不同剂量ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖的抑制作用

目的:确定5-氨基酮戊酸-光动力疗法对皮肤鳞状细胞癌A431细胞抑制的最佳剂量。方法:体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株,应用MTT法检测不同ALA浓度(0.5、1、2 mmol/L)、不同PDT光照剂量(5、10、20、40 J/cm~2)下A431细胞的增殖水平。结果:当ALA浓度为0.5 mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm~2对A431细胞的抑制率分别为6%、10%、15%、18%;当ALA浓度为1mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm~2对A431细胞的抑制率分别为30%、52%、80%、82%;当ALA浓度为2 mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm~2对A431细胞的抑制率分别为31%、54%、81%、82%。结论:ALA在浓度为1 mmol/L,光照剂量为20 J/cm~2时,ALA-PDT对A431细胞增殖抑制效果达到最佳。     

5%氮酮提高5-ALA-PDT治疗皮肤鳞状细胞癌的疗效

目的:确定氮酮对5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-ALA—PDT)治疗皮肤鳞状细胞癌(SCC)疗效的影响。方法:制备含不同浓度氮酮的5-AIA促渗乳膏;大鼠经皮给药,观察原卟啉Ⅸ(PpⅨ)体内生成动力学;30例皮肤鳞状细胞癌患者分别以不加氮酮的5-ALA乳膏和含5%氮酮的5-ALA促渗乳膏外用(每组15例),然后均给予光动力治疗,对比两种治疗方案的疗效。结果:5%氮酮对5-ALA表皮细胞内促PpⅨ合成增强作用最明显;含5%氮酮5-ALA-PDT组治疗SCC的CR率为93.3%,不含氮酮的5-ALA-PDT为66.7%(P<0.05)。结论:含5%氮酮的5-ALA乳膏能显著提高5-ALA-PDT治疗鳞状细胞癌的疗效。     

ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响

目的探究5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响。方法培养皮肤鳞癌A431细胞,将细胞分为对照组以及不同剂量的ALA-PDT处理组(ALA浓度分别为:0.1、0.5、2mmol/L),MTT检测各组细胞增殖活力。分别采用q PCR和Western blot方法检测ALA-PDT处理后A431细胞Gadd45a mRNA及Gadd45a蛋白表达。流式细胞术检测ALA-PDT处理后各组细胞凋亡率,并进一步观察经ALA-PDT处理后对A431细胞DNA总体甲基化水平的影响。结果不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALA-PDT处理后,随ALA浓度上升A431细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势(P均0.05);经不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALAPDT处理后A431细胞Gadd45a蛋白表达水平随ALA浓度上升而上升,而ALAPDT组DNA总体甲基化显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论 ALA-PDT治疗通过促进Gadd45a蛋白表达抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖并促进凋亡,过表达的Gadd45a蛋白可抑制A431细胞DNA甲基化。     

阿维A对人表皮鳞状细胞癌A431细胞株生长及凋亡的影响

目的 研究阿维A对上皮鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生长的影响及其诱导凋亡作用。方法 以体外培养的人表皮鳞癌细胞A431细胞和角质形成细胞HaCaT细胞为研究对象,用MTT法观察阿维A对A431细胞和HaCaT细胞的生长抑制作用,用光镜和电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰的出现,Annexin-V染色证实凋亡的发生。结果 随着阿维A作用时间的延长及剂量的增加,对A431细胞增殖的抑制作用增加。同样浓度和同样作用时间的阿维A对A431细胞增殖的抑制率高于对HaCaT细胞的抑制率。光镜和电镜观察显示随阿维A作用时间延长,A431凋亡细胞增多。流式细胞仪检测显示随阿维A作用时间的延长,亚G1期凋亡峰明显增加,Annexin-V染色阳性细胞数增多。结论 阿维A具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用。     

