叶下珠属植物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用

为探讨叶下珠属植物对单纯疱疹病毒Ⅱ型的抑制作用,采用地鼠肾细胞株（ＢＨＫ）和原代兔肾细胞对８种叶下珠属植物水提物进行了体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的研究。结果显示：除珠子草延益亚种外,云泰叶下珠,云贵叶下珠,广东叶下珠,余甘子,黄珠子草,广西叶下珠,苦味叶下珠等７种叶下珠水提物在该２种培养细胞上均有不同程度抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用。提示叶下珠属植物对单纯疱疹病毒Ⅱ型感染有一定的治疗作用。     

人防御素α5、人防御素β2在不孕患者输卵管的表达及意义

目的 通过分析粘连、闭锁的输卵管伞和正常输卵管伞中人防御素α5(human α defensin-5,HαD-5)、人防御素β2(human β defensin-2,HβD-2)的相关性,初步探讨HαD-5和HβD-2在输卵管伞粘连发生中的作用与意义,为临床防治输卵管伞粘连闭锁引起的不孕提供新的思路.方法 收集临床手术切除的输卵管伞组织,将输卵管伞分为粘连组(30例)和非粘连组(30例),应用免疫组化SP法检测HαD-5 和HβD-2的表达情况,分析二者的相关性.结果 免疫组化染色结果显示HαD-5、HβD-2两种因子在粘连组的表达强于不粘连组,且差异有统计学意义(P<0.05).不粘连组中HαD-5和HβD-2的表达呈正相关(r=0.404,P<0.05).粘连组中HαD-5和HβD-2的表达无相关性(P=0.089).结论 HαD-5、HβD-2在炎症发生时表达明显增强,在正常情况下,两者存在相互促进的协同作用,这种协同作用的破坏可能是粘连形成的原因之一.     

不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究

目的 探讨不同构型人α防御素-5(HD-5)多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异.方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞(Vero细胞),分别给予100 μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72 h后观察细胞病变效应(CPE),并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析.结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞(P＜0.01),而HD-5/A的抗病毒作     

单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞中培养与增殖特性的研究

目的研究单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）在非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）中培养及增殖的合适条件。方法把HSV-2接种于Vero细胞中培养和传代,于不同时间收获病毒液并测毒力,进行不同培养条件的摸索。结果pH值、残留牛血清是HSV-2在Vero细胞培养的影响因素,最佳收毒时间为36-72h。在Vero细胞上培养病毒3-5代,病毒毒力较高。结论建立了单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞上培养增殖的初步方法,为下一步建立HSV-2的潜伏与激发细胞模型打下基础。     

人乳头瘤病毒假病毒体外感染模型的建立及人α防御素5抗病毒作用

目的 建立用人乳头瘤病毒16亚型假病毒(HPV-16 Psv)感染官颈癌细胞模型,并研究3种不同构型人α防御素5(HD-5)抗HPV的作用.方法 将表达HPV-16假病毒衣壳蛋白的重组质粒p16L1L2和含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒Pfwb共转染293FT细胞,分离、纯化病毒颗粒后感染官颈癌细胞株C-33a,同时分别给予20 μg/ml的HD-5/N(天然构型)、HD-5/Acm(半胱氨酸被Acm修饰)或HD-5/Abu(半胱氨酸被Abu替换)处理,培养48 h后荧光显微镜观察和流式细胞分析病毒感染率.结果 Pfwb与P16L1L2成功转染293FT细胞并获得滴度达2.5×108TU/ml的HPV-16假病毒液,镜检和流式细胞术检测显示官颈癌细胞C-33a能够被假病毒感染并表达GFP.HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/Abu对HPV-16感染C-33a细胞的抑制率分别为(96.48±5.67)％、(69.02±7.88)％和(2.71±1.53)％.与HD-5/N相比,HD-5/Acm和HD-5/Abu的抗病毒作用显著降低(P＜0.01).结论 建立了基于流式细胞分析的HPV-16假病毒感染模型并将其用于抗病毒药物活性检测.发现HD-5的空间结构和分子中半胱氨酸对其抗HPV感染的活性有重要作用.     

人β防御素-2研究进展

内源性抗生素肽(endogenous antibiotic peptides)是动、植物天然免疫的重要介质,在哺乳动物(包括人)中,由于对革兰氏阳性菌、阴性菌、真菌、螺旋体、分枝杆菌及某些包膜病毒等均有很强杀伤活性,故将其命名为防御素(defensin).迄今为止,在人体中已发现的防御素共有两类(α、β)10种.其中β防御素家族共发现3种,分子量为4～5kD,含38～47个氨基酸残基阳离子,分别为人β防御素-1,2,3(human β-defensin-1,2,3. hBD-1,2,3).德国Harder J等[1]于1997年首先发现hBD-2,他们用大肠杆菌亲和柱结合高压液相层析法在牛皮癣病人皮肤中分离并纯化到约4.3kD的多肽,经氨基酸序列分析表明与牛的TAP(气管抗菌肽)、LAP(舌抗菌肽)及hBD-1同源,属于人β抗菌肽成员之一,命名hBD-2.已证实hBD-2是黏膜和上皮细胞抵抗微生物入侵的重要介质,在持续暴露在病原微生物的器官表面发挥重要的抗菌作用.     

