阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌后NF-kBp56表达的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌后脑组织中NF-kBp56rnRNA及蛋白表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分，应用原位杂交和免疫组化法检测NF-kBp56mRNA及蛋白表达。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中NF-kBp56mRNA和蛋白表达增加（P〈0．01），24h达高峰；给予阿托伐他汀钙干预后能减少缺血脑组织中NF-kBp56mRNA和蛋白表达（P〈0．05），降低神经功能缺损评分（P〈0．05）。结论阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-kBp56mRNA及蛋白表达，减轻缺血再灌损伤。     

在缺血鼠脑中尼莫地平对FADD、FAP-1表达的影响

目的 :探讨脑缺血再灌注后 FADD、 FAP- 1的表达及尼莫地平对它们的影响。方法 :用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,用免疫组化法检测 FADD、 FAP- 1的表达。结果 :对照组及治疗组大鼠缺血再灌注后均有FADD、 FAP- 1的表达 ,治疗组 FAP- 1的表达明显增多 (P<0 .0 1)。结论 :大鼠脑缺血再灌注引起了 FADD、 FAP- 1的表达 ,尼莫地平对 FAP- 1的表达有促进作用。     

依达拉奉对鼠脑缺血再灌后内质网应激相关因子表达的影响

[摘要]目的 研究依达拉奉对内质网应激相关因子表达及神经细胞凋亡的影响。 方法 使用SD大鼠短暂性MCAO模型,RT-PCR法检测缺血侧顶叶皮层PERK mRNA、CHOP mRNA表达,免疫组化法检测p-PERK、CHOP蛋白表达,TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果 PERK mRNA表达与p-PERK蛋白表达均于再灌注后1h达高峰,其后逐渐下降;再灌注1h缺血侧顶叶皮层CHOP mRNA表达增加,于再灌注12h表达达高峰,再灌注1h缺血侧顶叶皮层可见CHOP蛋白表达,再灌注24h表达达高峰;再灌注1h缺血侧梗死灶周围可以观察到凋亡细胞,至再灌注24h达高峰;依达拉奉能下调PERK、CHOP表达,减少神经细胞凋亡。 结论 依达拉奉能下调PERK、CHOP等ERS基因表达,减少神经细胞凋亡,可能通过抑制内质网应激在上游发挥神经保护作用。     

FADD在脑缺血鼠大脑皮质锥体细胞中表达

目的 :探讨在Fas死亡区内的相关蛋白 (Fas associatedproteinwithdeathdomain ,FADD)在大鼠局灶性缺血损伤中的表达及其与缺血性神经细胞损伤的关系。方法 :用免疫组化法观察大鼠局灶性脑缺血损伤后脑组织中的FADD蛋白免疫反应阳性细胞分布。结果 :脑缺血组大鼠脑内发现FADD的免疫阳性表达细胞以大脑皮质锥体细胞、神经轴突、神经胞体较明显 ,分布于患侧大脑皮质、基底节、海马等部位。结论 :FADD的活化及超量表达可能介导缺血神经细胞信号传导过程 ,并参与了脑缺血神经细胞损伤与修复的病理生理过程     

胰岛素对脑缺血再灌注后bFGF表达的影响

目的 研究胰岛素对脑缺血再灌注后碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)蛋白表达的影响。方法 用线栓法制成大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型，外周应用胰岛素保持血糖水平正常，免疫组化观察单纯缺血再灌注后bFGF表达及胰岛素对它们的影响。结果胰岛素组bFGF表达明显强于未用药组。结论 胰岛素增强缺血再灌注后bFGF的表达可能是其具有脑保护作用的机制之一。     

轻度低温对脑缺血再灌注后胶质细胞酸性蛋白表达的影响

目的：观察轻度低落曙对脑缺血再灌注后星形胶质细胞活性和组织病理变化的影响。方法：沙土鼠２４只，分非缺血对照组，缺血对照组和轻度低温组（３２－３３℃）。夹闭双侧颈总动脉２０ｍｉｎ再灌注４８ｈ，采用免疫组织化学法检测ＧＦＡＰ表达及ＨＥ染色观察组织病理变化。结果：图象分析显示缺血对照组ＧＦＡＰ表达的灰阶值与非缺血对照组比较明显增强，且阳性细胞数增多，胞体肿胀，轻度低温组ＧＦＡＰ表达基本恢复到非缺血对照组     

