参芪泄浊饮对大鼠腺嘌呤肾间质纤维化模型大鼠肾组织MMP-1、TIMP-1基因表达影响随机平行对照研究

[目的]研究参芪泄浊饮对腺嘌呤致大鼠慢性肾衰肾组织基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达的影响。[方法]SPF级雄性SD大鼠54只,采用Yokozawa法复制慢性肾衰大鼠模型,随机分为参芪泄浊饮高剂量组、参芪泄浊饮常规剂量组、氯沙坦组、模型组,分别予高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组以参芪泄浊饮水煎液20m L/kg·d、10m L/kg·d、氯沙坦组9mg/kg·d,模型组与空白组大鼠均予纯净水10m L/kg·d,连续灌胃干预8周,ELISA法测量血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸转氨酶(ALT);荧光定量PCR方法检测肾组织中MMP-1、TIMP-1。[结果]1Scr、BUN各组大鼠较空白组均有升高(P0.05),氯沙坦组明显低于模型组(P0.05);Scr高剂量组大鼠明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组大鼠(P0.05),常规剂量组与氯沙坦组亦低于模型组(P0.05);BUN变化趋势与Scr相同,高剂量组降低不明显(P0.05)。2MMP-1 m RNA各组均高于空白组(P0.05),高剂量组显著高于常规剂量组、氯沙坦组及模型组(P0.05),常规剂量组与氯沙坦组也显著高于模型组(P0.05);TIMP-1 m RNA各组均高于空白组(P0.05),高剂量组明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组(P0.05),常规剂量组与氯沙坦组明显低于模型组(P0.05)。[结论]参芪泄浊饮可通过促进MMP-1 m RNA及抑制TIMP-1 m RNA表达,使细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的降解增加,堆积减少,进而减缓CRF的进一步发展,保护肾脏。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠MMP-9 TIMP-1基因表达的影响

目的:探讨和络泄浊方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)后大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响。方法:采用UUO大鼠模型,将48只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组、中药灌胃组。在术后第1天开始,中药灌胃组给予中药15mL/kg,分早晚2次灌胃,假手术组和模型组每天给予等量生理盐水灌胃。在术后3、10、20、30天每组各取4只处死,左肾组织行HE染色,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,采用RT-PCR法检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的变化。并分析TIMP-1mRNA与肾小管间质损伤指数的相关性。结果:模型组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA的表达明显高于假手术组(P<0.01),中药灌胃组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达低于模型组(P<0.05或P<0.01)。MMP-9在模型组UUO术后明显升高,第10天时达到高峰,继之出现下降;在中药灌胃组第10天后下降幅度较小,在20天、30天时间点高于模型组(P<0.01)。结论:和络泄浊方通过调节MMP-9/TIMP-1的基因表达,促进了ECM的降解过程,从而减轻肾间质纤维化。     

稳肾颗粒对肾间质纤维化大鼠MMP-9/TIMP-1比值及Ets-1表达的影响

目的观察稳肾颗粒对肾间质纤维化大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)比值及逆转录病毒E26转录因子1(Ets-1)表达的影响,初步探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法将30只大鼠随机分为正常组、模型组、治疗A组和治疗B组。除正常组外,其余组均采用腺嘌呤干预建立肾间质纤维化大鼠模型,造模第22天起,治疗B组给予稳肾颗粒干预直至第42天;造模第29天起,治疗A组给予稳肾颗粒干预直到第42天。第43天处死大鼠,留取标本观察病理。Real time-PCR法检测肾组织中Ⅳ型胶原(ColⅣ)、MMP-9、TIMP-1和Ets-1 mRNA表达量。结果稳肾颗粒可以改善模型鼠肾功能,促进细胞外基质(ECM)降解,下调ColⅣ,上调MMP-9/TIMP-1比值,增加Ets-1表达。结论稳肾颗粒可能通过调节Ets-1蛋白表达而改善降解酶系统的功能紊乱,促进ECM降解,减少ECM沉积,改善肾间质纤维化。     

大黄素对肾纤维化大鼠肾组织MMP-9表达的影响

目的 探讨中药大黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中基质金属蛋白酶9 （MMP-9）表达的影响.方法 120只wister大鼠随机分成3组：假手术组、梗阻组及大黄素治疗组.制备单侧输尿管梗阻（UUO）模型.治疗组在UUO的基础上每天以大黄素40mg/kg灌胃,采用病理及免疫组化的方法动态观察各组大鼠术后1d、3d、7d、14d梗阻侧肾脏组织学变化和MMP9在梗阻肾小管间质中表达情况.结果模型组MMP-9的表达先增高后降低,治疗组MMP-9的表达水平高于模型组（P＜0 05）.结论 中药大黄素可以通过提高MMP9的表达,促进ECM的降解来发挥其延缓肾间质纤维化进程的作用.     

