电针对抑郁样小鼠内侧前额叶锥体神经元E/I平衡的影响※

目的 探讨电针对抑郁样小鼠内侧前额叶（mPFC）锥体神经元兴奋/抑制（E/I）平衡变化的影响。方法 30只6～7周龄SPF级雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组10只。采用慢性不可预见性温和性应激（CUMS）方法制备抑郁动物模型,电针百会、印堂进行干预,30 min/d,共10 d。采用糖水偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验评估小鼠抑郁样行为,采用全细胞记录检测mPFC锥体神经元E/I比值。结果 与对照组比较,模型组小鼠糖水消耗显著减少、强迫游泳与悬尾不动时间显著增加,sEPSC频率及电容量显著减少,sIPSC频率及电容量显著增加,E/I比值显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与对照组比较,电针组小鼠糖水消耗显著减少、强迫游泳与悬尾不动时间显著增加,差异有统计学意义（P<0.01）,sEPSC与sIPSC频率、幅度、电容量及E/I无明显改变,差异无统计学意义（P>0.05）;与模型组比较,电针组小鼠糖水消耗显著增加、强迫游泳与悬尾不动时间显著减少,sEPSC频率及电容量显著增加,sIPSC频率及电容量显著减少,E/I比值显著提高,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 电针能够改善小鼠抑郁样行为,改善mPFC区锥体神经元异常E/I平衡。     

二次打击致抑郁小鼠的证候属性及其机制

目的 探讨母婴分离（MS）联合慢性束缚应激（RS）致抑郁小鼠的证候属性及其机制研究。方法 仔鼠出生第0天（PD0）随机分为空白组和造模组。PD21后剔除雌鼠，随机分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组、氟西汀组，采用MS+RS建立二次打击模型，每组15只。采用糖水、悬尾及旷场实验评估小鼠焦虑抑郁样行为；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）及皮质酮（CORT）含量；高效液相-电化学法（HPLC-ECD）检测各组小鼠海马单胺类神经递质含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组小鼠海马5-羟色胺（5-HT）系统、下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴及脑源性神经营养因子（BDNF）信号通路基因表达水平；免疫组化法（IHC）检测各组小鼠海马5-HT系统及HPA轴蛋白表达水平；全自动蛋白表达分析系统（Simple Wes）检测各组小鼠海马BDNF等蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠出现抑郁样行为，温阳解郁方及氟西汀可显著缓解。与空白组比较，模型组血浆CORT及ACTH含量显著升高（P<0.01）；与模型组比较，温阳解郁方及氟西汀组小鼠血浆CORT及ACTH含量明显降低（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，单胺类神经递质表达方面，模型组海马神经递质表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，温阳解郁方及氟西汀组小鼠海马神经递质表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，模型组小鼠5-HT能神经受到抑制、HPA轴异常激活，温阳解郁方及氟西汀可调控5-HT能神经及HPA轴的异常状态。与空白组比较，海马组织BDNF、TrkB mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，温阳、解郁、温阳解郁方及氟西汀组小鼠海马BDNF、TrkB mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 二次打击致抑郁小鼠的证候属性可能是阳虚肝郁型，温阳解郁方可能通过调节5-HT神经系统及HPA轴介导的BDNF信号通路，增加海马神经递质含量，进而缓解模型小鼠抑郁样行为。     

丹参素钠的抗抑郁作用

目的：研究丹参素钠的抗抑郁作用以及对PC12细胞损伤的保护作用。方法：在大鼠强迫游泳、小鼠强迫游泳、小鼠悬尾实验3种急性抑郁模型上,将动物随机分为空白对照组、丹参素钠低、中、高剂量组和阿米替林组,观察药物预先单次灌胃对大/小鼠强迫游泳不动时间、悬尾不动时间的影响;并在细胞水平建立皮质酮损伤PC12细胞模型,观察丹参素钠对PC12细胞存活率的影响。结果：在大鼠强迫游泳实验中,空白对照组不动时间为（139±34）s,丹参素钠（12,24,48 mg·kg^-1）可分别缩短大鼠的强迫游泳不动时间至（107±23）,（89±18）,（76±18）s,与空白对照组相比有显著差异（P<0.05）;在小鼠强迫游泳和小鼠悬尾实验中,空白对照组不动时间分别为（123±39）,（110±26）s,丹参素钠（18,36,72 mg·kg^-1）可分别缩短小鼠的强迫游泳不动时间至（97±28）,（89±23）,（78±19）s;缩短小鼠的悬尾不动时间至（92±24）,（83±26）,（67±15）s,与空白对照组相比有显著差异（P<0.05）。PC12细胞经皮质酮损伤,细胞存活率显著降低吸光度（A）为0.68±0.08,与空白对照组A 1.41±0.39相比,有显著差异（P<0.05）。丹参素钠（1,10,100 mg·L^-1）可显著提高 PC12细胞的存活率,与皮质酮组比较有显著差异。结论：丹参素钠具有抗抑郁作用,作用机制可能与其细胞保护作用有关。     

