野西瓜多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的观察野西瓜多糖诱导人肺癌HepG2细胞凋亡作用。方法通过MTT法测定野西瓜多糖对HepG2细胞的细胞毒作用;倒置显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;PI染色法,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示野西瓜多糖对HepG2细胞有抑制作用,IC50为471.53mg/L;倒置显微镜、激光共聚焦扫描显微镜下观察细胞形态,表现为细胞皱缩、碎裂、甚至出现凋亡小体;流式细胞术检测到野西瓜高剂量组凋亡率为74.926%。结论野西瓜多糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用。     

PhaseoloidesideE诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:以人肝癌HepG2细胞为研究对象,探讨phaseoloideside E(PE)的体外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法,检测不同浓度的PE处理48 h后对HepG2细胞的细胞毒性效应;应用光学显微镜、荧光显微镜观察PE处理下的细胞形态学变化;用DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测凋亡,并用免疫印迹法检测PE对凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达水平的影响。结果:PE对HepG2细胞的生长有明显的细胞毒性效应;直接形态显微观察及Hoechst 33258荧光染色皆可见典型的凋亡细胞形态学特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示给药组出现明显的DNA梯状凋亡带,而对照组没有出现梯状条带;免疫印迹结果显示PE可以增加Bax表达并减少Bcl-2表达。结论:PE能够诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提示PE诱导的Bax,Bcl-2蛋白的表达水平变化可能与它的凋亡诱导效应紧密相关。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制研究

目的 研究氯化两面针碱(NC)在体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制.方法 通过MTT法测定NC细胞毒作用,光镜及吖啶橙染色观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法、流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期.结果 NC作用于细胞后,呈浓度依赖性抑制HepG2细胞的生长,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为(3.52±0.23) μmol/L;吖啶橙荧光染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA lader NC各剂量组(0.75,1.5,3 μmol/L)对细胞周期的影响表现为G2/M期阻滞,作用肝癌HepG2细胞24 h后的凋亡指数分别为(17±1.23)％、(25.2±3.52)％、(35.9±3.19)％,明显高于生理盐水(NS)对照组(0.29±0.1 1)％.结论 NC对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,NC抗肿瘤作用的机理可能是:阻滞细胞于G2/M期,诱导肿瘤细胞凋亡.     

鲜茵陈提取物对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用

目的:观察鲜茵陈提取物对人肝癌HepG2细胞株增殖的抑制和凋亡的诱导作用。方法:采用MTT法观察鲜茵陈提取物对HepG2增殖的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测鲜茵陈提取物对细胞凋亡的诱导。结果:不同浓度的提取物在不同时间内对HepG2的增殖有抑制作用,随着提取物浓度的增加和作用时间的延长,抑制增殖的作用越来越明显,凋亡逐渐增加。结论:鲜茵陈提取物对HepG2有明显的增殖抑制的作用,能够促进细胞的凋亡。     

粉防己碱抑制肝胚细胞癌HepG2细胞增殖及诱导该细胞凋亡的作用

肝癌是一种常见的致死性肿瘤,不易进行外科手术。作者研究了粉防己碱对人肝胚细胞癌 HepG2细胞增殖的抑制作用及诱导该细胞凋亡的作用。在抗细胞增殖实验中,HepG2细胞与8～24μm0l/L 的粉防己碱培养48 h,在24和48 h 用 MTT 法检测细胞活力。结果显示,     

仙鹤草对人肝癌HepG2细胞凋亡作用研究

目的：探讨仙鹤草丙酮提取物正丁醇层对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的仙鹤草丙酮提取物正丁醇层作用于体外培养的HepG2细胞,MTY法检测细胞生长抑制率,应用FCM检测细胞凋亡率。应用FCM检测细胞内活性氧的变化。结果：仙鹤草可显著抑制HepG2细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。结论：仙鹤草丙酮提取物正丁醇层能诱导细胞发生凋亡;细胞内活性氧的增加可能是其作用机制。     

荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用血清药理学方法制备荔枝核、环磷酰胺含药血清以及对照血清,作用于HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:荔枝核含药血清处理HepG2细胞后,呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖活性;并出现细胞核浓染与核碎裂;流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率明显高于对照组。结论:荔枝核含药血清能抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其机制可能与诱导HepG2细胞凋亡有关。     

中药复方博癌丸对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的研究中药复方搏癌丸对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的诱导作用.方法采用细胞药理学和血清药理学方法,对比观察(阴性无药血清对照、阳性药5-氟尿嘧啶血清对照)搏癌丸诱导HepG2细胞的增殖及凋亡.(1)MTT法观察4个搏癌丸药物血清浓度对HepG2细胞增殖的抑制作用,从中筛选出搏癌丸的有效药物浓度.(2)电镜及流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡.结果(1)10%、5%、2.5%搏癌丸药物血清3个有效浓度均对HepG2细胞增殖有显著抑制作用(P＜0.01),增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性(P＜0.01).(2)10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,HepG2细胞核明显缩小,浆比减少,核仁减少、浓缩甚至消失,核内异染色质明显增多,核膜完整,可见早、中、晚期细胞凋亡,出现凋亡小体.(3)10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,流式细胞仪检测的细胞凋亡率为25.34%,均显著高于相应无药血清对照组的3.54%(P<0.05).结论搏癌丸能在一定程度上抑制HepG2细胞的增殖和诱导HepG2细胞凋亡.     

迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

白蔹药效成分没食子酸抑制人肝癌HepG2细胞生长及作用机制研究

目的:探讨从白蔹抗肿瘤活性部位分离得到的没食子酸对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的没食子酸处理HepG2细胞,MTT法测定没食子酸对HepG2细胞生长增殖的抑制活性;采用Hochest染色、荧光显微镜、Annexin V-FITC/PI双标记法和流式细胞术观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡;采用JC-1染色检测HepG2细胞线粒体膜电位变化情况。结果:没食子酸在12.5～200 mg·L-1对HepG2细胞生长有明显抑制作用,且呈一定的浓度依赖性;没食子酸能诱导HepG2细胞凋亡,降低细胞线粒体的膜电位。结论:没食子酸为白蔹抗肿瘤主要活性成分之一,通过降低细胞线粒体的膜电位而诱导细胞凋亡为其抗肿瘤作用机制之一。     

红景天苷对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响简

 目的 观察红景天苷(salidroside)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响, 探讨其抗肿瘤的可能机制。方法 以体外培养的人肝癌HepG2细胞作为研究对象, 倒置显微镜观察红景天苷对肝癌细胞形态的影响;采用MTS法检测红景天苷对细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-8的表达。结果 红景天苷能显著抑制肝癌细胞HepG2增殖并促进其凋亡, 下调细胞Bcl-2 表达, 上调Bax、caspase-3及caspase-8的蛋白表达量。结论 红景天苷在体外对人肝癌HepG2细胞具有显著的抑制增殖和促进凋亡作用, 其机制可能与其调节凋亡基因Bcl-2、Bax、caspase-3与caspase-8的蛋白表达有关。     

芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的调控作用。方法：体外培养HepG2细胞，加入不同浓度芪术抗癌方（0,250,500,1 000 mg/L）处理48 h。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力，采用免疫印记法检测凋亡相关蛋白c-Caspase-3和c-Caspase-9表达变化。结果：CCK-8结果显示芪术抗癌方可呈浓度依赖性抑制HepG2细胞增殖，与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05),1 000 mg/L组抑制效果最好，芪术抗癌方刺激HepG2细胞后，凋亡相关蛋白c-Caspase3及c-Caspase9表达增加，呈浓度依赖性，在1 000 mg/L组达到最高且差异有统计学意义（c-Caspase3增加1.83倍，P<0.05；c-Caspase9增加1.06倍，P<0.05）。结论：芪术抗癌方可抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

白屈菜红碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制探讨

目的:研究白屈菜红碱(CHE)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制。方法:以肝癌HepG2细胞为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定CHE对细胞的增殖作用,荧光染料Hoechst 33285染色观察CHE对人肝癌细胞HepG2凋亡形态的变化,免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2家族的抑凋亡蛋白Bcl-xl,促凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达。结果:与溶剂组比较,CHE能显著抑制HepG2细胞的增殖,其6,12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为12.98,10.53,11.21μmol·L~(-1),在Hoechst 33258染色结果中,CHE组出现细胞凋亡的典型特征;与溶剂组比较,高浓度CHE能明显上调Bax,Caspase-3的蛋白及mRNA表达,明显降低Bcl-xl蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:白屈菜红碱能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并能上调促凋亡蛋白和mRNA,下调抗凋亡蛋白和mRNA表达,进而诱导凋亡。     

Activation of AMP‐activated Protein Kinase and Phosphorylation of Glycogen Synthase Kinase3 β Mediate Ursolic Acid Induced Apoptosis in HepG2 Liver Cancer Cells

Despite the antitumour effect of ursolic acid observed in several cancers, the underlying mechanism remains unclear. Thus, in the present study, the roles of AMP‐activated protein kinase (AMPK) and glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3β) were examined in ursolic acid induced apoptosis in HepG2 hepatocellular carcinoma cells. Ursolic acid significantly exerted cytotoxicity, increased the sub‐G1 population and the number of ethidium homodimer and terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT) mediated dUTP nick end labeling positive cells in HepG2 cells. Also, ursolic acid enhanced the cleavages of poly‐ADP‐ribose polymerase (PARP) and caspase3, attenuated the expression of astrocyte elevated gene (AEG1) and survivin in HepG2 cells. Interestingly, ursolic acid increased the phosphorylation of AMPK and coenzyme A carboxylase and also enhanced phosphorylation of GSK3β at inactive form serine 9, whereas ursolic acid attenuated the phosphorylation of AKT and mTOR in HepG2 cells. Conversely, AMPK inhibitor compound C or GSK3β inhibitor SB216763 blocked the cleavages of PARP and caspase 3 induced by ursolic acid in HepG2 cells. Furthermore, proteosomal inhibitor MG132 suppressed AMPK activation, GSK3β phosphorylation, cleaved PARP and deceased AEG‐1 induced by ursolic acid in HepG2 cells. Overall, our findings suggest that ursolic acid induced apoptosis in HepG2 cells via AMPK activation and GSK3β phosphorylation as a potent chemopreventive agent. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

