采用高糖高脂饮食4周联合左下腹腔内注射新鲜配制的2%链脲佐菌素（pH 4.5）30 mg·kg^-1体质量制备糖尿病模型,成模大鼠按血糖水平随机分为模型组、三黄糖肾康低、高剂量组（12.8、38.4 g·kg^-1）、骨疏康组（1.8 g·kg^-1）,另设同周龄喂食普通饲料大鼠为空白组。各组予相应药物或生理盐水灌胃12周后,全自动生化仪检测各组大鼠空腹血糖（FBG）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清空腹胰岛素（FINS）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）;计算机微断层扫描（Micro-CT）扫描大鼠股骨,观察骨组织微结构,检测骨密度（BMD）;苏木素-伊红（HE）染色、番红O-固绿染色观察大鼠股骨组织病理变化;免疫组化（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白5（LRP-5）及β-catenin蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠FBG、FINS、TRAP显著升高（P<0.01）,BALP显著降低（P<0.01）,BMD显著降低（P<0.01）,骨小梁结构松散不规则,细长疏稀,出现断裂,脂滴增多,Wnt3a、LRP-5和β-catenin蛋白表达下降（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,三黄糖肾康低、高剂量组FBG降低、BALP升高（P<0.05）,三黄糖肾康低剂量组FINS降低（P<0.05）,各给药组TRAP均显著降低（P<0.01）;各给药组BMD均有不同程度提高（P<0.05,P<0.01）;各给药组大鼠股骨骨小梁增多、增粗,排列较紧密、整齐,脂滴数量减少,骨微结构形态得到一定的改善;各给药组Wnt3a、LRP-5和β-catenin蛋白平均光密度值均有不同程度提高（P<0.05,P<0.01）;Wnt3a、LRP-5和β-catenin蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）。结论 三黄糖肾康可能通过提高骨组织Wnt3a、LRP-5及β-catenin蛋白的表达,调节Wnt/β-catenin信号传导通路的失调状态,促进骨形成,减少骨吸收,降低血糖,从而达到防治糖尿病骨质疏松症的效果。     

加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

目的 观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β₁（transforming growth factor-β₁,TGF-β₁）介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca²⁺/活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T-cells,NFAT）信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。方法 用TGF-β₁（10 μg·L^-1）诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca²⁺浓度。结果 TGF-β₁能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力（P<0.01）,下调上皮细胞黏附分子（E-cadherin）水平（P<0.01）,上调间质细胞标志蛋白（N-cadherin）,转录因子（Snail）和细胞骨架蛋白（Vimentin）表达（P<0.01）,并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）,活化T细胞核因子1（nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1）总蛋白,磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca²⁺胞内蓄积（P<0.01）;而加味小陷胸汤（10,20,40 mg·L^-1）均可明显抑制这一现象,且40 mg·L^-1效果最佳（P<0.05,P<0.01）;Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路特异性抑制剂（R）-（+）-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L^-1均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-β₁介导后的侵袭迁移,上调E-cadherin水平,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca²⁺在胞内蓄积（P<0.05,P<0.01）,且（R）-（+）-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L^-1抑制作用效果更强（P<0.05,P<0.01）。结论 以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路抑制TGF-β₁介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。     

二十五味鬼臼丸通过Wnt/β-catenin信号通路改善去卵巢大鼠骨质疏松症

目的 探讨藏族药二十五味鬼臼丸通过经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路改善去卵巢大鼠的骨质疏松症的机制。方法 将48只3月龄SD雌性大鼠随机分为模型组（OVX）、假手术组（Sham）、雌二醇组（E₂）、二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组,除假手术组大鼠摘取卵巢附近部分脂肪组织外,其余各组大鼠均摘取卵巢构建去卵巢骨质疏松大鼠模型。术后2周开始给药处理,雌二醇组给予戊酸雌二醇0.1 mg·kg^-1,二十五味鬼臼丸组给予二十五味鬼臼丸高剂量800 mg·kg^-1,中剂量400 mg·kg^-1,低剂量200 mg·kg^-1,模型组及假手术组给予同体积的生理盐水,连续灌胃12周,每日1次。取材后,苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠右侧股骨及腰椎的骨形态变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）、Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、Ⅰ型前胶原氨基端原肽（PINP）、骨钙素（BGP）的水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测股骨中β-catenin、矮小相关转录因子2（Runx2） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测β-catenin、Runx2和低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（Lrp‐5）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠骨小梁紊乱且稀疏,骨小梁间连接较少,血清BALP、BGP、PINP水平显著下降（P<0.01）,CTX-Ⅰ、TRAP5b水平显著升高（P<0.01）;股骨组织中β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平下降（P<0.01）;Lrp‐5、β‐catenin和Runx2的蛋白表达显著下降（P<0.01）。与模型组比较,二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组大鼠上述指标的异常改变得到不同程度的恢复（P<0.05,P<0.01）。结论 藏族药二十五味鬼臼丸对于治疗去卵巢大鼠骨质疏松症具有较好的效果,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关,通过上调信号通路中成骨相关基因的表达影响骨代谢。     

