HLA半相合外周血活化干细胞治疗晚期实体瘤的疗效

目的：观察HLA半相合外周血活化干细胞（HLA haploidentical peripheral blood stem cells,haploPBSCs）对晚期难治性实体瘤患者的临床抗肿瘤疗效以及不良反应。方法：入组42例全部为2004年10月至2007年10月天津医科大学肿瘤医院生物治疗科收治的晚期难治性恶性肿瘤患者（所有入组患者均知情同意,试验工作经医院伦理委员会批准）,其中卵巢癌12例,肾癌9例,肺癌8例,乳腺癌8例,结肠癌2例,胃癌2例,恶性黑素瘤1例。供者为患者健康直系亲属,进行haploPBSCs的动员、采集和体外rhIL2活化。经HLA半相合外周血干细胞治疗后,分别通过CT/PETCT检查、RESIST标准、KPS评分、临床症状缓解率等指标来评估HLA半相合外周血干细胞的临床疗效及不良反应情况。结果：42例患者接受1个疗程治疗后,全体患者中位无进展生存期（PFS）为6个月,临床获益率（CR+PR+SD）为73.8%;患者生活质量总获益率为76.2%,生活质量评分（KPS）较治疗前平均提高20分（0～30分）。其中,KIR不相合方向为GVH组的临床获益率、无进展生存期、生活质量总获益率均显著优于HVG(或相合)组\[94.1% vs 60.0%,（13.4±1.3）vs（8.0±0.9）个月,89.5% vs 65.2%,均P<005\];供受者关系为母子/女组的治疗有效率、患者生存期和生活质量均显著优于父子/女组（均P<0.05）;肾癌和卵巢癌的临床获益率分别为90.0%和81.8%,相对于其他类肿瘤类型高,在治疗反应性和敏感性上可能占优势。结论：HLA半相合外周血活化干细胞治疗后,机体产生非特异性的抗肿瘤作用,对改善患者症状和提高生活质量有显著效果。     

大剂量IL-2活化的HLA 半相合异基因造血干细胞治疗10例晚期难治性肾癌的疗效观察

目的:传统的免疫治疗对晚期难治性肾癌的疗效非常有限,因为肿瘤自身产生了免疫耐受,本研究的目的是探讨大剂量IL-2活化的HLA半相合异基因造血干细胞治疗晚期难治性肾癌的临床疗效.方法:10例晚期肾癌患者以及作为供者的其HLA半相合的亲属入组.所有患者均接受1个疗程的haplo-PBSCs治疗,评估临床疗效和免疫学反应.结...     

鼻咽癌患者外周血单个核细胞中P-gp和LRP的表达及其临床意义

目的通过检测鼻咽癌患者外周血单个核细胞中P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)的表达,探讨两者在鼻咽癌多药耐药中的作用及意义.方法采用流式细胞术对54例鼻咽癌患者化疗前后外周血单个核细胞中P-gp、LRP进行检测,同期选择鼻咽部非恶性肿瘤患者10例,正常健康人10例为对照组.结果 P-gp在正常人、非恶性肿瘤及鼻咽癌初治组中的表达差异无显著性,但在复发组的表达明显高于其他组,差异有显著性.LRP在初治及复发组中的表达明显高于对照组,且化疗前后差异有显著性.P-gp和LRP的表达与年龄、性别、临床分期、病理类型、淋巴结转移无显著相关.P-gp、LRP的表达与化疗疗效密切相关.结论 P-gp、LRP的表达在鼻咽癌多药耐药的产生中具有重要意义,对临床制定化疗方案具有潜在的指导意义.     

