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1.
目的探讨吉非替尼在肺癌突变细胞株凋亡中的作用及可能机制。方法将H3255肺腺癌细胞株培养至对数生长期,将其随机分为5组,吉非替尼组加入1μmol/L吉非替尼培养48 h;DMSO对照组仅加入0.1%DMSO培养48 h;转染组以促凋亡蛋白(BIM)重组腺病毒转染,阴性对照组以不带BIM的空载体转染,空白对照组不转染,继续培养48 h。采用Annexin PI单染法检测各组细胞凋亡率;Western blot法检测各组BIM蛋白表达。结果吉非替尼组细胞凋亡率及BIM蛋白表达明显高于DMSO对照组(P均<0.01),与阴性对照组、空白对照组比较,转染组细胞凋亡率及BIM蛋白表达显著增高(P均<0.01),吉非替尼组与转染组细胞凋亡率无明显差异。结论吉非替尼对存在EGFR突变的H3255肺腺癌细胞株有明显促凋亡作用,且促凋亡作用与BIM重组腺病毒转染效果相当,其机制可能与增强BIM表达有关。 相似文献
2.
目的 探讨外源性血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对肺癌细胞生物学行为的影响及机制。方法 将A549细胞分为BK组、VC组及SC组,BK组不转染,VC组及SC组均于EP管中加入200μL转染液和4μL脂质体,VC组及SC组分别加入5μg NC mimics、5μg miR-21 mimics。转染72 h后,采用免疫印迹法检测A549细胞中TCAB1蛋白表达;MTT法检测A549细胞生存率;Transwell小室检测A549细胞侵袭情况;流式细胞仪检测A549细胞凋亡率。结果 SC组A549细胞中VEGF-C mRNA表达低于BK组、VC组(P均<0.05),转染成功。BK组、VC组中VEGF-C mRNA表达相似(P>0.05)。干预12、24、48、72 h时,BK组与VC组A549细胞生存率比较差异无统计学意义(P均>0.05);SC组A549细胞生存率低于BK组、VC组,组间比较差异有统计学意义(P均<0.05)。BK组与VC组A549细胞侵袭细胞数目比较差异无统计学意义(P>0.05),SC组A549细胞侵袭细胞数目低于BK组、VC组,三组比较... 相似文献
3.
背景:X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是~种潜在的肿瘤抑制基因,能拮抗XIAP的抗凋亡作用。目的:探讨Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导胰腺癌细胞株SW1990凋亡的作用及其可能机制。方法:构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和对照病毒Ad5/F35一Null,感染胰腺癌细胞株SW1990。分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法检测XAF1mRNA和蛋白表达,以Annexin V—FITC/PI双染法和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP、Caspase.8、Caspase.9和细胞色素C的表达。结果:Ad5/F35.XAF1感染SW1990细胞后。XAF1mRNA和蛋白表达均显著增高,并能诱导细胞凋亡,同时伴有Caspase.3、PARP、Caspase.8和Caspase-9活化增强以及细胞色素C蛋白表达增加。结论:重组腺病毒Ad5/F35-XAF1感染胰腺癌细胞株SW1990后.能明显诱导细胞凋亡,其机制可能与XAFI激活了死亡受体途径和线粒体凋亡途径有关。 相似文献
4.
目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予40、80、160μg/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物(实验组),同时设对照组(0.04%DMSO+肺癌A549细胞)。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测用药后DNA梯状条带、TUNEL检测用药后肺癌A549细胞凋亡率的变化、免疫组化SP法检测用药后肺癌A549细胞Survivin蛋白表达变化、RT-PCR法检测用药后A549细胞Survivin mRNA的表达。结果实验组细胞DNA凝胶电泳均出现凋亡细胞所特有的DNA梯状条带图谱,而对照组细胞未出现。各实验组细胞随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量—效依赖性;其Survivin蛋白和mRNA表达均低于对照组(P均〈0.05),亦存在时相性和量—效依赖性。结论藤梨根乙酸乙酯提取物可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Survivin蛋白和mRNA表达有关。 相似文献
5.
