pGPH1-GFP—RKIP的构建及其对白血病细胞株CCRF-CEM化疗敏感性的影响

目的构建Raf激酶抑制蛋白（RKIP）小干扰RNA（siRNA）重组质粒pGPHl-绿色荧光蛋白（GFP）-RKIP,观察其对白血病细胞株CCRF-CEM化疗敏感性的影响。方法构建RKIP的siRNA重组质粒pGPHl-GFP-RKIP,电穿孔转染至儿童白血病细胞CCRF—CEM,以Westernblot法检测细胞RKIP、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（P．ERK）、磷酸化核因子KB抑制蛋白（p-IKB）;以不同浓度9-硝基喜树碱（9NC）处理上述细胞,Westernblotting法检测细胞RKIP,流式细胞仪法检测细胞caspase-3活性（计算细胞凋亡率）,同上检测RKIP表达。结果成功构建pG．PHl-GFP-RKIP;pGPHl-GFP-RKIP和pGPHl-GFP的转染效率分别为90．04％、91．32％;与pGPHI．GFP转染的细胞比较,pGPHl-GFP-RKIP转染的细胞RKIP表达下调,p-ERK、P—IKB表达上调（P均〈0．05）;9NC处理后CCRF-CEM细胞RKIP表达上调、细胞凋亡率下降（P均〈0．05）。结论成功构建了RKIP的siRNA质组质粒,RKIP表达变化可能与白血病细胞化疗敏感性有关。     

RKIP在胆囊癌中的表达及临床意义

目的: 探讨胆囊癌中Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的表达状况及其与胆囊癌临床病理指标和预后的可能关系.方法: 2006-01/2009-06苏州大学附属第二医院胆囊癌患者50例, 外科手术切除术后病理证实的存档组织蜡块.所有病例术前未进行放化疗, 有完整的临床病理资料.采用免疫组织化学Elivision Plus法, 对50例原发性胆囊癌与38例慢性胆囊炎组织中RKIP表达进行检测.结果: 在胆囊癌组织中表达的阳性率明显高于慢性胆囊炎组织, 差异有统计学意义(74.0%vs 0.8%, P<0.01).RKIP表达水平与胆囊癌患者年龄、性别、组织学类型及是有结石等因素均无明显关系(P>0.05), 但RKIP高表达与胆囊癌的低分级(31.8% vs 92.3%, P<0.05)、淋巴结或远处转移(75.0% vs 100.0%, P<0.05)以及术后生存时间减少(50.0% v s 93.8%,P<0.05)有明显关系.结论: RKIP在胆囊癌中高表达可能提示其在胆囊癌的发生、发展中起重要作用.     

Raf激酶抑制蛋白(RKIP)基因与肿瘤的研究进展

肿瘤的发生、发展和转移是一个高度复杂的过程。基因的点突变、染色体易位、致癌基因的扩增、抑制基因的丧失都是导致癌变的主要原因。研究表明,促进肿瘤形成的遗传因素包括遗传学机制和表观遗传学机制两大类。细胞突变由DNA核苷酸序列改变而引起的称为遗传学改变;基因表达水平的变化由碱基修饰的改变而引起的称为表观遗传学改变。这两种改变相互交错存在,共同促进肿瘤的形成。除了上述因素外,信号     

白血病抑制因子对K562细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的探讨白血病抑制因子（LIF）体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1—3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48h;应用MTT法、Hoeehst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况。结果观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组〉观察2组〉观察3组、6h〉12h〉24h〉48h（P均〈0．05）;观察1—3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组〈观察2组〈观察3组、6h〈12h〈24h〈48h（P均〈0．05）;观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6h〈12h〈24h〈48h（P均〈0．05）。结论LIF能以浓度-时间依赖性抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达。     

白血病抑制因子对K62细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的 探讨白血病抑制因子(LIF)体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1～3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48 h;应用MTT法、Hoechst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况.结果 观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组＞观察2组＞观察3组、6 h＞12 h＞24 h＞48 h(P均＜0.05);观察1～3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组＜观察2组＜观察3组、6 h＜12 h ＜24 h＜48 h(P均＜0.05);观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6 h＜12 h＜24 h＜48 h(P均＜0.05).结论 LIF能以浓度—时间依赖性抑制K562细胞 增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达.     

