Ang-1,Ang-2及其受体Tie2在增生期血管瘤中的表达

目的:检测血管生成素-1,-2(Ang-1,-2)及其受体Tie2在皮肤增生期血管瘤中的表达并探讨其意义。方法:应用半定量RT-PCR技术检测26例皮肤增生期血管瘤及20例正常组织中Ang-2、Ang-1及Tie2 mRNA的表达,并结合计算机图像分析比较上述RNA在两组中的表达。结果:Ang-2 mRNA在增生期血管瘤中的表达显著高于正常组织(P<0.05);Ang-1 mRNA在增生期血管瘤中的表达显著低于正常组织(P<0.05),而Tie2 mRNA的表达在血管瘤与正常组织间的表达无明显差异(P>0.05)。结论:Ang-1、Ang-2可能与血管瘤的发生、发展有关。     

原位RT-PCR检测血管瘤组织Ang2 mRNA及其受体Tie2 mRNA的表达

目的:探讨Ang2及其受体Tie2与血管瘤发生、发展的关系.方法:采用原位RT-PCR方法,对临床收集的62例手术切除的先天性皮肤血管标本(其中增生期血管瘤26例,消退期血管瘤24例,静脉型血管畸形12例)进行Ang2 mRNA,Tie2 mRNA表达水平的检测.结果:增生期、消退期血管瘤及静脉型血管畸形均有Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的阳性信号,但是三者阳性信号强弱有显著性差异(P﹤0.01),即静脉型血管畸形Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的表达较不同生长时期血管瘤低,增生期血管瘤二者的表达高于消退期.结论:Ang2及其受体Tie2可能与血管瘤及静脉型血管畸形的发生、发展有关.     

白血病抑制因子受体在婴幼儿血管瘤组织中的表达及意义

目的:探讨白血病抑制因子受体(LIFR)在婴幼儿血管瘤增殖、消退中的作用。方法:应用SP免疫组织化学方法检测LIFR与CD133、Ki67在血管瘤52例(按Takahashi等的标准分类,其中增生期A组30例,消退期B组22例)、血管畸形16例、正常包皮皮肤15例中的表达水平。所有资料应用软件包进行统计分析,P<0.05具有统计学意义。结果:增殖期血管瘤组LIFR、CD133、Ki67表达水平分别高于消退期血管瘤组、血管畸形组及正常皮肤组,差异具有统计学意义(P<0.01);消退期血管瘤组LIFR、CD133、Ki67阳性细胞率与血管畸形及正常皮肤组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。LIFR与CD133、Ki67在血管瘤组织中表达的阳性率有统计学意义(P<0.01)。结论:①LIFR的表达与血管瘤的增殖与退化过程有着密切关系;②CD133表达阳性的细胞参与了血管瘤的发生与发展过程;③LIFR与CD133、Ki67三者在小儿血管瘤的发生、发展过程中可能具有相互调节和协同的作用。     

普萘洛尔对婴幼儿血管瘤组织中血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨普萘洛尔对婴幼儿血管瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及临床意义。方法选取拟手术治疗的增生期血管瘤患儿20例,随机分为两组,分别于术前4周(10例)、3个月(10例)口服普萘洛尔1.0 mg/(kg.d)各10例;对照组为消退期血管瘤10例和增生期血管瘤10例,均不予用药。比较4组手术切除后瘤体标本,VEGF表达的异常。结果增生期用药组VEGF表达呈阴性或阳性表达,而增生期未用药组VEGF呈强阳性表达。4组免疫反应阳性颗粒积分A值差异有统计学意义(F=17.7024,P<0.05),普萘洛尔影响时间和血管瘤VEGF的表达呈显著负相关(r=-0.5922,P<0.05)。结论应用普萘洛尔能明显下调增生期血管瘤组织VEGF的表达水平,可促进血管瘤的消退,因此有望用于治疗婴幼儿增生期血管瘤。     

EGFL-7介导的促血管生成作用在婴幼儿血管瘤中的作用及干预分析

目的 探讨表皮生长因子样结构域7(EGFL-7)介导的促血管生成作用在婴幼儿血管瘤中的作用及干预措施.方法 收集该院2013年2月至2016年3月婴幼儿血管瘤的50例石蜡组织标本,按照病理期的不同分为增生期组、消退期组、消退完成期组.采用自身对照设计,选取5例癌旁正常组织作为对照组.对组织标本进行苏木素-伊红(HE)染色,检测以上病理标本中EGFL-7的生成情况.选取同期收治的30例增生期血管瘤患儿为研究对象,采用普萘洛尔干预治疗,检测该组患儿治疗前后血清、尿液中EGFL-7表达的变化.结果 增生期血管瘤组织切片管腔不明显,血管结构紊乱,细胞核大,染色深,内皮细胞排列紊乱.EGFL-7在增生期与消退期组的表达高于消退完成期组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05).EGFL-7在消退完成期组与对照组的表达差异无统计学意义(P>0.05).血管瘤的患儿经普萘洛尔干预后血清、尿液中的EGFL-7均低于干预前,差异有统计学意义(P<0.05).结论 经普萘洛尔干预后EGFL-7水平显著下降,这可能成为血管瘤干预的重要机制.     

