国人大肠肿瘤与DCC基因mRNA表达缺失的相关性研究

应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了３４例大肠肿瘤及其相应正常粘膜中ＤＣＣ基因ｍＲＮＡ表达情况。结果：５例大肠腺瘤和２９例大肠癌组织中分别有１例（２０％）、１５例（５１．７％）ＤＣＣ基因ｍＲ－ＮＡ表达发生缺失。其中高、中、低分化的大肠癌组织中该基因ｍＲＮＡ表达缺失率分别为２５．０％（２／８）、４４．４％（４／９）、７５．０％（９／１２）（Ｐ＜０．０５）。而有转移者为７６．９％（１０／１３），无转移者３１．２％（Ｐ＝０．０１８）。ＤＣＣ基因ｍＲＮＡ表达缺失与性别、肿瘤大小及部位无关。提示：对大肠癌原发病灶ＤＣＣ基因ｍＲＮＡ表达的检测将有助于识别高度恶性的大肠癌及判断大肠癌的转移潜能。     

食管癌APC/MCC、DCC基因杂合丢失的研究

目的研究ＡＰＣ（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓｐｏｌｙｐｏｓｉｓｃｏｌｉ）、ＭＣＣ（ｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ）和ＤＣＣ（ｄｅｌｅｔｅｄｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｒ）基因在人食管癌组织中的变化。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及限制性片段长度多态现象（ＲＦＬＰ）法检测了４６例食管癌组织中ＡＰＣ、ＭＣＣ和ＤＣＣ基因的杂合缺失。结果ＡＰＣ、ＭＣＣ和ＤＣＣ位点的杂合性丢失的发生频率分别为２９．０％（９／３１）、３３．３％（８／２４）和３２．４％（１２／３７）。然而,这些基因位点的杂合性丢失与肿瘤病理学类型、肿瘤的大小、浸润性及转移性无统计学的显著相关性（Ｐ＞０．０５）。结论ＡＰＣ、ＭＣＣ和ＤＣＣ基因位点的杂合性丢失在一定程度上是食管癌基因改变的普遍现象,并可能在肿瘤的发生中起作用。     

APC,MCC基因杂合型缺失与胃癌生物学行为的关系

采用蜡膜介导热启动ＰＣＲ等技术检查了ＡＰＣ和ＭＣＣ基因在胃癌组织中的缺失。结果在４４例胃癌组织中有２９例表现为ＡＰＣ基因杂合型，其中８例（２７．６％）存在缺失：２例高分化腺癌均有缺失，１３例中分化腺癌中２例缺失，１５例低分化腺癌中４例缺失。３例早期胃癌中１例发生缺失（１／３）。ＭＣＣ基因２５例杂合子中２例（８．０％）发生缺失。提示ＡＰＣ基因在胃癌发生中起一定作用，并可能参与早期发生。     

肺癌组织酸性谷胱甘肽S—转移酶基因测定及其临床意义

研究运用ＲＴ－ＰＣＲ方法对５１例手术切除肺癌组织和相应的癌周正常肺组织进行ＧＳＴ－πｍＲＮＡ水平检测。结果表明：ＧＳＴ－πｍＲＮＡ在正常肺组织和肺癌组织中表达阳性率分别为１９．６％（１０／５１）和５１．０％（２６／５１），两者之间具有明显差别。ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达与肿瘤病理类型、组织分化、ＴＮＭ分期等均无明显的相关性（Ｐ＞０．０５）。上述结果表明肺组织细胞在恶变过程中ＧＳＴ－πｍＲＮＡ水平表达明显增加，提示ＧＳＴ－π基因是肺癌肿瘤标志之一，同时在肺癌先天性耐药机制中占有重要的作用     