人β防御素-2抗唾液支原体活性研究

目的探讨人β防御素-2（hBD-2）在抗唾液支原体中的作用。方法用唾液支原体感染牙龈上皮细胞HQEC,ET—PCE检测hBD-2的表达情况;将培养的唾液支原体中加入不同浓度的hBD-2,检测其生长情况。结果唾液支原体能诱导HGEC表达hBD2,且hBD-2能明显抑制唾液支原体的生长。结论hBD-2可能在抗唾液支原体感染过程中起关键作用。     

可诱导性人β防御素-2抗肺炎球菌的活性研究

目的探讨人β防御素-2（hBD-2）在抗肺炎球菌感染中的作用。方法用肺炎球菌和白介素（IL）-1β刺激肺鳞状上皮细胞株EBC-1,RT-PCR检测hBD-2的表达情况;肺炎球菌感染预先加有hBD-2的EBC-1,检测hBD-2的抗菌情况。结果IL-1β和肺炎球菌能诱导EBC-1表达hBD-2,且hBD-2能明显抑制肺炎球菌的生长。结论hBD-2可能在保护肺炎球菌的生长过程中起关键作用。     

贻贝黏蛋白体外抗单纯疱疹病毒-2型的作用

目的 探讨贻贝黏蛋白(MAP)体外抗单纯疱疹病毒-2型(HSV-2)的作用。方法 采用细胞病变效应(CPE)观察细胞形态结合MTT法检测MAP对Vero细胞形态的影响和毒性。通过CPE检测MAP对HSV-2的直接影响以及对病毒感染的抑制作用。结果 细胞毒性试验结果显示,MAP在125μg/ml及以下浓度对Vero细胞形态和活性无明显影响。MAP对HSV-2活性具有直接影响作用,其半数有效浓度(EC₅₀)为54.88μg/ml,与溶媒对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。MAP对HSV-2感染后引起的细胞病变效应亦有一定的抑制作用,其EC₅₀在125μg/ml以上,与溶媒对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 MAP对HSV-2感染具有一定的抑制作用,提示其在抗HSV活性方面具有进一步研究的潜力。     

人α防御素的稳定表达和活性鉴定

目的: 制备有较高生物学活性的分泌型人α防御素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法: 将真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO-HNP1,3与含有dhfr基因的质粒pDCH1P11共转染入CHO-dhfr-,ELISA检测到培养上清中重组蛋白的表达,对阳性表达的细胞进行G418筛选,对其中9个表达量较高的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压扩增, ELISA法、RT-PCR法及间接免疫荧光(IFA)分析蛋白表达情况,并同步测定其体外抗菌活性.结果: α防御素1的表达量是18.85～47.46 mg/L*48 h*106个细胞; α防御素3的表达量是16.89～35.57 mg/L*48h*106 个细胞.用RT-PCR从稳定表达的细胞株中扩增出全长约303 bp的片段;IFA 显示稳定转染的细胞胞质核周质中有强的绿色荧光;K-B纸片琼脂扩散法显示α防御素1,3在大肠埃希菌MH平板上形成了明显的抑菌圈.结论: 成功高效地表达了分泌型的α防御素1,3,并具有良好的生物学活性,为进一步探讨α防御素1,3对HIV-1的抑制作用提供了物质基础.     

白介素-22诱导肺泡上皮2型人β防御素表达的初步研究

目的:初步探讨对于直接或间接引起的肺内感染,炎症反应产生的白介素(IL)-22能否刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,并且诱导其生成?释放2型人β防御素(human β-defensin-2,HBD-2)发挥抗感染作用?方法:流式细胞术检测肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞膜表面IL-22R表达水平?重组人IL-22(20 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测不同时间(0?2?4?8?16?24 h)HBD-2表达情况?不同浓度的重组人IL-22(0?4?20?100?500 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测HBD-2表达情况?结果:肺泡Ⅱ型上皮细胞膜表面IL-22R表达呈强阳性,阳性率达(99.90 ± 0.13)%?比较6个时间点HBD-2表达差异,发现HBD-2表达具有时间依赖性?比较不同浓度IL-22处理下HBD-2表达差异,IL-22 100 ng/ml为最佳干预浓度,且HBD-2表达与IL-22浓度具有依赖关系?结论:IL-22能显著诱导肺泡上皮细胞生成并释放HBD-2,且具有时间和剂量依赖性?     

人β-防御素2在EV71型手足口病中的表达及免疫作用分析

目的 探讨血清人β-防御素2(HBD2)在肠道病毒71型(EV71)手足口病中的表达及意义.方法 收集2018年4月至2019年6月在西安市儿童医院感染科住院的EV71型手足口病患儿90例为病例组,其中包括普通型60例(普通型组)和重型30例(重型组),收集同期内健康体检的儿童50例做为正常对照组,用ELASA方法检测...     

