转录信号传导子和激活子3信号传导通路调控选择性环氧化酶2抑制剂抗结肠癌的机制

目的探究转录信号传导子和激活子3(Stat3)信号传导通路与选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂抗结肠癌细胞株HT-29机制的关系,明确COX-2抑制剂抗结肠癌细胞内信号传导机制。方法将选择性COX-2抑制剂NS-398,作用于结肠癌细胞系HT-29,运用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测药物作用前后HT-29中COX-2mRNA的表达;ELISA法测定体系前列腺素E2(PGE2)水平;Westernblot检测药物作用前后Stat3通路相关蛋白JAK2、Stat3的磷酸化活性和cyclinD1、Bcl-2的表达。结果结肠癌细胞系HT-29中COX-2mRNA呈高表达,NS-398呈时间、剂量依赖性方式抑制HT-29细胞增殖,促进其凋亡。NS-398使HT-29细胞COX-2mRNA和PGE2表达水平显著下降。同时p-JAK2、p-Stat3、cyclinD1、Bcl-2表达水平随作用时间延长而下降。结论癌基因Stat3信号传导通路调控了NS-398抗结肠癌的细胞内信号传导机制,最终通过其下游靶基因cyclinD1、Bcl-2影响结肠癌细胞系HT-29的增殖与凋亡。     

选择性环氧化酶2抑制剂抗结肠癌作用途径研究

目的探讨选择性环氧化酶2(COX2)抑制剂抗结肠癌细胞株SW480与细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、凋亡蛋白Bcl2的关系,明确COX2抑制剂抗结肠癌非COX2依赖性途径的细胞内分子机制。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测结肠癌细胞系SW480中COX2的mRNA表达水平;将选择性COX2抑制剂NS398,作用于结肠癌细胞系SW480,运用MTT法分别于0、24、48、72h检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察NS398对细胞凋亡的影响,进一步采用Westernblot检测药物作用前后CyclinD1、Bcl2的表达。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX2mRNA的表达;空白组S及G2/M期DNA百分含量与处理组比值分别为1.28、1.55(P<0.01),故NS398呈时间、剂量依赖性方式抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡。同时,72h时空白组与NS398(75μmol/L)处理组CyclinD1、Bcl2表达水平比值分别为6.41和2.74(P<0.01),故两者表达水平随作用时间延长而下降。结论选择性COX2抑制剂NS398抗结肠癌存在着COX2非依赖性途径,可能通过CyclinD1,Bcl2影响结肠癌细胞SW480的增殖与凋亡,提示COX2抑制剂抗结直肠癌存在着新的靶点。     

COX-2抑制剂NS398调控过氧化物酶体增殖因子激活受体信号转导通路抑制胃癌细胞增殖的分子机制

研究表明环氧合酶-2（COX-2）在胃癌中呈过表达，而非甾体抗炎药（NSAIDs）可以抑制COX-2表达，阻断胃癌细胞增殖，但是NSAIDs拮抗肿瘤的作用机制并不只局限于COX-2通路，其机制尚不清楚。本研究旨在观察选择性COX-2抑制剂NS-398对胃癌细胞增殖与凋亡的影响，探讨选择性COX-2抑制剂抗胃癌的作用机制。     

Stat5b信号通路调控bcl-2成员表达抑制结肠癌细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨转录信号转导子与激活子5b（Stat5b）反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡的作用及其机制。方法 用阳离子脂质体介导Stat5b反义寡核苷酸（20μmol／L）转染人结肠癌HCT116细胞，MTT法检测细胞增殖状态；流式细胞术检测细胞周期与凋亡；Westernblot检测Star5、D-Star5及凋亡家族成员bcl-2、bcl-xL、Mcl-1、Caspase-3的表达。结果 转染Stat5b反义寡核苷酸72h后HCT116细胞增殖受抑制，G1期细胞比率由68．9％上升至85．6％，S期细胞比率由15．4％下降至7．6％，凋亡细胞比率由5.6％增加至27．5％，Stat5，p-Stat5与bcl-2家族成员表达水平下降。结论 stat5信号转导通路活性增高可能与结肠癌发生发展有关，阻断Star5通路可以诱导结肠癌细胞凋亡。     