《中国老年学杂志》2017,(8)
目的探讨miR-21对肺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法培养人肺癌细胞HBE、H460、A549和H446,将实验分为miR-21 inhibitor组、miRNA scramble组、空白对照组。荧光定量检测肺癌细胞H460、A549和H446 miR-21的表达;荧光定量PCR检测将miR-21 inhibitor和miRNA scramble转染到培养至对数生长期的人肺癌细胞H460后,对照组不转染的各组细胞的表达量;MTT实验检测转染miR-21 inhibitor后对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染miR-21 inhibitor后对细胞凋亡的影响;Western印迹检测与凋亡相关蛋白的活性。结果肺癌细胞H460、A549和H446miR-21的表达显著高于正常肺癌细胞HBE(P<0.01),由于肺癌细胞株H460的miR-21表达在3个细胞株中高表达,因此选择肺癌细胞株H460做后续研究;将miR-21 inhibitor组和miRNA scramble组转染到肺癌细胞株H460后,荧光定量PCR显示,miR-21 inhibitor组的miR-21的相对表达量为显著低于空白对照组(P<0.01),miRNA scramble组的相对表达量与空白对照组无差异(P>0.05);MTT结果显示,转染4 d后,miRNA scramble组与空白对照组细胞增殖率无差异(P>0.05),而miR-21 inhibitor组显著低于空白对照组(P<0.05),且随时间延长,细胞增殖率逐渐下降;流式结果显示,与空白对照组和miRNA scramble组比较,miR-21 inhibitor组细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);Western印迹显示,miR-21 inhibitor组Cleaved-caspase-3和Bax蛋白的表达显著高于miRNA scramble组和空白对照组,而miR-21 inhibitor组Bcl-2蛋白的表达显著低于miRNA Scramble组和空白对照组(P<0.05)。结论下调miR-21的表达,可抑制肺癌细胞H460的生长,增加细胞的凋亡,其作用机制可能与Bcl-2家族的调节有关。 相似文献
6.
目的 以重组腺病毒载体介导细胞因子诱导的凋亡抑制分子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)基因转染人肺腺癌细胞系A549,观察并鉴定该基因在腺癌细胞中的表达及其对细胞生长和细胞周期的影响.方法 构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因(Ad-CIAPIN1),转染到低水平表达CIAPIN1的人肺腺癌细胞系A549,采用Western blot检测目的蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果 外源性CIAPIN1基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达;CIAPIN1能显著抑制A549的生长(P<0.01);流式细胞仪检测显示肺癌细胞发生凋亡,并出现明显的G1/S期阻滞现象.结论 以腺病毒为载体介导CIAPIN1基因在A549细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡及参与细胞周期调控的作用.提示Ad-CIAPIN1基因可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用. 相似文献
7.
藤梨根提取物抑制肺癌A549细胞增殖作用机制研究 总被引:5,自引:1,他引:4
目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物(RAE)对肺癌A549细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的RAE进行干预,流式细胞术检测用药后A549细胞凋亡率变化,免疫组化SP法检侧细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化,RT—PCR法检测细胞Bcl-2、Bax mRNA表达,激光共聚焦显微技术测定细胞胞内Ca^2+浓度变化。结果各治疗组给予RAE作用后细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量效依赖性;用药后A549细胞Bcl-2蛋白和mRNA表达降低,而Bax蛋白和mRNA表达上调,细胞内Ca^2+浓度明显升高,与对照组比较均有显著统计学差异(P均〈0.01),亦存在时相性和量效依赖性。结论RAE可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低其Bcl-2蛋白和mRNA表达、上调Bax蛋白和mRNA表达、升高细胞内Ca^2+浓度有关。 相似文献
8.
XAF1基因在肝癌细胞凋亡中的诱导作用 总被引:1,自引:1,他引:0
背景:X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)与凋亡抑制和肿瘤细胞耐药现象密切相关。目的:研究XIAP相关因子1(XAF1)基因抑制人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2增殖和诱导凋亡的作用。方法:以腺病毒Ad5/F35为载体,构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照空病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白(EGFP),分别以相同感染复数(MOI)感染人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2,并设立空白组作为对照。作用48h后,以荧光显微镜检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达;以MTT法检测细胞活力;以Annexin V—FITC/PI双染法和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率。结果:Ad5/F35-EGFP感染48h后,几乎所有Bel-7404和HepG2细胞均表达EGFP。Ad5/F35-XAF1感染48h后,两种肝癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达均明显增高.细胞活力呈剂量依赖性地降低,细胞凋亡率显著增加。结论:重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2中的感染效率高,XAF1在不同的肝癌细胞株中恢复表达后,能显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。 相似文献
9.
目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照LipofectamineTM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白... 相似文献
10.
目的探讨弓形虫Ⅰ型和Ⅱ型ROP16蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖、周期和凋亡的影响及分子机制。方法将构建好的Ⅰ型和Ⅱ型ROP16重组慢病毒表达载体(A549-RH ROP16、A549-Me49ROP16)感染A549细胞,经嘌呤筛选稳定后获得单克隆过表达细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot法鉴定过表达效果,免疫荧光法检测其定位。CCK-8法测定A549细胞的增殖活性。流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化水平。Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53和细胞周期相关蛋白p21、CDK6、CyclinD1的蛋白水平。结果Western blot和q-PCR检测结果显示,重组慢病毒表达载体转染A549细胞72h后其ROP16mRNA和蛋白都有明显表达(P<0.05)。cck8检测结果显示,Ⅰ型ROP16蛋白抑制A549细胞增殖(P<0.05)。流式细胞术检测显示,与对照组比较,Ⅰ型ROP16过表达组中细胞凋亡率下降20.69%,G1期细胞百分由原来的63.2%升高到83.2%。Western blot结果显示促细胞周期G1/S转化因子CDK6、CyclinD1蛋白表达明显降低,而细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21表达明显升高(P<0.05);促凋亡因子Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53蛋白的表达明显升高,抗凋亡因子Bcl-2表达受到抑制(P<0.05)。而Ⅱ型ROP16过表达组与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论Ⅰ型ROP16蛋白过表达可诱导人肺腺癌A549细胞周期停滞和细胞凋亡。 相似文献
11.