南蛇藤提取物调控Lgr5/Wnt/β-catenin信号通路逆转胃癌前病变的机制

目的 基于胃类器官损伤模型探究南蛇藤提取物（COE）调控富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5 （Lgr5）/配体分泌介质（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路影响胃类器官增殖分化及Lgr5表达从而逆转胃癌前病变（PLGC）的作用机制。方法 通过小鼠胃腺体干细胞建立胃类器官,使用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG,0.02 mg·L^-1）处理胃类器官构建胃类器官损伤模型;将胃类器官损伤模型随机分为正常组、模型组（0.02 mg·L^-1 MNNG）、COE低、中、高质量浓度组（5、10、20 mg·L^-1）、Wnt抑制剂Dickkopf相关蛋白1（DKK1）（0.5 mg·L^-1）组并分别用不同药物处理24 h;镜下观察不同药物浓度胃类器官的数量与体积;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测胃类器官损伤模型活力;采用苏木素-伊红（HE）染色法观察胃类器官形态与病理学;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同药物浓度胃类器官中Lgr5、黏蛋白2 （MUC2）、黏蛋白5AC （MUC5AC）、黏蛋白6 （MUC6）、Wnt和β-catenin表达情况。结果 与正常组比较,模型组胃类器官数量显著减少（P<0.01）,体积显著减小（P<0.01）,活力显著降低（P<0.01）,Lgr5、MUC2、Wnt与β-catenin表达显著升高（P<0.01）,MUC5AC、MUC6表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较,COE低、中、高质量浓度组胃类器官数量及体积均显著升高（P<0.01）;胃类器官活力显著增强（P<0.01）,且在COE质量浓度为20 mg·L^-1时效果最显著（P<0.01）;COE中、高质量浓度组Lgr5、MUC2表达显著降低（P<0.01）,COE低、中、高质量浓度组MUC5AC、MUC6的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,Wnt抑制剂能够明显促进胃类器官MUC5AC、MUC6的表达（P<0.05,P<0.01）,显著降低MUC2、Wnt与β-catenin的表达（P<0.01）,COE高质量浓度与Wnt抑制剂共同使用能够促进这一趋势（P<0.01）。结论 COE通过抑制Lgr5、MUC2、Wnt、β-catenin的表达和促进MUC5AC及MUC6的表达,抑制Wnt/β-catenin通路,促进胃类器官增殖分化,逆转PLGC过程。     

右归丸通过AOPPs调控RAGE/ROS/NF-κB轴及Wnt/β-catenin信号通路对阿霉素诱导肾病综合征大鼠的保护机制

目的 探究右归丸对阿霉素诱导的肾病综合征（NS）大鼠的影响及其作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、右归丸低、中、高剂量组和泼尼松组。模型组大鼠尾静脉注射阿霉素构建NS模型,右归丸低、中、高剂量组分别按生药2.8、5.6、11.2 g·kg^-1·d^-1灌胃,泼尼松组以醋酸泼尼松6.3 mg·kg^-1·d^-1灌胃。各用药组连续给药6周,正常组及模型组灌服等体积生理盐水。BCA法检测24 h尿蛋白（24 h UP）;全自动生化分析仪检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态变化;试剂盒检测血清晚期氧化蛋白产物（AOPPs）、活性氧（ROS）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织晚期糖基化终产物受体（RAGE）、核转录因子-κB（NF-κB）磷酸化水平、Wnt及β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠24 h UP、血清BUN、SCr、TC、TG、AOPPs、ROS水平均显著升高（P<0.01）,ALB显著降低（P<0.01）,且肾组织存在典型的病理性损伤,RAGE、磷酸化（p）-NF-κB、Wnt1及β-catenin蛋白表达均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,右归丸低、中、高剂量组大鼠24 h UP、血清BUN、SCr、TC、TG、AOPPs、ROS水平均显著降低（P<0.01）,ALB明显升高（P<0.01）,肾组织损伤减轻,RAGE、p-NF-κB、Wnt1及β-catenin蛋白表达均显著降低（P<0.01）,且呈剂量相关。结论 右归丸能够改善阿霉素诱导的NS大鼠肾损伤,其机制可能与降低AOPPs水平,抑制RAGE/ROS/NF-κB轴及Wnt/β-catenin信号活化相关。     

