复心汤对慢性心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨复心汤对慢性心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法选取80只Wister SPF大鼠(雄性),建立心衰大鼠模型,分为空白对照组、模型组、卡托普利组与复心汤组。采用RT-PCR法检测各组大鼠心肌内B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)与天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8)的表达量。结果模型组Caspase-8与Bcl-2mRNA表达量明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05);卡托普利组、复心汤组Caspase-8mRNA表达量均明显低于模型组,Bcl-2mRNA表达量均明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05);卡托普利组与高剂量复心汤组Caspase-8及Bcl-2mRNA表达量相近,差异无统计学意义(P0.05)。结论复心汤可有效增加心肌细胞内Bcl-2mRNA表达量、降低Caspase-8mRNA表达量,抑制细胞凋亡,改善心肌功能,具有抗心衰价值。     

参芪利心汤对心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及机制研究

目的研究参芪利心汤对阿霉素诱导心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、依那普利(2.1 mg/kg)组以及参芪利心汤低、中、高剂量(9.975、19.950、39.900 g/kg)组,除对照组外,其余大鼠ip阿霉素诱导心力衰竭模型;各给药组ig相应药物,对照组和模型组ig等体积蒸馏水,1次/d,连续4周。给药结束后,采用心脏彩色多普勒超声仪测定各组大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)以及每搏心输出量(stroke volume,SV);采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠心肌组织病理变化;采用透射电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构;采用ELISA法检测各组大鼠血浆N端B型利钠肽(N-terminal B-type natriuretic peptide,NT-pro BNP)及心肌组织三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量;采用流式细胞仪检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;采用qRT-PCR法检测各组大鼠心肌组织B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)m RNA表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3和p53蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS和SV显著降低(P0.01),血浆NT-pro BNP含量显著升高(P0.01),心肌组织ATP含量显著降低(P0.01),心肌细胞凋亡率显著升高(P0.01);心肌组织Bcl-2和PGC-1αmRNA表达水平显著降低(P0.01),Bax和Caspase-3 mRNA表达水平显著升高(P0.01);心肌组织Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.01),Bax、Caspase-3和p53蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,参芪利心汤中、高剂量组和依那普利组大鼠LVEF、LVFS和SV均显著升高(P0.01);血浆NT-pro BNP含量显著降低(P0.01),心肌组织ATP含量显著升高(P0.01),心肌细胞凋亡率显著降低(P0.01);心肌组织Bcl-2和PGC-1αmRNA表达水平均显著升高(P0.01),Bax和Caspase-3 mRNA表达水平均显著降低(P0.01);心肌组织Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.01),Bax、Caspase-3和p53蛋白表达水平均显著降低(P0.05、0.01)。结论参芪利心汤能够改善心力衰竭大鼠的心肌结构、能量代谢及心功能,并减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调控PGC-1α和线粒体凋亡通路相关蛋白表达有关。     

益精杞菊地黄颗粒对慢性高眼压大鼠视网膜RGCs凋亡相关因子表达的影响

目的观察益精杞菊地黄颗粒对慢性高眼压大鼠视网膜RGCs凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法选用健康雄性的SD大鼠60只,随机平均分为5组,空白组、模型组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组。除空白组,其余4组均采用烧灼巩膜上静脉法,建立慢性高眼压模型。干预1个月后,分别采用免疫组化染色法检测视网膜RGCs层Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、Caspase-3 mRNA的相对表达量。结果 (1)免疫组化染色法检测,中药治疗组、模型组大鼠RGCs中Bcl-2、Bax、Caspase-3较正常组均有统计学差异(P0.01);与模型组相比,中剂量中药组的Bcl-2表达显著增多(P0.01),Bax、Caspase-3的表达显著减少(P0.01);Bcl-2、Bax、Caspase-3表达,高、低剂量组与模型组比较,无统计学意义(P0.05)。(2)RT-PCR检测显示,中、低剂量中药组的Bcl-2 mRNA相对表达量较模型组增多(P0.01),高剂量中药组较模型组,无统计学意义(P0.05);中、低剂量中药组Bax mRNA相对表达量均较模型组减少(P0.05),而高剂量组较模型组无统计学意义(P0.05);中剂量中药组的Caspase-3 mRNA相对表达量较模型组减少(P0.01),而高、低剂量组与模型组比较无统计学意义(P0.05)。结论益精杞菊地黄颗粒剂对慢性高眼压大鼠RGCs凋亡有保护作用,其机理可能与Bcl-2蛋白的表达上调,Bax和Caspase-3蛋白的表达下调有关,中剂量中药组的作用比较明显。     