目的 观察微小RNA(miRNA)-146a转染H9c2心肌细胞高糖培养下NF-κBp65和Ι型胶原表达。 方法 高糖培养H9c2细胞系,分为增强组(EC)、阴性对照组(NC)、空白对照组(BC)。采用Lipofectamine 2000 Transfection Reagent分别转染miRNA-146a增敏剂(50 nmol/L)、错义链(50 nmol/L)、PBS,于48 h后Real-time PCR测定miRNA-146a水平,Western-blot测定NF-κBp65和Ⅰ型胶原水平。 结果 转染后,EC组H9c2细胞miRNA-146a水平高于NC组和BC组(P〈0.05),NF-κBp65和Ⅰ型胶原蛋白表达量低于NC组和BC组(P〈0.05)。 结论 miRNA-146a参与了高糖培养H9c2心肌细胞纤维化,其机制与NF-κBp65和Ι型胶原表达有关。 相似文献
13.
14.
背景 非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85%左右,由于易错失最佳手术切除时机,且放化疗效果不佳,导致生存率偏低.而着丝粒蛋白F(CENPF)是在多种癌症中高表达的分子,探讨其对肺癌细胞生物学行为的影响,将有助于NSCLC的靶向治疗.目的 探讨CENPF在NSCLC组织中的表达及其对A549细胞生物学行为的影响.方法 ... 相似文献
15.
背景:外源性肿瘤坏死因子(TNF)-α联合化疗药物对肿瘤的疗效较单独应用更佳,为肿瘤治疗提供了新的方向。目的:对裸鼠人肝癌移植瘤模型行脂质体介导的TNF-α基因瘤内转染,研究肝癌移植瘤的生长抑制情况及其机制。方法:经脂质体介导,以真核表达质粒pSVK3-TNF-α分别转染人肝癌细胞株SMMC-7721和裸鼠皮下SMMC-7721细胞移植瘤。测定SMMC-7721细胞的TNF-α浓度,甲基噻唑基四唑(MTT)法测定细胞杀伤率,流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞周期和凋亡情况。结果:TNF-α转基因治疗裸鼠人肝癌移植瘤结束第5d,移植瘤体积为(75.28±35.35)mm^3,显著低于对照组的(326.45±103.64)mm^3(P〈0.05)。TNF-α基因体外转染SMMC-7721细胞24、48、72h后,基因转染组每106个细胞的TNF-α表达量分别为(1680±187)pg、(1702±205)pg和(1650±164)pg,细胞杀伤率分别为(37.1±2.4)%、(79.4±4.3)%和(84.2±4.6)%。基因转染72h后,SMMC-7721细胞增殖指数为(30.5±3.2)%,显著低于对照组的(46.1±3.9)%(P〈0.05);凋亡指数为(10.0±2.1)%,显著高于对照组的(2.7±0.4)%(P〈0.01)。结论:脂质体介导的TNF-α基因转染裸鼠人肝癌移植瘤可明显抑制肿瘤生长,其机制可能为影响肿瘤细胞生长周期以及诱导肿瘤细胞凋亡。 相似文献
16.
目的探讨整合素β1在肺癌发生、发展中的作用。方法应用基因芯片技术、基因表达的限制性分析(RAGE)法和流式细胞仪法检测整合素β1在肺腺癌细胞株A549、肺泡细胞癌细胞株H1650及小细胞肺癌细胞株DMS53中的表达情况。结果整合素β1在三种肺癌细胞中均出现高表达,以A549中表达最高,在非小细胞肺癌A549和H1650中表达显著高于在小细胞肺癌DMS53中的表达(P〈0.05)。结论整合素β1在非小细胞肺癌侵袭及转移中可能发挥一定作用,有望成为肿瘤治疗的靶基因。 相似文献
17.