肺癌组织中RKIP基因启动子区甲基化状态观察

目的观察肺癌组织中Raf激酶抑制蛋白（RKIP）基因启动子区甲基化状态变化,探讨其与肺癌临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR和甲基化特异性PCR法（MSP）分析肺癌及相应癌旁肺组织中RKIP基因表达情况及其启动子区甲基化状态。结果肺癌组织中RKIP基因启动子区甲基化率为45．8％（27／56）,明显高于癌旁肺组织的13．3％（2／56）,P〈0．05。所有甲基化的肺癌组织中RKIP基因均无表达。有淋巴结转移的43例肺癌组织中,27例RKIP基因启动子甲基化;无淋巴结转移的40例中,11例RKIP基因启动子甲基化（P〈0．05）。结论肺癌组织中RKIP基因失表达与其启动子区甲基化有关,这可能是肺癌发生发展以及转移的原因之一。     

贲门腺癌组织中RKIP、E-cadherin的表达变化及相关性

目的 观察Raf激酶抑制蛋白（RKIP）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）在贲门腺癌组织中的表达变化,并探讨其相关性.方法 应用免疫组化SP法检测160例贲门腺癌组织及癌旁非肿瘤组织中RKIP、E-cadherin的蛋白表达情况,分析其表达与临床病理参数的关系以及两者表达的相关性.结果 RKIP和E-cadherin在贲门腺癌组织中表达明显低于癌旁组织（P均＜0.05）.RKIP和E-cadherin在高分化、中分化和低分化的贲门腺癌组织中的表达差异有统计学意义（P均＜0.01）,在有淋巴结转移的贲门腺癌组织中表达低于无淋巴结转移的组织（P均＜0.05）.RKIP和E-cadherin在贲门腺癌组织中的表达呈正相关（r=0.388,P＜0.05）.结论 RKIP和E-cadherin 在贲门腺癌组织中表达降低,且两者表达呈正相关.     

急性淋巴细胞白血病X-连锁凋亡抑制蛋白的表达及意义

急性淋巴细胞白血病（ALL）发生和发展与凋亡受阻密切相关。X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在包括ALL在内的许多恶性肿瘤中过度表达并同时伴随着较差的预后。我们以初治、复发ALL患者及正常志愿者为研究对象,通过RT-PCR法检测XIAP的表达,观察正常人与ALL患者之间XIAP表达的差异。     

索拉非尼对人肝癌HepG2细胞凋亡及其Raf激酶表达的影响

目的观察索拉非尼对人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡及其Raf激酶的影响。方法体外构建培养肝癌HepG2细胞,设A、B组。A组加入索拉非尼0．2ml（将索拉非尼稀释至5μmol／L）,B组不加任何药物。继续培养细胞,于加药后第1、3、5、7天采用流式细胞术和荧光共振能量转移法（FRET）观察两组细胞凋亡及其Raf激酶表达变化。结果A组HepG2细胞Raf激酶活性为45．21％,低于B组的98．11％（P〈0．05）;A组加药后第1、3、5、7天Raf激酶活性分别为96．34％、78．21％、65．21％、45．11％（P均〈0．05）。与B组比较,A组细胞凋亡率明显增加、S期细胞明显减少（P均〈0．05）。结论索拉非尼可以有效地抑制人肝癌HepG2细胞Raf激酶的表达,使S期细胞明显减少,从而抑制HepG2细胞的生长。     

SiRNA靶向RKIP促进肝星状细胞在细胞外基质上的黏附

目的研究RKIP低表达对肝星状细胞(HSC)在细胞外基质上黏附功能的影响。方法通过RKIP的RNAi腺病毒载体感染HSC细胞株LX-2,实验分为RKIP的RNAi组(RKIP-RNAi-AD)和阴性对照组(NC-RNAi-GFP-AD)。Western印迹方法确定病毒感染后验证外源RKIP在细胞内表达情况。采用matrigel、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白包被的24孔板模拟肝纤维化病理状态下ECM成分的改变,将腺病毒干预后的LX-2以1.0×105/ml的浓度接种到包被后24孔板上,37℃培养1 h后,甲醛固定,结晶紫染色。200倍纤维镜下观察并计数黏附的细胞数。结果 RKIP的RNAi组较对照组蛋白表达减少(0.29±0.06 vs 0.73±0.14,P<0.05)。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的低表达促进细胞在matrigel上的黏附(170±25 vs 66±12,P<0.05)。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的低表达促进细胞在I型胶原上的黏附(200±25 vs 82±13,P<0.05)。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的低表达促进细胞在纤维连接蛋白上的黏附(276±28 vs 96±17,P<0.05)。结论 SiRNA靶向RKIP可以促进HSC在胶原基质上的粘附。     