PTEN和磷酸化Akt在婴幼儿血管瘤中的表达及意义

 目的 检测PTEN和磷酸化Akt在婴幼儿血管瘤不同时期的表达情况,分析二者的表达相关性,探讨其在婴幼儿血管瘤发生发展过程中的作用及意义。 方法  应用免疫组化SP法检测婴幼儿血管瘤增生期、消退期,血管畸形及正常皮肤中的PTEN和磷酸化Akt蛋白表达情况,利用计算机图像分析技术测量其平均光密度 结果 PTEN在增生期血管瘤内皮细胞的表达低于消退期、血管畸形及正常皮肤(P<0.01);磷酸化Akt在增生期血管瘤内皮细胞的表达高于消退期、血管畸形及正常皮肤(P<0.05);消退期血管瘤、血管畸形与正常皮肤间PTEN、磷酸化Akt的表达差异无统计学意义（P>0.05）;PTEN与磷酸化Akt在婴幼儿血管瘤组织中的表达呈负相关(r=－0.7192,P＜0.05)。 结论 PTEN与磷酸化Akt可能在婴幼儿血管瘤增生过程中起了一定的作用。     

激光治疗对婴幼儿皮肤血管瘤患者血浆VEGF及bFGF表达的影响

目的 探讨激光治疗对婴幼儿皮肤血管瘤患者血浆血管内皮细胞生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平的影响.方法 选取在我院美容门诊接受激光治疗的腹部表浅血管瘤患者109例,其中增生期患者74例,消退期患者20例,消退完成期患者15例;对照组10例为在我院小儿外科接受治疗的非血管瘤患者.酶联免疫吸附分析法检测各组患者外周血血浆中VEGF及bFGF浓度,并对其中23例增生期血管瘤患者激光治疗前后血浆中VEGF及bFGF浓度的变化进行动态观察.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学处理.结果 增生期血管瘤患者血浆VEGF浓度明显高于消退期、消退完成期患者及对照组(P＜0.01);增生期患者血浆bFGF浓度明显高于消退期、消退完成期患者及对照组(P＜0.01);血管瘤患者激光治疗后血浆中VEGF及bFGF浓度较激光治疗前均显著降低(P＜0.01).结论 婴幼儿皮肤血管瘤激光治疗后,血浆中VEGF及bFGF的浓度下降;VEGF及bFGF有望成为评判婴幼儿皮肤血管瘤激光治疗效果的客观检测指标.     

胆囊癌组织bcl-2和p53基因甲基化水平研究

目的:探讨胆囊癌组织总甲基化水平、bcl-2和p53基因甲基化水平在胆囊癌发病中的作用。方法:改进的酶联免疫吸附技术检测45例胆囊癌组织和40例胆囊炎组织基因组总甲基化水平,应用甲基化特异性PCR技术检测bcl-2和p53基因甲基化水平,应用荧光RT-PCR技术检测bcl-2和p53 mRNA的表达。结果:胆囊癌组织基因组总甲基化水平明显低于胆囊炎,差异具有统计学意义(P<0.05)。胆囊癌组织p53基因甲基化发生率高于胆囊炎(64.4%vs17.5%),差异具有统计学意义(P<0.05);胆囊癌组织bcl-2基因甲基化发生率与胆囊炎比较差异无统计学意义(17.8%vs 15.0%,P>0.05)。胆囊癌组织bcl-2 mRNA的表达明显高于胆囊炎、p53 mRNA的表达明显低于胆囊炎,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因组总甲基化水平降低和p53高甲基化可能是胆囊癌发生的分子机制之一。     

