烧伤患者外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达的变化

目的观察烧伤患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化。方法选取深II度以上烧伤30%~50%TBSA烧伤患者23例,伤后48 h取外周血20 mL,同时抽取健康献血者(设为对照组)12例,外周血20 mL。常规方法分离出单个核细胞,用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的小鼠抗人TLR4抗体对外周血单个核细胞进行免疫染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞率及其平均荧光强度(MFI)。结果烧伤后48 h,患者外周血单个核细胞TLR2-FITC阳性细胞数量上升,为(57.57±18.56)%,与对照组的(26.32±10.31)%相比,P<0.05;细胞表面TLR2-FITC荧光强度下降,TLR2-FITC MFI为58.5±18.76,低于对照组(69.79±23.42);TLR4-PE阳性率为(29.84±13.28)%,与对照组的(12.75±5.18)%相比,P<0.05;TLR4-PE MFI减弱,与对照组相比,P<0.05。结论烧伤患者外周血单个核细胞TLR2/4阳性数量均升高,而TLR2/4表达强度降低。     

Toll样受体4在血管性痴呆大鼠海马长时程表达的动态变化

目的 观察Toll样受体4(TLR4)在血管性痴呆(VD) 模型大鼠海马的表达及其动态变化,探讨TLR4介导的炎症反应在VD大鼠学习记忆障碍中的作用.方法 采用双侧颈总动脉反复夹闭再灌注,同时腹腔注射硝普钠建立VD大鼠模型,在15d、1个月、2个月和4个月等时间点,采用Morris水迷宫试验检测假手术组和模型组大鼠学习记忆能力的变化,免疫荧光技术观察两组大鼠海马TLR4形态、数量及表达的变化.结果 与假手术组相比,模型组大鼠EL均明显延长(P＜0.01),且模型组各时间点EL随时间的延长而逐渐延长.模型组大鼠海马TLR4表达比假手术组明显增多;组间比较,随造模手术后时间的延长,15d和1个月时间点间TLR4阳性细胞在海马CA1区逐渐增加,2个月和4个月时间点间则在海马CA1区和DG区均明显增多趋势.结论 TLR4介导的炎症反应对VD大鼠长时间海马损伤发挥重要作用,对其学习记忆功能障碍的发生发展也可能起到重要作用.     

TLR2和TLR4在人颈动脉硬化斑块中的表达

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在人颈动脉硬化斑块中的表达及其与斑块形成的关系.方法 根据术后组织病理学报告选择性收集36例新鲜颈动脉硬化斑块,其中软斑组12例,硬斑组12例,混合斑组12例,以及12例正常脾动脉组织作为对照组,采用RT-PCR检测标本组织中TLR2及TLR4 mRNA的表达水平;应用免疫组化检测TLR2和TLR4蛋白在标本组织中的表达.比较不同性质颈动脉硬化斑块组织TLR2和TLR4的mRNA及蛋白表达水平.结果 RT-PCR结果显示颈动脉硬化斑块组织中TLR2和TLR4相对水平分别为(0.926±0.047)和(1.040±0.056).显著高于脾动脉组织的(0.646±0.033)和(0.691±0.031)(P＜0.05);免疫组化结果显示TLR2和TLR4在颈动脉硬化斑块中相对水平分别为(135.295±17.787)和(130.368±14.969),显著高于脾动脉组织的(82.396±6.668)和(98.898±9.089)(P＜0.05);且TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达上调水平相关,TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达水平与斑块性质有关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR2及TLR4在颈动脉硬化斑块组织中高表达;TLRs信号通路可能促进了颈动脉硬化程度的进展.     

肝硬化患者小肠细菌过度生长与外周血内毒素水平、TLR2、TLR4表达的关系

目的 探讨肝硬化患者小肠细菌过度生长与内毒素及TLR2、TLR4表达的关系。方法 58例肝硬化患者和26例健康志愿者,采用显色基质鲎试剂试管法检测外周血内毒素浓度,流式细胞术检测外周血PBMC表面TLR2、TLR4的表达,乳果糖氢呼气试验（LHBT）评估小肠细菌过生长情况。结果 肝硬化组SIBO发生率为43.10%,显著高于健康对照组的7.69%（χ²=10.32,P=0.001）;肝硬化组LHBT小肠集值、外周血内毒素浓度、TLR2、TLR4高于健康对照组（t值分别为11.573、9.958、12.380、10.319,P均<0.05）;在肝硬化患者中SIB0阳性患者LHBT集值、外周血内毒素浓度、TLR2、TLR4水平高于SIBO阴性患者（t值分别为12.746、8.067、11.804、6.258,P均<0.05）。Pearson相关分析结果显示,肝硬化组、肝硬化SIBO阳性组的LHBT小肠集值与内毒素浓度、TLR2、TLR4呈正相关（P均<0.05）,且内毒素浓度与TLR2和TLR4呈正相关（P均<0.05）。结论 肝硬化患者小肠细菌过度生长更易出现高内毒素血症,并通过TLR2、TLR4的高表达引发炎症损伤,加重肝硬化病情。     