环氧化酶选择性抑制剂NS-398对Hela细胞线粒体膜电位改变及诱导凋亡作用研究

目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398诱导宫颈癌细胞凋亡的作用机制.方法 用不同浓度NS-398作用于人宫颈癌Hela细胞,CCK-8法检测NS-398对宫颈癌细胞增殖的影响,应用罗丹明（Rhodanmine） 123染色检测癌细胞线粒体膜电位改变;琼脂糖凝胶电泳检测DNA 降解梯度（ladder）.结果 NS-398对Hela细胞的增殖具有明显抑制作用;其抑制率随药物浓度的增高、药物作用时间的延长而显著增高.NS-398作用24 h可以使线粒体膜电位显著降低且与NS-398浓度密切相关;作用48 h可以诱导Hela细胞发生凋亡.结论 NS-398对宫颈癌Hela细胞生长具有显著的抑制作用.其可能通过线粒体途径诱导癌细胞凋亡.     

环氧化酶2抑制剂对结肠癌细胞中BCL-3及细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨环氧化酶2（COX-2）抑制剂对BCL-3基因及其靶向基因细胞周期蛋白1（cyclin D1）的转录和表达的影响.方法 实验组分别以25、50、100及200 μmol/L的NS398（COX-2抑制剂）处理结肠癌SW480细胞48 h或72 h;对照组以不含NS398的溶媒处理SW480细胞.采用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学染色方法分别从mRNA和蛋白水平检测各组细胞中BCL-3和cyclin D1的表达情况.结果 各组细胞处理48 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1 mRNA水平下降,呈剂量依赖性;而蛋白水平则无明显差异（P〉0.05）.处理72 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1蛋白水平下降,亦呈现剂量依赖性.当NS398浓度达到100 μmol/L时,其BCL-3 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.01）：当NS398浓度达到50 μmol/L时,其cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.05）.结论 结肠癌细胞株SW480中有BCL-3的表达.COX-2抑制剂NS398可从基因及蛋白水平对BCL-3及cyclinD1进行抑制,并呈剂量依赖性.NS398可能通过BCL-3而抑制cyclinD1.     

氟尿嘧啶对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响

目的观察氟尿嘧啶（5-FU）对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响。方法用不同药物浓度的5-FU处理SW480细胞,用CCK8法检测5-FU在SW480中的IC50,流式细胞仪检测SW480细胞ABCG2的阳性表达率．RT—PCR检测ABCG2的mRNA在SW480细胞中的表达差异。结果5-FU对SW480细胞的IC50随着药物浓度的增加而升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测发现,正常SW480细胞（A组）中ABCG2阳性表达率为（6．26±0．86）％;在药物处理48h后即刻检测时（B组）的阳性表达率下降至（3．43±1．18）％（P〈0．05）;在药物处理48h后的第2代细胞检测时（c组）则升高至（12．91±3．42）％（P〈0.05）。3组ABCG2mRNA表达趋势与流式细胞仪检测结果的趋势一致。结论不同浓度的5-FU可以影响人结肠癌SW480细胞ABCG2的表达。     

环氧合酶-2选择性抑制剂对肾癌细胞生长抑制和诱导凋亡作用机制的研究

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398对肾癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法 常规方法培养肾癌细胞株786-0,以不同浓度NS-398(25,50,100,150,200μmol/L)处理786-0细胞.MTT法检测NS-398对786-0细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测786-0细胞凋亡,Western blot检测COX-2及Bcl-2表达,EIA法检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)的含量.结果 NS-398可抑制肾癌细胞786-0生长,24 h最大抑制率为41.7%,48 h达50.4%;NS-398诱导肾癌细胞786-0凋亡,24 h细胞凋亡率达21.88%;NS-398可明显降低786-0细胞中产生的PGE2水平,下调COX-2和Bcl-2蛋白的表达.结论 NS-398通过抑制COX-2表达,减少肿瘤细胞中PGE2的产生、下调Bcl-2的抗凋亡活性,从而抑制肾癌细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

