不同剂量神经生长因子对神经源性疼痛大鼠脊髓Fos蛋白的影响

背景:神经生长因子对神经元的存活、生长发育、分化、再生和功能维持起到调控作用.目的:进一步验证不同剂量神经生长因子对神经源性痛大鼠的治疗作用以及对脊髓中Fos蛋白的影响.设计、地点:随机对照动物实验,在上海第九人民医院完成.材料:健康成年雄性Wistar大鼠72只,体质量180-200 g,随机分为4组,模型组及腹腔注射神经生长因子4, 8,16 μg组,每组18只.方法:72只大鼠结扎左侧坐骨神经制备坐骨神经慢性缩窄性损伤模型;腹腔注射神经生长因子4, 8,16 μg组,造模后分别腹腔注射神经生长因子4,8,16 Pg/(kg·d).主要观察指标:①于术前和术后第1,2,3,5,7,10,14天进行行为学观察和机械性痛阈测定.②于术后第2.7,14天各组分别处死大鼠各6只,取脊髓,应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测脊髓中Fos蛋白的表达.结果:模型组大鼠术后出现自发抬足、舔足等自发痛表现,术后第3天起开始出现痛阈下降,第14天达最低值,而注射神经生长因子组大鼠没有自发痛表现,没有出现机械性痛阈的低常期,第10,14天模型组大鼠痛阈与其余各组比较差异有显著性意义(P<0.05).4组大鼠术后第1天机械性痛阈普遍升高;注射神经生长因子16 Pg组大鼠术后第1天机械性痛闽比其他各组低(P<0.01),第2天机械性痛阈恢复至术前水平,低于注射神经生长因子4 Pg组(P<0.05).术后模型组大鼠脊髓Fos蛋白表达进行性升高,而其他各组大鼠脊髓中仅有少量Fos阳性神经元,模型组与其余各组比较差异显著(P<0.01).术后第2天注射神经生长因子16 μg组大鼠脊髓Fos蛋白表达最低,与模型组和注射神经生长因子4 Pg组比较,差异有显著性意义(P<0.01).结论:神经生长因子对大鼠神经源性痛有治疗作用,且大剂量较小剂量作用更为明显,其机制可能与抑制脊髓中Fos蛋白表达有关.     

新生大鼠手术切口对脊髓背角BDNF含量的影响

目的:探讨新生大鼠手术切口对脊髓小胶质细胞、BDNF含量的影响。方法:健康新生SD大鼠128只,采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)和后足切口组(Incision组)。后足切口术前、术后分别进行脊髓小胶质细胞标记物钙离子结合蛋白1的免疫荧光染色;酶联免疫吸附测定法检测BDNF含量;测定两组痛阈。术前预先给予小胶质细胞抑制剂米诺环素,检测BDNF含量。结果:Incision组大鼠术后1、3 d钙离子结合蛋白1阳性染色增加。术后1 d、3 d、7 d、14 d脊髓背角BDNF含量上调,3 d到达顶峰,之后逐渐降至Sham组水平。术前预先给予米诺环素可缓解手术切口造成的BDNF上调。术后6 w、10 w热痛阈升高。结论:新生大鼠手术切口导致脊髓小胶质细胞激活增多,BDNF含量呈时间依赖性增加。     

氯胺酮对神经病理性疼痛脊髓背角生长相关蛋白表达的影响

目的：观察氯胺酮对脊神经结扎大鼠脊髓背角生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。方法：25只雄性S D大鼠,随机分成5组;假手术组,氯胺酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,生理盐水组。行为学上应用von Frey Hair测定上述各组机械缩足时间变化（n=5）,采用免疫组织化学方法测定脊髓背角GAP-43表达的变化（n=5）。结果：氯胺酮组和生理盐水组,1周后均形成神经病理性疼痛模型。腹腔注射不同剂量氯胺酮均可逆转机械性痛觉过敏,氯胺酮组机械缩足时间与生理盐水组比较有显著统计学意义（P（0.001）。各组GAP-43表达随氯胺酮药物浓度增大而含量增加,生理盐水组亦可见GAP-43表达。结论：GAP-43可以阻断神经病理性疼痛中枢敏化的形成,氯胺酮能在很大程度上增强GAP-43的表达,从而起到治疗神经病理性疼痛的作用。     