原发性肝细胞癌患者外周血单个核细胞中HBV-DNA含量检测的意义

目的:了解原发性肝细胞癌(PHCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的整合情况,以揭示其在HCC发病机制中的作用。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测32例HCC患者和45例慢性乙型肝炎(CHB)患者血清和PBMC中HBV-DNA含量,引物和探针设计选择HBVC区的DNA序列。结果:HCC组和CHB组患者血清中HBV-DNA阳性率分别为62.5%(20/32)和46.7%(21/45)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为105.50±1.52和105.05±1.45copies/ml,PBMC中HBV-DNA阳性率分别为87.5%(28/32)和51.1%(23/45)(P<0.01)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为104.51±1.32和104.05±1.05copies/ml;HCC组血清和PBMC中HBV-DNA阳性率相比较有统计学差异(62.5%比87.5%,P<0.05);HCC组和CHB组血清和PBMC中HBV-DNA同时阳性时,其HBV-DNA含量均呈正相关(P<0.01)。结论:HCC患者PBMC中存在HBV-DNA整合的现象;作为临床预测HCC发生的风险指标,PBMC中HBV-DNA含量的检测与穿刺肝组织相比具有轻创或无创的优点。     

输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞治疗晚期肾细胞癌

背景与目的：肾细胞癌是一种对免疫治疗敏感的肿瘤,包括了非清髓性异基因移植。然而由于严重的毒性,许多转移性肾细胞癌并不适合非清髓性异基因移植。这促使了其他一些新的异基因免疫治疗的发展。本研究评价输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞治疗晚期肾细胞癌的有效性和安全性。方法：选择经病理证实的晚期肾细胞癌患者,予输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞。每2个月输注1次,治疗有效或稳定者继续输注,直至疾病进展或出现不能耐受的不良反应或患者（或供者）拒绝继续使用。结果：8例患者进入本研究。6例患者每次输注后每日口服沙利度胺100mg至300mg两个月,1例达到持久的完全缓解（CR）,5例稳定（SD）,2例进展（PD）。8例患者的中位疾病无进展时间为292d,中位生存时间为879d以上。毒性反应轻微。结论：输注经照射的HLA部分相合的异基因单个核细胞治疗晚期肾细胞癌有了一定疗效,值得进一步研究。     

白细胞介素2激活外周血、脐带血和骨髓单个核细胞培养上清对人白血病细胞株

目的 探讨用白细胞介素2（IL-2）激活的外周血（APB）、脐带血（ACB）和骨髓（ABM）单个核细胞的培养上清对肿瘤细胞的作用,及其作用的可能机制。方法 应用MTT法和集落培养法在体外检测了APB、ACB和ABM培养上清对HL-60和K562细胞的作用,用ELISA法检测了各种上清中TNF-a和IFN-r的产生情况。结果 APB、ACB和ABM培养上清都可产生TNF-a和IEN-r,对HL60和K562细胞有一定抑制作用,以APB培养上清最强。结论 应用IL-2净化自体干细胞移植物中混杂的肿瘤细胞时,培养上清中的细胞因子或其它成分也可以直接抑制肿瘤细胞。     

癌症患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶的基因表达及其临床意义

 端粒酶逆转移酶（hTERT）是端粒酶活性的限制性组分，它能以自身RNA部分为模板，把端粒DNA的重复序列加到染色体末端，从而维持端粒长度和染色体功能的稳定。hTERT的高表达已成为癌症发生发展的一个关键因素。本研究采用实时荧光定量PCR（RQPCR）方法对57例癌症患者及21例正常人进行hTERT的定量检测，旨在探讨癌症患者与正常人之间和不同癌症之间外周血单个核细胞hTERT基因表达的差异及其临床意义。     

外周血单个核细胞甲胎蛋白mRNA表达与肝癌的研究

目的　应用ＲＴ－ＰＣＲ技术研究原发性肝癌患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍ ＲＮＡ 表达与肝癌转移的关系。方法　原发性肝癌４８ 例。慢性肝病患者２１ 例。正常对照２０ 例。采外周血,肝素抗凝,分离单个核细胞及分离总ＲＮＡ。逆转录酶合成ｃＤＮＡ。设计扩增ＡＦＰ基因的引物,进行巢式ＰＣＲ扩增。结果　正常人ＰＢＭＣ均无ＡＦＰｍ ＲＮＡ 表达。原发性肝癌患者的ＰＢＭＣＡＦＰｍ ＲＮＡ阳性率（２８／４８,５８．３３％ ）明显高于慢性肝病组（３／２１,１４．２８％ ,Ｐ＜ ０．０１）。伴远处转移的原发性肝癌患者全部为阳性（８／８）。结论　ＲＴ－ＰＣＲ检测原发性肝癌患者ＡＦＰｍ Ｒ－ＮＡ 有可能成为反映肝癌细胞血行播散的指标。     

