颌面部爆炸伤后组织血栓素A2和前列环素I2对兔脑的作用机制

Blastinjuryofneckandheadisamainwoundtypeinaccident，violenceandwarwound．Andtheskullwillbeimpactednecessarilyduringthosecourses．thromboxaneA２（TXA２）canincreaseresistingforceofcerebralbloodcirculationandprostacyclinI２（PGI２）canpre－ventthebrainviadilatingvessels犤１－２〗．ThehalflifeofTXA２andPGI２isshortinblood，andnoteasytodetectdirectly．Usuallydetectthestablenon－activityproduction－TXB２and６－ketop－PGF１αtorepresentTXA２andPGI２．HereweinvestigatethechangeofTXA２andP…     

血管性痴呆患者血小板活化机制的研究

Excessivelyaggregatingfunctionofplateletplayedtheimpor－tantroleinpathogenesisofacutecerebralinfarction（ACI）．Inthecurrentstudy，restplatelet犤Ca２＋犦，Ca２＋，Mg２＋－ATPaseactivityweremeasuredtoconfirmtheirrelationshipwithvasculardementiaandcorrelationbetween犤Ca２＋犦withCa２＋，Mg２＋－ATPase．１Subjectandmethod１．１Subject３２subjectswereincludedinvasculardementia（VD）group．Amongthesepatients，２０weremale，１２werefemaleaged６１～７８（meanage：６６years）．Diseasecourselas…     

乳腺肿瘤C－erbB－2表达及预后意义的研究

应用免疫组化方法、观察了１０１例乳腺肿瘤Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因的表达状况，１３例良性病变全部阴性，８８例乳腺癌中，阳性者４８例（５４．５％），阴性者４０例（４５．５％），两者间差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。还发现Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达多见于浸润性导管癌（１８／３３例）、单纯癌（２２／３４例）及浸润性小叶癌（３／１０例）。Ｃ－ｅｒｂＢ－２在乳腺癌中的表达与肿瘤大小、分级无显著关系，而与淋巴结转移有关。５５例乳腺癌进行了随访，Ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性者，其死亡率（６４．５％）显著高于阴性者（１６．７％）。表明Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达和乳腺癌患者预后有关。     

Relationship of peripheral blood re lated factors changes and nerve function defection degree in acute c erebral infarction patients

INTRODUCTIONInflammatoryreactioninducedbycellimmunologyistheimportantmechanismofneuroninjury，degenertionandprogressivenecrosisduringischemia－reperfusioncourse犤１－２犦．Humanleucocyteantigen－II（HLA－II）ismainlyexpressedbypresentingantigenpresentingcell（APC）．WhileHLA－DRantigenexpressedmainlyontheactivatedTcellsandhadahighlyspecificityandplayedanimportantroleinimmunologyreactionandimmunologyadjustment犤２犦．Inourexperi－ment，weexploredresearchinCD３／CD（１６＋５６）andC…     

Analysis of immunological changes in 36 patients with Parkinson''''s disease

Background：Parkinson’sdisease（PD）isadegenerationdiseasewiththemainlesionbeinginthesubstantianigraandcorpusstriatum．Thecurrenttreatmentisstilldopaminepreparation，butthiscannotpreventtheprogressofthedisease．Themechanismisbelievedtoberelatedtoimmunologicalfactors．Objective：DiscusstheimmunologicalchangesinParkinson’sdiseaseDesign：DeterminetheamountofTlymphocytesubpopulation，tumornecrosisfactor（TNF－α）andinterleukin－２（IL－２）withim－munofluorescencemethodandradio－immunityas…     

白细胞介素3及其受体在甲亢患者外周血淋巴细胞体外诱生的…

应用放射免疫分析法观察了甲亢患者外周血淋巴细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）产生及其受体（ＩＬ－２Ｒ）表达的变化。结果表明，未治疗的甲亢，ＩＬ－２，膜ＩＬ－２Ｒ（ｍＩＬ２－Ｒ）显著降低。可溶性ＩＬ－２Ｒ（ｓＩＬ２－Ｒ）显著升高，与正常对照比较，均呈现统计学意义（Ｐ值均＜０．００１）。治疗后ＩＬ２－ｍＩＬ－２Ｒ上升，ｓＩＬ－２Ｒ水平下降，均恢复至正常水平。提示：甲亢患者体内存在细胞免疫的异常，ＩＬ－２，Ｉ     