目的探讨C-FLIP siRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响。方法常规方法培养大肠癌SW480细胞,待细胞处于对数生长期时,进行转染,分别转染C-FLIP siRNA重组体(观察组)和nonsilencing空载体(NC组),转染后24 h,将细胞传至96孔板中,两组转染细胞各传32孔,每8孔为一组平行孔,分别检测16 h、24 h、48 h、72 h细胞的增殖情况,并检测两种转染细胞中GHR受体mRNA和蛋白的表达情况。结果 C-FLIP siRNA重组体转染率达75%;大肠癌SW480培养后各时间点的吸光度值相比,差异有统计学意义(F=7.329,P=0.016),观察组的吸光度值均小于对照组,并且随着时间的延长,观察组吸光度值增加越来越慢,直至不增加;两组GHR受体蛋白水平相比,对照组高于观察组,差异有统计学意义(t=73.140,P=0.000);GHR mRNA表达观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=12.685,P=0.000)。结论 C-FLIP siRNA重组体能够有效抑制大肠癌细胞株中SW480的增殖。 相似文献
18.
目的探讨长链非编码RNA GIHCG(lncRNA GIHCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)恶性表型的影响。 方法使用qRT-PCR法分别检测50例NSCLC的肿瘤组织及其癌旁组织中lncRNA GIHCG及正常人支气管上皮细胞系E16HB,NSCLC细胞系A549、H1299、H1650、H2087中lncRNA GIHCG的表达。分别使用小干扰RNA(siRNA-1、siRNA-2)及对照转染A549和H1299细胞,实验设siRNA-1转染组、siRNA-2转染组、阴性对照组和空白对照组。各组转染48 h后采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞周期变化。 结果qRT-PCR结果显示,lncRNA GIHCG在肺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,同时非小细胞肺癌细胞系A549、H1299、H1650、H2087中lncRNA GIHCG的表达均高于16HBE细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,与空白对照组和阴性对照相比,siRNA-1组和siRNA-2组细胞存活率明显下降,穿膜细胞数明显减少,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞减少,差异均有统计学意义,而阴性对照组和空白对照组上述指标差异均无统计学意义。 结论lncRNA GIHCG高表达于NSCLC组织及细胞系中,沉默lncRNA GIHCG表达可明显抑制NSCLC恶性生物学表型。 相似文献
19.
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)linc00261在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法纳入中南大学湘雅医学院附属海口医院2017年2月至2018年9月收治的100例NSCLC患者,采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者癌组织及对应癌旁组织中lncRNA linc00261的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。通过设计合成lncRNA linc00261表达质粒,转染A549细胞,采用qRT-PCR检测转染细胞中lncRNA linc00261表达水平,使用MTT法检测转染细胞的增殖情况,使用流式细胞术检测转染细胞的凋亡情况。结果qRT-PCR检测结果显示,100例NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261的平均相对表达量(0.15±0.06)明显低于癌旁组织(1.19±0.23),差异有统计学意义(t=7.753,P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理组织类型的NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量比较差异均无统计学意义(P值均>0.05),但不同组织分化程度、临床分期及有无淋巴结转移患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量差异均有统计学意义(P值均<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞中lncRNA linc00261的表达量显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(F=5.196,P<0.001)。MTT检测结果显示,转染24 h后,3组之间细胞增殖能力差异无统计学意义(F=0.183,P>0.05);转染48、72、96 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的细胞增殖能力显著低于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(t=3.187、5.549,P值均<0.05)。流式细胞书检测结果显示,转染48 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的凋亡比例显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(χ^2=4.175、6.093,P值均<0.05)。结论lncRNA linc00261在NSCLC患者癌组织中表达下调,并与NSCLC的发生发展有关,其在NSCLC中可能发挥抑癌基因作用,过表达lncRNA linc0026可抑制NSCLC细胞增殖并诱导凋亡,有可能成为NSCLC潜在的治疗靶点。 相似文献
20.
目的探讨黄连素(BR)对大鼠H9e2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后凋亡的影响及其作用机制。方法:将培养的H9c2心肌细胞随机分为:正常对照(NC)组、单纯BR组、H/R组、药物低剂量BR(1.5×10-6moVL)组及高剂量BR(1.5×10-4moL/L)组。处理结束后,用MrITr比色法检测H9c2心肌细胞的活力,用Hoechst33258染色检测细胞核形态的变化,用Western blot法检测Cytochrome-C(Cyt-C),Caspase-9蛋白的表达。结果:与NC组比较,单纯BR组对H9c2心肌细胞无影响。与H/R组比较,低、高剂量BR组细胞的活力分别为(60.8±1.9)%和(81.2±1.9)%明显上升(P〈0.01),心肌细胞的凋亡率明显减少,Western blot的结果显示,BR可抑制凋亡相关蛋白Cyto-chrome-C、Caspase-9的表达。结论:BR对H9c2心肌细胞H/R损伤后的凋亡具有显著的抑制作用,其可能的机制与抑制的Cyt-C的释放和抑制Caspase-9的表达有关。 相似文献