三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响

目的对比三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响,优选大、小鼠肠道组织切片固定液。方法选择三种常用的固定液:10%中性福尔马林固定液,Bouin’s固定液,改良Davidson’s固定液,对SD大鼠和KM小鼠小肠组织进行固定,常规制作石蜡切片、HE染色,对比观察其染色效果。结果三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量存在影响,单纯福尔马林固定的切片存在肠粘膜上皮脱落、坏死的假象;Bouin’s固定液和改良Davidson’s固定液则可避免这一假象的出现,而且切片结构更精细、清晰,但是,HE染色的色彩不如单纯福尔马林固定液的鲜艳。结论 Bouin’s固定液和改良Davidson’s固定液固定的大、小鼠肠道组织的石蜡切片质量优于10%中性福尔马林固定液。     

两种固定液对肺组织固定效果的比较

目的:比较Bouin和10%甲醛两种固定液对正常肺组织的固定效果。方法:取正常小鼠肺组织,分别用Bouin和10%甲醛两种固定液,按料液比1∶20固定24 h,常规制备肺组织石蜡切片,HE染色;光镜下分别在100倍和400倍比较两种切片的组织结构和染色情况并统计高倍镜下清楚细胞数;应用t检验进行统计分析。结果:Bouin固定的肺组织在低倍镜下见解剖结构无分离,组织着色均匀,细胞内外结构清晰,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限分明,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞清晰且易于辨别;10%甲醛固定的肺组织切片染色后,在低倍镜下观察效果与Bouin固定的肺组织切片无显著差异,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限不清,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞结构模糊,经t检验两者差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Bouin固定的肺组织其HE染色效果较好,为肺组织切片的制备提供参考。     

大鼠睾丸组织固定法的优选研究

【摘要】目的：选择一种最优势、合理的固定方式以提高对睾丸组织制片效果,以配合不同种类的科学研究。方法：选用10%福尔马林、NBF-Bouin’s、Bouin’s和改良Davidson's四种不同的固定液对大鼠睾丸进行充分固定后,制作石蜡切片,进行HE染色,比较不同固定液中的睾丸组织学形态的差异;利用糖原特殊染色（PAS）,探讨不同固定液对睾丸糖原观察的影响;采用免疫组织染色,测评睾丸组织内雄激素受体的固定效果。结果：改良Davidson's固定液较NBF-Bouin’s引起的曲细精管萎缩轻,形态更为清晰,用免疫组织化学方法检测雄激素更为敏感,并且改良Davidson's 固定液在需要对精子发生进行分期时,其PAS 染色的效果与Bouin’s液固定后等同。     

大鼠眼部晶状体标本石蜡切片的改良制作方法

目的:探讨应用改良固定液和加压脱水法制作大鼠晶状体石蜡切片的效果。方法:将大鼠晶状体投入到由甲醛、冰醋酸和丙酮组成的改良固定液中固定后制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果:晶状体组织结构完整清楚。结论:此改良固定液和加压脱水法优于其它方法,是适合大鼠眼部晶状体标本石蜡切片的一种有效方法。     

SD大鼠皮肤组织教学石蜡切片的改进

目的:探讨一种改善皮肤组织教学切片质量的方法。方法:取大鼠的皮肤,用Bouin液固定、脱水﹑氯仿透明﹑浸蜡﹑包埋﹑切片﹑HE染色和封片,最后在光镜下观察。结果:新方法制作的皮肤组织切片结构完整,厚薄均匀,染色恰当,形态清晰无断裂破碎现象。结论:用Bouin固定液软化,降低组织硬度,氯仿透明不引起组织收缩变形及过度硬脆。这种改进的实验方法可切实提高皮肤组织石蜡切片效果,是可行的。     

卵巢切片制作方法体会

目的比较2种固定液,块染和片染,苏木精-伊红(HE)染色和masson染色对家兔卵巢切片制作的影响。方法采用HE整块染色法、HE常规片染法、Masson三色染色法对家兔卵巢切片进行染色,镜检。结果投入Bouin液固定的卵巢组织比10%甲醛液中HE染色法的染色要亮丽,结构分明。结论 Bouin液对组织固定均匀且收缩较小,染色效果艳丽。     