四逆散调控GSK-3β/A20/C/EBPβ抑制小胶质细胞激活改善抑郁模型小鼠抑郁样行为

目的 探讨四逆散通过调控糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3（A20）/CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）抑制小胶质细胞激活发挥抗抑郁作用。方法 将72只雄性C57/6J小鼠随机分出正常组、模型组、氟西汀组（5.0 mg·kg^-1）、四逆散低、中、高剂量组（4.9、9.8、19.6 g·kg^-1）,每组12只。适应性喂养1周后,采用慢性不可预知温和应激（CUMS）建立抑郁模型,第5周开始进行药物治疗4周。第9周进行行为学实验,包括蔗糖偏好实验、旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测皮质白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、一氧化氮合酶（iNOS）炎症蛋白的表达水平和GSK-3β、A20、C/EBPβ的表达水平。利用免疫荧光法检测皮质小胶质细胞的M1型极化标志物离子钙结合衔接分子1（Iba1）和巨噬细胞抗原（CD68）的荧光表达。结果 CUMS造模8周后,与正常组比较,模型组小鼠蔗糖偏好率显著降低（P<0.01）,旷场实验中央区域活动显著减少（P<0.01）,在高架十字迷宫实验开臂区域的活动明显减少（P<0.05）,强迫游泳的不动时间显著增加（P<0.01）;炎症蛋白IL-1β、IL-6、iNOS的表达水平显著升高（P<0.01）,Iba1和CD68的荧光共定位的指数升高（P<0.05）;GSK-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,C/EBPβ蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。药物干预4周后,与模型组比较,四逆散组小鼠糖水偏好率显著提高（P<0.01）,旷场实验和高架十字迷宫实验中在中央区域和开臂区域的活动明显增加（P<0.05）,四逆散中、高剂量组小鼠在强迫游泳实验中不动时间显著减少（P<0.01）;IL-1β、IL-6、iNOS的蛋白表达水平明显下降（P<0.05）,四逆散高剂量组Iba1和CD68的荧光共定位的指数明显下降（P<0.05）;四逆散中、高剂量组GSK-3β、C/EBPβ的蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,A20的蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 四逆散抗抑郁作用与调控GSK-3β/A20/C/EBPβ蛋白的表达,抑制小胶质细胞M1型激活有关。     

合欢花-远志单味药及药对对慢性不可预知应激大鼠抑郁样行为及海马CREB，NOX2表达的影响

目的 观察合欢花-远志单味药及药对改善慢性不可预知应激大鼠抑郁样行为的作用,并通过海马组织超微结构及环腺苷酸反应元件结合蛋白（CREB）,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2（NOX2）表达水平初步研究其机制。方法 72只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、合欢花组、远志组、合欢花-远志药对组及氟西汀组。除正常组外,其余5组均采用慢性不可预知应激刺激与孤养相结合的方法制备抑郁模型。自造模第1天起,合欢花组、远志组和药对组分别给与总生药量1.05 g·kg^-1的水煎液,氟西汀组给予2.1 mg·kg^-1剂量盐酸氟西汀水溶液,正常组和模型组给予蒸馏水,连续灌胃28 d。分别于造模前1 d及造模后第7,14,21,28天进行敞箱实验和强迫游泳实验,第28天电镜观察海马组织形态学改变,紫外分光光度法检测海马组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测CREB和NOX2表达水平。结果 行为学实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠水平活动次数和糖水消耗量减少,游泳不动时间增加（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,合欢花组、远志组和药对组大鼠水平活动次数和糖水消耗量明显增加,游泳不动时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）;与单味药比较,药对组各项行为学指标差异有统计学意义（P<0.05）。形态学结果发现,模型组海马组织线粒体肿胀明显,超微结构被破坏,而各给药组大鼠海马组织超微结构接近正常。与正常组比较,模型组海马组织SOD活性降低,MDA含量升高（P<0.01）;与模型组比较,合欢花组、远志组和药对组大鼠海马组织SOD活性升高,而MDA含量降低（P<0.05,P<0.01）;与单味药比较,药对组差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR和Western blot结果表明,与正常组比较,模型组大鼠海马组织NOX2表达增加,CREB的表达减少（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,合欢花组、远志组和药对组大鼠海马组织NOX2表达减少,CREB表达增加（P<0.05,P<0.01）;与单味药比较,药对组大鼠海马组织NOX2和CREB蛋白表达差异有统计学意义（P<0.01）。结论 合欢花-远志单味药及药对能改善慢性不可预知应激大鼠的抑郁样行为,可能与减少氧化应激和上调CREB表达、下调NOX2表达有关。     