康心饮对缺血性心肌病大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响

目的观察康心饮对缺血性心肌病(ICM)大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响,探讨其对ICM的作用及可能机制。方法 66只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、卡托普利组及康心饮低、中、高剂量组,每组11只。采用左前降支结扎法制备缺血性心肌病模型。模型组予生理盐水10 m L/(kg·d)早晚灌胃,卡托普利组予卡托普利2.86 mg/(kg·d)早晚灌胃,康心饮低、中、高组分别予康心饮9.2、18.4、36.8 g/(kg·d)早晚灌胃,给药2周。TUNEL法检测心肌凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K、Akt、FoxO1蛋白表达,RT-PCR检测PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌凋亡增多(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达量升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达量下降(P0.01),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白和PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均下降(P0.05);与模型组比较,康心饮组低、中、高剂量和卡托普利组心肌凋亡均明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(均P0.05),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白及PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均升高(P0.01),且康心饮高剂量组和卡托普利组优于康心饮低、中剂量组(P0.05)。结论康心饮可能通过激活PI3K/Akt/FoxO1信号通路,抑制ICM心肌细胞凋亡。     

参芪补心丸对心肌缺血模型大鼠ICAM-1、VCAM-1mRNA水平的影响

目的:通过观察参芪补心丸对心肌缺血模型大鼠ICAM-1,VCAM-1mRNA表达的影响,探讨参芪补心丸治疗冠心病的作用机制和疗效。方法:健康Wistar大鼠60只,雌雄各半。将其随机分为空白对照组、模型对照组、心通口服液组、参芪补心丸高、中、低剂量组,每组10只。利用原位杂交技术观察参芪补心丸对冠心病模型大鼠ICAM-1,VCAM-1mRNA表达的影响。结果:与空白对照组比较,除参芪补心丸高剂量组其余各组大鼠心肌组织ICAM-1和VCAM-1mRNA含量增高,有极显著差异(P0.01);与模型对照组比较,参芪补心丸高、中剂量组均可降低大鼠心肌组织ICAM-1和VCAM-1mRNA含量,有极显著差异(P0.01),心通口服液组有显著差异(P0.05);与心通口服液组比较,参芪补心丸高剂量组ICAM-1的含量降低,有极显著差异(P0.01),中剂量组ICAM-1含量降低,有显著差异(P0.05);与心通口服液组比较,参芪补心丸高、中剂量组VCAM-1mRNA的含量降低,有极显著差异(P0.01);与参芪补心丸中、低剂量组比较,参芪补心丸高剂量组ICAM-1的含量降低,有极显著差异(P0.01)。结论:参芪补心丸通过降低心肌缺血模型大鼠ICAM-1,VCAM-1mRNA的表达,与对照组相比能够明显减轻血管内皮炎性反应,抗血管内皮损伤。     

育肾助孕方对卵巢储备功能降低大鼠卵巢Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的观察育肾助孕方对卵巢储备功能降低模型大鼠卵巢Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。方法 48只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、补佳乐组及育肾助孕方低、中、高剂量组,每组8只。除对照组外,其余各组均采用雷公藤多苷药液灌胃建立卵巢储备功能降低大鼠模型。各组予相应药物干预2周。采用免疫组化及Western blot检测卵巢组织细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况,采用Real-time PCR检测卵巢细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达情况。结果与对照组比较,模型组Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05)。与模型组比较,补佳乐组和育肾助孕方各剂量组Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05);补佳乐组和育肾助孕方高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著高于模型组(P0.05)。与育肾助孕方低剂量组比较,育肾助孕方高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著升高,育肾助孕方高中剂量组Bax蛋白表达明显降低(P0.05)。结论育肾助孕方可通过上调卵巢组织细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达,促进卵巢颗粒细胞增殖,抑制其过度凋亡,从而改善卵巢储备功能。     

