雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡研究

目的：了解雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡的发生。方法：体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶（PI）联合标记,流式细胞仪检测,观察雷公藤甲素诱导细胞凋亡的特征。结果：雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0、12．5、25、50、100和200μg／L雷公藤甲素处理细胞2h,凋亡率分别为1．67％、16．54％、32．53％、47．62％、57．12％72．77．45％;100μg／L雷公藤甲素染毒0、0．5、1、2、3和4h,细胞凋亡率分别为1．12％、14．37％、35．26％、4975％、62．65％及78．46％。结论：雷公藤甲素可诱导肾上腺皮质细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇对三阴性乳腺癌细胞的作用及机制

目的 研究雷公藤内酯(triptolide,TP)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞MDA-MB-468的作用,并探讨其可能的机制.方法 不同浓度TP(0、12.5、25、50和100 nmol/L)处理MDA-MB-468细胞,分别作用24、48和72 h,CC...     

雷公藤甲素通过依赖于caspase的线粒体途径促进子宫内膜癌细胞凋亡

目的:研究雷公藤甲素对子宫内膜癌HEC-1B细胞生长和凋亡的调节作用,探讨其促进子宫内膜癌细胞凋亡的作用途径?方法:①细胞增殖/毒性检测试剂(CCK-8)测定雷公藤甲素对HEC-1B细胞的生长抑制作用及加入caspase抑制剂(z-VAD-fmk)后对其作用的影响;②Western blot法检测用药后caspase-3?9和bcl-2蛋白表达情况及z-VAD-fmk对caspase-3?9蛋白表达的影响?结果:CCK-8比色法显示雷公藤甲素对子宫内膜癌HEC-1B细胞的生长有明显的抑制作用,且存在时间和浓度依赖性(P < 0.01),在48?72 h作用效果明显?加入z-VAD-fmk后,雷公藤甲素对HEC-1B细胞生长抑制作用显著下降但仍高于对照组(P < 0.01)?Western blot结果同样证明加入z-VAD-fmk后,caspase-3?9蛋白的表达有一定的减弱但仍高于对照组(P < 0.05);同时随着药物浓度的增加,caspase-3?9蛋白表达逐渐升高,bcl-2蛋白表达逐渐降低(P < 0.05)?结论:雷公藤甲素对子宫内膜癌HEC-1B细胞的生长有明显的抑制作用,通过依赖于caspase的线粒体凋亡途径促进子宫内膜癌HEC-1B细胞凋亡?     

雷公藤甲素作用机制研究进展

通过检索中英文数据库,对近10年来国内外关于雷公藤甲素作用机制文献进行分析、整理和归纳,综述雷公藤甲素作用机制的最新研究进展。预计其在基因表达信号通路方面和药理作用靶向性方面的研究将成为未来重点。     

冬凌草甲素促进骨肉瘤细胞143B凋亡及其可能机制

目的 研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人骨肉瘤细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用的分子机制.方法 以结晶紫染色和Western blot检测ORI对143B细胞增殖的抑制作用,Annexin V-EGFP染色法和Western blot检测ORI对143B细胞凋亡的促进作用;RT-PCR和Western blot检测ORI对143B细胞内Wnt/β-catenin信号的影响;沉默或过表达β-catenin后,结晶紫染色分析ORI对143B细胞增殖的抑制作用的变化.结果 ORI能够抑制143B细胞株增殖,并诱导其凋亡(P＜0.05);呈浓度依赖性抑制143B细胞PCNA的表达,同时促进其Caspase3、Bad的表达;能够抑制143B细胞内Wnt/β-catenin信号的表达,沉默或过表达β-catenin后则可以相应地促进或抑制143B细胞的凋亡(P＜0.05).结论 ORI能够浓度依赖性抑制143B骨肉瘤细胞株增殖并诱导其凋亡,可能与ORI能够抑制其Wnt/β-catenin信号转导有关.     