抑癌基因RAS启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的关系

目的观察抑癌基因RAS在乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系。方法 选择50例PTC和32例良性甲状腺肿瘤(对照组,包括20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)患者,对2组患者手术获取的标本提取RNA后,反转录为cDNA,进行多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),检测RAS基因的表达情况;运用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测上述组织中RAS基因启动子区甲基化的情况,并对2种抑癌基因甲基化和未甲基化的组织随机进行测序。结果 PTC组患者中,有30例(60%)RAS基因启动子发生甲基化;对照组患者中,有10例(31.3%)RAS基因启动子发生甲基化;PTC组织RAS基因启动子甲基化率均显著高于对照组,差异有统计学意义(χ2=6.46,P<0.05)。乳头状甲状腺癌mRNA的半定量的值为0.56±0.10,对照组mRNA半定量的值为0.67±0.16,乳头状甲状腺癌mRNA的表达明显低于对照组,两者差异具有统计学意义(t=2.83,P<0.05)。经DNA测序证实,RAS基因启动子发生甲基化的其CpG岛的碱基未发生改变,仍为CG;未发生甲基化的,碱基由CG变为TG。结论 PTC患者RAS基因启动子甲基化发生率显著高于良性甲状腺肿瘤患者,而RAS基因mRNA的表达则较良性甲状腺肿瘤降低;推测RAS基因启动子甲基化可能与PTC的发生、发展相关。     

化瘀理气中药组方对大鼠胃黏膜异型增生p16基因甲基化与蛋白表达的影响

目的观察解毒化瘀健脾中药治疗胃黏膜异型增生过程中其化瘀与理气组方对模型大鼠p16基因甲基化状态和蛋白表达的影响。方法将胃黏膜异型增生大鼠分模型对照组、维甲酸治疗组(西药对照组)、化瘀组方、理气组方治疗组,并以正常大鼠作为阳性对照组进行相应药物干预;应用甲基化特异PCR技术检测大鼠胃黏膜p16基因甲基化状态;Real-time PCR、免疫组化技术、Western blot检测p16在m RNA和蛋白表达水平的变化。结果模型组胃黏膜异型增生细胞p16基因的甲基化阳性检出率均为33.33%(6/18),高于正常对照组(20.00%),但差异无统计学意义(χ2=1.023,P=0.312);化瘀和理气治疗组p16基因甲基化检出率均为0.00%(0/15);m RNA(P<0.001,P<0.001)和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)水平两组的表达均明显高于模型组。结论解毒化瘀健脾中药治疗胃黏膜异型增生过程中其化瘀与理气组方中药均对异型增生胃黏膜细胞p16基因具有一定的去甲基化作用,并能显著增加其转录与蛋白翻译水平的表达量。     

血管瘤患儿血清VEGF、E2及尿bFGF的检测及其意义

探讨血管瘤患儿血清血管内皮生长因子(VEGF)、雌二醇(E2)及尿碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)水平的变化,以鉴别血管瘤和血管畸形,并为血管瘤临床分期提供依据。方法选择血管瘤及血管畸形患儿138例,其中增生期血管瘤(增生期血管瘤组)60例,消退期血管瘤(消退期血管瘤组)38例,血管畸形(血管畸形组)40例。采用ELISA法检测各组血清VEGF及尿bFGF水平,采用电化学发光法、使用自动免疫分析仪检测各组血清E2水平,并与正常对照组进行对照。结果增生期血管瘤组患儿血清VEGF、E2及尿bFGF水平显著高于消退期血管瘤组、血管畸形组、正常对照组(均P<0.01)。消退期血管瘤组、血管畸形组患儿血清VEGF水平与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。消退期血管瘤组患儿血清E2水平显著高于血管畸形组、正常对照组(P<0.05)。消退期血管瘤组、血管畸形组患儿尿bFGF水平与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。增生期血管瘤组女性血清VEGF、E2及尿bFGF水平均显著高于男性,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论采用ELISA法检测血清VEGF、尿液bFGF及应用电化学发光法检测血清E2简便、易行、可靠,可为临床鉴别血管瘤和血管畸形,并为临床划分血管瘤分期提供依据。     

子宫内膜癌错配修复基因hMLH1的表达 和启动子甲基化研究

 【目的】 探讨子宫内膜癌组织中错配修复基因hMLH1 的表达和启动子甲基化状态与子宫内膜癌发生的关系&#65377;【方法】 应用免疫组化链霉素抗生物素- 过氧化物酶法(S-P法)和甲基化特异性聚合酶连反应(MSP)方法,检测37例子宫内膜癌组织和20例正常增生期子宫内膜组织中hMLH1蛋白的表达和启动子甲基化状态&#65377;【结果】 37例子宫内膜癌组织和20例正常增生期子宫内膜组织hMLH1基因蛋白表达分别为51.4%(19/37),85%(17/20);基因启动子甲基化分别为43.2%(16/37),15%(3/20)&#65377;发生甲基化的16例子宫内膜癌组织14例蛋白表达阴性,发生甲基化的3例正常增生期子宫内膜组织2例蛋白表达阴性&#65377;hMLH1蛋白表达与组织学分级(G1, G2, G3)有关,与肿瘤肌层浸润&#65380;淋巴结转移&#65380;国际妇产科协会(FIGO)分期和宫颈浸润无相关性,hMLH1的甲基化与上述临床病理因素均无相关性&#65377;【结论】 hMLH1基因启动子甲基化与其蛋白表达缺失密切相关,hMLH1基因在子宫内膜癌的发生过程中发挥重要作用&#65377;     

