基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体—细胞偶联物构建

目的 通过基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的糖链工程将曲妥珠单抗高密度偶联到人外周血白血病T细胞Jurkat细胞,并评价偶联细胞对HER2+靶细胞的识别活性。方法 首先通过凝集素染色和流式细胞术探究去唾液酸化对细胞上α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑效率的影响。然后制备含有叠氮标签的曲妥珠单抗,与GDP-炔基岩藻糖通过生物正交反应构建GDP-岩藻糖-抗体偶联物。再利用α-1,3FucT将GDP-岩藻糖-抗体偶联物转移至唾液酸酶处理过的细胞表面,构建抗体-细胞偶联物,并通过流式细胞术和共聚焦成像验证。最后通过荧光成像观察抗体-细胞偶联物对靶细胞SK-BR-3细胞的识别。结果 细胞表面糖链的末端α-2,6唾液酸切除后能够显著提升α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑的效率,成功制备GDP-岩藻糖-抗体偶联物并转移至细胞表面得到曲妥珠单抗-Jurkat偶联物,去唾液酸化显著增加了Jurkat细胞偶联曲妥珠单抗的容量,构建的曲妥珠单抗-Jurkat偶联物具备HER2+细胞靶向性。结论 细胞糖链工程可实现细胞偶联分子容量的调节,应用于抗体对免疫细胞的功能化,也为构建海洋糖类活性化合物偶联细胞提供了新的思路...     

海洋细胞毒药物与抗体偶联物的制备及生物活性评价

目的 以抗体N-糖链为偶联位点,制备曲妥珠单抗与海洋细胞毒药物单甲基澳瑞他汀E(MMAE)偶联物,并研究其对乳腺癌细胞BT474的杀伤作用。 方法 合成含叠氮和炔基修饰的唾液酸化寡糖,采用化学酶法制备含叠氮或炔基修饰的曲妥珠单抗,利用生物正交反应分别制备相应的抗体药物偶联物。利用SDS-PAGE 对转糖基及偶联过程进行监测,表面等离子共振技术(SPR)对叠氮或炔基修饰前后抗体与FcγRIIIa亲和力进行检测。利用CCK-8法评价两种抗体药物偶联物对乳腺癌细胞株BT474的杀伤作用。结果 成功制备了含叠氮或炔基修饰的曲妥珠单抗及N-糖链糖基位点抗体药物偶联物,修饰抗体与FcγRIIIa的亲和力较曲妥珠单抗增加,相比曲妥珠单抗,两种抗体MMAE偶联物对BT474有更明显的生长抑制作用。结论 基于抗体糖链末端唾液酸位点偶联的方法可有效应用于海洋细胞毒抗体偶联药物的开发。     

西妥昔单抗对不同级别人脑胶质瘤细胞体外药敏实验的研究

<正>胶质瘤的治疗仍以手术切除为主,辅以放疗、化疗等综合治疗,但总体疗效仍不满意。目前,西妥昔单抗(cetuximab)应用于脑胶质瘤的报道较少。本实验通过胶质瘤原代细胞培养建立胶质瘤体外细胞模型,西妥昔单抗直接作用于胶质瘤细胞,更直观地显示了西妥昔单抗对不同级别胶质瘤细胞的作用效果,为西妥昔单抗在临床上的进一步应用提供了实验室依据。     

抗体-药物偶联药物的研究进展

抗体-药物偶联物（ADC）也称为免疫偶联物,属于靶向抗肿瘤药物,由药物、抗体以及偶联抗体和药物的连接物所组成。当抗体和肿瘤细胞表面的抗原特异性结合时,抗体-药物偶联物可将药物成功释放到肿瘤细胞特定部位。本文主要概述抗体-药物偶联物的作用机理、分类以及相关药物的临床进展并重点介绍最新上市的药物曲妥珠单抗-美登木素I（T-DM1,Kadcyla）。     

替莫唑胺联合分子靶向药物抗人脑胶质瘤细胞的体外试验研究

<正>现今化疗药物种类繁多,但有效率均不理想,本实验应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法比较替莫唑胺(TMZ)联合分子靶向药物西妥昔单抗(C225)对人脑胶质瘤细胞的抑制作用,旨在探索一种有效、新型的化疗方案。     