雷公藤甲素活血通络抗乳腺癌作用研究

[目的]研究雷公藤甲素(Triptonide,TP)抗乳腺癌作用与其活血通络功效的关系,并析探雷公藤甲素可能的体内抗肿瘤机制。[方法]在BALB/c小鼠左侧倒数第2对乳腺脂肪垫下接种5×105个4T1细胞,建立小鼠乳腺癌模型。造模48 h后,观察肿瘤生长状况,随机分为5组,每组10只,模型组、阿霉素组、TP低剂量组、TP中剂量组、TP高剂量组,另设未造模正常对照组。分组给药后,每周Moor FLPI散斑全帧实时扫描成像系统仪检测小鼠腹部及瘤体部位微循环。末次给药后,小鼠眼眶静脉丛取血,用sysmex全自动血液分析仪计数其外周血血小板相关参数。[结果]与模型组比较,给药1周后,TP各剂量组瘤体附近血流量均升高,其中TP低剂量组左腹下血流量升高有显著性统计学意义(P0.01),TP中剂量组左腹上血流量升高有统计学意义(P0.05)。给药2~4周后,TP各剂量组瘤体附近血流量都升高(第3周TP低剂量组除外),但无统计学意义(P0.05)。给药3周后TP中、高剂量组瘤体部位血流量均升高但无统计学意义(P0.05),给药4周后TP高剂量组升高有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,TP各剂量组血小板相关参数PLT、MPV、PCT、PDW、P-LCR均降低,低剂量组PLT、PCT降低有统计学意义(P0.05)。[结论]雷公藤甲素直接抑制肿瘤增殖的同时,可改善荷瘤小鼠的血小板参数及微循环。提示雷公藤甲素使肿瘤组织瘀阻的络脉再通,"活血通络"可能是TP抑制肿瘤生长及转移的主要治则之一。     

野马追内酯O诱导三阴性乳腺癌BT-20细胞凋亡的作用机制研究

[目的] 通过体内外实验探究野马追内酯O(eupalinolide O,EO)对人乳腺癌BT-20细胞的作用及机制。[方法] 采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定EO对BT-20细胞的抑制作用及半数抑制浓度,以确定EO浓度。将BT-20细胞分为空白对照组、EO 5 μmol·L-1组、EO 10 μmol·L-1组,后两组以EO处理24 h,采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞毒性;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。24只裸鼠通过乳腺脂肪垫注射BT-20细胞,建立乳腺癌模型,并随机分为对照组、阿霉素组(7 mg·kg-1),EO低剂量组(15 mg·kg-1)和EO高剂量组(30 mg·kg-1),每组6只。除对照组外,各组裸鼠连续腹腔注射对应药物治疗21 d,期间测量体表肿瘤体积;结束后称取肿瘤质量,并采用免疫组化染色检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67表达。采用免疫印迹法检测细胞和裸鼠肿瘤组织中B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X(Bcl-2 associated X protein,Bax)、聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved caspase-3)和活化的半胱氨酸蛋白酶-9(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9,cleaved caspase-9)蛋白表达。 [结果] EO对BT-20细胞的抑制作用具有剂量-时间依赖性。与空白对照组比较,EO 5、10 μmol·L-1组细胞毒性和凋亡率增加(P＜0.05,P＜0.01),且EO 10 μmol·L-1组的细胞周期明显阻滞于G2/M期(P＜0.01)。与对照组比较,阿霉素组、EO低剂量组、EO高剂量组的裸鼠肿瘤质量显著降低(P＜0.01,P＜0.05),肿瘤组织内PCNA和Ki-67抗原表达显著降低(P＜0.01),肿瘤体积随治疗进展显著缩小(P＜0.01,P＜0.05)。与空白对照组比较,各组细胞的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P＜0.01,P＜0.05);与对照组裸鼠比较,各给药组的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P＜0.01,P＜0.05)。[结论] EO在体内外抑制BT-20细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制可能与其抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax、PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达有关。     