基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

目的 观察氧化苦参碱（OM）联合贝伐珠单抗（BV）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的作用,并基于分泌型糖蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对OM调控BV引起的上皮间质转化（EMT）的机制进行探讨。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验观察OM（0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）及BV（0,0.25×10^-4,0.50×10^-4,1.00×10^-4,2.00×10^-4,4.00×10^-4,8.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖的影响;通过侵袭小室法（transwell）和划痕损伤修复实验观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞侵袭与迁移能力的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖相关蛋白的影响,并对Wnt/β-catenin信号通路及EMT相关蛋白的表达水平进行检测。结果 与空白组比较,OM（2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）可呈浓度依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,而BV未表现出抑制MCF-7细胞增殖的作用,两药联合对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OM比较差异无统计学意义。与空白组比较,OM可显著减少MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.01）,BV可明显增加MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.05,P<0.01）。与BV比较,联合后OM可显著抑制BV引起的MCF-7细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。与空白组比较,OM及两药联用可明显抑制MCF-7细胞中与细胞增殖相关蛋白激酶B（Akt）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化（P<0.01）;OM及两药联用后显著降低Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,原癌基因（c-Myc）,CD44,G₁/S-特异性周期蛋白-D₁（cyclin D₁）蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;OM及两药联用可显著降低EMT中钙离子依赖的细胞N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）蛋白表达,增加钙离子依赖的细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平（P<0.01）,BV组上述相关蛋白的表达相反（P<0.05,P<0.01）。结论 OM与BV联合后OM可通过有效抑制BV引起的Wnt/β-catenin通路激活逆转EMT机制发挥抗乳腺癌的作用。     

鳖甲煎丸通过Wnt/β-catenin信号通路逆转大鼠肝卵圆细胞EMT的机制

目的 研究鳖甲煎丸对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的大鼠肝卵圆细胞WB-F344上皮间质转化（EMT）的影响,探讨其逆转EMT改变的作用机制。方法 将WB-F344细胞随机分为空白组,TGF-β₁模型组（10 μg·L^-1TGF-β₁）,鳖甲煎丸低剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+0.55 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸中剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+1.1 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸高剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+2.2 g·kg^-1鳖甲煎丸）,除空白组外,均采用TGF-β₁诱导WB-F344细胞构建EMT模型,分别加入鳖甲煎丸低、中、高剂量含药血清处理细胞,采用细胞划痕实验检测WB-F344细胞迁移能力的改变;使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）,N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）表达的变化;使用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达的改变;使用细胞免疫荧光法检测β-catenin的表达。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导WB-F344细胞4 d,WB-F344细胞间隙从紧密逐渐变得松散,细胞形态由鹅卵石状向成纤维样细胞转变,且E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高（P<0.01）,说明成功构建了WB-F344细胞EMT模型。划痕实验结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组WB-F344细胞的迁移能力增强（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组可以明显抑制WB-F344细胞的迁移能力（P<0.05）。Western blot结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin,Vimentin蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组中β-catenin mRNA表达升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组中β-catenin mRNA的表达降低（P<0.01）。细胞免疫荧光结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组β-catenin在细胞核内荧光表达增强;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组β-catenin在细胞核内荧光表达减弱,且鳖甲煎丸对细胞核内β-catenin抑制作用与其浓度呈正相关。结论 鳖甲煎丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,逆转TGF-β₁诱导WB-F344细胞的EMT进程,抑制WB-F344细胞的迁移能力。     

基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨益肾化瘀方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤的干预机制