染料木素与β-葡萄糖苷酶相互作用的研究

本文研究了染料木素与β-葡萄糖苷酶的相互作用。采用荧光光谱法研究了染料木素与β-葡萄糖苷酶的结合反应,二者的相互作用使β-葡萄糖苷酶发生内源荧光猝灭,属于静态猝灭机制。通过计算得到染料木素与β-葡萄糖苷酶在17、27和37℃下的结合常数分别为3.69×104、3.06×104和2.36×104 L·mol-1。同步荧光研究了染料木素对β-葡萄糖苷酶结构的影响,染料木素可使β-葡萄糖苷酶的构象发生变化、色氨酸残基所处微环境的疏水性降低。染料木素对酶活性的抑制试验结果表明其对酶的活性具有明显的抑制作用,双分子结合速率常数为1.2×103(mol·L-1)-1.min-1。结合AutoDock 4.2分子对接软件模拟研究了二者的键合模式和键合机制,表明氢键和疏水作用对染料木素与β-葡萄糖苷酶的结合起重要作用,同时还存在静电作用。     

K-ras基因突变状态与西妥昔单抗/帕尼单抗治疗转移性结直肠肠癌疗效的系统评价

目的 评价K-ras基因突变状态与西妥昔单抗/帕尼单抗治疗mCRC疗效间的关系。方法 检索Pubmed、CENTRAL(the Cochrane Central Register of Controlledtrials)、EMBASE、中国期刊全文数据库(CNKI)、美国临床肿瘤学会(ASCO)、欧洲肿瘤协会(EMSO)官方网等,公开发表的K-ras基因突变状态与西妥昔单抗/帕尼单抗治疗mCRC疗效间关系的研究(包括前瞻性和回顾性)。应用Stata 11.0统计软件分析K-ras基因突变状态与西妥昔单抗/帕尼单抗治疗mCRC疗效间的关系。结果 共12项研究1 622例受试者纳入分析,合并分析显示：mCRC 患者中K-ras基因突变率为P=39%(95% CI：37%~44%);K-ras野生型和突变型患者西妥昔单抗/帕尼单抗治疗的客观有效率(CR+PR)分别为P=18%(95% CI：15%~26%)和P=9%(95% CI：2%~15%);与K-ras突变型相比,K-ras野生型患者西妥昔单抗/帕尼单抗治疗的客观有效率优势比OR(odds ratio)=5.10(95% CI：2.84~9.14)。结论 mCRC中约有40%的患者存在K-ras基因突变,存在K-ras基因突变的患者对抗EGFR治疗(西妥昔单抗/帕尼单抗)反应较差。     

枫杨化学成分及其抑制α-葡萄糖苷酶的活性研究

目的研究枫杨的化学成分及其抑制α-葡萄糖苷酶的活性。方法采用反复硅胶柱层析、葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱、重结晶等分离纯化方法从枫杨乙酸乙酯部位分离单体化合物,依据主要理化性质和波谱数据鉴定化合物结构,运用96孔板测定化合物体外抑制α-葡萄糖苷酶活性。结果从乙酸乙酯部位分离鉴定了11个化合物,分别为β-胡萝卜苷(1)、水杨酸(2)、槲皮苷(3)、对香豆酸(4)、槲皮素(5)、5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌(6)、β-谷甾醇(7)、没食子酸(8)、山柰酚(9)、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(10)、原儿茶酸(11)。体外α-葡萄糖苷酶抑制活性实验结果表明:在浓度为1mg·mL-1时,化合物5、9对α-葡萄糖苷酶的抑制率超过90%,与阿卡波糖相当;化合物2、3、10对α-葡萄糖苷酶的抑制活性一般(约40%)。结论化合物2～4和9～11为首次从枫杨属植物中分离得到,化合物5、9对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制活性。     

西妥昔单抗抑制乳腺肿瘤细胞的增殖

目的研究西妥昔单抗对乳腺肿瘤细胞生长的影响。方法MDA—MB-231细胞在2μg／mL西妥昔单抗刺激12h和24h后,收集细胞进行裂解。等量蛋白进行蛋白印迹法检测integrin β5表达。软琼脂克隆形成实验检测西妥昔单抗对细胞生长的影响。结果西妥昔单抗明显降低integrin β5蛋白表达。MDA-MB-231细胞在西妥昔单抗的作用下降低了克隆形成数量。结论西妥昔单抗能够下调integrin β5表达,抑制乳腺癌细胞锚定非依赖生长,提示西妥昔单抗可能是重要的乳腺癌治疗靶向药物。     

液相色谱-质谱技术对利妥昔单抗及其类似药结构表征和相似性的研究

目的 应用液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectromety,LC/MS)和液相色谱-非数据依赖二级质谱数据采集技术(liquid chromatography-data independent acquisition mass spectromety,LC/MSE)对利妥昔单抗及其类似药进行结构表征和相似性研究.方法 用LC/MS对利妥昔单抗及其类似药的完整蛋白及轻链和重链的相对分子质量进行测定;用基于LC/MSE的肽图分析确定利妥昔单抗及其类似药的氨基酸全序列;用LC/荧光检测法分析利妥昔单抗的糖基化修饰结构及相对含量.结果 LC/MS可准确测定利妥昔单抗的相对分子质量.基于LC/MSE的肽图分析显示,利妥昔单抗的氨基酸序列覆盖率＞99％.LC/荧光检测法对利妥昔单抗的糖谱分析具有较好的重复性.利妥昔单抗类似药与原研药的相对分子质量和糖型信息相符、氨基酸序列完全一致、糖谱相似.结论 LC/MS和LC/MSE可用于利妥昔单抗及其类似药的结构表征和相似性比较,这为今后其他单克隆抗体结构表征平台的建立提供了依据.     