消瘀泄浊饮对肾间质纤维化大鼠的肾脏保护作用研究

目的:探讨消瘀泄浊饮对UUO模型大鼠的保护作用及作用机制。方法:实验采用UUO大鼠模型,将32只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、洛汀新治疗组(B组)、消瘀泄浊饮组(X组)。分组用药并监测体重,给药14天后处死大鼠。测定大鼠左肾指数,血清肌酐、尿素氮、白蛋白水平;肾组织HE染色观察病理改变;用免疫组织化学方法检测肾组织α-SMA的表达。结果:消瘀泄浊饮能够明显降低实验大鼠血清肌酐、尿素氮水平,升高白蛋白水平,能降低肾组织中α-SMA蛋白表达,与模型组比较有显著性差异,形态学观察也显示其肾脏损害轻于模型组。结论:消瘀泄浊饮能有效地延缓肾间质纤维化的进程,可通过抑制α-SMA的表达,减少肌成纤维细胞的活化和形成,从而起到抗肾纤维化的作用。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠治疗作用机理探讨

目的:通过对肾间质纤维化大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的研究,探讨和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠的治疗作用机理。方法:采用单侧输尿管结扎法(UUO)进行肾间质纤维化模型制备,48只W ister大鼠随机分为假手术组、模型组、中药灌胃组。术后第3、10、20、30天每组各处死4只大鼠。HE染色法观察肾脏病理改变,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,免疫组化法检测肾脏α-SMA、Ⅳ型胶原蛋白表达,采用RT—PCR法检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果:α-SMA、Ⅳ型胶原蛋白表达模型组明显增强(P<0.01),中药灌胃组各时间点的表达均少于模型组,假手术组表达无明显异常。模型组肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01),并随时间延长表达增强,中药灌胃组肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达亦高于假手术组(P<0.01),但较模型组表达弱(P<0.01)。MMP-9表达在模型组术后明显升高,第10天达到高峰,中药灌胃组在第20、30天时间点高于模型组(P<0.01)。结论:和络泄浊方通过调节α-SMA、Ⅳ型胶原及MMP-9/TIMP-1的基因表达,影响细胞外基质的降解过程,从而减轻肾间质纤维化。     

益气活血中药对肾间质纤维化大鼠肾组织中I、Ⅲ型胶原,MMP-1和TIMP-1表达的影响

目的探讨益气活血中药抗肾间质纤维化的作用机制。方法采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。应用免疫组化等技术,通过医学病理图像分析系统检测I、Ⅲ型胶原蛋白,基质金属蛋白酶1（MMP-1）,金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP-1）在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达。结果模型组Ⅲ型胶原蛋白的表达较假手术组显著增强;MMP-1在模型组表达较假手术组显著减弱且分布面积减少,同时模型组TIMP-1的表达与假手术组比较显著增强;中药治疗组与西药蒙诺治疗组都能逆转I、Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1和TIMP-1的表达,但两组间无显著差异,中药大剂量的治疗效果明显优于中、小剂量。结论益气活血中药与血管紧张素转换酶抑制剂的治疗效果和机制较为一致,可能通过恢复MMP/TIMP间的网络平衡来减少细胞外基质中胶原蛋白的合成,增加其降解,从而达到减轻或抑制肾小管间质纤维化进程的目的。     

益气活血中药对肾间质纤维化大鼠肾组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,MMP-1和TIMP-1表达的影响

目的 探讨益气活血中药抗肾间质纤维化的作用机制.方法 采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型.应用免疫组化等技术,通过医学病理图像分析系统检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,基质金属蛋白酶1(MMP-1),金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达.结果 模型组Ⅲ型胶原蛋白的表达较假手术组显著增强;MMP-1在模型组表达较假手术组显著减弱且分布面积减少,同时模型组TIMP-1的表达与假手术组比较显著增强;中药治疗组与西药蒙诺治疗组都能逆转Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1和TIMP-1的表达,但两组间无显著差异,中药大剂量的治疗效果明显优于中、小剂量.结论 益气活血中药与血管紧张素转换酶抑制剂的治疗效果和机制较为一致,可能通过恢复MMP/TIMP间的网络平衡来减少细胞外基质中胶原蛋白的合成,增加其降解,从而达到减轻或抑制肾小管间质纤维化进程的目的.     

鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠MMP-1、TIMP-1的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响,探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组及鳖甲煎丸治疗组,用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型,给予鳖甲煎丸进行防治,采用免疫组化方法,观测基质金属蛋白酶(MMP-1)及其抑制因子(TIMP-1)在各组大鼠肝脏组织中的表达。结果:与正常对照组比较,其余各组MMP-1表达均增高,差别有统计学意义(P0.05);秋水仙碱、鳖甲煎丸MMP-1表达较模型对照组有所升高,但差别无统计学意义(P0.05);鳖甲煎丸预防及治疗组TIMP-1高于正常对照组,低于模型对照组及秋水仙碱各组,差别均有统计学意义(P值均0.05)。结论:鳖甲煎丸可明显抑制TIMP-1的表达,促进细胞外基质的降解,从而实现对肝纤维化的防治作用。     

苦参素对免疫性肝纤维化大鼠肝脏组织MMP-1, TIMP-1表达的影响

目的:探讨苦参素对免疫性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响.方法:建立猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化模型.SD雄性大鼠44只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.1 mg·kg-1)和苦参素组(60 mg· kg-1),ip,1次/d,连续8周.采用免疫组化方法检测MMP-1,TIMP-1在各组大鼠中的表达.结果:与模型组相比,苦参素组MMP-1表达为(3.42±0.53)％,高于模型组的(2.81±0.53)％,(P＜0.05);苦参索组TIMP-1表达水平为(30.62士3.18)％,明显低于模型组的(41.64±4.51)％,(P＜0.01);苦参素组TIMP-1/MMP-1比值也明显低于模型组(P＜0.01).结论:苦参素能增加免疫性肝纤维化大鼠肝脏组织MMP-1的表达,抑制TIMP-1表达,调节TIMP-1/MMP-1比值,通过对细胞外基质(ECM)的调节起到抗肝纤维化的作用.     

膈下逐瘀汤逆转猪血清诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的:通过观察膈下逐瘀汤对实验性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,探讨其抗肝纤维化的可能机制。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清2.0 mL.kg-1腹腔注射,每周2次共12周诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤每天按7.37 g.kg-1灌胃给药12周。Masson染色法观察肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织MMP-13和TIMP-1含量,实时定量Rt-PCR检测肝组织MMP-13和TIMP-1 mRNA表达。结果:猪血清组肝组织胶原面积为(10.38±2.01)%;MMP-13蛋白(14.05±2.64)ng.g-1;MMP-13 mRNA(1.91±0.73)倍;TIMP-1蛋白(14.91±1.07)ng.g-1;TIMP1 mRNA(18.40±2.84)倍。与猪血清组比较,膈下逐瘀汤给药可显著降低肝组织胶原面积(6.66±1.04)%(P<0.05),增加肝组织MMP-13蛋白(20.03±2.14)ng.g-1和MMP-13mRNA(4.12±0.59)倍(P<0.05),降低肝组织TIMP-1蛋白(13.47±1.22)ng.g-1和TIMP-1mRNA(4.89±0.74)倍(P<0.05)。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维含量,其机制可能与调节MMP-13和TIMP-1的表达有关。     

补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达影响

目的:观察补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织中基质金属蛋白-9(MMP-9)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达及肺组织病理变化的影响。方法:雄性SD大鼠,随机分成4组:空白组、模型组、强的松组、补肺汤组。除空白组外,其余3组均采用博莱霉素(BLM)制作肺纤维化大鼠模型,每日灌胃给药,造模后7、14、28天取材。通过免疫组织化学染色方法,检测肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达,采用光学显微镜观察肺组织病理变化。结果:与模型组比较,补肺汤组、强的松组各时间点肺泡炎和肺纤维化程度均较轻;与模型组比较,各时间点强的松组、补肺汤组肺组织MMP-9蛋白表达明显减低;与模型组比较,各时间点的强的松组、补肺汤组肺组织TIMP-1蛋白表达明显降低。结论:补肺汤能够抑制早期肺泡炎的发生,降低肺组织MMP-9与TIMP-1蛋白表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,改善细胞外基质的异常代谢,从而抑制或延缓博莱霉素致大鼠肺纤维化的发生和发展。     

真武汤抗大鼠肾间质纤维化作用的研究

目的:观察真武汤对肾间质纤维化大鼠的作用,并通过观察真武汤对肾脏Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维的影响,探讨真武汤抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用"单肾切除加腺嘌呤灌胃法"建立大鼠慢性肾衰竭模型。治疗组予真武汤9.8,2.45g.kg-1 ig,对照组予尿毒清溶液ig。给药4周后处死大鼠取血测肌酐(Cr),尿素氮(BUN),钙(Ca2+)、磷(P3+),肾脏切片分别进行HE染色、PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色、Mallory染色,光镜下观察大鼠肾组织的病理形态学改变,HE染色进行肾小管间质病变半定量分析,PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色进行肾脏组织病理学图像分析。结果:在肾间质纤维化面积、肾小球系膜积分吸光度等方面,真武汤高、低剂量组的作用优于模型组和尿毒清组,P0.05。真武汤高、低剂量组在肾间质中Ⅰ,Ⅲ型胶原分布面积等方面的作用与模型组比,P0.05。结论:真武汤具有抗肾间质纤维化的作用,其作用途径可能与抑制Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维增生有关。     