关节炎疼痛对大鼠脊髓背角星形胶质细胞的影响

关节炎性病变引发的慢性疼痛是困扰关节炎患者的首要症状,严重影响患者的工作和生活,现有临床治疗方法常不能有效缓解关节炎患者的慢性疼痛[1]。因此,有必要深入研究关节炎疼痛产生的机制,寻求更为有效的治疗方法。近年来的研究表明,脊髓中胶质细胞激活在炎性疼痛的产生和维持中发挥着重要作用[2,3],但脊髓中胶质细胞激活与关节炎慢性疼痛的关系并不清楚。本研究采用大鼠佐剂单发关节炎疼痛模型,探讨关节炎疼痛与脊髓星形胶质细胞激活的关系。材料与方法1.实验动物及试剂Wistar大鼠20只,雌雄各半,体重150～180g(同济医学院实验动物中心),随…     

异氟醚对甲醛致痛诱发大鼠脊髓背角P物质释放的影响

目的：研究异氟醚对甲醛疼痛模型大鼠脊髓背角P物质(SP)释放的影响。方法：SD大鼠16只，随机数字表法分为4组，每组4只。通过向右侧后肢跖部皮下注射40g／L甲醛150μL建立疼痛模型。A组、B组跖部皮下注射注射生理盐水，C组、D组注射甲醛，B组、D组在皮下注射前10min吸入15g／L异氟醚，并持续60min，A组、C组吸纯氧。麻醉大鼠。取脊髓L3-5，节段。用SP免疫组化方法结合图像分析测定脊髓背角SP样免疫反应阳性(SPLI)纤维及终末的光密度(A)。结果：4组大鼠两侧脊髓背角SPLI的A值无显著差别(P&;gt;0.05，t=1．065)；与A组脊髓背角SPLI的A值比较，B组无明显变化(P&;gt;0.05，t=1．987)，C，D组显著小于A组(P&;lt;0.01，t=14．342，t=7．514)，有明显的纤维和终末脱失趋势；D组SPLI的A值较C组显著增加(P&;lt;0.01，t=8．263)。结论：异氟醚不影响髓背角浅层SP含量，但能明显减轻甲醛引起的疼痛反应和脊髓背角SP的释放，部分阻断脊髓痛觉的传导。     

过度通气对在体大鼠脊髓背角WDR神经元兴奋性影响的实验研究

目的:考察过度通气对大鼠脊髓背角广动力范围(Wide dynamic range,WDR)神经元自发和疼痛诱发放电频率的影响。方法:将25只SD大鼠随机分为N(正常通气)和H(过度通气)两组。两组均在吸入麻醉下行椎板切除,记录与大鼠后足掌部皮肤感觉对应的脊髓背角WDR神经元放电频率百分比。N组正常通气120分钟,旨在排除手术创伤对WDR神经元的影响;H组实施过度通气60分钟后,恢复正常通气继续观察60分钟,目的为考察过度通气对该神经元电活动的影响。结果:(1)N组各采样点间WDR神经元自发和诱发放电频率百分比均无显著性差异。(2)H组过度通气后WDR神经元自发和疼痛诱发放电频率百分比较对照值显著降低,并随正常通气的恢复而恢复。(3)H组过度通气期间WDR神经元自发及诱发放电频率百分比均较N组相应时间点显著降低。结论:过度通气可使大鼠脊髓背角WDR神经元兴奋性降低。     