六种固定液对小鼠角膜固定效果的比较

目的观察6种不同固定液固定下,小鼠角膜的组织形态学特征并筛选出适合角膜固定的固定液。方法取60只NIH小鼠眼球,随机分为6组,每组10只,分别固定于6种固定液中,即95%乙醇、10%中性甲醛、Bouin’s液、甲醛-乙酸固定液和Davidson’s液。固定完成后,标本经80%、95%、100%梯度酒精脱水,TO型生物制片透明剂透明,石蜡浸泡,最后石蜡包埋。石蜡切片厚度均为4μm,分别做HE染色,显微镜下观察形态学特征并对角膜各区域厚度进行测量分析。结果不同固定液固定的小鼠角膜组织形态及厚度各具特征,而甲醛-乙酸液固定后的角膜组织细胞形态改变小。结论甲醛-乙酸液固定后组织细胞形态改变小,是比较合适的小鼠角膜固定液。     

三种固定液对神经纤维冰冻切片固定效果之比较

目的:观察比较10%甲醛、丙酮和Bouin三种固定液对神经纤维的固定效果,为临床做出更好的神经纤维的快速冰冻切片提供实验基础.方法:取健康大鼠双侧坐骨神经,冰冻切片后分别用三种固定液固定,然后做HE染色,观察各自的组织结构及染色情况.结果:10%甲醛固定的神经纤维组织结构较清楚但是组织发生收缩;丙酮固定的神经纤维染色效果较好,组织没有发生收缩;Bouin固定液固定的神经纤维结构和染色都比较好但是组织收缩最明显.结论:三种固定液都可用于固定神经纤维,但丙酮效果最好.     

脂肪组织切片制备方法的改进

目的探讨脂肪组织石蜡切片及冰冻切片方法的改进。方法取脂肪组织迅速固定于10%中性福尔马林中,设置不同的脱水程序制备石蜡切片,HE染色。免疫组化法观察PPARγ和ITLN1的表达。取脂肪组织迅速固定于甲醛钙或10%中性福尔马林固定液中24 h以上,OCT包埋,置于-80℃冰箱至少30 min,设置冰冻切片机箱体温度-20℃,样品头温度-30℃,切片后HE染色。结果用改进方法制备的脂肪组织石蜡切片,切面平整,无皱褶,无裂隙,脂肪细胞结构完整,染色清晰,且对免疫组化结果无影响;冰冻切片的改进提高了切片质量,结构完整,形态好,染色清晰。结论改进的脂肪组织石蜡切片和冰冻切片均可成功应用于不同实验动物,为脂肪组织的研究提供了有力的支撑条件。     

固定液对恒冷箱切片组织结构与染色效果的比较观察

对Ｗｉｓｔａｒ大鼠６种器官进行恒冷箱新鲜冰冻切片,采用９种固定液分别固定切片,在同等条件下做Ｈ．Ｅ染色,观察不同固定液对器官组织结构与染色效果的影响,以寻找适用于恒冷箱切片的最佳固定液．结果表明：１０％中性甲醛固定的切片,器官的组织结构清晰,染色好,镜下与石蜡切片相似,我们推荐在恒冷箱切片Ｈ．Ｅ染色时选用１０％中性甲醛作为固定液,这对提高恒冷箱切片染色技术和临床病理快速诊断的准确性,有一定指导意义。     

组织检材的PCR性别鉴定研究

作者用引物Ｙ３、Ｙ４通过ＰＣＲ技术对微量陈旧的组织检材进行了扩增，扩增的靶序列位于Ｙ染色体ＤＮＡ特异３．４Ｋｂ重复序列中，产物为４４６ｐｂ。检材是新鲜组织、甲醛固定组织、石蜡包埋组织和ＨＥ染色切片组织。检材的保存时间从凡小时到五年。结果表明：新鲜组织，１０％中性缓冲甲醛固定一年以下的组织和石蜡包埋３年以下的组织均可做为ＰＣＲ性别鉴定的良好检材。     

三种不同固定液对小鼠组织过碘酸雪夫染色效果比较

目的 比较小鼠肝脏、肾脏、小肠三种组织在质量分数4％多聚甲醛液、Carnoy's液、Bouin,s液三种固定液不同固定时间下的制片质量和过碘酸雪夫染色(PAS)效果,筛选出一种最为适用的固定方法.方法 取成年雄性C57BL/6小鼠肝脏、肾脏、小肠,分别固定于三种固定液,固定时间分别是质量分数4％多聚甲醛液:24h、48 h、72 h;Camoy's液:4h、8h、12 h;Bouin's液:12 h、24 h、48 h,充分固定后,常规制作石蜡切片,然后进行PAS染色,对比观察染色效果.结果 三种固定液对不同组织、不同固定时间下PAS染色结果存在差异.肝脏、肾脏、小肠经Camoy's液处理12h后PAS效果最佳,质量分数4％多聚甲醛液固定24 h基本满足观察检测效果,而经Bouin's液固定组织染色效果相对较差.结论 PAS反应对固定液和固定时间具有选择性,Camoy's液是组织进行PAS染色的理想固定液,但从固定效果、重复性、安全性、成本等多因素综合考虑,在PAS反应中,质量分数4％多聚甲醛液可以替代Camoy's液.     