逍遥散促进小胶质细胞极化改善血管性痴呆伴抑郁小鼠髓鞘再生及抑郁表型

目的 探讨逍遥散对血管性痴呆（VaD）小鼠抑郁行为表型的作用及可能机制。方法 3月龄雄性C57/BL6小鼠60只,分为正常组、模型组、氟西汀组及逍遥散低、中、高剂量组。除正常组外,其余5组小鼠采用双侧颈总动脉狭窄术,术后2周开始给予慢性束缚应激,每天6 h,构建VaD伴抑郁小鼠模型;逍遥散低、中、高组予逍遥散水煎剂（5,10,20 g·kg^-1）灌胃,氟西汀组给予氟西汀（10 mg·kg^-1）灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,共计4周,给药期间给予束缚应激维持;糖水偏好试验、悬尾试验检测小鼠抑郁行为表型,免疫荧光法检测小鼠腹侧海马（vHIP）髓鞘碱性蛋白（MBP）荧光表达水平;透射电镜观察小鼠vHIP髓鞘超微结构;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MBP,少突胶质细胞糖蛋白（MOG）,髓鞘相关醣蛋白（MAG）,髓样细胞触发性受体-2（TREM2）,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,精氨酸酶1（Arg1）,白细胞介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-4（IL-4）,白细胞介素-10（IL-10）蛋白表达水平。结果 行为学检测结果显示：与正常组比较,模型组小鼠不动时间增加、糖水偏好百分比下降（P<0.01）;与模型组比较,给予逍遥散干预后小鼠不动时间缩短（P<0.05）,糖水偏好百分比增加（P<0.01）;Western blot结果显示：与正常组比较,模型组小鼠vHIP中髓鞘相关蛋白（MBP,MOG,MAG）表达下降（P<0.01）;与模型组比较,低剂量组小鼠vHIP中MBP,MOG,MAG蛋白表达增加（P<0.05,P<0.01）,iNOS蛋白表达降低（P<0.01）,中、高剂量组MBP,MOG,MAG,TREM2,Arg1,IL-4,IL-10蛋白表达均增加（P<0.05,P<0.01）,iNOS,IL-1β,TNF-α蛋白表达水平降低（P<0.01）;免疫荧光结果显示：与正常组比较,模型组小鼠MBP平均荧光强度降低（P<0.01）,低、中、高剂量组MBP平均荧光强度不同程度增加（P<0.01）;透射电镜结果显示：模型组髓鞘结构松解,致密层分离,排列紊乱,给予逍遥散干预改善小鼠髓鞘结构完整性及板层结构松散度。结论 逍遥散改善VaD小鼠的抑郁表型,其机制可能是通过上调TREM2诱导小胶质细胞M2型极化,增加其抗炎及吞噬能力,促进受损髓鞘再生。     

基于代谢组学探讨电针对WKY抑郁大鼠的抗抑郁作用＊

目的 采用液质联用非靶向代谢组学技术探究电针抗抑郁的作用机制方法 将24只雄性WKY大鼠随机分为模型组、电针组、假针组，每组８只。Wistar雄性大鼠8只设为对照组。电针组于“百会”“足三里”进行电针治疗，每次20 min，1周5次，连续治疗3周。假针组取穴同电针组，毫针不刺破皮肤，毫针与电针仪导线相连，但无电流通过。最后通过旷场实验、强迫游泳和新奇抑制摄食实验评价行为学改变；对照组、模型组和电针组大鼠粪便采用高效液相-色谱质谱系统分析代谢物及组成的变化，探究抑郁症核心生物标记物的代谢途径差异，以评价电针的抗抑郁作用机制。结果 与对照组相比，模型组在旷场试验中的直立次数减少（P<0.001），中央运动距离减少（P<0.05）；强迫游泳的不动时间延长（P<0.001）；新奇抑制摄食潜伏摄食时间增加（P<0.001）。与假针组相比，电针组在旷场试验中的直立次数增加（P<0.001），中央运动距离增加（P<0.05）；强迫游泳的不动时间减少（P<0.001）；新奇抑制摄食潜在摄食时间减少（P<0.001）。通过模式识别分析发现，WKY大鼠代谢产物发生显著差异，电针后的代谢产物也出现明显差异。对显著性差异代谢产物分析发现，甜菜苷在模型组中升高，在电针组中降低；环己基氨基磺酸酯、10-氢过氧-H4-神经前列腺素、15（S）-羟基二十碳三烯酸、地奥司明在模型组中降低，在电针组中升高。KEGG通路结果发现显著差异代谢产物主要参与了脂质代谢、氨基酸代谢、生物素降解与代谢等代谢途径。结论 电针能改变抑郁大鼠的抑郁样行为，可能是通过调节脂质代谢、氨基酸代谢、生物素降解与代谢等代谢途径发挥抗抑郁的治疗作用。     