应用晚期乳腺癌患者外周血单个核细胞体外增殖诱导新型CIK细胞的实验研究

目的 应用晚期乳腺癌患者外周血来源的单个核细胞体外培养诱导产生新型(Cytokine induced killer cells,CIK)细胞的可能性,为乳腺癌患者应用自体免疫细胞治疗提供理论基础。方法 取8例晚期乳腺癌患者外周血提取单个核细胞,经体外培养诱导增殖,并应用细胞计数法和流式细胞仪检测增殖细胞表面特异性标志CD3、CD16和CD56,应用51Cr release assay及MTT方法测定其对MCF7及BT20乳腺癌细胞株的杀伤能力。应用ELISA试验方法对诱导得到的新型CIK细胞的培养上清液进行解析。结果 经过体外18天培养,平均得到8.2×10⁸个以上纯度为95.2%~98.1%的CD16⁺、CD56⁺和CD16⁺CD56⁺阳性高纯度NK细胞的新型CIK细胞,且对乳腺癌细胞株MCF7及BT20具有明显的抑制作用。结论 成功应用晚期乳腺癌外周血单个核细胞选择性扩增诱导高纯度NK细胞的新型CIK细胞,且证明其对MCF7及BT20乳腺癌细胞具有明显抑制作用,为应用自体高纯度NK细胞的新型CIK细胞为基础的过继性免疫细胞治疗乳腺癌提供理论研究基础。     

Lysis of Fresh Human Tumor Cells by Autologous Peripheral Blood Lymphocytes and Tumor-infiltrating Lymphocytes Activated hy PSK

The protein-bound polysaccharide PSK was tested for the ability to induce in vitro autologous tumor killing (ATK) activity in human cancer patients. Peripheral blood lymphocytes (PBL) and tumor-infiltrating lymphocytes (TIL) demonstrated various levels of cytotoxicity against autologous, freshly isolated tumor cells. When PBL and TIL were cultured overnight with PSK, ATK activity was induced in previously non-reactive cases and augmented in previously reactive samples. The PSK effect was observed with PSK concentrations of 10–100 μg/ml that could be obtained in the blood of cancer patients who received standard oral administration of PSK. The manifestation of PSK-induced ATK required active cell metabolism and RNA and protein syntheses, but not DNA synthesis of lymphocytes. PSK-induced enhancement of ATK was not abrogated by monoclonal antibodies (mAb) directed against interferon (IFN)α or IFNγ-. In addition, mAb that neutralized interleukin-2 (IL-2) or mAb reactive with α-chain or β -chain of IL-2 receptors (IL-2R) had no effect on PSK-induced ATK activity. Supernatants from PSK-stimulated lymphocyte cultures did not induce ATK. Cell fractiona-tion experiments revealed that CD3^-CD16⁺ large granular lymphocytes (LGL) and/or CD3⁺CD16^- T lymphocytes were responsible for both spontaneous and PSK-induced ATK. PSK-activated LGL, but not T lymphocytes expressed lysis of fresh allogeneic tumor cells. These results indicate that PSK activates PBL and TIL to exhibit ATK independently of IL-2/IL-2R systems.     

人参皂甙与IL-2协同诱导PBMC对恶性脑胶质瘤细胞杀伤活性研究

目的：探索提高恶性脑胶质瘤治疗效果的新途径。方法：用人参皂甙（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ,ＧＳ）与白细胞介素２（ＩＬ－２）协同诱导人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）制成ＧＳ－ＬＡＫ细胞,用ＭＴＴ法测定其对恶性脑胶质瘤细胞（ＢＴ３２５）的杀伤活性,并与ＬＡＫ细胞相比较。结果：效应细胞ＧＳ－ＬＡＫ在增殖数量和杀伤恶性脑胶质瘤细胞活性等方面均优于ＬＡＫ细胞,且ＩＬ－２用量减少。结论：采用ＧＳ－ＬＡＫ细胞,可提高效应细胞的数量和活性,为恶性脑胶质瘤的免疫治疗打下了理论基础。     