73例西妥昔单抗不良反应文献分析

目的:探讨与分析西妥昔单抗所致药品不良反应(ADR)发生的规律及特点,旨为临床合理用药提供依据.方法:检索中国知网、万方、维普、PubMed、Web of Science等数据库,对所收集的西妥昔单抗致ADR相关文献进行统计与分析.结果:共检索到73例西妥昔单抗所致ADR的个例报道,以男性患者为主(53例,72.60％...     

西妥昔单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌临床疗效观察

目的 观察西妥昔单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌的疗效及毒副反应.方法 25例晚期结直肠癌,给予西妥昔单抗联合化疗治疗.结果 全组有效率56.0%,疾病控制率(DCR)88.0%.中位肿瘤进展时间(TTP)10.5个月.主要毒副反应为痤疮样皮疹.结论 西妥昔单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌疗效较好,毒副反应可耐受.     

抗表皮生长因子受体单克隆抗体——西妥昔单抗在结直肠癌治疗中的临床进展

最近,一些临床试验的结果肯定了西妥昔单抗（cetuximab）作为一种表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体在结直肠肿瘤的治疗作用。本文从转移性结直肠癌治疗的角度综述西妥昔单抗这一EGFR抗体的临床观察结果,回顾分析了多篇近年发表的关于西妥昔单抗在结直肠癌和其它恶性肿瘤临床应用的文献。西妥昔单抗在转移性结直肠肿瘤的无进展生存期的延长上获得了肯定的疗效（3.9月vs2.56月,P〈0.01）。然而,在作为第二线治疗时,西妥昔单抗与依立替康的联合治疗对比依立替康单药治疗并没有使平均生存期得到延长。在副作用方面,痤疮样皮疹的严重程度可以预示肿瘤对西妥昔单抗的应答强弱,外用糖皮质激素和润肤剂可以治疗这一副作用。低镁血症是该药引起的一个比较特殊的副作用,使用静脉补镁是治疗低镁血症的有效方法。     

某院西妥昔单抗合理使用评价标准的建立与应用

目的 建立西妥昔单抗合理应用评价标准,评价我院西妥昔单抗临床使用情况,为临床合理用药提供参考。方法 借鉴药物利用评价（DUE）标准,参考中国国家药品监督管理局（NMPA）、美国食品药品监督管理局（FDA）西妥昔单抗药品说明书,NCCN、CSCO相关指南,以及新型抗肿瘤药物临床应用指导原则等,建立西妥昔单抗DUE标准,评价我院150例患者的西妥昔单抗临床应用情况。结果 西妥昔单抗不合理用药体现在以下方面：适应证不适宜（15例,10.00%）,用法用量不适宜（8例,5.93%）,预处理不适宜（20例,13.33%）,治疗类型与治疗方案不适宜（8例,5.93%）。结论 我院建立的西妥昔单抗DUE标准有较好的实用性和科学性,可为临床合理用药提供参考。     

苦杏仁中β-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

目的建立苦杏仁中β-葡萄糖苷酶活性测定的最优条件,为进一步阐明苦杏仁炮制原理及储藏养护条件研究提供依据。方法采用比色法,以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷为底物,考察苦杏仁中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件。结果苦杏仁中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件为p H=5.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液,反应温度50℃,底物浓度50 mmol·L~(-1),反应时间30 min,于400 nm波长条件下检测β-葡萄糖苷酶活性。结论确定了测定苦杏仁中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件,为进一步研究苦杏仁"杀酶保苷"炮制原理、储藏养护条件及储藏期奠定基础。     

西妥昔单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌20例护理体会

西妥昔单抗是人和嵌合体鼠的单克隆的重组体,它通过与表皮生长因子受体（EGFR）的配体结合区结合,干扰了EGFR以及下游信号激活,从而抑制了细胞分化、血管生成、转移以及促进了凋亡。此外,西妥昔单抗TGG1结构还有抗体依赖型细胞介导的细胞毒作用。     