目的 探讨基于Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）调控上皮-间充质细胞转化（EMT）途径益肾化瘀方对糖尿病肾病（DN）肾小球足细胞损伤的干预机制。方法 60只SD大鼠分为正常组,模型组,Wnt-C59组（Wnt/β-catenin通路抑制剂,0.03 g·kg^-1）,低、中、高剂量益肾化瘀方组（8,16,32 g·kg^-1）,12周后,比较各组一般体征变化及血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,肾指数,尿蛋白量,血糖,肾脏病理改变,足细胞和肾小球基底膜损伤情况及足细胞损伤相关蛋白［去氧肾上腺素（nephrin）,肾小球蛋白（synaptopodin）］,Wnt/β-catenin通路相关蛋白（Wnt1,β-catenin）,足细胞EMT相关蛋白［α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）］表达水平。结果 与正常组比较,模型组肾组织出现明显病理改变,肾小球系膜基质弥漫性增厚,足突融合较为严重,SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显升高（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,各干预组SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显下降（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显升高（P<0.05）;各干预组中,高剂量益肾化瘀方组对于上述指标的改善程度明显优于低、中剂量益肾化瘀方组（P<0.05）,与Wnt-C59组比较无显著差异。结论 益肾化瘀方通过抑制Wnt/β-catenin通路阻止足细胞EMT,从而修复DN大鼠肾小球足细胞损伤。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨红芪多糖对糖尿病肾病db/db小鼠作用机制

目的 观察红芪多糖（HPS）对糖尿病肾病db/db小鼠Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。方法 将50只db/db小鼠按体质量随机分为模型组、厄贝沙坦组、HPS高、中、低剂量组,每组10只;另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。正常组和模型组给予5 mL·kg^-1·d^-1蒸馏水,厄贝沙坦组给予22.75 mg·kg^-1·d^-1厄贝沙坦溶液,HPS高、中、低剂量组分别给予200、100、50 mg·kg^-1·d^-1 HPS溶液。6组小鼠每日灌胃1次,连续给药12周。检测各组小鼠一般状态、血糖（GLU）、24 h尿蛋白（UTP）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）,苏木素-伊红（HE）染色观察肾脏组织病理变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肾脏中Wnt1、β-catenin、糖原合成激酶-3β（GSK-3β）及磷酸化糖原合成激酶-3β（p-GSK-3β）的蛋白及mRNA的表达水平。结果 治疗12周后,与正常组比较,模型组小鼠一般状态较差且肾脏组织病理超微结构病变显著,其GLU、24 h UTP、SCr、BUN水平均升高（P<0.01）;与模型组比较,HPS高、中剂量组小鼠一般状态及肾脏组织病理超微结构均得到一定程度改善,其GLU、24 h UTP、SCr、BUN水平均降低（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组Wnt1、β-catenin、GSK-3β及p-GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均升高（P<0.01）;与模型组比较,HPS高、中剂量组Wnt1、β-catenin、GSK-3β及p-GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 HPS可在一定程度上减轻糖尿病肾病的肾损伤,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。     

基于MGC-803细胞微环境探讨加味小陷胸汤抑制侵袭迁移作用机制

目的 观察加味小陷胸汤水提取物对MGC-803细胞微环境的影响，探究该方通过调控MGC-803细胞微环境抑制侵袭迁移作用与其调控Wnt5a/Ca²⁺/活化T细胞核因子（NFAT）信号通路的可能机制。方法 转化生长因子-β₁（TGF-β₁）造模后，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、加味小陷胸汤组（10、20、40 mg·L^-1）；Wnt5a过表达质粒转染后，分为过表达载体（pEX）-空白（NC）组、pEX-Wnt5a组、pEX-NC+加味小陷胸汤组（40 mg·L^-1）和pEX-Wnt5a+加味小陷胸汤组（40 mg·L^-1）。观察MGC-803细胞侵袭能力、迁移能力、微环境关键因子、上皮间质转化（EMT）基因、Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达及细胞Ca²⁺浓度变化。结果 与空白组比较，模型组微环境显著上调（P<0.01）；与模型组比较，加味小陷胸汤（10、20、40 mg·L^-1）可明显抑制微环境（P<0.05，P<0.01）。进一步实验表明，与空白组比较，模型组过表达Wnt5a后侵袭细胞增多，划痕率升高，微环境因子和EMT基因呈活化态势，Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路激活（P<0.01）；与模型组比较，加味小陷胸汤可抑制细胞远处侵袭和减少愈合，抑制微环境、EMT发展，和Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号转导，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca²⁺浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P<0.05，P<0.01）。结论 加味小陷胸汤可通过改善MGC-803细胞微环境调控Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路，抑制胃癌侵袭转移和EMT进程。     