腹膜透析液对腹膜间皮细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖（dextrose）腹膜透析液、艾考糊精（icodextrin）腹膜透析液对人腹膜间皮细胞 Toll 样受体2（TLR2）和 TLR4表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代（HMrSV5,DMEM ／F12培养基含10％胎牛血清）用于实验研究。 M TT 检测细胞活力,实验分为5组：阴性对照组、1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组、7．5％ icodextrin 组,应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 TLR2和 TLR4的表达水平。结果不同浓度 dextrose 腹膜透析液作用24 h 对腹膜间皮细胞 TLR2和 TLR4的表达无明显影响。作用48 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dex-trose 组 TLR2分别降低（5．5±2．8）％、（31．4±7．5）％、（54．9±1．9）％,TLR4分别降低（32．9±17．6）％、（47．7±13．5）％、（66．4±13．5）％;作用72 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组 TLR2表达分别降低（29．4±14．7）％、（38．9±9．9）％、（63．5±16．5）％,TLR4表达分别降低（59．5±16．8）％、（63．1±9．5）％、（79．2±14．0）％;7．5％ icodextrin 组TLR2和 TLR4表达与阴性对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 dextrose 透析液下调 HM rSV5 TLR2和 TLR4的表达;icodextrin 透析液对 TLR2和 TLR4的表达无显著影响。     

Hp感染性胃癌组织TLR2、TLR4表达及其临床意义

<正>我国是胃癌的高发国家之一,年新发病例约40万例,2009年数据统计显示,胃癌年新发病例约占全部癌症的7.8%,约99万例^[1]。既往研究证实,胃黏膜长期慢性炎症刺激是导致胃癌发生发展的独立危险因素之一^[2-3]。幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)可介导CagA基因及对上皮细胞保护层具穿透能力的HtrA的蛋白酶等毒性因子表达,参与激活胃黏膜组织免疫及炎症反应引发黏膜受损,甚至萎缩,     

多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR2、TLR4表达的影响

目的:观察Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(TLR4)在多柔比星(doxorubicin,DOX)损伤乳鼠心肌细胞中的表达,探讨多柔比星在心肌损伤中的可能发病机制。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞随机分为2组,对照组将心肌细胞悬液换用无血清培养基继续培养,未加任何药物;多柔比星组在培养液中加入多柔比星1 mg/L。作用6 h后免疫组织化学法检测心肌细胞TLR2、TLR4蛋白表达;分别作用2,6 h后用蛋白质印迹法对TLR2、TLR4在心肌细胞的表达水平进行半定量分析。结果:多柔比星组心肌细胞TLR2、TLR4的表达较对照组明显增加(P<0.01)。结论:TLR2、TLR4作为模式识别受体可能介导了多柔比星心肌细胞损伤的固有免疫反应,是多柔比星心肌细胞损伤的机制之一。     

人TLR4及MD2基因反义真核表达载体的构建

目的构建人TLR4及MD2基因反义真核表达载体,为研究其在肺炎症反应中的作用奠定基础.方法通过PCR技术扩增出TLR4及MD2基因片段,然后分别反向插入真核表达载体pEFBOS的多克隆位点,最后对产生的重组子进行酶切和测序鉴定.结果扩增出的TLR4目的片段为2.6 kb,MD2为0.5 kb,并成功地连接到pEFBOS载体上,DNA测序结果也显示插入片段为目的片段.结论成功构建人TLR4及MD2基因反义真核表达载体.     