卵巢癌MDR1基因表达与近期化疗效果

目的　研究卵巢癌ＭＤＲ１ 基因表达对化疗的影响。　方法　应用免疫组织化学（ＡＢＣ） 法及改进的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）分别检测ＰＧＰ和ＭＤＲ１ 基因ｍ ＲＮＡ 的表达水平。　结果　４９ 例卵巢癌中用ＡＢＣ法检测ＰＧＰ表达的阳性率为４２８％ ,其中有化疗史的阳性率为３６０％ ;无化疗史的为５００ ％ （ Ｐ＞ ００５）。ＰＧＰ染色阴性的近期化疗有效率为５３６ ％ ,而染色阳性的为１４３ ％ （Ｐ＜ ００５） 。有３７ 例卵巢癌用改进的ＲＴＰＣＲ 检测ＭＤＲ１ 基因ｍ ＲＮＡ 表达的阳性率为７０３ ％ 。有化疗史的阳性率为９５２％ ;而无化疗史的阳性率为３７５ ％（ Ｐ＜０００１） 。ＭＤＲ１ 基因ｍＲＮＡ表达阴性的近期化疗有效率为８１８ ％ ,而表达阳性的为２３１％ （Ｐ＜ ０００５）。此同样３７ 例卵巢癌免疫组化结果并未见与化疗史相关,但仍发现与近期疗效存在相关性。　结论　ＭＤＲ１ 基因表达与卵巢癌化疗密切相关,ＰＧＰ／ ＭＤＲ１ ｍＲＮＡ 有可能作为预测卵巢癌化疗效果的一项指标。改进ＲＴＰＣＲ 方法适用于临床耐药性检测。     

贲门癌组织中多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因表达的临床研究

目的了解多药耐药基因（ＭＤＲ１）和多药耐药相关蛋白基因（ＭＲＰ）在贲门癌组织中的表达及其临床意义。方法采用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测了４６例贲门癌及癌旁组织中ＭＤＲ１和ＭＲＰ６４表达。结果癌组织中ＭＤＲ１和ＭＲＰ表达的阳性率分别６３％和５０％,均高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５）;术前化疗的ＭＤＲ１ｍＲＮＡ和ＭＲＰｍＲＮＡ表达水平高于未化疗者（Ｐ＜０．０５）;中低分化肿瘤的ＭＤＲ１ｍＲＮＡ和ＭＲＰｍＲＮＡ表达水平高于高分化肿瘤（Ｐ＜０．０５）;结论贲门癌组织中具有内源和获得性多药耐药性;ＭＤＲ１和ＭＲＰ表达与贲门癌的ＴＮＭ分期无关,其高表达状态可预示肿瘤组织的分化不良。     

大肠癌组织APC／MCC和DCC基因杂合缺失的研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，并配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，对４１例大肠癌组织ＡＰＣ／ＭＣＣ和ＤＣＣ基因的杂合缺失（ＬＯＨ）进行研究。ＡＰＣ基因ＬＯＨ率为２８．０％（７／２５），ＭＣＣ基因ＬＯＨ率为３６．４０％（８／２２），两者综合分析ＬＯＨ率为３８．９％（１４／３８）。ＤＣＣ基因ＬＯＨ率为５５．３％（２１／３８）。ＤＣＣ基因在有淋巴结转移组的ＬＯＨ率（８０．０％），显著高于无淋巴     

PCNA,CD44和nm23基因产物在膀胱癌的表达及临床意义

应用流式免疫法对４５例膀胱癌标本的ＰＣＮＡ、ＣＤ４４ｖ和ｎｍ２３－Ｈ１基因产物的表达进行研究。结果显示，ＰＣＮＡ高表达仅与膀胱癌的浸润程度有关（Ｐ＜０．０５），ＣＤ４４高表达与膀胱癌的浸润程度和复发有关（Ｐ＜０．０５）；而ｎｍ２３－Ｈ１低表达与膀胱癌的浸润程度和复发有关（Ｐ＜０．０５）。提示检测ＰＣＮＡ、ＣＤ４４ｖ和ｎｍ２３－Ｈ１基因产物的表达，能为判断膀胱癌的恶性程度和复发提供依据     