逍遥散正丁醇部位基于IGF-1Rβ/PI3K/Akt信号通路的抗抑郁作用

目的 观察逍遥散正丁醇部位对慢性不可预知应激（CUMS）模型小鼠抑郁样行为的干预作用,及其作用发挥与调控类胰岛素生长因子-1受体β（IGF-1Rβ）/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路的关系。方法 首先基于小鼠行为绝望模型初步获得逍遥散正丁醇部位发挥抗抑郁作用的有效剂量。再将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组、逍遥散正丁醇部位20,40 g·kg^-1组,采用CUMS法建立抑郁症模型小鼠研究其抗抑郁作用及机制,以糖水偏好实验检测造模效果。模型成功后,各给药组连续灌胃小鼠5周,正常组与模型组给予等体积溶媒。第5周末,开展小鼠糖水偏好实验、悬尾实验及新奇环境抑制进食实验;酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定小鼠血清、海马区类胰岛素生长因子-1（IGF-1）含量,甲苯胺蓝染色法检测海马CA3区神经元尼氏小体平均光密度,免疫荧光法标记海马齿状回（DG）5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）和双肾上腺皮质激素（DCX）阳性表达神经元,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马区IGF-1Rβ,PI3K,磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）,Akt,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）,剪切后的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果 小鼠强迫游泳和悬尾实验结果表明,逍遥散正丁醇部位生药量9.1,40 g·kg^-1均能明显缩短小鼠不动时间（P<0.05,P<0.01）,表明其在9.1~40 g·kg^-1剂量之间具有有效性。CUMS模型中,与模型组比较,逍遥散正丁醇部位（生药量20,40 g·kg^-1）能明显提高小鼠糖水偏好率（P<0.05,P<0.01）,缩短悬尾不动时间（P<0.01）及新奇环境摄食潜伏期（P<0.01）;并逆转模型小鼠血清、海马区下调的IGF-1含量（P<0.01）,增加小鼠海马CA3区神经元尼氏小体数目（P<0.01）,促进海马DG区Brdu和DCX表达（P<0.05,P<0.01）,下调模型小鼠海马IGF-1Rβ（P<0.05,P<0.01）,p-PI3K/PI3K（P<0.05,P<0.01）,p-Akt/Akt（P<0.05）,cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平。结论 逍遥散正丁醇部位具有与逍遥散全方相当的抗抑郁作用,可改善CUSM模型小鼠的抑郁样行为,诱导模型小鼠海马CA3区神经元合成尼氏小体,增加DG区神经元增殖、分化,促进神经发生;其作用发挥可能与抑制过度激活的IGF-1Rβ/PI3K/Akt通路、减少神经元凋亡有关。     

基于NF-κB/NLRP3通路探究十大功劳叶提取物对抑郁症大鼠炎症的影响及机制

目的 研究十大功劳叶提取物的抗抑郁作用及其潜在机制。方法 经HPLC-MS/MS手段鉴定分离十大功劳叶提取物主要化学成分。通过小鼠行为绝望实验初步探究十大功劳叶提取物的潜在抗抑郁作用,将小鼠随机分为空白组、氟西汀组（10 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,连续灌胃给药12 d,于末次给药1 h后,测定小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间。进而采用利血平（0.5 mg·kg^-1）腹腔注射诱导大鼠抑郁模型探究其抗抑郁作用机制,分组如下,分别为正常组、模型组、氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,每天灌胃给药1次,连续10 d,末次给药1 h后,做行为学检查;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平;免疫组化法测定大鼠脑组织中IL-6和IL-1β蛋白的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中核转录因子-κB（NF-κB）和NOD样受体蛋白3（NLRP3）蛋白的表达。结果 从十大功劳叶提取物中分离鉴定得到7种化学成分,主要为生物碱。小鼠行为绝望实验结果显示,与空白组比较,十大功劳叶提取物高剂量组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）。大鼠抑郁实验结果显示,与正常组比较,模型组中大鼠上睑下垂现象明显增加（P<0.05）,圈内保留时间显著延长（P<0.01）;大鼠血清中IL-6、TNF-α水平明显升高（P<0.05）;大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率显著升高（P<0.01）;大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,十大功劳叶提取物高剂量明显缩短大鼠在圈内保留时间（P<0.05）,降低大鼠血清中IL-6、TNF-α水平（P<0.05,P<0.01）,降低大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率（P<0.01）;降低大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 十大功劳叶提取物具有明显的抗抑郁作用,且能改善利血平诱导的抑郁大鼠炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关。     

银杏蜜环口服溶液对孤养结合慢性不可预知温和应激大鼠抑郁模型P2RX7/NLRP3信号通路的影响

目的 通过观察银杏蜜环口服溶液对抑郁模型大鼠的影响,探讨银杏蜜环口服溶液抗抑郁的机制。方法 50只SD大鼠,除正常组外,采用孤养结合慢性不可预见性应激（CUMS）大鼠抑郁模型,模型成功的大鼠分为模型组,氟西汀组（10 mg·kg^-1）,银杏蜜环口服溶液高、低剂量组（618,309 mg·kg^-1）,每组10只;连续造模21 d,刺激第7天给药,以10 mL·kg^-1体积连续给药14 d,正常组与模型组灌胃蒸馏水;进行糖水偏好实验、旷场实验、悬尾不动实验;苏木素-伊红（HE）染色法观察抑郁大鼠海马组织病理形态变化;运用多因子检测技术（Luminex）及蛋白免疫印迹法（Western blot）技术检测各组大鼠海马组织白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量及NOD样受体3（NLRP3）及其相关激活信号通路蛋白的表达水平。结果 连续给药14 d后,与正常组比较,模型组大鼠糖水消耗率明显降低、直立次数明显减少、悬尾不动累积时间明显延长（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,氟西汀及银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠表现为直立、穿格次数增加,糖水消耗率增加,悬尾不动累积时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）。HE结果显示,银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠海马区神经元细胞排列有序,轻度疏松,小胶质细胞浸润不明显;与正常组比较,模型组海马组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的含量明显增加（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,银杏蜜环口服溶液高剂量组大鼠脑组织IL-1β,IL-6和TNF-α的含量明显降低（P<0.05,P<0.01）。分子生物学实验表明,与正常组比较,模型组嘌呤能受体P2X7（P2RX7）,NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）,IL-1β蛋白表达明显增加（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,氟西汀及银杏蜜环口服溶液高剂量组可明显抑制P2RX7,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 银杏蜜环口服溶液可以改善孤养结合CUMS诱导的大鼠抑郁样行为,其作用机制与调控P2RX7/NLRP3信号通路相关。     