细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制

目的 观察雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤情况,研究细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制。方法 大鼠分别单次ip给予雷公藤甲素1、2 mg/kg,给药后48 h心脏采血,检测血浆尿素氮（BUN）与肌酐（Scr）水平;肾脏HE染色,光镜下观察肾组织形态学改变;应用原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测肾组织细胞凋亡情况;利用免疫组织化学染色法结合计算机图像分析技术检测肾组织内凋亡相关蛋白的表达情况,并利用RT-PCR技术测定肾组织内凋亡相关蛋白调控基因的表达。结果 雷公藤甲素2个剂量组均可见大量肾小管上皮细胞凋亡,且高剂量的作用显著大于低剂量,细胞凋亡与肾功能改变相关;肾组织中Bax、Bid、Bad、Fas以及FasL蛋白表达明显增多,且呈剂量依赖性,而Bcl-2的表达未见明显改变。结论 一次性ip大剂量雷公藤甲素会在短时间（48 h）内造成严重的肾损伤,肾小管上皮细胞凋亡是雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤的重要组织学基础之一,且Bcl-2家族以及Fas/FasL在雷公藤甲素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的过程中起重要作用。     

原花青素促进三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用机制研究

目的 研究原花青素(Procyanidins,PC)对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖及细胞凋亡的作用及其机制.方法 常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、 对照组和PC10、20、40、80、160、320μg/mL组.MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测FoxA1蛋白及抗凋亡蛋白bcl2、UCP2表达.结果 PC各剂量组均可显著抑制抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05);PC(10-160μg/mL)组剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),PC(40-320μg/mL)可以时间依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);PC320μg/mL组各时间点细胞抑制率与PC160μg/mL组差异无显著性(P>0.05);160μg/mL PC可以时间依赖性促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05);160μg/mL PC作用24 h后,FoxA1蛋白表达显著上升(P<0.05),同时bcl2及UCP2表达降低(P<0.05).结论 PC抑制MDA-MB-231细胞,促进MDA-MB-231细胞凋亡,升高其FoxA1表达,同时降低bcl2及UCP2表达,表明PC可能通过促进FoxA1表达发挥促进MDA-MB-231细胞凋亡的作用.     

阿帕替尼对三阴性乳腺癌细胞凋亡的影响

目的 研究阿帕替尼对三阴性乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制。方法 体外培养三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468,设置PBS组、1、5、10、20μg/ml阿帕替尼组,分别用PBS,1、5、10、20μg/ml阿帕替尼处理细胞。通过MTT实验、流式细胞仪分析、划痕实验及Transwell实验,检测阿帕替尼对细胞增殖、凋亡、周期、迁移及侵袭的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果 各阿帕替尼组细胞存活率均低于PBS组,差异有统计学意义（P <0.05）。1、10μg/ml阿帕替尼组细胞凋亡率均高于PBS组,差异有统计学意义（P <0.05）。PBS组与1、10μg/ml阿帕替尼组细胞周期分布比较,差异无统计学意义（P> 0.05）。1、10μg/ml阿帕替尼组细胞迁移运动面积均低于PBS组,差异有统计学意义（P <0.05）。1、10μg/ml阿帕替尼组细胞侵袭数量均低于PBS组,差异有统计学意义（P <0.05）。5、10μg/ml阿帕替尼组p65及Bcl-2表达量均低于PBS组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 阿帕替尼可抑...     

黄芩苷联合黄芩素诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的：探讨黄芩苷和黄芩素联合应用对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。方法将不同浓度的黄芩苷、黄芩素以及两者联合作用于人乳腺癌（Michigan Cancer Foundation 7,MCF-7）细胞。检测上述化合物对乳腺癌细胞的活力、凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果黄芩苷或黄芩素作用于乳腺癌细胞后,与作用前相比细胞生长抑制率显著升高（P〈0.05）;两者联合应用,与两者单独作用相比抗增殖作用明显增强（P〈0.05）。流式细胞术检测发现两者作用后尤其是两者联用后细胞凋亡显著增加。蛋白印迹分析显示黄芩苷和黄芩素联合作用后Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53的表达增加而Bcl-2表达下降,同时p-38活化亦增加。结论黄芩苷和黄芩素均能诱导乳腺癌细胞的凋亡,两者联合应用后作用明显增强,其机制可能与其促进促凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53等的表达,并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。     