TLR9激动剂与贝伐珠单抗有望协同治疗结肠癌

[英]/Damiano V…∥Proc Natl Acad Sci USA.-2007,104(30).-12468～12473Toll样受体9(toll-like receptor,TLR9)的人工合成激动剂是一类可诱发特异性免疫反应的化合物,具有抗肿瘤活性,目前正在进行癌症患者的治疗研究。然而,它们对肿瘤生长和血管生成的影响机制并不十分清楚。近来发现,TLR9的合成激动剂——免疫调节寡聚核苷酸(immune modulatory oligonucleotide,IMO),可以通过破坏表皮生长因子受体(EGFR)信号通路或与抗-EGFR抗体西妥昔单抗协同作用于GEO人结肠癌异种移植物,而对血管内皮生长因子(VEGF)过表达的GEO西妥昔…     

抗体偶联药物在乳腺癌治疗中的研究进展

抗体偶联药物(ADC)是一类治疗乳腺癌的新型靶向药物,由连接子将化疗药物同单克隆抗体(单抗抗偶联而成,以单抗作为载体将化疗药物靶向运输至目标肿瘤细胞内发挥抗肿瘤作用。根据ADC作用于不同靶点的抗原,分为靶向人表皮生长因子受体2(HER2)、人滋养细胞表面抗原2 (Trop-2)及其他分子等类型。目前,全球范围内已有3种ADC获批治疗乳腺癌,除用于HER2阳性乳腺癌的曲妥珠单抗-美坦新偶联物(T-DM1)、曲妥珠单抗-德鲁替康(T-DXd)外,还有可使三阴性乳腺癌(TNBC)获益的戈沙妥珠单抗(SG)。ADC在HER2阳性乳腺癌治疗中疗效显著,同时在治疗晚期TNBC和部分HER2低表达的乳腺癌中也取得了重要进展,为不同乳腺癌分子分型的人群提供了更多选择。     

蒲桃不同药用部位乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的抑制作用研究

目的:比较蒲桃不同药用部位(根、茎、叶、种子、花和果肉)乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶活性的抑制作用。方法:以半数抑制浓度(IC50)为评价指标,阿卡波糖为阳性对照,采用体外抑制模型方法评价蒲桃不同药用部位乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶(酵母菌源和小鼠小肠源)和α-淀粉酶活性的抑制作用,并采用酶促动力学与Lineweaver-Burk双倒数法分析作用最强的药用部位对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的抑制类型。结果:蒲桃不同药用部位乙醇提取物对酵母菌源α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的强弱顺序为蒲桃种子>蒲桃茎>蒲桃叶>蒲桃根>蒲桃花>蒲桃果肉>阿卡波糖,对小鼠小肠源α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的强弱顺序为蒲桃种子>蒲桃茎>蒲桃根>蒲桃叶>蒲桃花>蒲桃果肉>阿卡波糖,对α-淀粉酶活性抑制作用的强弱顺序为阿卡波糖>蒲桃种子>蒲桃茎>蒲桃根>蒲桃叶>蒲桃果肉>蒲桃花。其中,蒲桃种子乙醇提取物对酵母菌源α-葡萄糖苷酶、小鼠小肠源α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的抑制作用[IC50分别为(6.64±0.24)、(32.77±2.46)和(41.18±1.63)μg/m L]显著强于其他药用部位,并且对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用显著强于阿卡波糖[对酵母菌源α-葡萄糖苷酶和小鼠小肠源α-葡萄糖苷酶的IC50分别为(2 833.33±5.48)、(1 304.21±6.45)μg/m L](P<0.05),但其对α-淀粉酶活性的抑制作用不及阿卡波糖[IC50为(27.27±1.24)μg/mL](P<0.05)。酶促动力学研究结果表明,蒲桃种子乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的抑制作用均为可逆竞争性抑制类型。结论:在蒲桃根、茎、叶、种子、花和果肉等不同部位中,以蒲桃种子对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶活性的抑制作用最强,具有开发成辅助降糖的药品或保健食品的价值。     

金银花液湿敷治疗西妥昔单抗致痤疮样皮疹的效果观察

目的:观察金银花液湿敷治疗西妥昔单抗致痤疮样皮疹的效果。方法:西妥昔单抗致痤疮样皮疹患者61例,随机分为观察组(31例)与对照组(30例)。观察组采用金银花液湿敷治疗,对照组采用温水湿敷。湿敷从出现皮疹即开始使用,1周为一疗程。比较两组患者的治疗效果。结果:观察组与对照组的总有效率分别为93.5%、73.3%,观察组总有效率明显高于对照组(Z=-2.229,P<0.05)。结论:采用金银花液湿敷治疗西妥昔单抗致痤疮样皮疹可获得满意的临床效果。