参芪扶正注射液通过调控miR-29b/Bcl-2通路逆转胰腺癌多药耐药研究

目的研究参芪扶正注射液对微小RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)和B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)表达的影响,探究参芪扶正注射液逆转胰腺癌多药耐药的可能机制。方法将miR-29b模拟物(miR-29b mimics)和miR-29b抑制剂(miR-29binhibitors)转染至人胰腺癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)耐药细胞株Patu8988/5-Fu,采用qRT-PCR检测参芪扶正注射液(5、10、20μL/mL)对Patu8988/5-Fu细胞miR-29bm RNA表达的影响;采用MTT法检测miR-29bmimics和miR-29binhibitors对Patu8988细胞活力的影响;采用Westernblotting法检测miR-29bmimics和miR-29b inhibitors对Patu8988/5-Fu细胞Bcl-2蛋白表达的影响。结果与对照组比较,参芪扶正注射液组Patu8988/5-Fu细胞中miR-29b m RNA表达水平显著升高(P0.05、0.01、0.001);miR-29b mimics组Patu8988/5-Fu细胞miR-29b mRNA表达水平显著升高(P0.001),miR-29b inhibitors组miR-29b m RNA表达水平显著降低(P0.01);miR-29b mimics组Patu8988细胞活力显著降低(P0.05),miR-29b inhibitors组Patu8988细胞活力显著升高(P0.01);miR-29b mimics组Patu8988/5-Fu细胞Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),miR-29b mimics+参芪扶正注射液组Bcl-2蛋白表达水平进一步降低(P0.05);miR-29b inhibitors组Patu8988/5-Fu细胞Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),miR-29b mimics+参芪扶正注射液组Bcl-2蛋白水平无明显变化。结论 miR-29b通过下调Bcl-2蛋白表达抑制Patu8988细胞增殖,参芪扶正注射液可能通过调控miR-29b/Bcl-2通路从而逆转肿瘤多药耐药。     

参芪通脉颗粒对慢性充血性心力衰竭模型大鼠血浆BNP、ET水平影响

目的:观察参芪通脉颗粒对慢性充血性心力衰竭模型大鼠血浆脑钠肽(BNP)、内皮素(ET)以及心肌细胞结构的影响。方法:用腹腔注射阿霉素(ADR)法复制慢性充血性心力衰竭(CHF)大鼠模型,采用组织切片、HE染色、光镜观察心肌组织病理变化;采用酶联免疫法测定血浆BNP和ET含量。结果:参芪通脉颗粒组心肌细胞水肿、肥厚较模型组明显减轻,心肌细胞横(纵)纹存在;与模型组比较,卡托普利组、参芪通脉颗粒小剂量组、参芪通脉颗粒大剂量组血浆BNP和ET水平明显降低(P0.01或P0.05);与卡托普利组比较,参芪通脉颗粒大剂量组血浆BNP和ET水平无显著性差异(P0.05)。结论:参芪通脉颗粒能抑制CHF大鼠的神经内分泌激活,降低CHF大鼠血浆BNP和ET水平,减少心肌纤维化,修复已损伤的心肌细胞,从而改善心功能,保护衰竭的心脏。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

燧心胶囊对慢性心力衰竭大鼠凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的:以慢性心力衰竭大鼠为研究对象,测定心肌组织Bcl-2、Bax mRNA水平及其蛋白表达,以探究燧心胶囊干预心室重塑的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型对照组、地高辛组、卡托普利组、燧心胶囊低剂量组、燧心胶囊高剂量组。采用腹主动脉缩窄术建立大鼠慢性心力衰竭模型,连续给药12周。Real time PCR检测心肌细胞凋亡基因Bcl-2 mRNA、Bax mRNA水平;免疫组化法观察大鼠心肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与模型对照组比较,卡托普利组、燧心胶囊低、高剂量组大鼠Bcl-2 mRNA水平及其蛋白表达增高,Bax mRNA水平及其蛋白表达降低,Bcl-2/Bax则显著性增高,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。其中燧心胶囊高剂量组对Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白的调控程度较低剂量组显著(P0.05)。结论:高剂量燧心胶囊能够调控凋亡基因Bcl-2和Bax mRNA水平及其蛋白表达,抑制心肌细胞程序性死亡,延缓心力衰竭的进程。     

真武汤对cTnT~(R141W)转基因扩张型心肌病小鼠心肌组织Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响