冰冻切片免疫荧光中组织固定方法研究

目的通过对3种不同固定液对肝组织冰冻切片免疫荧光过程中固定情况的比较,探寻保存抗原最佳固定效果的方法。方法取Wistar大鼠肝脏,OCT包埋后置于冰冻机切片,片厚8～10μm。分别用10%甲醛、丙酮和1%多聚甲醛3种固定液固定后,进行免疫荧光染色,经Image-pro图像分析软件及单因素方差分析统计,比较其染色效果。结果丙酮固定的肝组织的免疫荧光组织结构清晰,核浆对比度好,其Heppar肝细胞抗原的阳性面积为(73.2±1.2)%,与10%甲醛(46.2±1.5)%及1%多聚甲醛(62.2±1.1)%固定的肝组织比较差异有统计学意义。结论在保存肝组织中抗原活性方面,相对于10%甲醛和1%多聚甲醛液,以丙酮固定液固定效果最好。     

聚羟基丙烯酸和Van-clear替代传统试剂在FISH法检测宫颈hTERC基因中的应用比较

目的：观察环保固定液（聚羟基丙烯酸、环保透明脱蜡液Van-clear单独或联合）替代传统固定液［4%（体积分数）中性缓冲甲醛、传统透明脱蜡液二甲苯］应用于荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）法检测宫颈组织中人端粒酶核糖核酸组分（human telomerase RNA component,hTERC）基因扩增的差异。方法： 收集2013年3月到2015年4月于中山市博爱医院妇科住院部送检的255例宫颈组织标本,同一病变部位切取4个样本,分为4组,命名为A、B、C、D组:A组采用4%中性缓冲甲醛固定、二甲苯透明脱蜡制作切片;B组采用聚羟基丙烯酸固定、二甲苯透明脱蜡制作切片;C组采用4%中性缓冲甲醛固定、Van clear透明脱蜡制作切片;D组采用聚羟基丙烯酸固定、Van-clear透明脱蜡制作切片。采用FISH技术检测4组宫颈标本中hTERC基因。结果： 在FISH法检测宫颈各级病变组织hTERC基因时,荧光显微镜下,A、B、C、D四组的组织轮廓和背景均清晰,探针定位准确,可见耀眼的红/绿荧光信号。B、C、D组与A组阳性率相比差异均无统计学意义（P>0.05）,且FISH结果符合率高。结论： 环保试剂聚羟基丙烯酸、Van clear有潜在的可能单独或联合替代4%中性缓冲甲醛、二甲苯应用于FISH法检测宫颈hTERC基因。     

家用微波炉及金属溶液在恢复陈旧石蜡包埋组织抗原性中的应用

应用家用微波炉及饱和硫氰酸铅溶液对３５倒不同陈旧性甲醛固定石蜡包埋组织切片进行免疫组化染色，其中间叶性恶性肿瘤组织５例，流行性出血热肺、肾上腺、甲状腺组织各１０例，分别使用Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ、Ｃ１同相应组织中的抗原反应，同时与常规免疫组化进行对照。结果表明：改良的免疫组化法与常规免疫组化法相比，不需要酶的消化处理，阳性染色强度大，范围广。提示，应用微波炉及金属槽液能促使陈旧性石蜡包埋组织中抗原的恢复，其染色效果明显优于常规酶液处理之方法。     

一种优化的大鼠视网膜组织石蜡切片制作方法

目的针对大鼠视网膜石蜡切片过程中易出现标本脱离及断裂分离的问题,寻找并优化大鼠视网膜石蜡切片的制作方法并评估效果．方法分别用10％多聚甲醛固定液;4％多聚甲醛固定液;单独固定及使用4％多聚甲醛、95％酒精、冰醋酸混合固定液（FAA固定液）;预处理后再使用10％多聚甲醛分别固定等4种方法对大鼠视网膜组织进行固定,HE染色后显微镜下进行观察．结果单独使用10％多聚甲醛以及4％多聚甲醛固定均出现视网膜脱离及各层结构断裂分离现象,但经FAA固定液预处理的视网膜切片HE染色后颜色鲜明均匀,虽部分区域视网膜偶有脱离,但不易脱片,各层结构完整,未出现断裂分离．结论经FAA固定液及多聚甲醛处理过的视网膜石蜡切片固定效果明显优于单独使用多聚甲醛,甲醛浓度对HE染色结果无明显影响．