错配修复基因hMLH1a突变384Asp在胃癌、食管癌发病中的作用

目的：研究ｈＭＬＨ１基因错义突变Ｖａ１３８４Ａｓｐ在胃癌、食管癌发病中的作用。方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ测序技术，对７９例胃癌患者及其亲属、７６例食管癌患者及其亲属、１００例正常对照，进行了错配修复基因ｈＭ－ＬＨ１错义突变Ｖａ１３８４Ａｓｐ筛选，确定其检出率。结果 ：６％的正常人携带ｈＭＬＨ１基因Ｖａ１３８Ａｓｐ（杂合型）；具有癌症家族史的胃癌患者及其亲属中Ｖａ１３８４Ａｓｐ的检出率与正常对照比较具有显著差异（Ｐ〈０．０５；Ｐ〈０．０１）。以年龄分组比较，围绕中位发病年龄组的胃癌患者和低年龄的胃癌患者亲属组Ｖａ１３８４Ａｓｐ检出率较高（Ｐ〈０．０５ 管癌患者及其亲属与正常对照之间无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论：ｈＭＬＨ１基因Ｖａ１３８４Ａｓｐ等位基因频率在中国人中约为３％，该错义突变可能在部分胃癌发病     

贲门癌组织中多药耐药基因和多药而药相关蛋白基因表达的临床

目的 了解多药耐药基因（ＭＤＲＩ）和多药耐药相关蛋白基因（ＭＲＰ）在贲门癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测了５６例贲门癌及癌旁组织中ＭＤＲＩ和ＭＲＰ的表达。结果 癌组织 ＭＤＲＩ和ＭＲＰ表达的阳性率分别６３％和５０％,均高于癌旁组织（Ｐ〈０．０５）有化疗的ＭＤＲ１ ｍＲＮＡ和ＭＤＲ１和ＭＲＰ表达的水平高于未化疗者（Ｐ〈０．０５）;中低分化肿瘤的的ＭＤ     

差异竞争性PCR定量扩增胃癌及转移灶癌基因HER2和C-myc

目的 介绍差异竞争性多聚酶链反应（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ＰＣＲ，ＤＣ－ＰＣＲ），并分析癌基因ＨＥＲ２和Ｃ－ｍｙｃ变异与胃癌生物学行为的关系。方法 用ＤＣ－ＰＣＲ定量检测胃原发癌、癌旁、转移淋巴结及远处脏器转移癌中ＨＥＲ２和Ｃ－ｍｙｃ扩增。结果 ＨＥＲ２扩增频率在近端胃癌组中高于远端胃癌组（分别是８４．６％和２６．３％，Ｐ〈０．０５），侵及浆膜组明显高于未侵及浆膜组（     

p73基因在肺癌组织中的表达

目的：探讨ｐ７３基因在肺癌组织中的表达情况。方法：采用定量ＲＴ－ＰＣＲ技术检测４０例肺癌及其癌旁肺组织中ｐ７３基因的表达程度;采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测肺癌与癌旁组织中ｐ７３基因的突变情况。结果：①定量ＲＴ－ＰＣＲ检出ｐ７３基因在２４例肺癌中呈中高表达,在癌旁组织中未检出高表达。ｐ７３基因在肺癌与癌旁组织中的表达率之间存在显著性差异（Ｐ＜０．０１）;在１９例中高分化标本中检出９例呈中高表达,在２１例低分化标本中检出１５例呈中高表达,两者之间存在显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）;ｐ７３基因表达程度在１５例肺癌Ⅰ～Ⅱ期标本检出 ９例呈中高表达,２５例Ⅲ～Ⅳ期标本中检出１５例呈中高表达,两者之间无显著差异（Ｐ＞ ０．０５）。②等位基因表达分析示ｐ７３基因在１２例杂合标本肺癌组织中１０例存在Ｇ／Ｃ：Ａ／Ｔ双等位基因表达,在癌旁组织中皆为Ｇ／Ｃ表达,未见Ａ／Ｔ表达。③ＰＣＲ－ＳＳＣＰ未检出ｐ７３基因突变。结论：ｐ７３基因ｍＲＮＡ的表达可能与肺癌分化程度有关,与临床分期无关。     