5-氨基酮戊酸光动力疗法对小鼠RAW264.7巨噬细胞株吞噬活性和活性氧自由基的影响

目的探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-aminolevulinicacid photodynamic therapy,5-ALA-PDT)对RAW264.7细胞吞噬活性和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的影响。方法细胞实验研究用灭活痤疮丙酸杆菌诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,产生炎症细胞模型,给予不同浓度的5-ALA孵育RAW264.7细胞,并给予16 J/cm~2红光照射。采用中性红法检测巨噬细胞的吞噬活性,荧光显微镜观察细胞内活性氧离子的荧光强度,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐法(dihydrochloride acetyl acid dichloride,DCFH-DA)检测活性氧自由基水平。结果模型组吞噬活性比空白组高,随着5-ALA浓度升高,吞噬活性降低,呈剂量依赖性。荧光显微镜下5-ALA 0.12 mmol/L组细胞内有大量红色荧光。随着5-ALA浓度升高,ROS水平升高,呈剂量依赖性。结论 5-ALA-PDT可对RAW264.7细胞吞噬活性和活性氧自由基产生影响,可能影响5-ALA-PDT的疗效。     

lncRNA UCA1通过激活miR-143/HK2通路促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭和EMT

目的:探讨长链非编码RNA UCA1(lncRNA UCA1)在皮肤鳞状细胞癌A431细胞中的表达及其对A431细胞增殖、侵袭及其上皮间质转化(EMT)的影响.方法:通过RT-qPCR检测皮肤鳞状细胞癌、癌旁正常组织、A431细胞、HaCaT细胞中lncRNA UCA1的表达;siRNA技术下调lncRNA UCA1表...     

氨基酮戊酸光动力疗法对鳞状细胞癌细胞株A431蛋白激酶D1及其磷酸化位点的影响

目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞蛋白激酶D1（PKD1）的影响,探讨ALA-PDT诱导A431细胞凋亡的机制。方法 体外培养A431细胞,用CCK-8法检测筛选出抑制作用最强的ALA浓度和光动力照射（PDT）剂量组合。将对数期生长A431细胞随机分为不予任何干预的对照组、ALA组、PDT组及ALA-PDT组,观察4组细胞接受相应干预12、24、36、48 h后细胞增殖抑制率和增殖抑制作用最强时间点的凋亡率。反转录PCR检测ALA-PDT作用A431细胞不同时间点后各组PKD1基因mRNA的表达。Western 印迹法检测各组A431细胞中PKD1及其磷酸化位点Tyr463蛋白（pTyr463）、Ser916蛋白（pSer916）表达。结果 ALA浓度1.5 mmol/L、光照剂量2 J/cm2为最佳剂量组合。4组细胞干预12、24、36、48 h的增殖抑制率差异有统计学意义（F = 39.56,P < 0.05）。孵育24 h时：ALA-PDT组细胞增殖抑制率（46.26% ± 1.25%）高于ALA组（14.65% ± 0.33%）、PDT组（14.96% ± 0.68%）和对照组（11.98% ± 0.32%）,差异有统计学意义（均P < 0.05 ）;ALA-PDT组细胞增殖抑制率高于12 h（P < 0.05）;4组细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 16.32,P < 0.05）,ALA-PDT组（41.92% ± 3.23%）高于对照组（4.67% ± 0.88%）、ALA组（7.02% ± 1.52%）和PDT组（8.37% ± 0.59%）,均P < 0.05。ALA-PDT作用于A431细胞后0、6、12、24、36、48 h,细胞PKD1基因mRNA的相对表达量差异有统计学意义（F = 22.24,P < 0.05）,孵育24 h mRNA相对表达量低于0、6、12 h（均P < 0.05）,与36、48 h差异无统计学意义（均P > 0.05）。4组A431细胞中pSer916表达量差异无统计学意义（F = 1.53,P > 0.05）,PKD1和pTyr463表达量差异有统计学意义（F值为10.04、8.27,均P < 0.05）,ALA-PDT组PKD1、pTyr463的表达低于对照组、ALA组、PDT组（均P < 0.05）。结论 PKD1可能参与ALA-PDT疗法诱导A431细胞凋亡的光化学反应进程,且可能是通过Tyr463位点活化促进癌变的发展。     

组胺对皮肤鳞状细胞癌细胞生长和迁移的影响

目的:探讨组胺处理体外培养的皮肤鳞状细胞癌细胞(A431)对其生物学行为的影响。方法:用细胞活力(CCK-8)法检测不同浓度组胺处理A431细胞的活性,筛选用于本研究的有效组胺浓度。流式细胞仪检测癌细胞增殖周期细胞百分比与细胞增殖指数;划痕、Transwell小室和黏附实验分别检测癌细胞的迁移、侵袭和黏附潜能。结果:与未处理的对照组相比,组胺处理A431细胞在48 h出现显著抑制作用,呈浓度和时间依赖关系。组胺10~4 mol/L组在48 h和72 h处理癌细胞活力比其他浓度组更显著(均P0.01)。组胺10~4mol/L组处理后细胞在G1期比率显著增加,在S期比率明显降低(均P0.05),并抑制A431细胞的迁移、侵袭和黏附(均P0.05)。结论:组胺能有效抑制A431细胞增殖、迁移、侵袭和黏附的生物学行为。     