康复训练对大鼠脑梗死后脊髓Fos、CGRP和HSP70表达的影响

目的：研究康复功能训练后，脑梗死大鼠脊髓中Fos，降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP)，热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70)蛋白表达的变化。方法：采用60只SD大鼠制作脑梗死，24h后随机分为康复组和制动组，康复组每天给予平衡，抓握，旋转，行走等功能训练，制动组置于网状笼内固定，各组在24h ey 1,2,3,4周检测脊髓Fos,CGRP和HSP70蛋白表达情况，结果：康复组和制动组大鼠脊髓背角出现Fos,免疫阳性物质，前角出现CGRP和HSP70阳性反应神经元，康复组反应明显较制动组强，瘫痪侧较对侧少，结论：康复功能训练可增加感觉刺激和运动输出，促进运动功能的恢复。     

豆腐果苷对慢性神经病理性疼痛大鼠热痛觉过敏及脊髓背角p-CREB表达的影响

目的:观察豆腐果苷(helicid)对坐骨神经慢性压迫伤(CCI)后大鼠热痛觉过敏的影响及对脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP response element binding protein,P-CREB)表达的影响.方法:32只180～220 g Wistar雄性大鼠随机分为4组(n=8);分别为Sham组(假手术组)、CCI组(CCI模型组)、H1组(CCI 10天后豆腐果苷,25 mg·kg-1·d-1×10 d灌胃)和H2组(CCI 10天后豆腐果苷,50 mg·kg-1·d-1×10d灌胃).4组分别于CCI手术前1天、CCI手术后1、3、5、7、9、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20天进行热板实验、测后肢回缩时间(PWL).CCI后20天取L4、5脊髓,免疫组织化学染色,计数p-CREB免疫反应阳性(p-CREB-IR)神经元数量.结果:第一部分:CCI手术后第9天,Sham组、CCI组、H1组、H2组分别与术前PWL基础值比较,Sham组无差异(P>0.05),CCI组、H1组、H2组均有差异(P<0.05),且下降达30%以上;CCI手术后第9天,CCI组、H1组、H2组分别做PWL值组间两两比较均无差异(P>0.05),证实CCI模型制作成功.给药后第1-10天,H1组、H2组分别与CCI组做组间比较,PWL值增高,H2组第3天已有差异,H1组第5天开始有差异,两组PWL值增高至第7天达峰值,后一直保持稳定,H2组较H1组保持较高水平.第二部分:脊髓背角p-CREB免疫反应阳性神经元细胞计数比较:与Sham组比较,CCI组、H1组和H2组计数明显升高,有差异(P<0.01);H1组和H2分别与CCI组比较,数量较之为少(P<0.01);H1组计数稍大于H2组,但无差异;即CCI>H1>H2>Sham组.结论:口服豆腐果苷能剂量依赖性提高CCI大鼠热痛阈值,降低热痛觉过敏,并与影响脊髓背角P-CREB的表达有关.     

大鼠坐骨神经慢性压迫后脊髓背角GCH1基因表达与疼痛的关系

目的:探讨大鼠坐骨神经慢性压迫(chronic constriction injury,CCI)后,脊髓背角内三磷酸鸟苷环化水解酶1 (GTP cyclohydrolase 1,GCH1)基因的表达变化与神经病理性疼痛产生的关系.方法:wistar大鼠64只被随机分为CCI组和Sham组,每组32只.对CCI组大鼠行右侧坐骨神经结扎;建立CCI模型,Sham组仅暴露坐骨神经不结扎,于术前1天及术后1、3、7、10、14、21、28天测定大鼠机械痛阈值,并分别在术后3、7、14、28天职腰4～6段脊髓,进行免疫组化和Western Blotting检测,观察脊髓背角GCH1表达的变化情况.结果:CCI组大鼠术后各时间点后肢机械痛阈值均显著低于Sham组(P＜0.05),术后第1天开始疼痛阈值便明显降低,直至术后第28天,均低于术前水平(P＜0.05).免疫组化结果显示:CCI组大鼠术后脊髓背角神经元GCH1的表达呈先升高后降低的趋势;与Sham组相比,术后各时间点GCH1的表达均明显增高(P＜0.05).Western Blotting检测与免疫组化结果基本一致,CCI组术后3天、7天、14天GCH1表达均高于Sham组(P＜0.05).结论:周围神经损伤引起的痛觉过敏随脊髓背角内GCH1表达升高而增强,随其表达降低而减轻,可以认为GCH1可能参与了神经病理性疼痛的形成.     