β-catenin RNA干扰对黄精丸治疗学习记忆障碍小鼠的信号通路机制的影响

目的 用侧脑室β-连环蛋白（β-catenin）RNA干扰（RNAi）黄精丸治疗D-半乳糖联合东莨菪碱模拟的阿尔茨海默病（AD）小鼠,以探讨黄精丸防治AD的神经保护信号分子机制。方法 81只雄性昆明种小鼠随机分成正常组,假手术组,AD模型组,多奈哌齐组,黄精丸+scrambled组（即β-catenin RNA干扰组）,黄精丸+RNAi组,黄精丸组,多奈哌齐组和黄精丸组每组小鼠8只,其余各组每组13只。连续5周采用D-半乳糖联合东莨菪碱注射法给后5组的各小鼠制作AD模型。造模后第4周第1天,给黄精丸+RNAi组各小鼠右侧脑室一次性注射聚乙烯亚胺（PEI-LMW）/β-catenin siRNAs纳米络合物0.75 μL以脑内β-catenin RNA干扰处理,黄精丸+scrambled组各小鼠右侧脑室一次性注射络合复合物0.75 μL以作β-catenin干扰对照,假手术组各小鼠侧脑室内注射生理盐水0.75 μL。侧脑室注射2周后,经确认小鼠β-catenin RNAi成功,再给多奈哌齐组小鼠灌胃多奈哌齐（6.5×10^-4 g·kg^-1）,给黄精丸+scrambled组,黄精丸+RNAi组,黄精丸组各小鼠灌胃黄精丸（2.5 g·kg^-1）,持续4周。灌胃结束后,采用跳台实验评价各小鼠的学习记忆能力差异;尼氏染色计数各组小鼠大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元数量差异;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组小鼠大脑Wnt1,蓬松蛋白极性片段2（DVL2）,糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）,β-catenin,细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁） mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠大脑Wnt1,DVL2,GSK-3β,β-catenin,CyclinD₁蛋白表达水平。结果 AD小鼠侧脑室内β-catenin RNAi可明显抑制其脑内β-catenin表达,可成功实现目的基因沉默。与正常组比较,AD模型组小鼠学习与记忆成绩显著下降,跳台的错误次数增多（P<0.01）,大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元神经元数量显著减少（P<0.01）,大脑Wnt1,DVL2,β-catenin,CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平均显著下降（P<0.01）,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与AD模型组比较,黄精丸组小鼠的学习与记忆成绩均显著升高,跳台错误次数均显著降低,大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元数量显著升高,大脑Wnt1,DVL2,β-catenin,CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平均显著升高,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与黄精丸组比较,黄精丸+RNAi组小鼠的学习与记忆成绩均下降,跳台错误次数显著升高（P<0.01）,大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元数量显著降低（P<0.01）,大脑Wnt1,DVL2,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平无明显变化,β-catenin,CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论 黄精丸可通过激活Wnt/β-catenin信号通路转导发挥治疗AD作用。     

黄连解毒汤对Aβ1-42诱导AD大鼠学习记忆能力及胆碱能系统的影响

目的 探讨黄连解毒汤对β-淀粉样蛋白（Aβ）_1-42诱导阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力和胆碱能系统的影响。方法 选用60只雄性SD大鼠，分为正常组，模型组，石杉碱甲组（2.1×10^-5 g·kg^-1），黄连解毒汤高、中、低剂量组（6，3，1.5 g·kg^-1）。运用Aβ_1-42海马注射复制AD大鼠模型，术后连续灌胃治疗4周，进行Morris水迷宫实验。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马病理改变，腹主动脉取血，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清、海马中乙酰胆碱（ACh），乙酰胆碱酯酶（AchE），胆碱乙酰转移酶（ChAT）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测海马α7nAChR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组动物脑组织皮质区神经元坏死、海马区锥体细胞或颗粒细胞坏死、排列紊乱和炎性细胞浸润等病理改变明显，大鼠逃避潜伏期延长、逃逸平台次数降低、有效区域停留时间、有效区域游泳路径均减少（P<0.05，P<0.01），血清中ACh，ChAT浓度降低（P<0.01），海马中ACh，AchE，ChAT含量，α7nAChR蛋白，α7nAChR mRNA表达降低（P<0.01）；与模型组比较，黄连解毒汤中剂量组逃避潜伏期变短（P<0.05），逃逸平台次数、有效区域游泳路径、有效区域停留时间增加（P<0.05，P<0.01），血清ACh，ChAT含量和海马AchE，ChAT，α7nAChR mRNA表达上升（P<0.05），海马α7nAChR蛋白表达升高明显（P<0.01）；高剂量组有效区域有效区域停留时间延长（P<0.01）；逃逸平台次数增加，血清ACh，ChAT含量和海马ACh，AchE，α7nAChR蛋白，α7nAChR mRNA表达上升（P<0.05）。结论 黄连解毒汤可显著改善Aβ_1-42诱导AD大鼠学习记忆能力，其作用机制可能与改善Aβ_1-42所导致的胆碱能系统损伤，增强胆碱能系统功能有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黑逍遥散对AD模型大鼠神经炎症的影响