肿瘤负荷对CIK/IL-2临床疗效的影响

目的:自从1993年Schmidt Wolf建立细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)制备方法以来,CIK/IL-2在净化骨髓和治疗血液病方面取得较多经验,但缺乏CIK/IL-2治疗实体瘤的临床资料.本文总结应用CIK/IL-2治疗41例实体瘤的临床经验,分析肿瘤负荷对该疗法临床疗效的影响.方法:选择无临床病灶的高危复发患者和存在明显临床病灶的晚期实体瘤患者,分离外周血单个核细胞,制备CIK.CIK联合IL-2静脉输注患者.结果:高危复发组中,姑息性治疗9例,根治性治疗14例,中位随访时间13个月.接受CIK/IL-2治疗后姑息性治疗者复发6例,根治性治疗者复发3例,复发率分别为66.7%和21.4%(P＜0.05).此外,CIK/IL-2治疗常规治疗失败的晚期实体瘤患者18例,4例稳定.结论:CIK/IL-2的临床疗效受肿瘤负荷制约,接受CIK/IL-2辅助治疗前应联合其它治疗方法尽量降低肿瘤负荷.     

APAAP法检测肿瘤患者外周血IL—2分泌细胞的初步探讨

本文报道了用APAAP法检测正常人和肿瘤患者外周血淋巴细胞(PBL)中IL-2分泌细胞的频数和形态、泌尿系肿瘤患者术前术后IL-2分泌细胞频数的变化,对鼻咽癌患者IL-2分泌细胞频数和血清中EB病毒抗体滴度做了对比性的观察。初步发现:与正常人相比,肿瘤患者PBL中IL-2分泌细胞频数明显低于正常人(P<0.01),14例泌尿系肿瘤患者肿瘤切除后一段时间后,其IL-2分泌细胞频数都较术前有不同程度升高,鼻咽癌患者血清中EB病毒抗体滴度明显升高,而IL-2分泌细胞频数却明显低于正常人。由此推测:PBL中IL-2分泌细胞的测定有可能成为动态地观察肿瘤患者免疫功能的指标之一,可以对肿瘤的发生、发展、治疗效果和愈后的判断提供一定的参考。     

细胞因子IL-2和IL-6对胰腺癌细胞表达VEGF-D的调节

目的探讨细胞因子白细胞介素2（IL-2）和白细胞介素6（IL-6）对胰腺癌细胞表达VEGF-D的调节。方法以细胞因子IL-2或IL-6分别刺激胰腺癌细胞株SW1990和BXPC-3后用逆转录 聚合酶链式反应技术（RT-PCR）分析其VEGF-D基因的表达。结果IL-2使细胞株SW1990和BXPC-3产生VEGF-D mRNA减少;IL 6使细胞株SW1990产生VEGF-D mRNA增加,但对细胞株BXPC-3产生VEGF-D mRNA无明显影响。结论IL-2抑制胰腺癌细胞VEGF-D mRNA的表达,从而抑制胰腺癌淋巴结转移;IL-6促进某些胰腺癌细胞VEGF-D mRNA的表达,但对胰腺癌细胞生物学特性的影响有待于进一步深入研究。     

Impact of IL-2 and IL-2R SNPs on Proliferation and Tumorkilling Activity of Lymphokine-Activated Killer Cells from Healthy Chinese Blood Donors

One of the goals of tumor immunotherapy is to generate immune cells with potent anti-tumor activity throughin vitro techniques using peripheral blood collected from patients. However, cancer patients generally havepoor immunological function. Thus using patient T cells, which have reduced in vitro proliferative capabilitiesand less tumor cell killing activity to generate lymphokine-activated killer (LAK) cells, fails to achieve optimalclinical efficacy. Interleukin-2 (IL-2) is a potent activating cytokine for both T cells and natural killer cells.Thus, this study aimed to identify optimal donors for allogeneic LAK cell immunotherapy based on singlenucleotide polymorphisms (SNP) in the IL-2 and IL-2R genes. IL-2 and IL-2R SNPs were analyzed using HRMPCR.LAK cells were derived from peripheral blood mononuclear cells by culturing with IL-2. The frequencyand tumor-killing activity of LAK cells in each group were analyzed by flow cytometry and tumor cell killingassays, respectively. Regarding polymorphisms at IL-2-330 (rs2069762) T/G, LAK cells from GG donors hadsignificantly greater proliferation, tumor-killing activity, and IFN-γ production than LAK cells from TT donors(P<0.05). Regarding polymorphisms at IL-2R rs2104286 A/G, LAK cell proliferation and tumor cell killing weresignificantly greater in LAK cells from AA donors than GG donors (P<0.05). These data suggest that either IL-2-330(rs2069762)T/G GG donors or IL-2R rs2104286 A/G AA donors are excellent candidates for allogeneicLAK cell immunotherapy.     