目的观察真武汤对扩张型心肌病小鼠心肌组织Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响,并探讨其作用机制。方法 cTnT~(R141W)转基因扩张型心肌病小鼠60只,随机分为真武汤药物治疗组(高剂量组、中剂量组),阳性药物对照组(卡托普利组),模型组,每组15只;野生型小鼠15只,为空白对照组。分别给予真武汤、卡托普利、生理盐水,灌胃1个月。采用实时荧光定量PCR法检测各组心肌组织Bax和Bcl-2 mRNA的表达水平。结果与空白组比较,各组Bcl-2表达均显著下降,模型组Bax表达明显升高(P0.01或P0.05)。与模型组比较,真武汤药物治疗组中,高剂量组Bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低(P0.05);卡托普利组与模型组相比,Bcl-2表达明显升高(P0.01),Bax表达有降低趋势(P0.05)。真武汤高剂量组与卡托普利组相比,Bcl-2和Bax表达无明显差异(P0.05)。结论真武汤能够上调扩张型心肌病小鼠Bcl-2表达,下调Bax表达。说明真武汤能够干预凋亡调控因子,抑制心肌细胞凋亡,从而起到治疗扩张型心肌病的作用,这可能是真武汤治疗扩张型心肌病的作用机制之一。     

复心合剂对心衰大鼠信号通路Raf-MEK-ERK的影响

目的:初步探索复心合剂对信号通路Raf-MEK-ERK的影响。方法:75只Wistar雄性大鼠,随机分为5组,对照组、卡托普利组、复心合剂低剂量组、复心合剂高剂量组均为15只。实验过程中阿霉素干预4周后测定大鼠心功能;6周后应用Western blot法检测大鼠心肌组织中Raf、MEK、ERK蛋白表达情况。结果:(1)与正常对照组比较,模型组大鼠BNP值显著升高(P0.01),心衰模型成功建立。(2)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织Raf水平显著升高(P0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织Raf水平显著降低(P0.01),与卡托普利组相比,复心汤高剂量组大鼠心肌组织Raf无统计学意义(P0.05)。(3)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织MEK水平显著升高(P0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织MEK水平显著降低(P0.01)。(4)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌ERK蛋白表达明显升高(P0.01),卡托普利组及复心合剂高剂量组ERK蛋白表达无显著差异性(P0.05),与模型组相比,复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织ERK水平显著降低(P0.01)。结论:复心合剂对心衰大鼠信号通路Raf-MEK-ERK的蛋白激活具有一定的抑制作用,延缓心衰进程。     

丹参多酚酸盐对心力衰竭大鼠心肌肌球蛋白重链的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对心力衰竭(心衰)大鼠心肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)的影响。方法采用随机数字表法将60只雄性SD大鼠分成6组:正常对照组、模型组、卡托普利组、丹参多酚酸盐低剂量组、丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利和丹参多酚酸盐高剂量联合组(下称中西药联合组),每组10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用阿霉素腹腔注射法制备心衰模型,正常对照组大鼠给予等体积生理盐水腹腔注射,每周1次,共6周。从注射阿霉素第5周开始,各用药组给药干预,卡托普利组予100 mg/(kg·d)的卡托普利水溶液灌胃;丹参多酚酸盐低、高剂量组分别以24.219 mg/(kg·d)及48.438 mg/(kg·d)的丹参多酚酸盐溶于2 m L 5%葡萄糖溶液中腹腔注射。中西药联合组予高剂量的丹参多酚酸盐腹腔注射,同时予卡托普利水溶液灌胃,模型组予腹腔注射生理盐水2 m L,每日1次,均连续干预8周。采用生物信号采集处理系统检测心功能、心肌肥厚指数;荧光定量PCR法检测心肌α-MHC及β-MHC mRNA表达;Western blot法检测心肌蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的表达。结果与正常对照组比较,模型组心脏质量指数(heart mass index,HMI)及左室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)明显增高(P0.01);与模型组比较,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组HMI及LVMI均下降(P0.05,P0.01),中西药联合组较卡托普利组下降更明显(P0.05)。与正常对照组比较,模型组心肌组织α-MHC mRNA水平降低,β-MHC mRNA水平及心肌组织PKC表达升高(P0.01);与模型组比较,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组及中西药联合组心肌组织α-MHC mRNA水平升高,β-MHC mRNA水平及心肌组织PKC表达水平均降低(P0.05,P0.01),且中西药联合组与卡托普利组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论丹参多酚酸盐能上调α-MHC并下调β-MHC mRNA水平,其机制可能降低PKC的表达有关。     

丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3及其抑制因子-1表达的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)及其抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠完全随机分成模型组,丹参多酚酸盐低剂量组、高剂量组,卡托普利组,卡托普利和丹参多酚酸盐高剂量联合组(简称中西药联合组),正常对照组。除正常对照组,其余大鼠运用阿霉素腹腔注射制造心衰模型,正常对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,每周1次,共6周。在开始造模的同时,各组开始相关干预。8周后,检测心功能,行心肌组织天狼猩红染色,检测心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)、心肌血管周围胶原面积与管腔面积的比例(perivasular circumferentiall area,PVCA)。荧光PCR检测心肌MMP-3、TIMP-1的mRNA水平,Western blot检测心肌MMP-3、TIMP-1的表达情况。结果与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均有不同程度的降低心肌CVF、PVCA(P0.05,P0.01,P0.01),中西药联合组较卡托普利组更明显(P0.05);丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组心肌组织中MMP-3的mRNA水平及蛋白表达较模型组均降低(P0.05,P0.01,P0.01),且中西药联合组低于卡托普利组(P0.05);与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均能上调心肌组织TIMP-1的mRNA水平及蛋白表达(P0.05,P0.01,P0.01),且中西药联合组高于卡托普利组(P0.05)。结论丹参多酚酸盐能降低心肌间质胶原,其机制可能与下调MMP-3及上调TIMP-1的表达有关。     

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的:探讨拳参正丁醇提取物-413(Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)细胞凋亡的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组(0.1 mg·kg~(-1)),PBNA-413中剂量组(0.3 mg·kg~(-1)),PBNA-413高剂量组(1.0 mg·kg~(-1))。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果:大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高(P0.05,P0.01),PBNA-413处理后ST段及T波降低(P0.01),以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P0.01)。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论:PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。     

气血宁对心肌梗死大鼠心脏保护作用机制研究

目的探讨中药气血宁对心肌梗死大鼠心脏结构、功能及ghrelin表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、倍他乐克组、气血宁小剂量组和气血宁大剂量组。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支的方法制作心肌梗死大鼠模型,假手术组平行手术操作但不结扎前降支。术后灌胃给药4周。采用超声心动图检测心脏结构、功能,HE染色观察心肌组织病理,实时荧光定量PCR检测ghrelin及其受体GHSR mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组、倍他乐克组、气血宁小剂量组和气血宁大剂量组收缩末期的室间隔厚度均显著变薄(P0.05,P0.01),左室内径显著增大(P0.01),左室射血分数和左室短轴缩短分数明显降低(P0.01);模型组舒张末期的左室内径显著增大(P0.05),心肌组织ghrelin及其受体GHSR mRNA的表达显著增高(P0.01)。与模型组比较,气血宁大剂量组左室射血分数和左室短轴缩短分数明显增大(P0.05);倍他乐克组、气血宁小剂量组和气血宁大剂量组的心肌组织病理损伤有所改善,ghrelin及其受体GHSR mRNA的表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论中药气血宁能部分改善心肌梗死大鼠心脏结构、功能,调节ghrelin及其受体GHSR mRNA的表达。     

参芪益心方抑制阿霉素诱导大鼠H9c2细胞凋亡的机制研究

目的?基于心肌细胞内质网应激观察参芪益心方对大鼠H9c2心肌细胞内Ca2+及半胱氨酸天冬氨酸酶（Caspase）-3、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白-78（GRP78）、增强型蛋白同源蛋白（CHOP）、肌质网钙离子ATP酶（SERCa2a）蛋白和mRNA表达的影响。方法?SD大鼠制备参芪益心方含药血清。体外培养H9c2心肌细胞，用阿霉素诱导凋亡建立模型，将细胞分为模型组（8%空白血清）、高剂量组（8%含药血清）、中剂量组（4%含药血清+4%空白血清）、低剂量组（2%含药血清+6%空白血清）和卡托普利（1×10-5 mol/L）组，另设空白组（8%空白血清）。Real-time PCR及Western Blot分别检测Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP、SERCa2a mRNA及蛋白的表达，Fluo-3AM流式细胞仪检测H9c2细胞内Ca2+荧光强度。结果?与空白组比较，模型组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的蛋白、mRNA表达及Ca2+荧光强度增加，SERCa2a 蛋白及mRNA表达下降（均P<0.01）。与模型组比较，各干预组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低，Ca2+荧光强度降低，SERCa2a蛋白及mRNA表达增加（P<0.01）。与卡托普利组比较，中药高剂量组SERCa2a蛋白及mRNA表达升高，Ca2+荧光强度升高（P<0.01）。结论?参芪益心方可通过降低Ca2+浓度，下调Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的表达，上调SERCa2a的表达，减轻内质网的过度应激，抑制心肌细胞凋亡。     