基于胶质细胞增殖调控因子bFGF/TGF-β1探讨逍遥散治疗抑郁症的机制＊

目的 基于胶质细胞增殖调控因子bFGF/TGF-β1探讨逍遥散治疗抑郁症的机制。方法 采用CUMS方法建立抑郁症小鼠模型。造模成功后，给予逍遥散和盐酸氟西汀干预，对小鼠体重、摄食量、行为学进行评估；采用Elisa、免疫组化和Western blotting方法检测小鼠前额皮质bFGF和TGF-β1蛋白表达情况及逍遥散的调节作用。结果 模型组小鼠体重、饮食情况、糖水摄入量较正常组小鼠出现显著降低（P < 0.01），强迫游泳不动时间显著延长（P < 0.01），经逍遥散和氟西汀治疗以后得到显著改善（P < 0.05）；另外Elisa、免疫组化和western blot实验结果均表明，抑郁症小鼠前额皮质bFGF蛋白含量表达显著降低（P < 0.01），经逍遥散和氟西汀治疗后，抑郁症小鼠前额皮质bFGF蛋白表达情况可被扭转（P < 0.05），而各组小鼠前额皮质TGF-β1蛋白表达情况与bFGF刚好相反。结论 逍遥散可通过调控AST抑制剂TGF-β1和促活化剂bFGF而发挥治疗抑郁症的作用，其机制可能与逍遥散通过bFGF/TGF-β1调控前额皮质AST功能有关。     

基于抗抑郁活性的百合地黄汤中生地黄与百合的配比优选及其机制

目的 基于抗抑郁活性优选百合地黄汤中生地黄与百合的最佳配比并初探其可能的机制。方法 100只雄性小鼠随机分为正常组、模型组、生地黄单煎液组、百合单煎液组、5种不同配比的百合地黄汤组（生地黄-百合5∶6、5∶5、5∶4、5∶3、5∶2）、盐酸氟西汀组。除正常组外,其余9组,连续21 d,采用慢性不可预知性温和应激法（CUMS）制备抑郁小鼠模型。生地黄单煎液组、百合单煎液组和5种不同配比的百合地黄汤组均以2 g·kg^-1分别灌胃相应的药物,盐酸氟西汀组灌胃盐酸氟西汀0.01 g·kg^-1,正常组和模型组分别灌胃等体积生理盐水,连续21 d。通过行为学实验评价不同配比的百合地黄汤的抗抑郁作用;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织脑源性神经营养因子（BDNF）和酪氨酸激酶受体B（TrkB）的表达水平;羟胺法检测海马组织总超氧化物歧化酶（SOD）的水平;分光光度法检测海马组织还原型谷胱甘肽（GSH）的水平;比色法检测海马组织谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）和谷胱甘肽S转移酶（GST）的水平;硫代巴比妥酸法检测海马组织丙二醛（MDA）的水平,初探其抗抑郁机制。结果 CUMS引起了糖水偏爱率显著下降及强迫游泳和悬尾不动时间均显著延长（P<0.01）;而不同配比的百合地黄汤及生地黄、百合的单煎液均在不同程度上明显逆转了上述指标的异常（P<0.05,P<0.01）,尤以配比为5∶6时对上述指标的影响最为明显;此外,CUMS引起了小鼠海马BDNF和TrkB的表达水平及SOD、谷胱甘肽抗氧化相关指标水平均显著降低（P<0.01）,脂质过氧化产物MDA水平显著升高（P<0.01）,而较优比的百合地黄汤（生地黄-百合5∶6、5∶5、5∶4）及生地黄、百合的单煎液均在不同程度上明显逆转了以上指标的异常（P<0.05,P<0.01）。结论 5种不同配比的百合地黄汤及生地黄、百合的单煎液均能产生抗抑郁作用,尤以生地黄-百合配比为5∶6时抗抑郁作用最强,且随着百合在方中占比减少,抗抑郁作用逐渐减弱,其机制可能涉及增强海马中枢神经营养水平和抗氧化防御能力。     