IL-2单独或联合IL-12活化骨髓抗肿瘤效应研究

目的 :研究白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和白细胞介素 - 12 (IL - 12 )活化骨髓的抗肿瘤效应与重建造血功能 ;探讨活化骨髓的性质和杀伤肿瘤细胞的机制。方法 :测定活化骨髓杀伤肿瘤细胞的活性 ;检测活化骨髓的细胞表面分化抗原 ,特别是CD34 /CD38-细胞群的表达。结果 :活化骨髓与L12 10 细胞、新鲜白血病细胞共同培养后显示有杀伤肿瘤细胞作用 ,以培养 3～ 4天时最强 ;活化骨髓细胞的CD3、CD8、CD16、CD5 6分化抗原表达与新鲜骨髓相比升高 ,有显著性差异 (P <0 0 1)。L12 10 细胞、新鲜白血病细胞与活化骨髓共同培养后分化抗原CD71、CD95表达下降 ,超二倍体、亚二倍体等异倍体减少 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;活化骨髓中CD34 /CD38-细胞分化抗原表达与新鲜骨髓相比没有显著性差异 (P >0 0 5 )。IL - 12活化骨髓效靶比 (E∶T)稀释一倍后杀伤白血病细胞活性仍然比IL - 2活化骨髓明显 ;IL - 2联合IL - 12诱导后活化骨髓抗肿瘤活性进一步增强。结论 :活化骨髓具有抗肿瘤效应 ,其中有细胞毒T细胞、自然杀伤细胞的作用 ,也有凋亡机制参与 ;活化骨髓还保留有重建造血的功能 ;IL - 12活化骨髓比IL - 2活化骨髓的活性高 ;且IL - 2联合IL - 12诱导后活化骨髓抗肿瘤活性进一步增强     

LAK细胞/IL-2联合放射免疫治疗晚期肿瘤的临床研究

 观察了72例接受不同方法治疗的晚期消化道恶性肿瘤患者愈后及γ显像情况,患者随机分为3组,第一组21例单独应用¹³¹I标记的抗结肠癌单克隆抗体CL₃(简称¹³¹I-CL₃)局部多点注射治疗;第二组33例接受LAK细胞/IL-2静脉注射治疗;第三组18例接受LAK细胞/IL-2联合¹³¹I-CL₃肿瘤局部多点注射治疗。发现:(1)LAK细胞/IL-2和¹³¹I-CL₃联合应用组,肿瘤局部核素标记抗体浓聚大于¹³¹I-CL₃组。(2)联合应用LAK细胞/IL-2及¹³¹I-CL₃治疗组的有效率(CR+PR,50%)明显高于¹³¹I-CL₃治疗组(238%)及LAK细胞/IL-2治疗组(121%)。说明LAK细胞/IL-2联合应用后可增强放免显像及放免治疗的效果。     

共刺激分子B7和肿瘤免疫

为了更好地使IL-3在体内发挥其造血促进作用和免疫增强作用，于本实验中建立了IL-3基因疗法的小鼠模型，并动态观察了其外周血细胞数量的变化．通过基因转染、G418抗性筛选、有限稀释及IL-3活性测定，从16株NIH3T3成纤维细胞克隆中选出一株分泌IL-3高达2416U／ml的克隆株。将其移植入小鼠腹腔后，实验小鼠血清可检测出一定水平的IL-3并维持至半个月之久。实验小鼠外周血自细胞，特别是中性粒细胞数量显著增加，血小板也有不同程度的升高。该实验结果表明成纤维细胞途径能将IL-3基因携至体内进行有效表达并发挥显著的生物学作用。