目的 研究黑逍遥散是否可以通过调控激活Wnt β-连环蛋白（β-catenin）信号通路抑制阿尔茨海默病（AD）大鼠海马区炎症反应，改善AD大鼠认知和记忆功能障碍。方法 90只雄性Wistar大鼠先随机分别选择12只作为空白组和假手术组，剩余大鼠在左右两侧海马区注射β淀粉样蛋白₄₂（Aβ₄₂）制造AD模型大鼠，随机分为模型组、黑逍遥散低、中、高剂量组和多奈哌齐组，每组12只，并连续42 d给予相应剂量黑逍遥散和多奈哌齐灌胃。尼氏染色观察海马CA1区病理形态学变化；Morris水迷宫实验检测1~5 d大鼠逃避潜伏期的变化，第6天的空间探索能力。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠海马组织和血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测检测海马中海马区糖原合成激酶-3β（GSK-3β）、β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠GSK-3β、β-catenin、PPARγ mRNA的水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显减少，排布不均，细胞体损坏比较明显，尼式小体不清；模型组大鼠第3~5天的逃避潜伏期均相比治疗组显著延长（P<0.01），跨台次数显著减少（P<0.01）；模型组大鼠血清和海马组织中IL-10水平显著降低，IL-6、TNF-α水平显著升高（P<0.01）；模型组GSK-3β蛋白和mRNA显著升高，β-catenin、PPARγ蛋白表达显著降低（P<0.01），差异较为明显；与模型组比较，黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠神经元细胞数量分布较多，排列整齐，结构完整，尼式小体清晰明确；黑逍遥散中、高剂量组和多奈哌齐组的第3~5天逃避潜伏期显著缩短（P<0.01），跨越平台次数显著增多（P<0.01）；大鼠海马组织和血清中IL-10的表达水平明显升高，IL-6和TNF-α显著降低（P<0.01）；大鼠海马中GSK-3β蛋白和GSK-3β mRNA表达明显降低，β-catenin、PPARγ蛋白和β-catenin、PPARγ mRNA表达水平显著升高（P<0.01）。盐酸多奈哌齐组与黑逍遥散高剂量组之间各指标比较，差异无统计学意义。结论 黑逍遥散可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制AD大鼠海马区炎症反应，改善AD模型大鼠认知和记忆障碍。     

基于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca2+载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

目的 探讨小陷胸汤对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。方法 通过CB-DOCK在线平台（http： //clab. labshare. cn /cb-dock /）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10 μg·L^-1的TGF-β₁建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组（0.1、0.2、0.4 g·L^-1），为进一步探讨Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用，将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞，分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组和Wnt5a-OE+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组。分别使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）、Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca²⁺浓度变化。结果 分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路。与模型组比较，小陷胸汤（0.1、0.2、0.4 g·L^-1）能明显促进MGC-803细胞活力的丧失，可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞，并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合，并促进E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达（P<0.05，P<0.01）。进一步实验表明，与模型组比较，小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca²⁺浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P<0.05，P<0.01）。结论 小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化（EMT），从而减弱TGF-β₁诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。     