胃癌组织bcl-2蛋白表达和DCC基因的杂合性缺失

为了研究ｂｃｌ２蛋白表达和ＤＣＣ基因的杂合性缺失（ＬＯＨ）在胃癌发生中的作用，采用免疫组织化学技术和ＰＣＲ方法检测了胃癌组织ｂｃｌ２蛋白的表达和ＤＣＣ基因的杂合性丢失（ＬＯＨ）。结果发现，胃癌（信息个体）ＬＯＨ发生率为５４．５％（１８／３３），ｂｃｌ２蛋白的表达阳性率为６０．０％（３０／５０），Ⅲ、Ⅳ期胃癌ＬＯＨ发生率（８３．３％，１５／１８）显著高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌（２０．０％，３／１５），Ｐ＜０．０１。ｂｃｌ２蛋白的表达和ＤＣＣ基因的ＬＯＨ与胃癌大小、分化程度、淋巴结转移、浆膜浸润、临床分期及Ｌａｕｒｅｎ′ｓ分型无显著相关。结果提示ｂｃｌ２蛋白的高表达参与了胃癌的发生，ＤＣＣ基因的ＬＯＨ与胃癌的进展有关，但其致癌机制有所不同     

多药耐药基因产物表达和细胞调亡对胃癌影响的研究

目的 探讨多药耐药（ＭＤＲ）的基因产物和细胞凋亡指数（ＡＩ）表达与胃癌分型、分期、预后的关系。方法 应用免疫组化及原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ），对８０例胃癌标本进行ＭＤＲ指标（Ｐ－ｇｐ、ＧＳＴ－π、ＴＯＰＯⅡ）及ＡＩ检测。结果 Ｐ－ｇｐ表达或临床分期有关（Ｐ〈０．０５），正常组织Ｐ－ｇｐ表达高者生存期长（Ｐ〈０．０５）；ＧＳＴ－π表达强度与预后有关，高表达者生存期短（Ｐ〈０．０５）；ＴＯＰＯⅡ表达与分型有关（Ｐ〈０．０５），低分化癌表达高于高中分化癌；凋亡指数表达与临床分期有关（Ｐ〈０．０５），高表达者其临床分期越晚。结论 ＭＤＲ与细胞凋亡都属细胞正常基因组表达的一部分，在正常组织及癌组织均可有表达。正常组织Ｐ－ｇｐ、ＧＳＴ－π的表达与预后有关，不同生存期的ＭＤＲ与细胞凋亡表达差异无显著性（Ｐ〉０．０５），但Ｍ     

成人急性髓细胞白血病免疫表型及其在预后中的意义

应用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和间接免疫荧光法对７１例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）进行免疫表型检测，结果表明，髓系抗原表达率依次为ＣＤ３３＞ＣＤ１５＞ＣＤ１３＞ＣＤ１４。ＡＭＬ中很少同时表达淋系抗原。免疫表型结合形态学及细胞化学特征，７１例中诊断全髓白血病病３例，急性混合性白血病（ＡＭＬＬ）５例。观察诱导缓解治疗完全缓解（ＣＲ）率与免疫表型的关系发现，ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５及ＨＬＡ－ＤＲ各单项表达对ＣＲ率无明显影响（Ｐ＞０．０５），而ＣＤ＋３３组ＣＲ率明显高于ＣＤ－３３组（Ｐ＜０．０５）。ＡＭＬ伴有单个淋系抗原表达对ＣＲ率无明显影响。     

胃癌多基因表达的同步检测

应用ＬＳＡＢ和ＡＢＣ法对７５例胃癌及癌旁组织进行了ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ和ｒａｓ表达的研究。结果显示：（１）７５例胃癌ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ和ｒａｓ表达阳性率分别为４１．３％、１８．７％、６１．３％和４６．７％。ｐ５３在肠型胃癌中阳性率为５２．６％，高于弥漫型胃癌的２９．７％（Ｐ＜０．０５）；在早期胃癌中阳性率较高（６０．０％），癌旁重度异型增生亦有阳性表达（２／４）。ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达只限于癌灶，而癌旁组织均为阴性。ｃ－ｅｒｂＢ－２在高分化胃癌中阳性率较高（Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ表达与胃癌的大体类型、生长方式、分化程度、淋巴结受累和远处转移呈正相关（Ｐ＜０．０５）。（２）ｃ－ｅｒｂＢ－２和ＥＧＦＲ在胃癌中的表达互相独立。（３）ｒａｓ表达与ＥＧＦＲ表达呈正相关，而与ｃ－ｅｒｂＢ－２呈负相关。（４）ｐ５３表达与其它基因表达无明显关系。上述结果表明，胃癌发生发展过程中伴有多种癌基因的变化，其出现时间不同，意义也不一样。     