止喘汤对哮喘大鼠模型气道重构中MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的:观察中药止喘汤对哮喘大鼠气道重构的干预,并探讨其对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法:50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德(BUD)组、黄芩组及止喘汤组5组。采用卵清白蛋白(OVA)致敏加激发法复制大鼠哮喘模型,苏木精-伊红染色测气道形态学参数,免疫组化染色测定气道壁MMP-9、TIMP-1及IV型胶原含量。结果:哮喘组较正常组大鼠气道壁明显增厚,MMP-9、TIMP-1表达增多(P<0.01)。用中药和BUD干预后大鼠气道壁明显变薄,MMP-9、TIMP-1表达减少,与哮喘组比较有统计学意义(P<0.01);其中复方组肺纤维化轻于单味组,各项指标比较有统计学意义(P<0.05)。大鼠气道壁的厚度、IV型胶原含量、MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP间有相关关系。结论:中药具有干预哮喘大鼠模型气道重构的作用,这些作用可能是通过调节MMP-9和TIMP-1而实现的,基于中医基本病机证型的复方优于单味中药。     

妇科止血消痛颗粒对产后子宫复旧不全大鼠模型子宫MMP-9、TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察妇科止血消痛颗粒对产后子宫复旧不全大鼠子宫组织基质金属蛋白-9（MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）表达的影响,探讨妇科止血消痛颗粒治疗产后子宫复旧不全的机制。方法建立大鼠产后子宫复旧不全病理模型,随机分为模型组、产妇康组及妇科止血消痛颗粒高、中、低剂量组。造模第1日开始各给药组分别灌胃相应药物,空白组、模型组予蒸馏水灌胃。均每日1次,连续7d。采用原位杂交法检测各组大鼠子宫组织中MMP-9、TIMP-1基因的表达水平。结果各组大鼠子宫内膜中均可检测到MMP-9和TIMP-1的杂交信号。模型组MMP-9表达强度明显超过空白组,TIMP-1表达弱于空白组。妇科止血消痛颗粒高、中、低剂量组及产妇康组,MMP-9 mRNA的表达明显降低（P〈0．05,P〈0．01）;妇科止血消痛颗粒中、低剂量组与产妇康组MMP-9 mRNA的表达强度相似,但均低于妇科止血消痛颗粒高剂量组的表达强度（P〈0．01）。妇科止血消痛颗粒高剂量组及产妇康组TIMP-1 mRNA的表达明显升高（P〈0．05）,且表达相似。结论妇科止血消痛颗粒通过抑制MMP-9的高表达,升高TIMP-1的低表达,从而发挥治疗产后子宫复旧不全的作用。     

雄芍汤对免疫性肝纤维化大鼠MMP-9和TIMP-1的影响

目的:研究雄芍汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响.方法:大鼠分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊对照组(0.525 g·kg-1)、雄芍汤预防组(7.9 g·kg-1)和高、低剂量组(15.8,7.9g·kg-1).采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型.酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清MMP-9含量,实时荧光定量PCR技术检测肝组织中TIMP-1 mRNA的表达.结果:雄芍汤7.9 g·kg-1剂量预防组MMP-9含量显著高于模型组(P＜0.01).雄芍汤15.8 g·kg-1剂量组TIMP-1 mRNA表达显著低于模型组(P＜0.01).结论:雄芍汤可以促进免疫性肝纤维化大鼠血清MMP-9生成,抑制大鼠肝组织TIMP-1 mRNA表达.调节MMP与TIMP的协调平衡可能是雄芍汤抗肝纤维化的机制之一.     

膈下逐瘀汤对免疫性肝纤维化大鼠肝组织MMP-9和TIMP-2表达的影响

目的:观察膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清腹腔注射诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤灌胃给药干预。消化法检测肝组织羟脯氨酸含量,ELISA法检测肝组织MMP-9和TIMP-2蛋白含量,实时定量RT-PCR检测肝组织MMP-9和TIMP-2 mRNA表达。结果:与模型对照组比较,膈下逐瘀汤可显著降低肝组织羟脯氨酸、MMP-9及TIMP-2蛋白含量,下调肝组织MMP-9、TIMP-2 mRNA水平。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与调节MMP-9和TIMP-2的表达有关。