COX-2及其选择性抑制剂NS-398对激光术后创面修复的实验研究

目的：探讨COX-2及其选择性抑制剂NS-398对激光术后大鼠创面修复的影响。方法：点阵CO2激光照射形成大鼠创伤模型,分为正常、术后第1、3、5、7、10、14天共7个时相点,基质对照组、NS-398药物组术后分别外用75%酒精、NS-398,肉眼观察创面结痂及愈合时间,HE染色计数中性粒细胞、成纤维样细胞,免疫组化方法检测COX-2、PGE2及TGF-β1的表达情况。结果：NS-398药物组结痂时间明显短于对照组,各组间愈合时间无统计学差异;术后第1、3天,NS-398药物组中性粒细胞的数量及PGE2、TGF-β1表达量均明显低于对照组;术后第5天,NS-398药物组成纤维样细胞的数量明显高于对照组;激光术后（尤炎症期）大鼠创面明显表达COX-2。结论：COX-2对大鼠创面修复的炎症期及细胞增殖期具有重要作用;NS-398能降低激光术后创面炎症反应及瘢痕形成率,同时不会延缓创面愈合。     

NS-398对骨肉瘤细胞的作用及其对Survivin表达的影响

目的：观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人骨肉瘤细胞系MG-63的凋亡的影响及其对survivin基因表达的影响。方法：体外培养骨肉瘤细胞系MG-63，应用MTT法研究不同浓度NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63的凋亡诱导作用，流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡率的变化，RT-PCR法分析NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63中survivin基因表达的影响。结果：NS-398可诱导骨肉瘤细胞系MG-63发生凋亡，并具有剂量依赖性，在NS-398浓度为200μmol／L时，对细胞生长有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示NS-398引起MG-63细胞凋亡率增加。RT-PCR分析显示经NS-398作用后的骨肉瘤细胞系MG-63表达survivin较用药前明显下降。结论：NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63有杀伤作用，其作用可能通过抑制survivin的表达，促进肿瘤细胞的凋亡而实现。     

非甾体类抗炎药NS398诱导肾癌细胞凋亡的作用及其机制

目的观察COX-2选择性抑制剂NS398的对肾癌细胞增殖和凋亡作用的影响及其作用机制。方法采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养，将NS398分别以25、50、100、150、200μmol／L的剂量加入细胞中作用24及48h后，应用MTT法检测NS398对肾癌细胞增殖的影响；将NS398以50、100及200μmol／L的浓度作用于肾癌786-0细胞24h后，用流式细胞仪测定细胞凋亡的情况；将NS398分别以25、50、100、150、200txmol／L的剂量加入细胞中作用24h后，应用RT．PCR和Western blotting分别检测肾癌786-0细胞中COX-2和bcl-2的mRNA及其蛋白表达的情况。结果NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用，且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大，呈浓度依赖关系（P〈0．05）；NS398作用肾癌786-0细胞24h后，在细胞周期G0／G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰，随着浓度升高凋亡峰亦越来越增高（P〈0．05）；RT-PCR和Western Blot结果表明，不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中，COX-2和bcl-2无论在mRNA水平还是在蛋白水平均明显减弱，且呈剂量梯度下降。结论肾癌786-0细胞中存在着COX-2的过表达，选择性COX-2抑制剂NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖；其机制可能是通过抑制COX-2的表达，导致bcl-2抗凋亡活性的降低来完成的。     

紫草素下调CXCR4表达及抑制结肠癌细胞株SW480在CXCL12诱导下的定向迁移

目的探讨紫草素对结肠癌细胞增殖、CXCR4表达及对CXCL12诱导的定向迁移能力的影响。方法采用MTT法观察紫草素对SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测紫草素对SW480细胞表面CXCR4表达的影响．Transwell方法观察紫草素对SW480细胞定向迁移能力的影响。结果紫草素对SW480细胞生长有抑制作用．这种抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强。SW480细胞CXCR4阳性表达率为（99．1±0．7）％,用紫草素0.01、0．1及1．0μmol／L作用24h后,CXCR4阳性表达率分别降至（76．0±2．4）％、（59．1±2．5）％和（35．5±1．9）％（F=1098．041．P〈0．001）。上述不同浓度紫草素对CXCL12诱导的SW480迁移抑制率分别为25．2％、38．5％和55．7％（F=48．970,P〈0．001）。结论紫草素除了抑制结肠癌细胞增殖外,还可能通过下调CXCR4表达从而抑制肿瘤细胞在CXCL12诱导下的定向迁移。     