逍遥散加味对青幼期抑郁模型大鼠抑郁行为及小胶质细胞活化的影响

目的 探讨逍遥散加味百合、合欢皮（百欢逍遥汤）通过调节小胶质细胞活化改善青幼期大鼠抑郁样行为的作用机制。方法 应用慢性不可预见性温和应激法（CUMS）创建青幼期（3~8周龄）抑郁大鼠模型，将60只青幼期SD大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组、百欢逍遥汤低、中、高剂量组（5.36、10.71、21.42 g·kg^-1），蔗糖偏好实验（SPT）检测大鼠糖水偏好值；强迫游泳实验（FST）检测大鼠不动时间；旷场实验（OFT）检测总路程、中心区域路程、水平穿越方格数及前肢离地垂直活动次数；Morris水迷宫实验（MWM）检测逃避潜伏期和穿梭平台次数；免疫荧光检测海马区M1型小胶质细胞极化标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和M2型小胶质细胞极化标志物巨噬细胞甘露糖受体（CD206）的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马组织iNOS、CD206和促炎细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6及抗炎细胞因子IL-4、IL-10的mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马iNOS和CD206的蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马炎症因子IL-4、IL-6的含量。结果 与正常组比较，模型组大鼠蔗糖偏好值明显降低（P<0.05），不动时间明显增加（P<0.05），运动和探索行为明显减少（P<0.05），学习、空间记忆水平明显降低（P<0.05），iNOS的mRNA和蛋白水平均明显提高（P<0.05），促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也明显提高（P<0.05）。与模型组比较，百欢逍遥汤干预后青幼期抑郁大鼠的蔗糖偏好值明显升高（P<0.05），不动时间显著缩短（P<0.01），运动和探索行为明显增加（P<0.05），学习和空间记忆能力显著提升（P<0.01），百欢逍遥汤高剂量组海马区iNOS阳性表达和蛋白含量显著降低（P<0.01），TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著下降（P<0.01）；百欢逍遥汤高剂量组CD206阳性表达显著增加（P<0.01），IL-4、IL-10水平显著上升（P<0.01）。与氟西汀组比较，百欢逍遥汤高剂量组蔗糖偏好率显著升高（P<0.01），不动时间显著减短（P<0.01），中心区域路程显著增多（P<0.01），学习和空间记忆能力显著增强（P<0.01），海马区iNOS阳性表达和mRNA水平明显降低（P<0.05），TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显较低（P<0.05，P<0.01）；CD206阳性表达显著更高（P<0.01），IL-4、IL-10水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 百欢逍遥汤对青幼期大鼠抑郁行为的改善作用与抑制海马区小胶质M1型极化，促进M2型极化有关。     

民族药铁包金基于FGF2/FGFR1通路改善抑郁样行为的作用机制研究※

目的 观察民族药铁包金对脂多糖（LPS）诱导的抑郁样行为的干预作用,并探讨其基于FGF2/FGFR1信号通路的分子作用机制。方法 将150只SPF级雄性小鼠随机分成3批,每批分成5组,即模型组、铁包金低剂组（2 g/kg）、铁包金中剂组（4 g/kg）、铁包金高剂组（8 g/kg）、氟西汀组（20 mg/kg）,各组给药1 h后分别进行强迫游泳实验（FST）、悬尾实验（TST）及开场实验（OFT）。另取60只SPF级雄性小鼠随机分成6组,即正常对照组、模型对照组、铁包金低剂组（2 g/kg）、铁包金中剂组（4 g/kg）、铁包金高剂组（8 g/kg）、氟西汀组（20 mg/kg）,各组持续给予相应药物7 d,最后一次给药后注射LPS,采用糖水偏好实验和FST评价动物抑郁样行为。采用Western Blot方法测小鼠海马组织中成纤维细胞生长因子2（FGF2）、磷酸化及总成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）的含量。结果 铁包金可以缩短小鼠强迫游泳和悬尾不动时间,对小鼠自发活性行为则没有影响,提示铁包金具有良好的抗抑郁效果。同时,铁包金能够显著增加LPS抑郁小鼠糖水偏好值,减少小鼠游泳不动时间;并可显著增加小鼠大脑海马FGF2表达量,提高FGFR1磷酸化水平。结论 铁包金具有抗抑郁作用,其作用机制与激活大脑海马FGF2/FGFR1信号通路相关。     