知母宁的体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用

目的 检测知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)作用。方法 以Vero细胞为宿主细胞，阿昔洛韦为阳性对照药物，采用中性红染色法测定不同药物加入方式下知母宁的体外抗HSV-Ⅱ有效率，并检测其抑制病毒作用的时效关系及对病毒感染性的影响。结果 知母宁表现出对HSV-Ⅱ 333的综合抑制作用和抑制病毒吸附后的后续复制增殖作用，其抗病毒有效率(ER％)最高达80％，这两种作用的半数有效浓度(EC50)均约为0．8mg／ml。知母宁浓度≥2．08mg／m1时能显著抑制HSV-Ⅱ，ER％最高达95％。知母宁还有较弱的预防病毒吸附作用。知母宁抗病毒作用的时效关系研究表明，随药物作用时间延长，低浓度药物抗病毒有效率呈减小趋势，在高浓度时(≥2．08mg／ml)其病毒抑制强度基本维持稳定。随药物作用时间延长，知母宁可明显削弱病毒的感染性，知母宁组病毒的-lg TCID50值较病毒对照组的下降值呈增大趋势，其下降百分比维持稳定，约为40％。结论 知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型效果好，且其抗病毒作用具有多个作用点。     

人α-防御素5在毕赤酵母中分泌表达的研究

目的 探索人α-防御素5成熟肽(mHD5)在酵母中高效分泌表达的可行性.方法 PCR扩增获得酵母菌偏好的mHD5密码子序列,应用基因重组方法构建表达质粒,电击转化酵母菌株GS115,应用G418浓度梯度、表型和PCR技术筛选高拷贝转化株.经摇瓶发酵和甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析重组mHD5(rmHD5)表达量,并采用Western blot鉴定.选用琼脂扩散法检测rmHD5的抑菌活性.结果 构建了pPIC9K-mHD5酵母表达质粒.筛选得到3株His /Mut 表型,且耐受8 mg/ml G418的多拷贝转化酵母菌株,成功获得表达量约120 mg/L的发酵上清.rmHD3对大肠杆菌(EC25922)和金黄色葡萄球菌(SA25923)2种标准菌株均具有明显的抑菌活性.结论 防御素基因可以在毕赤酵母中实现分泌型离表达,此策略可能是抗菌肽工业化开发的有效途径之一.     

大黄提取液体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的实验研究

目的:研究大黄提取液在体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用。方法:用hela细胞做体外培养实验,以不同剂量的大黄提取液作用于病毒复制周期的各个阶段,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变(CPE)、MTT染色细胞保护率(MTT法)作为评价指标,判断药效,对大黄提取液抗HSV-Ⅱ作用进行评价。结果:大黄提取液对hela细胞的增殖无明显作用,且对hela细胞毒性极低,对病毒有直接灭活作用;可干扰病毒向宿主细胞吸附,还可有效抑制病毒复制。结论:大黄提取液在体外对HSV-Ⅱ有显著的抑制和杀伤作用,并且有效抑制病毒复制。     

抗生素S632A3在体外抗肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV—1）作用的初步研究

目的：体外测定抗生素S632A3抗肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据。方法：用不同稀释度的抗生素S632A3抑制3种肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型对Vero细胞的感染作用,48h后观察细胞病变效应,并用MTT法测定细胞活性。结果：抗生素S632A3能明显抑制肠道病毒及疱疹病毒对Vero细胞的致病变作用,使细胞存活率较高。结论：该药物有较显著的抗肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用,且对细胞的毒性很低,是一种具有潜在开发前景的药物。     

329薄荷油体外抗Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒活性的研究

薄荷油是从辣薄荷Mentha piperita L.叶中提取的挥发油。作者对薄荷油的体外抗HSV-1和HSV-2的作用进行了研究。     

微量元素硒体外抗单纯疱疹病毒1型活性的初步研究

初步研究微量元素硒体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的活性及可能的机制。方法以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定硒化合物SeO2的最终作用的质量浓度和采用终点滴定法测定HSV-1的感染滴度,并通过观察细胞病变效应和细胞凋亡情况初步研究硒化合物SeO2体外抗HSV-1的活性。结果当SeO2药物质量浓度为0.382mg.L-1时,SeO2能明显地抑制病毒感染Vero细胞病变(CPE)以及促进细胞凋亡,其作用具有浓度依赖性;当SeO2药物质量浓度超过2.034mg.L-1时,细胞存活率下降。结论微量元素硒具有体外抗HSV-1的活性,且可通过抑制细胞病变和促进细胞凋亡而发挥作用。     

黄芩素抗人巨细胞病毒的体外实验研究

目的体外研究黄芩素抗人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）的效果和安全性。方法细胞病变法和噻唑蓝（MTT）法检测各浓度黄芩素对人胚肺成纤维细胞（HEL）存活率及HCMV抑制率的影响,并与更昔洛韦进行比较。数据输入SigmaPlot软件,经Hill方程曲线拟合计算药物的半数毒性浓度（TC50）和半数有效浓度（EC50）。结果更昔洛韦和黄芩素的TC50分别为353.1＂g/ml和151.4＂g/ml,EC50分别为62.98＂g/ml和14.47＂g/ml,治疗指数分别为6和10。结论黄芩素具有体外抗HCMV作用,值得进一步研究。