不同程度腰椎椎狭窄对脊髓背角神经肽的影响

目的：探讨不同程度的腰椎椎管狭窄时，相应节段脊髓背角中P物质（SP）和血管活性肠多肽（VIP）等神经肽含量和分布的变化特点，以及该变化的临床意义。方法：以家犬建立腰椎椎管狭窄的动物模型。实验分为A组：正常组；B组：对照组；C组：25％狭窄组；D组：50％狭窄组等4组，每组6只。分别检测各组脊髓背角SP、VIP的表达及含量变化。结果：脊髓背角中SP含量25％狭窄组各时相点差异无显著性意义（P&;gt;0.05）。50％狭窄组各时相点均非常显著升高（P&;lt;0.01）。脊髓背角中VIP含量25％狭窄组术后1，4周时较正常组、对照组有显著升高（P&;lt;0.05）。50％狭窄组在各时相点均显著（P&;lt;0.05）或非常显著（P&;lt;0.01）升高。结论：椎管狭窄造成的马尾神经压迫性损害可引起脊髓背角SP、VIP显著升高；脊髓背角中SP含量的升高随狭窄程度的增加而增加。VIP含量的升高不随狭窄程度的增加而增加。SP、VIP等神经肽类物质在腰椎椎管狭窄引起的下腰部和下肢疼痛的机制中扮演了重要的角色。     

新生时辣椒素处理大鼠的炎症和痛敏：对脊髓背角伤害性神经元的影响

新生时辣椒素处理大鼠的炎症和痛敏──对脊髓背角伤害性神经元的影响已知，脊髓中有两类伤害性神经元：一类是伤害特异性（ＮＳ）神经元，只对伤害性刺激起反应，接受Ｃ纤维和Ａδ纤维的传入冲动；另一类是广动力范围（ＷＤＲ）神经元，对伤害性和非伤害性刺激均起反应，...     

脊髓损伤后慢性中枢性疼痛与脊髓背角P物质关系研究

目的探讨脊髓损伤 (SCI)后慢性中枢性疼痛 (CCP)与P物质的关系。方法选取SD大鼠 2 8只 ,分为正常组 (A组 )、假手术组 (B组 ) ,以及用WADE法复制出SCI后无CCP组 (C组 )和CCP组 (D组 )。取大鼠T13 和L2 脊髓节段 ,采用免疫荧光组织化学染色法结合激光共聚焦显微镜技术观察脊髓背角P物质 (SP)的变化。结果各组大鼠T13 和L2 节段脊髓背角SP含量比较为 :D组较C组减少 (P <0 .0 5 ) ,较A组和B组明显减少 (P <0 .0 1) ;C组较A组和B组减少 (P <0 .0 5 ) ;A组与B组无显著性差异。结论SCI后CCP大鼠脊髓背角SP可能对CCP有某种程度的抑制作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fos蛋白的影响

目的：探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响：方法：SD大鼠18只，体质量250～280g，雌雄不限。动物随机分为3组．对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型，电针百会、风池、大钟及足三里穴，频率2～20Hz，强度2．0A，持续30min，4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果：电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达：治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加，CA1区（236&;#177;26．126&;#177;19.P&;lt;0.05)；CA3(328&;#177;80，212&;#177;55．P&;lt;0.05)：CA4(594&;#177;104．381&;#177;92、P&;lt;0．01)：DG(621&;#177;111，341&;#177;89．P&;lt;0.01)。结论：缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达，电针可增强Fos蛋白的表达。     