TLR2、TLR4在乙型肝炎病毒转染的HepG2细胞株的表达

目的探讨乙肝病毒全基因组瞬时转染HepG2细胞后，对HBV抗原分泌，病原识别受体Toll样受体2、4（TLR2、4）的表达及细胞增殖的影响。方法已构建pBlueScript—HBV质粒并经测序，转化宿主菌，摇菌后提取质粒，用Sapl酶切，获得HBV 3．2kb基因组，采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2，IMX检测HBV所分泌抗原，台盼蓝计数检测细胞增殖活性，直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率，并与空白对照绗对比。结果HBsAg利HBeAg的分泌随着转染HBV DNA量的增加而升高，除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外，差异均有显著性意义（P〈0．05）。TLR2、4在转染后均有上调，TLR4在各组间差异显著（P〈0.05），但TLR2只在最大剂量转染组时差异有显著性（P〈0．05）。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少（P〈0．05），但4μg和6μg两组间比较无显著意义（P〉0．05）。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR2、4的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论研究结果初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR2、4的上调，而且TLR的上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制，成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。     

5岁以下喘息患儿哮喘预测指数与外周血单核细胞TLR4表达的相关性研究

目的 探讨5岁以下喘息患儿外周血单核细胞(PBMCs)表面Toll样受体4(TLR4)及血清白细胞介素6(IL-6)的表达.方法 选取该院门诊或住院患儿共224例,其中哮喘预测指数(API)阳性组116例,阴性组108例.两组患儿均在喘息症状缓解1个月后分别抽取外周血,流式细胞仪检测PBMCs TLR4阳性率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-6水平.结果 API阳性组患儿CD14+单核细胞表面TLR4阳性率明显高于API阴性组[(34.9±10.0)％vs.(30.2±8.8)％];API阳性组患儿血清IL-6水平明显高于API阴性组[(46.4±15.1)ng/L vs.(40.5±13.6)ng/L];且两组TLR4阳性率和IL-6水平均呈线性相关(P＜0.05).结论 TLR4的激活诱导IL-6等细胞因子表达可能和哮喘的发生、发展有关,TLR4可能可以作为喘息发展为哮喘的预测指标.     

缺血性脑卒中患者TLR2 TLR4与血小板神经功能的关系

目的 探究缺血性脑卒中患者外周血单核细胞(PBMC)中Toll样受体(TLR)2、TLR4表达水平与血小板活化及神经功能的关系。方法 选取2017年5月至2020年6月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的134例缺血性脑卒中患者为研究对象(研究组),同期140例健康体检者为对照(对照组),收集两组对象一般资料。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测两组对象PBMC中TLR2、TLR4 mRNA水平;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组对象血浆中血小板活化因子(PAF)、血小板活化标志物α颗粒膜糖蛋白140(GMP-140)、β-血小板球蛋白(β-TG)、血小板第4因子(PF4)水平;采用美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分评估研究组患者神经功能;Spearman分析研究组患者PBMC中TLR2、TLR4与糖尿病史、高血压史的相关性;Pearson分析研究组患者PBMC中TLR2、TLR4与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,血浆中PAF、GMP-140、β-TG、PF4水平,NIHSS评分的相关性。结果 与对照...     

TLR2和TLR4在生殖器疱疹患者外周血白细胞上的表达

目的探讨Toll样受体2和4（Toll—likereceptor,TLR2、TLR4）的表达在生殖器疱疹发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测32例生殖器疱疹患者及22例正常人外周血淋巴细胞、单核细胞和粒细胞表面TLR2和TLR4的表达。结果TLR2和TLR4在外周血单核细胞上的表达相对较高,而在淋巴细胞和粒细胞上的阳性率平均值均低于5％;患者和对照组相比,各细胞表面TLR2的表达水平无显著差异（P＞0．05）,TLR4在两组淋巴细胞上表达水平无显著差异（P＞0．05）,患者TLR4在单核细胞上的表达水平为（18．49％±10．01）％。显著高于对照组（8．02％±5．37）％（P〈0．001）;患者TLR4在粒细胞细胞上的表达水平为（1．90％±1．46）％,比对照组的（0．45％±0．25）％明显升高（P〈0．001）。结论单核细胞和粒细胞表面的TLR4在对病毒识别、增强特畀陡的信号传导、启动抗病毒的固有免癌反应中起着重要作用。     

胰岛素受体基因第17外显子多态性与血管性痴呆的相关性

目的 探讨胰岛素受体(insulin receptor,INSR)基因第17外显子1 058位点多态性与血管性痴呆的相关性.方法 采用PCR-限制性内切酶消化法检测126例血管性痴呆患者(vascular dementia,VaD组)及114例非痴呆脑梗死患者(对照组)胰岛素受体基因第17外显子的多态性.结果 VaD组胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)者比例(42.9%)显著高于对照组(27.2%) (P<0.05);VaD组INSR T等位基因频率(19.4%)与对照组(10.5%)相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 INSR基因17外显子多态性可能与VaD具有相关性.     