胰蛋白酶对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生长的影响

目的 探讨胰蛋白酶对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移和黏附能力等生物学行为的影响。方法 用不同浓度的胰蛋白酶处理A431细胞,通过CCK8法检测细胞活性,筛选胰蛋白酶作用的最佳浓度;流式细胞仪检测癌细胞增殖周期细胞百分率和增殖率;划痕和Transwell小室实验分别检测癌细胞在二维和三维空间的迁移能力;纤连蛋白粘附试验检测癌细胞的黏附潜能。 结果 用不同浓度胰蛋白酶处理A431细胞,通过检测细胞生长活性发现,随着胰蛋白酶浓度升高,A431细胞增殖活性增加;100 nmol/L胰蛋白酶处理A431细胞后,与对照组相比,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,细胞增殖指数、细胞迁移能力和黏附潜能增加,差异均有统计学意义（均P < 0.05）。 结论 胰蛋白酶能促进A431细胞增殖、迁移和黏附。     

葡萄籽原花青素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响

目的：明确葡萄籽原花青素（GSP）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养A431细胞,用不同浓度的GSP（5、10、20、40、80 μg/mL）处理,采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞活力和增殖能力,Western blot检测细胞通路PI3K/Akt/GSK-3β信号转导通路蛋白的表达。结果：随着GSP浓度增加,A431细胞活力及细胞克隆逐渐下降,细胞凋亡逐渐增加。GSP处理后A431细胞中p-PI3K、p-Akt和p-GSK-3β表达水平明显降低。结论：GSP可以诱导A431细胞凋亡和抑制A431细胞增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活化有关。     

5-ALA-PDT法在HPV11.HaCaT细胞模型中的应用

目的：确定光动力疗法(5-ALA-PDT)对携带HPV11全基因组的HaCaT细胞(HPV11.HaCaT)模型的影响。方法：HPV11.HaCaT细胞培养传代后分别用不同浓度5-ALA(0.375、0.75、1.5、3mM),或不同剂量红光(10、20、40J/cm2),或不同浓度5-ALA结合不同剂量红光处理。用MTT法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR测定HPV11早期基因E5、E6和E7 mRNA的表达。结果：0.75mM以上浓度的5-ALA联合20或40J/cm2红光,细胞存活率均在50%以下(P<0.01)。0.375mM 5-ALA联合20J/cm2红光能明显降低HPV11E6和E7 mRNA表达,相对表达量为0.28和0.26(P<0.01),而0.75mM 5-ALA联合20J/cm2红光处理对HPV11 E6和E7 mRNA表达影响不明显,相对表达量为0.85和1.46(P>0.05),但以上两种处理条件对HPV11 E5 mRNA的表达均无明显影响。结论：5-ALA-PDT法应用于HPV11.HaCaT细胞模型能抑制HPV11.HaCaT细胞增殖,并能降低该细胞中HPV11 E6、E7mRNA的表达。     

5-氨基酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣的Meta分析

目的评价5-氨基酮戊酸光动力疗法对降低尖锐湿疣复发率的有效性。方法检索知网、万方和维普数据库中涉及尖锐湿疣的2009年至2013年年度文献,按照纳入研究标准筛选文献,并采用Stata/SE 11.0软件对质量较好的文献进行Meta分析。结果纳入9篇均为对比研究采用光动力疗法或者CO2激光治疗尖锐湿疣的文献,随机效应模型Meta分析显示5-氨基酮戊酸光动力疗法的复发率低于CO2激光疗法的复发率[OR=4.121,95%CI(3.162,5.374),P0.01]。结论 5-氨基酮戊酸光动力疗法确实可降低尖锐湿疣的复发率,但由于文献数量和质量有限,以上结论有待日后进一步验证。     