母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用

目的 观察母婴分离/束缚应激诱发焦虑抑郁小鼠海马小胶质细胞激活和白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达情况,探讨温阳解郁方抗焦虑抑郁的机制。方法 84只雄性C57BL仔鼠于出生后第0天（PD0）随机分为空白组、束缚应激组和造模组,造模组采取母婴分离结合束缚应激制备焦虑抑郁模型,将造模组按随机数字表法分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组。在离乳第21天（PD21）至成年第90天（PD90）,空白组、束缚应激组和模型组饲喂正常饲料,其余饲喂药混饲料（温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组用药剂量分别为5.85,12.03,16.71 g·kg^-1及2.60 mg·kg^-1）。采用旷场实验,O迷宫和社会交互实验评估模型组小鼠焦虑抑郁状态;免疫组化法（IHC）观察海马小胶质细胞及离子钙接头蛋白-1（Iba-1）表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测IL-1β,IL-6,TNF-α,Iba-1,糖皮质激素受体（GR）mRNA表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著减少（P<0.01）,开臂活动时间与活动总路程明显减少（P<0.05,P<0.01）,训练探察时间和辨别探查时间显著增加（P<0.01）,Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-1β,IL-6,TNF-α mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,GR mRNA表达水平显著降低（P<0.01）,IHC结果显示小胶质细胞的过度激活。与模型组比较,温阳解郁方及氟西汀组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著上升（P<0.01）,开臂活动时间显著上升（P<0.01）,训练探察时间和辨别探查时间明显降低（P<0.05,P<0.01）;Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-1β,IL-6,TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,GR mRNA表达水平显著上升（P<0.01）,IHC结果表明小胶质细胞的形态恢复;温阳组和解郁组小鼠开臂活动时间显著上升（P<0.01）,辨别探查时间明显降低（P<0.05）,Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-6 mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;温阳组小鼠GR mRNA表达水平明显上升（P<0.05）,TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;解郁组小鼠5 min运动总路程显著上升（P<0.01）,训练探察时间明显降低（P<0.05）,IL-1β mRNA表达水平明显降低（P<0.05）,IHC结果表明两组小胶质细胞有所恢复。结论 温阳解郁方的综合疗效和药理作用优于温阳方和解郁方,其作用机制可能通过抑制母婴分离/束缚应激小鼠海马小胶质细胞的激活,降低IL-1β,IL-6,TNF-α等细胞因子的表达,增加海马GR表达,从而改善小鼠的焦虑抑郁样行为。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性应激抑郁大鼠海马BDNF/TrkB/CREB通路的影响

目的 基于脑源性神经营养因子（BDNF）/络氨酸激酶B（TrkB）/环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）途径探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性应激抑郁大鼠海马的影响。方法 取60只SD大鼠,其中10只作为空白组,余50只建立慢性应激抑郁大鼠模型后,随机分为5组,即模型组,盐酸氟西汀组（0.003 g·kg^-1）,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组（1.625,3.25,6.5 g·kg^-1）。连续灌胃给药8周,1次/d,分别于造模前、造模后及给药后进行行为学实验评估大鼠抑郁状态。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马形态学变化,免疫组织化学法（IHC）检测大鼠海马组织中BDNF蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马组织中BDNF,TrkB,CREB mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）定量检测大鼠海马组织中BDNF,TrkB,CREB蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠糖水偏嗜率明显降低（P<0.05）,水平得分、垂直得分明显降低（P<0.05）,不动时间明显增加（P<0.05）,漂浮时间显著增加（P<0.05）,HE染色结果显示海马神经元结构损伤,免疫组织化学染色中BDNF表达明显降低（P<0.05）,BDNF,TrkB,CREB mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05）;与模型组比较,盐酸氟西汀组及柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠糖水偏嗜率明显升高（P<0.05）,水平得分、垂直得分明显增加（P<0.05）,不动时间明显减少（P<0.05）,漂浮时间明显减少（P<0.05）,海马神经元结构明显复原,免疫组织化学染色中BDNF表达明显增加（P<0.05）,BDNF,TrkB,CREB mRNA及蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论 柴胡加龙骨牡蛎汤能显著改善经慢性应激刺激后大鼠的抑郁样行为,增强海马组织神经元的再生与修复,其机制可能与上调大鼠海马BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。     

酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠的临床观察

目的 观察酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠患者的临床疗效。方法 将120例肝郁血虚型抑郁伴失眠患者随机平均分为观察组与对照组，每组60例，对照组口服盐酸氟西汀胶囊（百忧解），观察组用酸枣仁汤联合盐酸氟西汀，两组疗程均为8周。用汉密尔顿抑郁量表（HAMD），日常生活能力量表（ADL）和匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）评估临床疗效；ELISA法测定血浆中5-羟色胺（5-HT），去甲肾上腺素（NE），脑源性神经营养因子（BDNF），胶质细胞源性神经营养因子（GDNF），神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S100β水平。结果 治疗8周后，与同组治疗前比较，观察组的HAMD和PSQI评分均显著下降（P<0.01）；ADL显著提高（P<0.01）；血浆5-HT，NE，GDNF和BDNF均显著增高（P<0.01）。治疗后，与对照组比较，观察组总有效率显著升高（P<0.01），HAMD评分和PSQI均显著降低（P<0.01），ADL评分显著升高（P<0.01）；血浆5-HT，NE，BDNF和GDNF水平均显著增高（P<0.01），而NSE和S100β水平均显著降低（P<0.01）。结论 酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠的疗效优于单用氟西汀。其机制可能酸枣仁汤对氟西汀增加单胺类神经递质有协同作用，并与促进BDNF和GDNF的分泌，增加对神经细胞的保护有关。     