鞘内注射新斯的明对手术切口引起的大鼠脊髓背角P物质表达的影响

目的:研究鞘内注射新斯的明对术后疼痛大鼠疼痛行为和脊髓背角P物质表达的影响。方法:采用大鼠切口疼痛模型,用累积疼痛评分法评价疼痛行为及免疫组织化学法观察P物质的表达。结果:手术前和手术后鞘内注射新斯的明均可降低累积疼痛评分。左侧后爪足底切口可增加同侧脊髓背角P物质样免疫反应 (0. 6173±0. 0731,vs0. 3792±0. 0874,P<0. 01),手术前鞘内注射新斯的明可明显抑制P物质表达的增多(0. 3789±0. 0388,P<0. 01),手术后鞘内注射新斯的明作用较弱(0. 4982±0. 0653,P>0. 05)。结论:鞘内注射新斯的明的抗伤害作用可能与抑制脊髓背角P物质表达有关。     

牛肾上腺髓质22肽在吗啡耐受大鼠中对伤害性刺激引起的脊髓背角c-s表达的影响Fo

目的：研究鞘内注射牛肾上腺髓质22肽（bovine adrenal medulla 22,BAM22）对伤害性感受的影响。方法：以雄性SD大鼠为实验对象,通过甩尾反射实验揭示BAM22的药理特性;运用免疫组织化学方法检测在吗啡耐受大鼠中,鞘内注射BAM22对脊髓c-Fos蛋白表达的影响。结果：鞘内注射BAM22可剂量依赖性地延长伤害性热刺激引起的甩尾反射潜伏期,10 nmol BAM22可延长甩尾潜伏期达50%MPE,作用持续约1 h。在动物产生吗啡耐受后,鞘内注射10 nmol BAM22仍能明显抑制伤害性热刺激引起的脊髓背角各层c-Fos蛋白的表达。与对照组相比,其表达约减少70%。结论：本研究表明BAM22参与脊髓水平伤害性信息的调制;在吗啡耐受大鼠中,BAM22可通过感受神经元特异性受体调制疼痛过程。     

脊髓背角P38MAPK活化在大鼠切口痛形成中的作用

目的:研究切口痛大鼠脊髓背角磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的变化和鞘内注射p38MAPK特异性抑制剂SB203580对切口痛大鼠疼痛的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、切口痛组(IP组)、药物组和DMSO组.按Yaksh法施行鞘内置管.按Brennan法建立大鼠切15口疼痛模型.采用Hargreaves法(热痛觉过敏)测定热刺激缩足反射潜伏期(TWL).应用免疫组织化学法检测脊髓背角p-p38MAPK表达的变化.结果:与SH组相对应的时间点和术前值比较,IP组和DMSO组大鼠在术后2 h、3 h、6h、ld、2 d和3 d的TWL均明显缩短(P<0.05或P<0.01),但IP组和DMSO组各相对应的时间点比较无明显差异;与IP组和DMSO组相对应的时间点比较,药物组大鼠在术后2 h、3 h、6 h、1 d和2 d的TWL均明显延长(P<0.05或P<0.01).与SH组比较,IP组和DMSO组P-p38MAPK阳性细胞数增加(P<0.01);与IP组和DMSO组比较,药物组P-p38MAPK阳性细胞数降低(P<0.01或0.05),IP组和DMSO组间差异无统计学意义(P>0.05).IP组和DMSO组p-p38MAPK阳性细胞数在术后6h开始增加,1d达到高峰,然后逐渐下降,5d后逐渐恢复.结论:脊髓背角p38MAPK活化参与切口痛的形成与发展.     

大鼠脊髓背角TRPV4在背根神经节持续受压致神经病理性疼痛中的作用

目的:探讨大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)持续受压(chronic compression of right side dorsal root ganglion,CCD)后脊髓背角瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)基因及蛋白变化,明确脊髓背角TRPV4在CCD致神经病理性疼痛中的作用。方法:采用健康成年雄性Wistar大鼠,共36只,随机分为3组,分别为空白对照组、CCD手术组、CCD+钌红组。制备大鼠背根神经节持续受压模型,于术前1天、术后第7天、给药前及给药2h后,测量大鼠机械刺激缩爪反应阈值,观察机械痛阈的变化;利用RT-PCR及Western Blot技术检测各组大鼠手术侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达的变化。结果:与空白对照组相比,术后第7天,CCD组大鼠术侧机械痛阈值明显下降(P0.001),同侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达升高(P0.05);与给药前相比,给予钌红2h后,术侧机械痛阈值明显升高(P0.001),同侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达下降(P0.05)。结论:CCD后大鼠术侧机械痛阈下降,脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达升高;钌红可部分逆转CCD后痛觉过敏,部分降低脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达。脊髓背角TRPV4参与CCD后大鼠神经病理性疼痛形成。     