RP-HPLC法测定雷公藤甲素脂质体中雷公藤甲素的含量

目的建立雷公藤甲素脂质体中雷公藤甲素的含量测定方法。方法色谱柱μ-Bondapak C18(250mm×4.6mm,5μm);检测波长:219nm;流动相:甲醇-水-异丙醇(4:3:1);流速:1.0mL/min:柱温:30℃。结果雷公藤甲素与制剂中的辅料达到良好分离,雷公藤甲素在0.8—3.2μg范围内与峰面积有良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率为97.65%,RSD为0.42%。结论此方法灵敏、准确、重现性好。     

冬凌草甲素诱导膀胱癌MB49细胞凋亡及机制研究

目的研究冬凌草甲素对膀胱癌MB49细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用及其机制。方法MTT法检测冬凌草甲素对MB49细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检查Annexin V-FITC-PI双染色法检测细胞凋亡率;分光光度法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9活性变化;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果冬凌草甲素对MB49细胞有明显的生长抑制作用,呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡细胞数和坏死细胞数均增加,浓度越高,坏死细胞的比率增加越多。随着冬凌草甲素作用时间延长,MB49细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均升高;Bcl-2蛋白的表达逐渐减弱,Bax蛋白的表达逐渐增强,但Caspase-8未见明显变化。结论冬凌草甲素对膀胱癌MB49有明显的抗肿瘤作用。冬凌草甲素可能主要通过Fas/FasL-线粒体途径上调Bax、下调Bcl-2,导致MB49细胞凋亡的发生。     

雷公藤红素促进人类乳腺癌MDA-MB-453细胞HER2蛋白降解及诱导凋亡的机制

[目的]研究雷公藤红素促进人类乳腺癌MDA-MB-453细胞HER2蛋白降解及诱导凋亡的机制.[方法]MTT法检测雷公藤红素对MDA-MB-453的细胞毒作用;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白变化;免疫荧光检测HER2蛋白在细胞中的定位变化.[结果]雷公藤红素对MDA-MB-453有强大的细胞毒作用,IC50为(5.22±0.29)μmol/L;该化合物可浓度依赖性地诱导MDA-MB-453细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体、sub-G1改变及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Parp的裂解活化.值得一提的是,雷公藤红素作用后,Western Blot检测到HER2蛋白明显降低,并且原先主要表达在细胞膜上的HER2蛋白发生了异位.[结论]雷公藤红素浓度依赖性地诱导MDA-MB-453细胞发生凋亡,并且促进HER2蛋白降解,这可能与改变了HER2蛋白在细胞中的定位有关系.     

RP-HPLC法测定雷公藤甲素外用凝胶中雷公藤甲素的含量

目的:建立RP-HPLC法测定雷公藤外用凝胶中雷公藤甲素的含量.方法:采用Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mmi.d,5μm),检测波长为220nm,流动相为甲醇:水(46:54),流速1ml/min,柱温为室温.结果:在10.24～51.20μg/ml间,雷公藤甲素的浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系(γ＝0.999 7),方法回收率为98.3%,RSD为0.23%(n=5).结论:此方法准确、简便,可用于雷公藤甲素外用凝胶中雷公藤甲素的含量测定.     

雷公藤甲素的半合成研究

以雷酚内酯为原料,经甲基化、氧化、去甲基化、还原、环氧化等七步反应合成了雷公藤甲素。其结构经红外光谱、核磁共振光谱、质谱确证。     

雷公藤中雷公藤甲素和雷公藤乙素的测定

目的建立雷公藤药材中雷公藤甲素和雷公藤乙素的HPLC定量测定方法。方法药材经95%乙醇回流提取,过中性氧化铝柱,三氯甲烷-甲醇(9:1)洗脱,洗脱液蒸干后用流动相定容。色谱柱:Hypersil BDS色谱柱(250mm×4.0mm,5μm)。流动相为乙腈-水(23:77)(雷公藤甲素),乙腈-水(16:84)(雷公藤乙素)。检测波长:220nm。结果雷公藤甲素与雷公藤乙素线性范围均在5～100μg/mL,线性关系良好。平均回收率分别为97.5%和97.3%,RSD<2%(n=9)。结论本方法重现性好,灵敏度高,可用于雷公藤中雷公藤甲素和雷公藤乙素的测定。     