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨当归芍药散对卵巢储备功能低下模型大鼠的影响

目的 观察当归芍药散对雷公藤多苷片联合应激所致的卵巢储备功能下降（DOR）模型大鼠卵巢储备功能的改善作用,并探讨转化生长因子-β₁ （TGF-β₁）/Smads信号通路在其中的作用机制。方法 选取性周期正常的雌性SD大鼠48只,随机分为正常组8只和模型制备组40只。模型制备组以灌胃雷公藤多苷片（50 mg·kg^-1）联合随机应激法建立模型,时间15 d,造模成功后将其随机分为模型组、当归芍药散低、中、高剂量组（3.96,7.92,15.84 g·kg^-1）及戊酸雌二醇组（0.09 mg·kg^-1）各8只,各组在继续给予应激的同时,分别用生理盐水,低、中、高剂量当归芍药散及戊酸雌二醇进行相应剂量灌胃干预,连续15 d。各组大鼠每日观察动情周期,干预结束后处死大鼠,计算大鼠卵巢脏器指数,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠卵巢组织病理变化,免疫组化法（IHC）检测大鼠卵巢组织中TGF-β₁,转化生长因子-β₁受体（TGF-β₁R）蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠卵巢组织中Smad2,Smad3,Smad7 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱率明显升高（P<0.05）,卵巢指数明显下降（P<0.01）,卵巢组织中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白及Smad2,Smad3 mRNA表达水平降低（P<0.01）,Smad7 mRNA表达水平上升（P<0.01）;与模型组比较,中药3组与戊酸雌二醇组大鼠动情周期均有不同程度改善（P<0.05）,卵巢指数均有不同程度回升,其中以中、高剂量组最为明显（P<0.05,P<0.01）,卵巢组织中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白及Smad2,Smad3 mRNA水平均有不同程度升高（P<0.01）,Smad7 mRNA表达水平均下降（P<0.01）,其中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白表达改善程度以中剂量组和戊酸雌二醇组最为明显。结论 当归芍药散能够明显改善DOR大鼠卵巢储备功能,且作用机制与调控TGF-β₁/Smads信号通路密切相关。     

补肾活血方调控Wnt/β-catenin信号通路改善复发性流产小鼠子宫螺旋动脉重铸的机制

目的 观察补肾活血方对复发性流产模型小鼠子宫蜕膜组织Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路及子宫螺旋动脉重铸的影响，探讨其作用机制。方法 以CBA/J×BALB/c小鼠合笼构建正常妊娠小鼠模型，以CBA/J×DBA/2小鼠合笼构建复发性流产小鼠模型，将复发性流产模型小鼠随机分为模型组、地屈孕酮组、中药低剂量组及中药高剂量组，以正常妊娠小鼠作为空白组，每组10只，各组分别给予药物治疗14 d。疗程结束后观察各组小鼠胚胎吸收率，苏木素-伊红（HE）染色观察蜕膜组织病理形态、螺旋动脉生理性转变率，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、血管内皮生长因子（VEGF）及Wnt/β-catenin信号通路的mRNA与蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组胚胎吸收率明显升高（P<0.05）；子宫螺旋动脉生理性转变率明显降低（P<0.05）；子宫蜕膜组织的细胞水肿变性，排列紊乱；螺旋动脉重铸关键因子MMP-2、MMP-9、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关因子Wnt2、β-catenin、细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）、c-Myc的mRNA与蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，中药低剂量组、中药高剂量组可以明显降低胚胎吸收率（P<0.05）；明显提高螺旋动脉生理性转变率（P<0.05）；改善子宫蜕膜组织的细胞形态、增加蜕膜血管数量；明显上调MMP-2、MMP-9、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关因子的mRNA与蛋白表达（P<0.05）。结论 复发性流产存在子宫螺旋动脉重铸障碍，补肾活血方可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路，增加VEGF、MMP-2及MMP-9的表达，促进子宫螺旋动脉重铸，从而治疗复发性流产。     

加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠耐药相关基因及IL-7介导的Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 通过建立气阴两虚型Lewis肺癌小鼠模型,观察加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠免疫功能、耐药相关基因及白细胞介素-7（IL-7）介导的Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响,阐明加味龟鹿二仙胶汤的抗癌机制,为其临床应用提供依据。方法 建立气阴两虚型Lewis肺癌小鼠模型,分为正常组（不造模）,模型组（等体积生理盐水）,顺铂组（顺铂,2 mg·kg^-1）,中药组（加味龟鹿二仙胶汤,19.63 g·kg^-1·d^-1）,联合组（加味龟鹿二仙胶汤,19.63 g·kg^-1·d^-1+顺铂,2 mg·kg^-1）,每组10只,分别给药,干预21 d。观察小鼠一般情况、脏器指数,计算抑瘤率,流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（CD4⁺ CD25⁺Treg）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中细胞因子水平IL-7,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中耐药相关基因P-糖蛋白（P-gp）,多药耐药相关蛋白1（MRP1）mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果 与模型组比较,中药组及联合组摄食量增加,精神状态较好,反应灵敏,体质量增加。与顺铂组比较,联合组胸腺指数、脾脏指数显著升高（P<0.01）,联合组抑瘤率明显升高（P<0.01）。与顺铂组比较,中药组、联合组CD4⁺ CD25⁺Treg /CD4⁺明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药组、联合组IL-7水平显著升高（P<0.01）。与顺铂组比较,中药组、联合组P-gp,MRP1 mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药组、联合组Wnt1,β-catenin蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 加味龟鹿二仙胶汤与顺铂联用可明显抑制Lewis肺癌小鼠体内肿瘤的生长,其作用机制可能与其能够解除机体免疫抑制状态,促进机体产生IL-7,调节IL-7介导的Wnt/β-catenin信号通路,减少肺癌组织中耐药相关基因的表达有关。     