5-氨基酮戊酸光动力疗法治疗鲍温样丘疹病疗效评价

目的:评价温敏凝胶为光敏剂载体的5-氨基酮戊酸光动力疗法治疗鲍温样丘疹病的临床疗效。方法:治疗组30例采用5-ALA-PDT治疗,每周治疗1次,共4次;对照组30例予二氧化碳激光治疗。结果:治疗组痊愈10例,显效10例,有效率为66.7%;复发2例,复发率20%。对照组痊愈23例,显效3例,有效率为86.7%;复发16例,复发率69.6%。两组之间有效率相比无明显差异(P0.05);复发率相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:与较二氧化碳激光治疗比较,以温敏凝胶为光敏剂载体的ALA-PDT疗法能降低鲍温样丘疹病的复发率。     

外源性信号通路JAK/STAT在ALA-光动力诱导人SCC细胞凋亡中的作用

目的：明确外源性凋亡机制(JAK/STAT信号通路)在5-ALA-PDT诱导人鳞状细胞癌细胞(SCC)凋亡中的作用。方法：体外培养鳞状细胞癌细胞系A431和COLO-16,分为空白对照组、转染阴性对照组、光动力组、转染阴性+光动力组、STAT3高表达载体组、STAT3-siRNA组、STAT3高表达载体+光动力组,STAT3-siRNA组+光动力组。CCK-8,流式细胞术（FCM）法分别检测各组细胞的存活率和凋亡率,qRT-PCR和Western Blot检测STAT3及其下游基因Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白水平。结果：5-ALA-PDT组A431和COLO-16凋亡率为24%和22%高于STAT3高表达载体+光动力组(11%和10.5%),低于 STAT3-siRNA+光动力组（36%和39%）;5-ALA-PDT组STAT3和Bcl-2 mRNA水平和蛋白水平低于高表达载体+光动力组,高于STAT3-siRNA组。5-ALA-PDT组Bax mRNA和蛋白的水平高于高表达载体+光动力组,低于STAT3-siRNA组。结论：外源性凋亡通路JAK-STAT3可能参与5-ALA-PDT诱导的上皮鳞癌细胞的凋亡过程。     

miR-196-5 p靶向HOXA5激活JAK/STAT通路促进皮肤鳞状细胞癌的增殖、侵袭及EMT

目的:探讨miR-196-5p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)增殖、侵袭和EMT的影响及其潜在的作用机制.方法:利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-196-5 p在癌旁正常组织、CSCC组织、A431细胞和HaCaT细胞中的表达水平.过表达或下调miR-196-5 p在A431细胞中的表达后,通过CCK-8...     

5-aminolaevulinic acid photodynamic therapy in a transgenic mouse model of skin melanoma

Photodynamic therapy (PDT) is widely used to treat preneoplastic skin lesions and non-melanoma skin tumours. Studies analyzing the effects of PDT on malignant melanoma have yielded conflicting results. On the one hand, melanoma cell lines in culture as well as cell lines transplanted into experimental animals were sensitive to PDT. On the other hand, spontaneous melanomas of human patients responded poorly to most PDT regimens tested so far. Here, we analyzed effects of 5-aminolaevulinic acid (5-ALA)-based PDT on melanoma cell lines and on experimental melanomas. To mimic the clinical situation as closely as possible, metallothionein-I/ret (MT-ret) mice, a transgenic model of skin melanoma development, were used. Optimal doses of 5-ALA as well as energy doses and power densities were determined in vitro using a cell line (Mel25) established by us from a melanoma of an MT-ret transgenic mouse as well as commercially available human and mouse melanoma cell lines. Treatment with light irradiation alone had no effect. In combination with 5-ALA, however, this illumination readily induced the death of all mouse and human melanoma cell lines examined. Still, 5-ALA PDT caused only minor focal regressive changes including haemorrhages and fibrosis of MT-ret melanomas in vivo and did not significantly delay tumour growth. These results show that, even though MT-ret melanoma cells are vulnerable to 5-ALA PDT in vitro, malignant MT-ret melanomas in vivo are quite resistant to this type of therapy at doses which are highly effective in vitro.     