COX-2与VEGF-C在直肠癌中的表达及其在淋巴转移中的意义

目的探讨直肠癌中VEGF-C及COX-2表达的关系及意义.方法用COX-2特异性抑制剂NS-398及其催化产物PGE2作用于大肠癌LOVO细胞,应用Western blot方法检测VEGF-C蛋白表达.应用免疫组化方法检测45例直肠腺癌组织VEGF-C及COX-2表达情况.结果NS-398明显抑制LOVO细胞VEGF-C蛋白的表达.经PGE2作用后,VEGF-C蛋白表达上调.直肠癌组织中VEGF-C及COX-2的表达具有明显相关性.结论COX-2上调VEGF-C表达,促进肿瘤淋巴转移.     

COX-2特异性抑制剂NS-398对胰腺癌生长及肿瘤血管 生成影响

目的:探讨COX-2特异性抑制剂NS-398对胰腺癌生长的影响及其机制。方法:分别用q RT-PCR与Western blot检测不同人胰腺癌细胞株(Bx PC-3、SWl990、Capan-2、Aspc-1、PANC-1)中COX-2及VEGF表达,并用MTT法检测NS-398在体外对人胰腺癌细胞增殖抑制作用;用体外实验最敏感细胞株建立裸鼠胰腺癌原位移植瘤模型,并随机将荷瘤鼠分为实验组和对照组,分别用NS-398与生理盐水处理,比较两组移植瘤的生长情况,并检测肿瘤组织中COX-2、VEGF蛋白表达及肿瘤微血管密度(MVD)。结果:各胰腺癌细胞中均有COX-2及VEGF表达,NS-398呈时间与浓度依赖性抑制各胰腺癌细胞的体外增殖,其中Bxpc-3细胞COX-2与VEGF表达量最高,且对NS-398最敏感。用Bxpc-3细胞建立原位移植瘤的实验组与对照组裸鼠比较,平均肿瘤体积明显减小(20.215 2 mm~3 vs.204.444 4 mm~3),瘤组织中COX-2与VEGF表达及MVD均明显降低(均P0.05)。结论:NS-398对胰腺癌的生长有抑制作用,其机制可能是通过COX-2途径降低VEGF基因表达从而抑制肿瘤血管生成有关。     

结直肠癌中MEK2/ERK信号传导通路的研究

目的　研究丝裂原激活化蛋白激酶 (MAPK )中MEK2 /ERK信号传导通路在结直肠癌发生发展中的作用。方法　 ( 1)采用Westernblot检测 5 2例结直肠癌组织及其邻近肠黏膜中MEK 2蛋白的表达。 ( 2 )用丝裂原细胞外激酶 (MEK )抑制剂作用于结肠癌细胞系SW 480 ,然后以MTT法检测细胞增殖状态 ;用Westernblot检测MEK2 ,p ERK及其靶基因产物C myc的表达。结果　结直肠癌组织中MEK2蛋白表达水平明显高于邻近的肠黏膜 (P <0 .0 5 ) ,且与肿瘤的分化、Dukes分期及淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。应用MEK的抑制剂后SW 480细胞中MEK2 ,p ERK ,C myc表达水平随作用时间延长而下降。结论　MEK2活性增高与结直肠癌细胞侵袭力有关 ,阻断MEK2 /ERK信号传导通路可以抑制结肠癌细胞的增殖 ,促进其凋亡。     

Fas/FasL在异源融合瘤诱导结肠癌细胞早期凋亡中的作用

目的 探讨Fas/FasL通路在人异源树突状细胞（dendritic cell,DC）/结肠癌细胞融合瘤诱导结肠癌细胞凋亡中的作用.方法 使用50%聚乙二醇（PEG）将健康人外周血来源DC与结肠癌细胞SW480融合,用其致敏T淋巴细胞,采用流式细胞术检测致敏细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对结肠癌细胞凋亡的影响;使用免疫组化法分别检测SW480细胞Fas分子的表达以及T淋巴细胞活化前后FasL的表达情况.结果 结肠癌SW480细胞的早期凋亡率为46.88%;结肠癌SW480细胞高表达Fas分子用融合瘤致敏T细胞后,其FasL分子的表达明显增加.结论 异源树突状细胞融合瘤可能通过Fas/FasL通路来诱导结肠癌细胞的早期凋亡.     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS398诱导前列腺癌PC-3细胞系凋亡的研究