rsTRAIL诱导白血病细胞系HL60凋亡及其作用机制

用不同浓度可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rsTRAIL）处理白血病HL60细胞系,采用AO/EB双重荧光染色法、MTT比色法、流式细胞分析术、染色体核型分析等多种细胞及遗传学方法检测rsTRAIL诱导白血病HL60细胞凋亡的作用。结果rsTRAIL处理后HL60细胞可见典型的凋亡特点,细胞生长抑制率和凋亡率从50 ng/ml的8.4%和21.4%上升到5 000 ng/ml的70.0%和86.5%,具显著的剂量和时间效应;高浓度rsTRAIL（3 200 ng/ml、5 000 ng/ml）作用HL60细胞后,出现体积增大,染色体多倍化（130~144条）的细胞,流式分析结果提示细胞出现裂亡。认为rsTRAIL对白血病细胞系HL60的细胞及遗传学影响非常显著,可通过诱导凋亡的方式杀伤肿瘤细胞。     

急性白血病细胞体外对Jurkat细胞凋亡的影响

为探讨白血病细胞凋亡相关基因 (Fas)的功能性表达情况 ,将 2 7例白血病患者的白血病细胞与 Jurkat细胞体外孵育后 ,用原位末端标记法 (TUNEL )测定单纯 Jurkat细胞 (对照组 )、不加和加入不同浓度抗凋亡相关基因配体 (Fas L)的 Jurkat细胞凋亡率。结果显示 ,不加抗 Fas L 急性非淋巴细胞白血病组 (ANL L 组 )与对照组比较 ,凋亡率明显增高 (P<0 .0 1) ,急性淋巴细胞白血病组 (AL L 组 )与对照组比较仅轻度增高 (P<0 .0 5 ) ,两者均随细胞浓度的增加而凋亡率增高 ;ANL L组加与不加抗 Fas L 相比凋亡率明显减少 (P<0 .0 1) ,随抗 Fas L浓度的增加而凋亡率减少 ,AL L 组加与不加抗 Fas L 相比凋亡率轻度减少 (P<0 .0 5 ) ,也随抗 Fas L 浓度的增高而减少 ,但不如 ANL L组凋亡率变化明显。提示急性白血病细胞存在 Fas L的功能性表达 ,ANL L较 AL L的 Fas L表达高     

RKIP和MMP-9在结直肠癌中的研究进展

Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族成员之一,可抑制肿瘤细胞转移,与肿瘤的发生、发展密切相关。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是一种能降解细胞外基质的内肽酶,在肿瘤侵袭、转移过程中发挥重要作用。本文就RKIP和MMP-9在结直肠癌中的研究进展作一综述。     

慢性髓细胞白血病患者血小板凋亡蛋白表达的研究

慢性髓细胞白血病患者血小板凋亡蛋白表达的研究杨林花沈迪周剑锋乔振华张玉金王爱莲魏文宁慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）半数以上病例诊断时伴有巨核细胞及血小板增多，致使部分病例发生血栓或出血。有核细胞的过度增殖可能是由于细胞的凋亡基因表达异常，现认为无核细胞也...     

细胞凋亡与白血病

细胞凋亡与白血病马东初，方军捷，张素芬细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）又称程序性细胞死亡不仅存在于正常组织与器官，调节着机体细胞生长与更新间的平衡稳定，也存在于各种肿瘤组织，与肿瘤的发生有密切的联系。它与白血病的关系也越来越引起人们的重视，我们就此问题...     