酸枣仁-合欢花药对在抑郁症模型大鼠的治疗作用

目的 研究酸枣仁-合欢花药对对慢性温和不可预知性应激（CUMS）抑郁模型大鼠海马组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1（NLRP1）/趋化因子配体1（CXCL1）/趋化因子受体2（CXCR2）通路的影响。方法 120只雄性SD大鼠随机分为正常组、CUMS组、CUMS+酸枣仁-合欢花低、中、高剂量组（4、8、16 g·kg^-1）、CUMS+盐酸文拉法辛组（0.008 g·kg^-1），每组20只。采用孤养结合CUMS来复制抑郁模型，通过糖水消耗实验、悬尾试验、强迫游泳实验及Morris水迷宫实验测定大鼠行为学和空间学习记忆能力；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中NLRP1/CXCL1/CXCR2通路相关因子的变化情况；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠海马组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-18、IL-1β及IL-6的含量；组织免疫荧光检测海马组织中活性氧（ROS）水平。结果 与正常组比较，CUMS各处理组大鼠的糖水偏爱度和穿台次数显著降低（P<0.01），而悬尾不动时间、强迫游泳漂浮时间和逃避潜伏期则显著升高（P<0.01）；与CUMS组比较，酸枣仁-合欢花各剂量组和盐酸文拉法辛组则明显改变CUMS对上述大鼠行为学和空间学习记忆能力的影响（P<0.05，P<0.01）。与正常组比较，CUMS组大鼠海马组织中NLRP1、CXCL1和CXCR2的蛋白水平均有显著升高（P<0.01），炎性因子IL-18、IL-1β、TNF-α和IL-6的含量显著升高（P<0.01）。与模型组比较，酸枣仁-合欢花和盐酸文拉法辛组明显降低CUMS大鼠海马中NLRP1/CXCL1/CXCR2信号通路的活化及炎症因子的水平（P<0.05，P<0.01），此外，酸枣仁-合欢花药对明显降低CUMS大鼠海马组织中的ROS水平（P<0.05，P<0.01）。结论 酸枣仁-合欢花药对能够改善CUMS抑郁模型大鼠的抑郁行为，其作用机制可能与其抑制ROS/NLRP1/CXCL1/CXCR2信号通路的活化有关。     

补肾疏肝方对老年抑郁症小鼠海马氧化应激及TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的 观察慢性轻度不可预见性应激（CUMS）后老年抑郁症小鼠海马组织氧化应激和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路变化,并探讨补肾疏肝方抗抑郁的可能机制。方法 5月龄的小鼠90只,随机分为正常组、模型组、补肾疏肝方高、中、低剂量组和氟西汀组共6组,每组15只。除正常组外,其余各组小鼠均采用CUMS建立老年抑郁症模型。补肾疏肝方高、中、低剂量组小鼠在造模第1天开始同时灌胃补肾疏肝方19.5,9.75,4.87 g·kg^-1,氟西汀组小鼠灌胃氟西汀0.033 g·kg^-1,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,共21 d。用矿场实验评价各组小鼠的行为反应,采集小鼠海马组织并进行相关指标检测,WST-1法测超氧化物歧化酶（SOD）含量,TBA法测丙二醛（MDA）的含量,微量酶标法测谷胱甘肽（GSH）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGF-β₁,Smad2,Smad3,Smad7 mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠OFT水平得分和垂直得分明显降低,海马组织SOD,GSH水平均下降,MDA含量明显升高（P<0.05）;TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。与模型组比较,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织SOD,GSH含量均上升,MDA含量下降（P<0.05）,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均下调,Smad7 mRNA表达上调（P<0.05）。与补肾疏肝方高剂量组比较,补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织SOD,GSH含量下降,MDA含量均上升（P<0.05）;补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。结论 补肾疏肝方可显著改善SAPM8小鼠的老年抑郁症状,其机制可能与调节海马氧化应激及TGF-β₁/Smad信号通路有关。     

P2X7受体在择时电针调整小鼠自发活动近日节律中的影响研究＊

目的 观察择时电针对野生型（WT）小鼠和P2X7基因敲除型（P2X7 KO）小鼠自发活动的影响，探讨P2X7受体在择时电针调整自发活动近日节律中的作用。方法 WT小鼠36只，P2X7 KO小鼠36只，两类小鼠各自分为CT8、CT16两个时间点处理，每个时间点又分为空白组（Con组）、假穴组（SA组）、电针组（EA组），共计12组，每组6只。采用Achoff导引方法，电针组于暗置第11天电针“百会”穴和“长强”穴，假穴组于暗置第11天电针腹部非经非穴点，空白组不做处理，运用Clocklab、Matlab分析电针对小鼠自发活动近日节律的影响及相位转移值的大小。结果 ①在CT8时，WT电针组小鼠自发活动相位前置（P < 0.01），P2X7 KO电针组小鼠自发活动相位前置（P < 0.05或P < 0.01）；②在CT16时，WT电针组小鼠自发活动相位后置（P < 0.05或P < 0.01），P2X7 KO电针组小鼠自发活动相位后置（P < 0.05）；③在CT8时电针组中，与P2X7 KO小鼠比较，WT小鼠自发活动相位前置明显（P < 0.05）。结论 P2X7可能参与了CT8时电针对自发活动昼夜节律的影响，这可能是择时电针治疗近日节律紊乱的科学基础之一。