目的观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺 (NS398)在诱导COX-2表达阴性的前列腺癌PC-3细胞凋亡中的作用. 方法应用RT-PCR和Western blot的方法对PC-3细胞mRNA和蛋白水平的COX-2表达情况进行检测,四甲基偶氮唑蓝快速比色法观察不同浓度和时间NS398对PC-3细胞生存率的影响,流式细胞术检测100 μmol/L NS398作用24 h PC-3细胞的凋亡情况. 结果 mRNA和蛋白水平PC-3细胞COX-2均呈阴性表达;NS398可以抑制PC-3细胞的存活,并随浓度增加而增强,但无显著的时间依赖性;与对照组(10.563±2.582)%相比,100 μmol/L NS398诱导PC-3细胞早期凋亡比率(19.307±3.773)%显著增加,差异有统计学意义(P=0.01). 结论选择性COX-2抑制剂NS398可以诱导COX-2表达阴性的PC-3细胞凋亡,提示COX-2非依赖性途径的存在.     

环氧合酶-2和VEGF在肝细胞癌中的表达及NS-398对其的抑制作用

肝细胞癌（HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，易发生肝内外转移，预后较差。研究表明，环氧合酶-2（C0X-2）与肿瘤血管生成有关。我们采用免疫组织化学法检测COX-2与VEGF在HCC中的表达，并观察COX-2特异性抑制剂NS-398对肝癌细胞株VEGF表达的影响。探讨COX-2在HCC血管生成中的作用。     

NS-398和DHA联合抑制β-eatenin、c-mye对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂NS-398和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）联合对胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及机制。方法体外培养胆管癌QBC939细胞,设立NS-398组、DHA组、联合组和空白组,将0,25,50,100,150,200μmol／L的NS-398和0,15,30,45,60,75μg／ml的DHA分别联合作用于QBC939细胞;应用CCK8法检测QBC939细胞的生长抑制率：采用流式细胞术检测细胞凋亡：应用实时荧光定量PCR、Western blot和ELISA检测细胞中β-catenin和c-myc的表达。结果NS-398和DHA在体外均能抑制QBC939细胞生长,NS-398为100pomol／L联合DHA为45μg／ml作用后,细胞生长抑制率达90％（F=5．85,P〈0．05）,二者联合能明显促进QBC939细胞凋亡（F=8．16,P〈0．01）。实时荧光定量PCR、Western blot和ELISA实验均显示联合能明显抑制β-catenin（F=7．61,P〈0．01）、（F=7．75,P〈0．01）、（F=8．17,P〈0．01）和c-myc（F=7．92,P〈0．01）、（F=8．76,P〈0．01）、（F=8．12,P〈0．01）表达。结论NS-398和DHA联合能明显抑制QBC939细胞生长,促进早期凋亡,二者联合对QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过抑制β-catenin和c-myc的表达,促进细胞早期凋亡。     

表观沉默蛋白Bmil在结直肠癌组织中的表达及其对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人结直肠癌中表观沉默蛋白Bmil表达与结直肠癌病理特征的关系,探讨Bmil蛋白对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法应用免疫组织化学技术检测85例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Bmil蛋白表达：用BmilsiRNA转染结肠癌细胞系SW480．运用MTY法检测细胞增殖状态：流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响．Westemblot检测Bmil及Bcl-2蛋白的表达。结果结直肠癌组织中Bmil蛋白表达的阳性率为56．5％（48／85）．明显高于正常肠黏膜[17．6％（15／85）]（P〈0．05）;其阳性表达与肿瘤分化程度、分期及淋巴结转移有关（P〈0．05）。SW480转染BmilsiRNA后,细胞增殖受到抑制,凋亡明显;转染24、48和72h后,其抑制率分别为13．1％、16．5％和18．3％．细胞凋亡率分别为15．7％、45．6％和40．2％：同时,Bmil表达水平在转染48h后下降,Bcl-2表达水平也降低（P〈0．01）。结论结直肠癌中Bmil表达与肿瘤病理学特征关系密切,阻断Bmil表达可抑制结肠癌细胞的增殖．促进其凋亡。