光动力疗法治疗尖锐湿疣照光方法与疼痛的关系分析

目的观察5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-ALA-PDT)治疗尖锐湿疣(CA)过程中2种照光方法与疼痛的关系,在保持最佳疗效前提下以探讨最适照光方法。方法将接受光动力治疗的CA患者随机分为A、B 2组,用多功能电离子手术治疗仪去除显性疣体后进行5-ALA-PDT治疗,照光功率分别为80 mW/cm^2×30 min与100 mW/cm^2×24min,每周1次,共3次。照光过程中采用视觉模拟评分法对患者疼痛进行评分并进行比较,观察治疗结束后1个月、6个月的复发率。结果A组第1个月、6个月的复发率分别为7.69%和10.26%,与B组(2.70%和8.11%)相近(均P>0.05)。照光1 min时,A组与B组疼痛评分差异无统计学意义,照光5~10 min疼痛评分比较,A组均显著低于B组差异有统计学意义(均P<0.05)。结论5-ALA-PDT治疗CA照光功率80 mW/cm^2×30 min的疗效与100 mW/cm^2×24min相当,但疼痛不良反应相对较轻。因此,5-ALA-PDT治疗CA照光功率为80 mW/cm^2时长30 min,既能达到良好疗效又能将疼痛的不良反应降到最低,是治疗CA的适宜照光方法。     

KAAD-环巴胺抑制Hedgehog信号通路对人鳞状细胞癌细胞株A431生长及凋亡的影响

目的 探讨Hedgehog信号转导通路的特异性抑制剂KAAD-环巴胺对人鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma, SCC）细胞增殖及凋亡的影响。方法 采用 MTT 法测定KAAD-环巴胺对A431细胞的增殖抑制情况，光镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测KAAD-环巴胺对A431细胞周期的影响，用 Annexin-V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率的变化。结果 MTT 结果显示0.5，1，2，5 μmol/L KAAD-环巴胺对A431细胞的生长抑制率依次为（7.0 ± 2.3）%，（20.6 ± 2.8）%，（48.3 ± 3.4）%和（61.6 ± 3.3）%，F = 49.92，P ＜ 0.01；5 μmol/L KAAD-环巴胺作用1 ～ 5 d 的生长抑制率分别为（18.3 ± 2.6）%，（56.1 ± 3.7）%，（65.4 ± 2.8）%，（71.2 ± 1.9）%，（75.9 ± 3.0）%，F = 16.32，P ＜ 0.01，表明KAAD-环巴胺可显著抑制A431细胞增殖，且呈浓度和时间依赖性：r浓度 = 0.91，P ＜ 0.01；r时间 = 0.86，P ＜ 0.05。光镜下细胞形态明显受损。细胞周期结果显示KAAD-环巴胺作用组G1期细胞数为（76.2 ± 1.8）%，较空白对照（51.8 ± 2.9）%明显增加，F = 26.34，P ＜ 0.01，G1期前亚二倍体峰由空白对照组（1.7 ± 0.3）%增至（8.7 ± 0.2）%，F = 6.32，P ＜ 0.05，表明 KAAD-环巴胺可以将A431阻滞于G1期。凋亡检测结果显示KAAD-环巴胺可以明显诱导A431细胞发生凋亡，凋亡率由空白对照（18.5 ± 3.1）% 增至（46.2 ± 2.8）%，F = 32.01，P ＜ 0.01。阴性对照组实验结果与空白对照组比较差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。结论 Hedgehog信号通路的特异性抑制剂KAAD-环巴胺能够显著抑制A431细胞增殖并诱导其凋亡。     

The effect of L-cysteine and N-acetylcysteine on porphyrin/heme biosynthetic pathway in cells treated with 5-aminolevulinic acid and exposed to radiation

The effects of L-cysteine (LC) and N-acetylcysteine (NAC) on porphyrin accumulation in a human dermal microvascular endothelial cell line (HMEC-1) and a human epidermoid carcinoma cell line (A431) loaded with 5-aminolevulinic acid (ALA) and exposed to ultraviolet A (UVA) and blue light radiation were determined. Porphyrin accumulation was decreased in the presence of 0.1–7.5 mM LC (24.8%-31.4% suppression in HMEC-1 cell; 35.8%-48.9% suppression in A431 cells), and in the presence of 0.1–10.0 mM NAC (30.9%-58.0% suppression in HMEC-1 cells; 8.5%-45.3% in A431 cells). The suppression occurred in a LC or NAC dose-dependent fashion. The above was associated with partial reversal of suppression of ferrochelatase (FeC) activity in HMEC-1 cells and in A431 cells. As compared to FeC activity in cells treated with ALA and irradiation, enzyme activity was higher (by 31.9%-62.1%) in the presence of LC (1.0 mM or 5.0 mM) and in the presence of NAC (1.0 mM or 5.0 mM). These data indicate that LC and NAC have protective effects on porphyrin- and irradiation-induced diminution of FeC activity in HMEC-1 cells and A431 cells in vitro.