高血糖对大鼠脑缺血再灌注后碱性成纤维因子表达的影响

目的观察高血糖条件下大鼠脑缺血再灌注后碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）表达的情况。方法以链脲佐菌素诱导产生实验性糖尿病大鼠,饲养6周左右,经测定血糖〉16.7mmol/L确定糖尿病模型的建立。以线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,进行梗死体积测定,采用免疫组化方法观察大鼠脑缺血再灌注6h、12h、24h、48h时程bFGF的表达情况,比较糖尿病大鼠及正常大鼠脑缺血再灌注后脑内bFGF的表达的差异。结果（1）相同时间点糖尿病组大鼠脑梗死体积明显大于正常血糖组。（2）正常血糖组大鼠及糖尿病组大鼠脑缺血后bFGF的表达均增加,糖尿病组大鼠脑缺血再灌注后各时间点bFGF的表达均低于正常血糖组（P〈0.01）。结论脑缺血再灌注损伤可以诱导bFGF表达增强,提示bFGF对缺血性脑损伤有保护作用。糖尿病加重了大鼠脑缺血再灌注损伤,造成bFGF的表达不足。     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后诱导性一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注时氧化氮合酶(iNOS)在PACAP脑保护机制中的作用.方法 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,对36只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和PACAP组,在大鼠脑缺血2h后进行24h、48h再灌注,应用免疫组化法检测脑组织iNOS的表达.结果 脑缺血再灌注后,与假手术组比较,iNOS的表达量显著增加,阳性细胞数分别为60.02±4.23、80.36±6.24,P<0.01;应用PACAP后与缺血再灌注组比较,iNOS表达的峰值明显降低,分别为30.47±5.24、40.56±4.84,P<0.01.结论 PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注时iNOS的表达,这可能是其脑保护作用之一.     

川芎嗪、黄芪对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Fos蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪、黄芪对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Fos蛋白表达的影响.方法48只雄性SD大鼠,随机等分成4组,每组12只.A组:假手术组;B组:生理盐水对照组;C组:川芎嗪治疗组;D组:黄芪治疗组.采用TUNEL法及免疫组化法分别检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡及Fos蛋白的表达.结果与A组比较,B组大鼠神经细胞凋亡数目及Fos蛋白阳性细胞数目增多,Fos蛋白阳性细胞平均灰度值下降(P＜0.01);与B组比较,C组、D组大鼠神经细胞凋亡数目及Fos蛋白阳性细胞数目下降,Fos蛋白阳性细胞平均灰度值升高(P＜0.01).结论川芎嗪、黄芪均可能通过抑制脑缺血再灌注后Fos蛋白表达而减少神经细胞凋亡.     

孕酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后TASK3蛋白表达的影响

目的观察孕酮对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠脑组织TASK3蛋白表达的影响,探讨孕酮对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R组)和孕酮+I/R组,后3组按缺血再灌注后不同时间随机分为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h和120 h 8个亚组。线栓法建立大鼠右侧MCAO模型,缺血2 h再灌注24 h进行脑损伤评估,检测各组大鼠死亡率、神经功能缺陷评分以及2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积;采用免疫印迹法检测各组大鼠脑组织缺血2 h再灌注后不同时间点TASK3蛋白的表达。结果孕酮+I/R组大鼠死亡率(18.18%)明显低于I/R组(40.66%),该组动物脑梗死体积(21.85%±3.53%)也显著低于I/R组(37.21%±3.50%)(P<0.01),且该组神经功能缺陷评分(2.00±0.74)显著低于I/R组(2.67±0.49)(P<0.05)。与正常对照组相比,假手术组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达无明显变化,而I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达均显著降低(P<0.05);与I/R组相比,孕酮+I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达显著升高(P<0.05)。结论孕酮对脑缺血再灌注损伤的大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调TASK3通道蛋白的表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血后FADD和Daxx的表达