槲皮素拮抗雷公藤甲素诱导的小鼠肝损伤的机制研究

  目的  探究槲皮素(quercetin,QE)对雷公藤甲素(triptolide,TP)诱发肝损伤的拮抗机制。  方法  取40只C57BL/6小鼠,随机平均分为正常对照组、TP模型组、低剂量QE(20 mg/kg)组和高剂量QE(80 mg/kg)组。低剂量QE组和高剂量QE组进行预处理给药,按0.2 mL/10 g量连续灌胃10 d,2次/d,其余各组灌胃等量生理盐水。末次给药4 h后,除正常对照组外,各组单次灌胃500 μg/kg TP进行造模。造模22 h后取血,处死小鼠,肝切片HE染色观察肝组织病理学改变;检测小鼠血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性;测定肝匀浆液中还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;采用ELISA方法检测肝匀浆液中白细胞介素(IL)-17、IL-10和IL-6分泌情况;Western blot测定Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。  结果  与正常对照组比较,TP模型组肝小叶结构萎缩甚至消失,肝细胞坏死明显,炎性细胞浸润;小鼠血清中ALT、AST和MDA水平异常升高,SOD和GSH水平降低,IL-6和IL-17分泌水平升高,IL-10分泌水平下降,TLR4蛋白水平升高(P < 0.05)。与TP模型组相比,QE组肝组织损伤和炎症细胞浸润减轻,血清中ALT、AST、MDA、IL-6和IL-17水平均下降,TLR4表达水平下调(P < 0.05),且高剂量QE组改变更为明显(P < 0.05,与低剂量QE组比较)。  结论  槲皮素可通过减轻氧化损伤促进抗氧化,调控细胞因子的分泌,减轻TP诱导的肝损伤。     

雷公藤甲素体内代谢产物研究

目的：研究配伍甘草后雷公藤甲素在大鼠体内的代谢产物,为阐明甘草对雷公藤的减毒增效机制以及指导雷公藤甲素代谢产物的分离鉴定奠定基础。方法：采用高效液相色谱二极管阵列结合电喷雾离子肼多级质谱（ HPLC－DAD－ESI／Trap／MSn ）法研究配伍甘草后雷公藤甲素在大鼠尿液中的代谢产物。结果：在大鼠尿液中发现雷公藤甲素代谢产物4个,分子量分别为376（M1）,376（M2）,374（M3）和390（M4）。根据DAD紫外光谱图、电喷雾离子肼多级质谱以及药物体内代谢特点初步鉴定为：2（或5）－羟基雷公藤甲素（M1,M2）,2－羰基雷公藤甲素（M3）,2－羰基－5－羟基雷公藤甲素（M4）。结论：氧化代谢产物为雷公藤甲素的主要代谢产物,氧化代谢可能为雷公藤甲素的解毒途径。     

芹菜素7-O-葡萄糖苷对抗TRAIL乳腺癌细胞凋亡的作用机制研究

[目的]探讨芹菜素7-O-葡萄糖苷（AGL）对抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）乳腺癌细胞凋亡的影响。[方法]通过CCK-8法、蛋白免疫印迹、流式细胞法检测AGL、TRAIL、AGL+TRAIL对乳腺癌细胞活性、聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)水平和细胞凋亡的影响,通过激光扫描共焦显微镜检测细胞ROS水平,采用ELISA法检测丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性以及Western-blot检测PARP-1、p53、p53上调凋亡调制物（PUMA）水平。建立MCF7移植瘤模型,观察AGL+TRAIL处理下移植瘤生长和凋亡情况。[结果] TRAIL(50 ng/mL)+AGL(20、40μmol/L)处理时,MCF7细胞存活率降低（P<0.05）,Cleaved PARP-1水平升高（P<0.05）;TRAIL(50 ng/mL)+AGL(20μmol/L)处理时,MCF7细胞凋亡率、Cleaved-Cas-3、Cleaved-Cas-9水平均显著升高（P<0.05）。AGL(10、20μmol/L)处理时,MCF7细胞ROS（+）细胞数...