子宫内膜癌错配修复基因hMLH1的表达和启动子甲基化研究

【目的】探讨子宫内膜癌组织中错配修复基因hMLH1的表达和启动子甲基化状态与子宫内膜癌发生的关系。【方法】应用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化物酶法（S-P法）和甲基化特异性聚合酶连反应（MSP）方法,检测37例子宫内膜癌组织和20例正常增生期子宫内膜组织中hMLH1蛋白的表达和启动子甲基化状态。【结果】37例子宫内膜癌组织和20例正常增生期子宫内膜组织hMLH1基因蛋白表达分别为51．4％（19／37）,85％（17／20）;基因启动子甲基化分别为43．2％（16／37）,15％（3／20）。发生甲基化的16例子宫内膜癌组织14例蛋白表达阴性,发生甲基化的3例正常增生期子宫内膜组织2例蛋白表达阴性。hMLH1蛋白表达与组织学分级（G1,G2,G3）有关,与肿瘤肌层浸润、淋巴结转移、国际妇产科协会（FIGO）分期和宫颈浸润无相关性,hMLH1的甲基化与上述临床病理因素均无相关性。【结论】hMLH1基因启动子甲基化与其蛋白表达缺失密切相关,hMLH1基因在子宫内膜癌的发生过程中发挥重要作用。     

RASSF2基因甲基化与卵巢透明细胞癌的相关性

目的探讨RASSF2基因异常甲基化与卵巢透明细胞癌的相关性。方法分别通过甲基化特异性PCR技术及免疫组化技术检测48例卵巢透明细胞癌组织中RASSF2基因的甲基化及蛋白表达情况。结果透明细胞癌组织中RASSF2基因的甲基化发生率(45.83%,22/48)及蛋白表达缺失发生率(47.92%,23/48)均显著高于正常卵巢组织及癌旁异位内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF2基因甲基化与其蛋白表达缺失具有相关性。结论 RASSF2基因异常甲基化所导致的蛋白表达缺失可能在卵巢透明细胞癌的发病机制中具有重要作用。     

CDK2及其抑制因子P57~(kip2)在血管瘤中的表达和意义

目的:探讨细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)及其抑制因子P57kip2在血管瘤发生、发展过程中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学方法(SP法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及其正常皮肤组织中CDK2及P57kip2的表达水平。结果:CDK2在增生期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞(P<0.001),而后两组比较差异无统计学意义。P57kip2在增生期血管瘤内皮细胞的表达显著低于退化期血管瘤内皮细胞(P<0.005),退化期血管瘤内皮细胞P57kip2表达水平与正常组织相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDK2的高表达及P57kip2的低表达或缺失可能在血管瘤的发生发展中起重要作用。     

胰岛素样生长因子2及其受体在血管瘤和血管畸形中的表达

目的 检测胰岛素样生长因子2(IGF2)及受体(IGF2R)在不同时期婴幼儿血管瘤(IH)、血管畸形和正常皮肤组织中的表达情况并探讨其意义.方法 应用SP免疫组织化学方法检测IGF2及IGF2R在不同时期血管瘤、血管畸形和正常皮肤组织中的表达水平,采用Image-pro plus 6.0系统测定平均积分光密度、阳性表达面积,计算平均阳性反应率.结果 增生期血管瘤血管内皮细胞IGF2及IGF2R的表达均较强,消退期血管瘤血管内皮细胞IGF2及IGF2R的表达均较弱,而血管畸形和正常皮肤组织组织IGF2及IGF2R均不表达.不同时期血管瘤组的IGF2及IGF2R的表达水平明显强于血管畸形和正常皮肤组织组,差异有统计学意义(P＜0.01);增生期血管瘤组IGF2及IGF2R的表达水平明显高于消退期,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 IGF2及IGF2R可能参与了IH的发生发展机制,甚至也有可能参与了其消退的过程.在婴幼儿血管瘤中,IGF2的表达强弱与IH的分期有一定的关系.     