山楂乙醇提取物对肝癌细胞HepG2凋亡及相关因子表达的影响

目的:探讨山楂提取物体外对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法:山楂乙醇提取,并采用不同质量浓度(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L-1)山楂提取物处理HepG2细胞24,48,72 h。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测提取物对肝癌细胞活力的影响;流式细胞术检测提取物处理细胞48 h后的凋亡率;实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达;免疫印迹法(Western blot)检测激活型Caspase-3(CleavedCaspase-3),Bcl-2,Bax蛋白表达。结果:山楂提取物对HepG2细胞的活力有显著抑制作用(P0.05),并以浓度及时间依赖的形式诱导细胞凋亡。山楂提取物可以显著促进Bax和Cleaved-Caspase-3基因和蛋白表达,抑制Bcl-2基因和蛋白表达。结论:山楂提取物抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进其发生凋亡,与Bax和Cleaved-Caspase-3的表达增加,Bcl-2/Bax降低有关。     

洋葱提取物对人结肠癌细胞凋亡及周期的影响

目的研究洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡及细胞周期的影响。方法采用水提取和乙醇提取洋葱后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物含量。体外培养结肠癌细胞株(LoVo cells、SW480 cells、HT-29 cells、HCT-8 cells),采用含黄酮类化合物浓度40 mg/L和60 mg/L的提取物对其进行干预,流式细胞仪检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡影响,检测含黄酮类化合物浓度为40 mg/L的水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞周期的影响。结果洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株的凋亡具有剂量依赖性,其中水提取物引起SW480、HCT-8细胞株凋亡率较乙醇提取物高。而乙醇提取物引起HT-29细胞株凋亡率较水提取物高。洋葱提取物能将结肠癌细胞株的细胞周期阻滞在G1期,阻碍其向S期转换,以抑制细胞增殖。结论洋葱水提取物和乙醇提取物能够诱导结肠癌细胞株的凋亡,并能够对结肠癌细胞周期产生影响,其具体机制需进一步探讨。     

紫杉醇联合三尖杉宁碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:以HepG2细胞作为体外模型,研究紫杉醇与三尖杉宁碱联合作用抑制肿瘤细胞增殖及凋亡双重作用。方法:MTT法检测不同浓度紫杉醇、三尖杉宁碱单药及不同联合给药方案对HepG2细胞的生长抑制作用;以PI染色法流式细胞仪分析不同给药方案对HepG2细胞周期分布的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法分析不同联合给药方案对HepG2细胞凋亡的影响。结果:MTT法证实不同给药方案对HepG2细胞抑制强度不同,紫杉醇和三尖杉宁碱同时给药无明显协同作用;先给予三尖杉宁碱24 h再给予紫杉醇和先给予紫杉醇24 h再给予三尖杉宁碱可见明显协同作用,先给予紫杉醇24 h再给予三尖杉宁碱协同作用更加明显,流式细胞仪检测结果显示,紫杉醇与三尖杉宁碱联合用药较二者单独用药可诱导更多HepG2细胞凋亡。结论:紫杉醇与三尖杉宁碱联合应用可协同抑制HepG2细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

小半夏加茯苓方含药血清抑制HepG2细胞增殖及促进凋亡

目的:采用血清药理学的方法,观察小半夏茯苓方对肝癌HepG2细胞增殖的影响,初步探索该方诱导肝癌细胞凋亡相关因子表达的影响。方法:制备含药血清,正常实验用动物Wistar大鼠,采用灌胃或腹腔注射给药途径,连续给药3 d,其中,正常对照组,灌服生理盐水;环磷酰胺(CTX)组,腹腔注射CTX;原方汤剂组,灌服小半夏加茯苓汤;原方汤剂加CTX组,灌服小半夏加茯苓汤的同时腹腔注射CTX;颗粒剂高中剂量组,灌服相当于小半夏加茯苓汤等量、二倍量的颗粒剂,末次给药后12 h,腹主静脉取血,制备含药血清,刺激体外培养的HepG2肝癌细胞,采用MTT法检测其对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测其对各时相细胞周期分布,免疫组织化学的方法观察其对凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3(caspase-3)、半胱天冬酶-9(caspase-9)的影响。结果:小半夏加茯苓方能抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在作用24 h时效果最明显。流式检测结果显示,药物作用细胞24 h,小半夏加茯苓方阻滞细胞于S期,环磷酰胺将细胞阻滞于G2期。小半夏加茯苓方作用24 h能诱导HepG2细胞的凋亡,caspase-3表达与药物的剂量呈正相关。结论:小半夏加茯苓方可能通过激活caspase-3蛋白表达,从而诱导肝癌细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,有效抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用。     

番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法设AS-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50μg/mL)、顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察。结果AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48hIC50为6.67μg/mL。结论番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。