补阳还五汤对特发性肺纤维化大鼠Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响

目的 观察补阳还五汤对特发性肺纤维化（IPF）大鼠Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）/核因子E₂相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）抗氧化信号通路的影响，探讨该方干预IPF的作用机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼达尼布组，每组10只。除假手术组外，其余各组气管内滴注博来霉素（0.005 g·kg^-1）制备IPF大鼠模型。补阳还五汤组灌服补阳还五汤煎液（14.84 g·kg^-1），尼达尼布组灌服尼达尼布混悬液（0.1 g·kg^-1），假手术组、模型组灌服等容积生理盐水，共28 d。肺功能检测后，取血清及肺组织。苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色观察肺组织病理改变并行半定量分析；检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量；测定血清和肺组织丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达情况。结果 与假手术组比较，模型组大鼠呼吸系统阻力和弹力增高，顺应性显著降低（P<0.01）；肺指数和病理评分、HYP含量显著升高（P<0.01）；血清和肺组织MDA含量增加，SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低（P<0.01）；肺组织Keap1 mRNA与蛋白表达降低，Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，补阳还五汤组大鼠呼吸系统阻力和弹力下降，顺应性显著升高（P<0.01）；肺指数、病理评分、肺组织HYP含量显著降低（P<0.01）；血清和肺组织MDA含量下降、SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高（P<0.01）；肺组织Keap1表达降低，Nrf2、HO-1表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 补阳还五汤可启动Keap1/Nrf2/HO-1介导的抗氧化效应，增强机体抗氧化能力，延缓IPF大鼠病理进程。     

大补元煎联合运动通过调控PI3K/Akt/GSK-3β信号通路改善AD大鼠学习记忆能力

目的 研究大补元煎灌胃联合4周的跑台运动对阿尔茨海默病（AD）大鼠磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）信号通路及相关细胞凋亡蛋白的调节作用，探讨其改善AD大鼠认知功能的作用机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机均分为假手术组（Sham组）、运动组（EX组）、模型组（AD组）、大补元煎组（TCM组）、运动+大补元煎组（EX+TCM组），每组10只。采用海马区注射β淀粉样蛋白25-35（Aβ_25-35）寡聚体溶液建立AD大鼠模型，EX组进行6 d/周的跑台训练。TCM组予大补元煎水煎液灌胃（5.36 g?kg^-1），EX+TCM组在跑台训练同时进行大补元煎水煎液灌胃，Sham组、AD组及EX组给予等容纯水灌胃。Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆，苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马神经元的形态变化，透射电镜观察海马神经元超微结构的改变，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马中蛋白激酶B（Akt）、磷酸化（p）-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、β-连环蛋白（β-catenin）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果 与Sham组比较，AD组大鼠逃避潜伏期和游泳总路程显著增加，目标象限停留时间显著减少（P<0.01），海马锥体细胞排列疏松紊乱，密度降低；海马超微结构出现髓鞘样改变，线粒体肿胀模糊；Bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β的水平显著降低、β-catenin表达明显下降（P<0.05，P<0.01）、cleaved Caspase-3表达明显上调（P<0.05）。与AD组比较，EX组、TCM组、EX+TCM组大鼠逃避潜伏期和游泳路程明显减少，目标象限停留时间明显增加（P<0.05，P<0.01）；锥体细胞排列规律，细胞数量增加，透射电镜下可见髓鞘样改变减轻，线粒体肿胀改善；Bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β表达升高，cleaved Caspase-3表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），且EX+TCM组β-catenin水平升高而EX组、TCM组与AD组比较差异无统计学意义。与EX+TCM组比较，EX组与TCM组逃避潜伏期和游泳路程增加（P<0.05，P<0.01），目标象限停留时间显著减少（P<0.01）；锥体细胞排列疏松，电镜下突触完整性下降；Bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β、β-catenin的水平明显降低（P<0.05，P<0.01），cleaved Caspase-3表达明显升高（P<0.05）。结论 有氧运动结合大补元煎可改善AD大鼠认知功能障碍，其机制可能与升高PI3K/Akt/GSK-3β信号通路中的关键蛋白表达有关，且联合使用优于运动或药物单独使用。