高血压病患者淋巴细胞内腺苷脱氨酶与IL—2相关性的研究

采用分光光度法及双抗夹心法对２４例高血压病（ＥＨ）患者的淋巴细胞内膜苷脱氨酶（ＬＡＤＡ）活性及白细胞介素２（ＩＬ－２）水平进行检测，并与２０例正常人对照，结果表明：ＥＨ患者ＬＡＤＡ活性，ＩＬ－２水平均低于对照组（Ｐ均小于０．０１）；ＥＨ患者ＩＬ－２与血压呈负相关（ｒ＝－０．８２５，Ｐ〈０．０５）；ＥＨ患者ＬＡＤＡ活性与ＩＬ－２呈正相关（ｒ＝７．９９１，Ｐ〈０．０５）结果说明：ＥＨ患者存在免疫改变，     

类风湿性关节炎患者血清白细胞介素的检测

为了解类风湿性关节炎（ＲＡ）患者的免疫损伤机理，应用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测３８例ＲＡ患者血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）和白细胞介素８（ＩＬ－８）含量，并检验其相关性。结果：（１）ＲＡ患者血清ｓＩＬ－２Ｒ和ＩＬ－８水平均比正常对照组显著升高（Ｐ＜０．０１）；血清ｓＩＬ－２Ｒ浓度在类风湿因子（ＲＦ）阳性与阴性组中差异有显著性（Ｐ＜０．０１）；（２）ＲＦ阳性患者血清ｓＩＬ－２Ｒ与ＩＬ－８浓度呈正相关（ｒ＝０．７４，Ｐ＜０．０５）。提示ＲＡ患者Ｔ细胞异常活化以及免疫调节功能紊乱。     

黄芪和大青叶对病毒性心肌炎小鼠的保护作用

ThisresearchaimtoexploreeffectivedrugtherapythroughobservingcurativeeffectofsingledosetraditionalChinesemedicineonmurineviralmyocarditis（VMC）．１Materialandmethod１．１Materials（１）CoxsackievirusB３（CVB３），Nancystrain，whichwasdeliveredbyourexaminationcenter．TransferofcultureonsimplelayHep－２cellfor３times，afterallcellsweresuffered，freezeandmelt３timesrepeatedly，thenstoredat－２０℃．（２）６０Balb／Cmice，６～８weeksold，BW１６～１８g，male，whichweredeliveredbyanimalexamina…     

丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定研究

目的构建含丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心(core,C)蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体,为C蛋白与宿主蛋白相互作用机制研究奠定基础。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增HCV 1b基因型C蛋白基因,经EcoR I和Pst I双酶切后插入到诱饵载体pGBKT7中,构建含HCV C蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-Core,经酶切分析及核酸测序分析加以鉴定。醋酸锂法将pGBKT7-Core转化入酵母菌株Y2HGold,蛋白印迹法检测C蛋白的表达,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母细胞的毒性作用及对报告基因的激活作用。结果重组质粒pGBKT7-Core中的C蛋白基因为576 bp,经核酸测序分析与NCBI中注册的HCV 1b基因型C蛋白基因序列一致;转化酵母菌后检测到C蛋白的表达;HCV C蛋白对酵母菌Y2HGold无毒性,且对报告基因无激活作用。结论含HCV C蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体构建成功,表达稳定。     

基因治疗骨质疏松、骨转移癌的可行性研究

目的研究人骨保护素(OPG)转染小鼠胚胎成肌细胞C2C12后细胞形态及细胞周期的变化。方法采用Westernblot方法证实OPG在真核细胞中表达。对稳定转染OPG基因的C2C12细胞的形态、细胞周期等进行检测。结果成功克隆了人OPG编码区基因并构建了真核表达载体pcDNA3－OPG。结论人OPG编码区基因稳定转染的小鼠胚胎成肌细胞生长状态良好,DNA合成旺盛,无诱导细胞凋亡现象,为采用OPG基因治疗骨质疏松、骨转移癌等的可行性提供了依据。     

重组人单链白细胞介素12融合基因的构建、真核表达及生物学活性测定

目的 探讨用生物学技术获取具有生物学活性的重组人白细胞介素１２（ｒｈＩＬ－１２）的方法。方法 从经佛波醇酯（ＰＤＢｕ）刺激的ＥＢ病毒转化的人Ｂ淋巴母细胞株ＮＣ－３７中提取ｍＲＮＡ,经逆转录－聚合酶链反应分别获得ｈＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５亚单位编码序列的ｃＤＮＡ,运用重组聚合酶链反应技术。将两段基因通过多肽接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ＤＮＡ序列连接后进行基因重组,构建了重组人单链ＩＬ－１２融合基因（ｒｈ－ｓｃＩＬ－１２）。进一步将ｒｈｓｃＩＬ－１２融合基因插入ｐｃＤＮＡ３．１（＋）真核表达载体中,构建ｒｈｓｃＩＬ－１２真核表达载体「ｐｃＤＮＡ３．１（＋）－ｒｈｓｃＩＬ－１２」,转染ＣＯＳ－７细胞,结果 经Ｇ４１８筛选获ＣＯＳ－ｒｈｓｃＩＬ－１２融合蛋白稳定表达株,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ显示该融合蛋白相对分子质量为７     