蛋白激酶C对内脏炎症痛模型大鼠脊髓背角神经元电活动的影响

目的：本实验采用福尔马林诱导的急性内脏炎症痛模型，观察蛋白激酶C（Protein Kinase C，PKC）激动剂PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate）与抑制剂H-7（1-（5-isoquinolinesulfonyl）2-meth-ylpiperazine dihydrochloride）对脊髓背角神经元放电的影响。方法：选用健康成年Wistar大鼠，随机分为4组：（1）福尔马林直肠粘膜下注射致炎组（F）；（2）福尔马林致炎与脊髓微透析生理盐水组（F＋NS）；（3）福尔马林致炎与脊髓微透析H-7组（F＋H-7）；（4）福尔马林致炎与脊髓微透析PMA组（F＋PMA）。结果：记录到24个单位的反应结果表明：福尔马林致炎后0～120min内放电频率明显增加，特别是0～15min和15～30min内与致炎前相比均有显著性增强（P＜0．05）；经微透析PMA和H-7后，上述时间段内放电频率分别明显增强（P＜0．01）和回降（P＜0．05）。结论：PKC在福尔马林致内脏炎症痛的产生和维持中起重要作用。     

康复训练对脑梗死大鼠中枢神经系统Fos表达的影响

目的 研究康复训练对脑硬死大鼠中枢神经系统Fos蛋白表达的影响。方法 采用60只SD大鼠制作脑梗死模型;1d后随机分为康复组和制动组;康复组每天给予平衡、抓握、旋转、行走等训练,制动组置于网状笼内固定,各组在1、7、14、21、28d检测Fos表达。结果 康复组和组大鼠大脑皮质、丘脑、下丘脑、基底节、网状结构及脊髓后角均出现Fos阳性反应,两组比较差异有非常显著性意义（P＜0．01）。结论 康复训练可激活脑梗死大鼠梗死灶周围和对侧相应皮质神经元功能,促进运动功能恢复。     

电针对神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏及脊髓背角钾-氯离子协同转运体2表达的影响

目的:观察患侧电针和健侧电针足三里穴、阳陵泉穴对神经病理性疼痛大鼠行为学表现以及脊髓背角钾-氯离子协同转运体2(KCC2)表达的影响,探讨患侧选穴和健侧选穴两种针刺方案的镇痛效应,以及KCC2在电针镇痛效应中的作用。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组:假模组、模型组、患侧电针组、健侧电针组,每组10只。建立大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型,治疗组于术后1周开始电针治疗,每天1次,连续7天。各组于术前(0天)及术后3、5、7、10、12、14天分别测量大鼠患侧足机械足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。术后14天处死大鼠,取脊髓组织行HE染色观察组织病理学改变,并采用免疫组化方法检测脊髓背角KCC2蛋白的表达。结果:与术前比较,CCI各组大鼠痛阈明显降低,出现痛觉过敏(P0.001),电针治疗后大鼠MWT和TWL均有不同程度的持续升高,且患侧与健侧电针相比无明显差异。HE染色结果提示,患侧电针组与健侧电针组脊髓背角组织及神经元病变程度较模型组减轻。术后14天患侧与健侧电针组较模型组脊髓背角患侧KCC2表达显著增加(P0.05),并且患侧电针组与健侧电针组无明显差异。结论:患侧电针和健侧电针能产生类似的镇痛效果,均可减轻外周神经损伤后引起的痛觉过敏。患侧电针与健侧电针治疗均可抑制KCC2蛋白的表达下调,电针的镇痛作用可能是通过增加脊髓背角中KCC2的表达实现的。