槲皮素对白血病细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨槲皮素对白血病细胞增殖、凋亡的影响。方法 人原髓细胞白血病细胞(HL-60)加入10、20、40μmol/L浓度的槲皮素100μl,分别记为槲皮素10、20、40μmol/L组,另加入RPMI1640培养液100μl为空白组。比较各组细胞增殖、凋亡、黏附能力、迁移能力、侵袭情况;检测各组HL-60细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)家族蛋白8、9、3的表达情况。结果 槲皮素抑制白血病细胞的增殖活力,其活力随槲皮素浓度和作用时间的增加而加强。槲皮素各组凋亡指数较空白组增加,黏附率、迁移率、侵袭数较空白组降低,差异有统计学意义(P<0.05),且槲皮素各组呈显著浓度依赖性(P<0.05)。40μmol/L槲皮素能够显著上调caspase9、3蛋白表达(P<0.05)。结论 槲皮素能够抑制白血病HL-60细胞的增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,对其具有较强的杀伤作用,凋亡机制与细胞中caspase9、3蛋白有关。     

细胞色素C对白血病细胞增殖、凋亡及Survivin表达的影响

凋亡是细胞的程序性死亡,该过程的启动和实施涉及一系列复杂的生化反应并受多种分子调节。死亡蛋白酶(Caspase)是其中的一组关键分子,在凋亡过程中起着中心调控作用,而线粒体是导致Caspase级联反应活化和细胞凋亡的第二途径。     

凋亡抑制蛋白Livin在卵巢癌中的表达

采用RT-PCR法检测30例卵巢癌患者和对照组10例良性卵巢组织中Livinα和Livinβ mRNA的表达.发现卵巢癌组织中Livin的阳性表达率为43.33%,良性卵巢组织中Livinα和Livinβ均不表达,两组比较具有统计学差异(P<0.05).认为Livin的两种异构体α和β在卵巢癌组织中高表达,这可能会使其成为卵巢癌诊断和治疗的新靶点.     

抗增殖蛋白过表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响*

目的 探讨抗增殖蛋白（PHB）过表达对人肝癌细胞系HepG₂细胞增殖和凋亡的影响。方法 在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG₂细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测HepG₂细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG₂细胞周期和凋亡。结果 转染pEGFP-N1-PHB细胞增殖明显低于pEGFP-N1空载转染细胞或未转染细胞（P<0.05）;在转染后48 h,转染组G2/M期细胞比例为（27.84±0.47）%,显著高于空载转染组的（17.21±0.64）%或未转染组的（22.67±0.33）%（P<0.001）;转染组细胞凋亡率为（31.72±0.35）%,显著高于空载转染组的（18.66±0.56）%或未转染组的（13.47±0.94）%（P<0.001）。结论 PHB过表达可抑制人肝癌HepG₂细胞增殖,诱导细胞进入G2/M期后被阻滞,并诱导细胞凋亡。     

TXNIP过表达对INS-1细胞凋亡通路的影响

摘要：目的：本文使用腺病毒转染技术,观察在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞过表达TXNIP是否引起细胞凋亡,并对TXNIP介导细胞凋亡的通路进行了初步分析。方法：将处于对数生长期在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞分为三组,即正常培养组,空病毒（Ad-eGFP）组,TXNIP过表达（Ad-TXNIP-eGFP）组,均于转染48h后收集细胞进行指标测定。结果：转染细胞48h时病毒转染率达到高峰,并且荧光蛋白表达量基本一致。同Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组TXNIP mRNA（38.68±7.35 vs 0.73±0.39,P ＜0.01）和蛋白表达量（1.28±0.25 vs 0.62±0.16,P ＜0.01）均明显增高,说明转染及TXNIP过表达成功;与Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组Caspase-3相对活性明显增高（3.823±0.238 vs 0.956±0.107,单位nmol?h-1?mg-1 pro, P＜0.01）;反映下游不同通路的Caspase-8（132.10±27.33 vs 81.01±15.34,单位pg?ml-1 ,P＜0.01）和Caspase-9（290.76±43.15 vs 88.94±14.68,单位pg?ml-1 ,P＜0.01）和Caspase-12活性均明显增高（266.96±18.50 vs 52.05±6.13,单位pg?ml-1 ,P＜0.01）;。结论：单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养下INS-1细胞凋亡,线粒体凋亡途径、死亡受体活化途径和内质网应激介导途径均参与了TXNIP引的起INS-1细胞凋亡的发生。