SARS病毒M蛋白真核表达载体的构建与表达

目的 构建SARS病毒M蛋白片段真核表达载体,并检测其在Vero细胞中的表达.方法 在PCR引物下游引入Flag序列,以PCR从质粒pGEX-6P-1-SARS-M中扩增M蛋白编码基因片段,将酶切后的PCR产物克隆至pcDNA3.1(+)中,构建并鉴定重组质粒pcDNA3.1(+)-SARS-M.重组质粒经Superfect转染Vero细胞,Western blot检测基因表达情况.结果 重组质粒经酶切鉴定和基因测序显示构建正确;Western blot检测表明重组M蛋白片段在Vero细胞中获得正确表达.结论 成功构建SARS病毒M蛋白片段真核表达载体,并在Vero细胞中获得正确表达,为进一步研究M蛋白的功能奠定了基础.     

大鼠少突胶质细胞转录因子2基因真核表达载体的构建

背景：碱性螺旋-环-螺旋转录因子少突胶质细胞转录因子2在脊髓的少突胶质细胞的分化过程中起着关键性的作用。目的：构建大鼠少突胶质细胞转录因子2基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达。方法：从新生大鼠脊髓组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将少突胶质细胞转录因子2cDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-Olig2以脂质体法转染至COS-7细胞中,反转录PCR鉴定少突胶质细胞转录因子2mRNA的表达,免疫印迹法检测少突胶质细胞转录因子2蛋白质表达水平。结果与结论：克隆了少突胶质细胞转录因子2的cDNA,并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-Olig2,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;转染72h时免疫印迹分析显示,COS-7/pEGFP-N1-Olig2实验组COS-7细胞表达Olig2-GFP融合蛋白。提示实验成功构建pEGFP-N1-Olig2真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。     

日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达

目的从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出信号蛋白Sj14-3-3编码基因，并亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法提取日本血吸虫成虫总RNA，分离mRNA，RT-PCR法制备cDNA．并扩增出Sj-4-3-3编码基因，通过线性TA克隆载体pGEM-T连接，亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，经转染至COS-7细胞中表达，Western blotting鉴定。结果RT-PCR产物、pGEM-T-Sj14-3-3及pcDNA3．1( )-Sj14-3-3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段，经SDS-PAGE及Western blotting鉴定后的分子量为29kD。结论真核表达重组质粒pcDNA3．1( )-Sj14-3-3在COS-7细胞中的表达产物是一分子量为29kD的蛋白，并能被抗Sj14-3-3单克隆抗体识别。     

基因ifi56在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的表达及其真核表达质粒的构建

本研究探讨ifi56基因在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的表达,构建人ifi56真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位情况。用RT-PCR技术检测APL细胞NB4经维甲酸处理不同时间后ifi56的表达,并从白血病细胞NB4中扩增ifi56全长编码序列,将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,转染到293T细胞中,提取细胞蛋白,用Western blot方法检测蛋白表达情况,荧光显微镜检测IFI56的定位。结果表明,ifi56在未经处理的NB4细胞中几乎检测不到,当用维甲酸处理72小时后明显升高,并成功将ifi56插入到质粒pEGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为83 kD。IFI56重组蛋白在293T细胞内主要定位于细胞胞浆中。结论:ifi56表达随着APL细胞分化明显升高,成功构建ifi56基因真核表达载体,IFI56蛋白主要定位于细胞浆。     

分泌人内皮抑素基因工程细胞系的建立

目的建立稳定的基因工程细胞系。方法将含有白细胞介素-2（IL-2）分泌肽的人endostatin全长cDNA插入真核表达载体pSNA2.0,产生重组质粒pSNA2.0/hEndostatin,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK293细胞中,G418筛选后得到阳性克隆hED/293,采用Western-blot检测转染细胞上清中endostatin蛋白的表达。结果hED/293细胞株培养上清中有endosta-tin蛋白的表达,分子量为20000。结论重组pSNA2.0/hEndostatin真核表达载体构建正确,转染HEK293细胞后可有效的表达人endostatin蛋白,并能分泌到细胞外。