益气活血药对心肌梗死大鼠心脏蛋白激酶C表达的影响

目的探讨益气活血中药(生脉注射液联合血塞通注射液)对心肌梗死大鼠心脏蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为模型组、假手术组、卡托普利组和益气活血组。结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型(假手术组只穿线,不结扎)。模型组和假手术组给予生理盐水;卡托普利组给予卡托普利片4.39 mg/(kg·d)溶解灌胃;益气活血组给予生脉注射液3.51 m L/(kg·d)联合血塞通注射液17.54 mg/(kg·d)腹腔注射。治疗4周后取材,称重计算心脏质量指数;RT-PCR法检测左心室心肌组织PKC mRNA的表达;Western blot法检测PKC蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组心脏质量指数显著增加(P0.01),PKC的mRNA和蛋白表达亦显著增加(P0.05或P0.01);与模型组比较,益气活血组和卡托普利组心脏质量指数显著降低(P0.05),同时PKC的mRNA和蛋白表达也显著降低(P0.05或P0.01)。结论益气活血药(生脉注射液联合血塞通注射液)可以改善心脏重构,其机制与抑制心肌梗死后心肌组织PKC的高表达有关。     

安寐丹通过线粒体介导的海马神经细胞凋亡改善睡眠剥夺模型大鼠的学习记忆水平

目的:探讨安寐丹通过线粒体介导海马神经细胞凋亡对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响。方法:48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、安寐丹低、中、高剂量(4.86,9.72,19.44 g·kg~(-1)·d~(-1))组和艾司唑仑组(0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组8只。通过自制睡眠剥夺箱进行持续性睡眠剥夺14 d。以Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的含量。透射电镜观察海马区神经元线粒体形态结构,免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测海马区细胞色素C(Cyt-C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白及Bcl-2,Bax mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组上平台潜伏期、游泳总路程延长,初次到达平台时间延长,跨越平台次数减少,目标象限时间显著降低(P0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,Bax蛋白及mRNA水平显著升高(P0.01),线粒体结构破坏,嵴断裂,肿胀变形;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,安寐丹低、中、高剂量组明显改善SD大鼠空间探索和定位航行水平(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平升高,Bax蛋白及mRNA水平明显降低(P0.05,P0.01);线粒体损伤改善,水肿减轻;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著下降(P0.01)。结论:安寐丹能够改善睡眠剥夺大鼠学习记忆水平,其作用与线粒体介导的海马神经细胞凋亡,降低Cyt-C,Caspase-3等蛋白表达相关。     

新加生脉饮对阿霉素所致心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的通过观察新加生脉饮对阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡的逆转和防治作用,为阿霉素心肌损伤的临床治疗奠定实验基础。方法利用阿霉素的心脏毒性诱导心肌细胞凋亡大鼠模型。将40只雄性SD大鼠随机分成4组:对照组、阿霉素模型组、卡托普利(10 mg/kg)组、新加生脉饮(3.75 g/kg)组,ig给予相应药物,每日1次,共给药6周。实验过程中观察大鼠的精神、活动、进食、毛色等情况,治疗6周后测定心功能、大鼠左室肥厚指标,HE染色观察心肌病理变化,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测心肌Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠心功能显著降低。与模型组比较,各药物治疗后可不同程度改善大鼠心功能情况,其中新加生脉饮组疗效显著。与对照组比较,模型组大鼠心体比、左室肥厚指数、心肌细胞凋亡指数均明显升高。与模型组比较,卡托普利及新加生脉饮可不同程度地改善大鼠心肌肥厚及心肌细胞凋亡情况。与对照组比较,模型组大鼠心肌Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高;与模型组比较,卡托普利及新加生脉饮可不同程度地增加大鼠心肌Bcl-2蛋白表达水平,减低Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结论新加生脉饮能改善心肌细胞凋亡大鼠心功能情况,通过降低心肌细胞中Caspase-3蛋白的表达或抑制其活性,增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax,从而抑制心肌细胞凋亡。