鼻敏康颗粒对肺气虚变应性鼻炎大鼠模型鼻黏膜中TLR2和TLR4表达的影响

目的:观察鼻敏康颗粒对肺气虚型变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、氯雷他定组、鼻敏康组。用烟熏法造成肺气虚型大鼠模型,在此基础上,用卵白蛋白(OVA)造成变应性鼻炎大鼠模型。给药1 w后处死大鼠,剥取鼻黏膜,匀浆后离心,检测上清液中TLR2和TLR4含量。结果:与模型组比较,氯雷他定组与鼻敏康组TLR2、TLR4水平降低(P0.05,P0.01),差异有统计学意义。结论:鼻敏康颗粒对变应性鼻炎有治疗作用。     

甘露聚糖肽对溃疡性结肠炎病人TLR-2和TLR-4表达影响

目的 了解甘露聚糖肽对溃疡性结肠炎(UC)病人Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)表达的影响。方法 UC病人200例,随机分为两组,各100例。对照组病人给予美沙拉嗪颗粒2g冲服每天2次,9g/L氯化钠注射液100mL静脉滴注每天1次;观察组给予美沙拉嗪颗粒2g冲服每天2次,甘露聚糖肽10mg溶于9g/L氯化钠注射液100mL静脉滴注每天1次,15d为1个疗程,共治疗2个疗程。分别于治疗前和治疗后,取病变最显著肠黏膜组织3块,应用免疫组化方法检测TLR-2和TLR-4表达。结果 治疗前,两组TLR-2、TLR-4表达比较,差异无显著性(P>0.05);治疗后观察组TLR-2、TLR-4表达阳性率低于对照组,差异有显著性(χ2=5.49、6,12,P<0.05)。结论 甘露聚糖肽能抑制UC病人TLR-2、TLR-4的表达。     

结核病患者中性粒细胞表面Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(M.tb)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR4的表达率;再用M.tb感染结核病患者和正常人外周血,检测PMN表面TLR2和TLR4表达情况。结果:结核病患者外周血感染M.tb前PMN表面TLR2和TLR4表达率明显高于正常人(P0.01);结核病患者和正常人外周血在感染M.tb后PMN表面TLR2和TLR4表达率均较感染前明显降低(P0.01)。结论:结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达和活化有助于机体抵御结核感染,TLR2和TLR4共同参与了宿主对M.tb的免疫应答。     

TLR4在乳腺癌组织中的表达与微血管密度的关系及临床意义

目的：研究Toll样受体4（TLR4）在乳腺癌组织中的表达及其与肿瘤微血管生成的关系,并探讨其临床意义。方法：采用免疫组织化学法对58例乳腺癌组织及30例正常乳腺组织中TLR4表达进行检测;用CD105标记肿瘤新生血管,计数乳腺癌及正常乳腺组织中微血管密度（MVD）。结果：TLR4在乳腺癌和正常乳腺组织中的阳性表达率分别为69.0%和13.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）;乳腺癌组织平均MVD值明显高于正常乳腺组织,差异有统计学意义（P〈0.05）;乳腺癌组织中TLR4的表达与MVD呈正相关（r=0.581,P〈0.05）;TLR4的表达和MVD计数与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、组织分级等因素无关（P〉0.05）,但与淋巴结转移及TNM分期关系密切（P〈0.05）。结论：TLR4在乳腺癌组织中表达增高,其异常表达与肿瘤MVD有关,促进肿瘤新生血管形成可能是其参与乳腺癌的发生发展机制之一。     

哮喘患儿外周血炎症因子及肺功能水平与TLR4基因多态性的相关性研究

目的 分析儿童哮喘患者外周血炎症因子及肺功能水平与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因多态性的相关性。方法 收集近3年收治急性发作期哮喘患儿172例作为实验组,并根据哮喘患儿发病的严重程度将哮喘分为轻度、中度、重度和危重级,选取同期健康体检儿童136例作为对照组,测定各组受试者肺功能指标第1秒用力呼气容积(FEV1)占用力肺活量(FVC)百分比(FEV₁/FVC%)和呼出气一氧化氮(FeNO)水平比,采集研究对象的外周静脉血,应用ELISA法检测白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)表达水平,采用血球计数仪检测外周血嗜酸性粒细胞百分率(Eos),利用化学发光发检测血清总IgE,聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RELP)技术检测TLR4基因Asp299Gly(A/G)和Thr399Ile(C/T)位点单核苷酸多态性,分析以上基因多态性与儿童哮喘的相关性。结果 哮喘患儿外周血中IL-4、Eos、IgE及FeNO水平比显著高于对照组,IFN-γ和肺功...