P16基因及其蛋白异常表达与肺腺癌病期及转移的关系

目的 探讨ｐ１６基因及其蛋白异常表达与肺腺癌病期及转移的关系。方法 肺癌手术标本采用免疫组化ＡＢＣ法分析ｐ１６蛋白的表达,其结果与ｐ１６基因第２外显子多聚酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结果进行对比。胸水中肺腺癌细胞采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析。结果（１）７４例肺腺癌和７６例肺鳞癌中ｐ１６蛋白阳性表达率分别率为４７．３％和４７．４％。二组间无显著差异（Ｐ〉０．０５）。但肺腺癌ｐ１６蛋白阴     

Bcl-2基因及其家族Bax,Bcl-Xl和Fas/Apo-l,P16的检测在急性白血病中的临床意义

目的：为了解白血病凋亡正、负反馈网络中的问题与临床的关系，研究了抑制凋亡的基因Ｂｃｌ２及其家族Ｂａｘ，ＢｃｌＸｌ以及诱导凋亡的基因Ｆａｓ／Ａｐｏ１，Ｐ１６。方法：采用细胞免疫组化，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ，以及ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ的方法。结果：发现在ＡＭＬ组和ＡＬＬ组，Ｂｃｌ２抗原表达均明显高于正常（Ｐ＜００１），回顾性分析ＡＭＬＣＲ组其明显低于ＮＲ组（Ｐ＜００１）。蛋白印迹ＣＲ组Ｂｃｌ２表达虽然降低，但和ＮＲ组比较无统计学意义（Ｐ＞００５）。Ｂｃｌ２ｍＲＮＡ的表达ＣＲ组明显低于ＮＲ组（Ｐ＜０．０１）。Ｂａｘ的表达在免疫组化中白血病明显低于正常（Ｐ＜００１），但在ＣＲ组与ＮＲ组，免疫组化，蛋白印迹，ＢａｘｍＲＮＡ的表达，均无差异（Ｐ＞００５）。但ＢｃｌＸｌｍＲＮＡ的表达两组间有明显差异（Ｐ＜００１）。Ｆａｓ／Ａｐｏ１的表达为白血病组低于正常（Ｐ＜００１），但在ＣＲ与ＮＲ组中，免疫组化与蛋白印迹分析均无统计差异（Ｐ＞００５）。Ｐ１６的表达为白血病组低于正常组（Ｐ＜００１），但在ＣＲ组与ＮＲ组中无统计学意义（Ｐ＞００５）。结论：Ｂｃｌ２抗原以及Ｂｃｌ２ｍＲＮＡ，Ｂｃｌ     

乳腺癌 nm23-H_1 蛋白表达的研究

应用ＳＰ免疫组化法检测８４例乳腺浸润性导管癌中ｎｍ２３－Ｈ１蛋白的表达，结果显示ｎｍ２３－Ｈ１蛋白在７２例（８７．５％）有表达。研究表明ｎｍ２３－Ｈ１蛋白的表达水平与淋巴结转移呈负相关（Ｐ＜０．０１），与ＥＲ、ＰＲ水平呈正相关（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），而与组织学分级ＰＣＮＡ指数及ＭＤＲ１－Ｐｇｐ的表达无关（Ｐ＞０．０５）。     

RT—PCR定量检测GST—πmRNA的表达

目的：建立一个用于测定临床样本中胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）ｍＲＮＡ表达水平的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量技术。方法：根据共扩增ＰＣＲ定量原理，通过多对引物的特异性分析和动力学筛选，建立了以β－ａｃｔｉｎ作内参，底片扫描定量的ＲＴ－ＰＣＲ法，并对３０例食管癌组织和癌旁组织ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平进行了检测。结果：本方法灵敏度高、重复性好（批内ＣＶ＜１６％；批间ＣＶ＜３０％）、不用同位素标记，ＧＳＴ－π／β－ａｃｔｉｎ比值不受肝素、ＳＤＳ等的影响。２３例食管癌组织的ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平（１．９８±０．７６）明显高于２１例癌旁组织表达水平（１．０２±０．５８）（Ｐ＜０．０１）。结论：所建立的方法能反映ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达的微小差异并能作批量分析，ＧＳＴ－πｍＲＮＡ可作为食管癌的肿瘤基因标志。