婴幼儿皮肤血管瘤组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和内皮抑素的表达

目的检测婴幼儿皮肤血管瘤不同病理时期血管瘤组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （caspase-3）和内皮抑素的表达,了解血管瘤的生物学特性,探讨血管瘤的增生及消退机制。方法采用免疫组化链霉菌亲生物素蛋白过氧化物酶连接法检测43例手术切除的婴幼儿皮肤血管瘤标本及6例正常皮肤组织标本中caspase-3和内皮抑素的表达情况,同时用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸生物素缺口末端标记法测定同一标本的细胞凋亡情况。结果消退期血管瘤中caspase-3和内皮抑素阳性表达以及凋亡指数均高于增生期（P〈0.05）,增生期二者的阳性表达均高于正常皮肤组织表达（P〈0.05）。caspase-3与内皮抑素的阳性表达呈正相关（r=0.753,P〈0.01）。结论caspase-3和内皮抑素可能通过促进和诱导内皮细胞的凋亡使血管瘤由增生期进入消退期,内皮抑素可增加caspase-3的活性,caspase-3和内皮抑素在血管瘤的发生发展中发挥重要协同作用,有利于血管瘤的自然消退。     

P21ras、FasL在皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的:研究P21与FasL在血管瘤组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测人血管瘤组织中增生期、退化期及正常皮肤组织血管内皮细胞中P21ras与FasL的表达水平,利用计算机成像分析系统检测不同时期皮肤血管瘤与正常皮肤组织P21ras与FasL的平均光密度及其阳性面积率。结果:P21ras在血管瘤增生期的表达与退化期比较差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P<0.01)。FasL在增生期的表达明显高于退化期及正常皮肤组织,差异有统计学意义(P<0.01);退化期明显高于正常皮肤组织,有统计学意义(P<0.05)。结论:P21ras与FasL在血管瘤的生长中起促进增殖作用,并且二者之间有协同促进作用。     

B细胞淋巴瘤SHP-1基因甲基化状态及其意义

 【目的】探讨JAK/STAT信号转导途径负调控子SHP-1基因启动子区域CpG岛异常甲基化在B细胞淋巴瘤中的意义。【方法】收集存档石蜡包埋组织标本61例(52例B细胞非霍奇金淋巴瘤标本,9例良性增生淋巴结标本),健康人外周血单个核细胞DNA标本15例,用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)和非甲基化特异性PCR(unmethylation-specific PCR,un-MSP)检测SHP-1启动子区域CpG岛甲基化状态,MSP、un-MSP和RT-PCR方法分别检测接受或未接受去甲基化处理的Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的甲基化状态及mRNA的表达,MTT法检测接受去甲基化干预后细胞生长受抑情况。【结果】SHP-1基因启动子区域在弥漫性大B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤甲基化频率分别为94%及97%,对照组9例淋巴结良性增生标本和15例正常人外周血单个核细胞标本中SHP-1基因启动子区域甲基化频率为0。经去甲基化干预后,Raji细胞SHP-1基因启动子区域呈去甲基化状态,基因恢复表达,细胞生长受到抑制。【结论】SHP-1基因启动子区域启动子区域CpG岛在B细胞淋巴瘤中存在高度甲基化，由其所致的SHP-1基因沉默可能是B细胞淋巴瘤发生的一个重要因素，SHP-1基因的甲基化可作为一个良好的分子诊断标记及可能的治疗靶点。     

早期鼻咽癌基因甲基化谱的初步构建

摘 要: 【目的】 分析早期鼻咽癌的基因甲基化状态,初步构建早期鼻咽癌的基因甲基化谱?【方法】 收集I期(T1N0M0)鼻咽癌石蜡标本及炎性增生性鼻咽组织各4例,分别提取DNA,富集两组样品基因组甲基化片段后采用甲基化芯片(NimbleGen)对两组标本进行高通量测序分析,对杂交信号进行扫描及初步数据处理,分析并筛选出两组标本的差异甲基化基因?【结果】 4例鼻咽癌石蜡标本中均出现甲基化的基因数目为1 134个,而4例炎性增生性鼻咽组织中均出现甲基化的基因有2 091个,4例鼻咽癌标本全部发生甲基化但4例炎性增生性鼻咽组织全未发生甲基化的基因有218个,提示此218个基因可能为早期鼻咽癌患者的甲基化基因谱?另外,4例鼻咽癌标本全未发生甲基化而4例炎性增生性鼻咽组织全部发生甲基化的基因数目为1 558个?【结论】 本研究初步构建了早期鼻咽癌的基因甲基化谱,为进一步建立更为精确的甲基化谱奠定了基础,同时也为寻找鼻咽癌新的分子标志物提供了可能?