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后Fas相关蛋白FADD和Daxx在缺血半暗带的表达变化.方法 ①将SD大鼠随机分为假手术组和模型组.线栓法制备大鼠大脑中动脉梗阻(MCAO)模型,缺血2 h后恢复再灌注,再灌注后1、3、6、12和24 h处死动物.RT-PCR、免疫组织化学、Western blot等方法分别检测缺血半暗带FADD、Daxx mRNA和蛋白的表达变化;②免疫荧光双标分别标记神经元核区和FADD及Daxx蛋白染色区,激光扫描共聚焦显微镜观察二者在缺血再灌注前后神经元的定位.结果 再灌注3 h假手术组可以检测到少量的FADD mRNA和蛋白表达(mRNA:0.441±0.038;蛋白:156.78±13.04),模型组FADD mRNA和蛋白表达变化一致,在再灌注3 h开始上升(mRNA:0.628±0.059,P＜0.01;蛋白:131.28±5.99,F=15.692,P＜0.01),12 h达到高峰(mRNA:0.971±0.070,F=56.233,P＜0.01;蛋白:104.36±8.55,P＜0.01),24 h显著下降(mRNA:0.551±0.042,P＜0.05;蛋白:123.01±11.87,P＜0.01),模型组FADD mRNA和蛋白表达变化一致,在再灌注3 h开始上升(P＜0.01),12 h达到高峰(P＜0.01),24h显著下降(P＜0.05);假手术组可以检测到较高的Daxx mRNA和蛋白表达;模型组Daxx mRNA和蛋白表达变化一致,再灌注3 h开始上升(P＜0.01),此后持续上升,一直至24 h仍维持较高水平表达(P＜0.01);激光扫描共聚焦显微镜显示脑缺血再灌注后FADD的免疫活性位于胞质,Daxx的免疫活性从胞核向胞质移位.结论 大鼠脑缺血急性期FADD、Daxx mRNA和蛋白表达增加,可能参与了脑缺血后促凋亡作用.     

大鼠局灶性脑缺血再灌后转录因子ATF4的表达变化

目的观察鼠脑缺血再灌注后ATF4mRNA及蛋白的表达变化。方法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,RT-PCR法、免疫组化染色分别测定鼠脑缺血半暗带区再灌注后不同时相ATF4mRNA及蛋白的表达变化。结果模型组ATF4mRNA与蛋白于再灌注后1h表达增加;ATF4mRNA表达于再灌注后6h达高峰,其蛋白表达于再灌注后24h达高峰。结论鼠脑缺血再灌注可诱导ATF4在缺血半暗带区表达,提示ATF4可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能损伤、细胞凋亡及caspasc-3蛋白表达的影响.方法 雄性SD大鼠24只采用随机数字表法分为假手术组、脑缺血再灌注组、生理盐水治疗组、依达拉奉治疗组,每组6只.除假手术组外,其余3组均采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型.依达拉奉治疗组于脑缺血开始时及再灌注后12 h分别腹腔注射依达拉奉3 mg/kg,生理盐水治疗组同时间注射等量生理盐水;假手术组同样过程造模,但不插入尼龙线造成缺血.造模后24 h后进行大鼠神经行为学评分;应用免疫组织化学及Western blot检测caspase-3蛋白表达水平的变化;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)研究神经细胞凋亡的变化.结果 与脑缺血再灌注组及生理盐水治疗组相比,依达拉奉治疗组大鼠神经行为学评分明显减少,caspase-3免疫阳性细胞及蛋白表达明显减少,凋亡细胞也减少,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 依达拉奉能有效减轻脑缺血灌注损伤后神经细胞凋亡.改善神经功能缺损症状,推测其机制与抑制caspase-3蛋白表达有关.     

Ketamine inhibits c-Jun protein expression in mouse hippocampus following cerebral ischemia/reperfusion injury

A model of cerebral ischemia and reperfusion was established in mice.Mice were treated with ketamine via intraperitoneal injection immediately following ischemia or ischemia/reperfusion.Ketamine did not remarkably change infarct volume in mice immediately following ischemia,but injection immediately following ischemia/reperfusion significantly decreased infarct volume.Ketamine injection immediately after ischemia or ischemia/reperfusion inhibited c-Jun protein expression in mouse hippocampus,but nuclear factor kappa B expression was unaltered.In addition,the Longa scale score for neural impairment was not reduced in mice following cerebral ischemia/reperfusion.These results indicate that ketamine can protect mice against cerebral ischemia and reperfusion injury by modulating c-Jun protein expression in mouse hippocampus.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同脑区iNOS表达的影响

目的 探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同脑区诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 雄性SD大鼠,随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温组.采用线栓法制作大脑中动脉闭塞再灌注模型,于缺血后48h,观察不同组间组织形态学变化,检测不同脑区iNOS蛋白表达、iNOS活性和产物NO含量.结果 常温缺血后48h,纹状体和皮质均检测到iNOS活性升高和免疫阳性反应,且皮质缺血半暗带区iNOS免疫反应明显强于纹状体和皮质缺血核心区.亚低温明显缩小梗死面积,抑制皮质和纹状体iNOS活性,明显下调半暗带区iNOS蛋白表达,减少NO产生.结论亚低温可能通过减少半暗带区iNOS蛋白表达,抑制iNOS活性,减少NO产生而起到脑保护作用.     

局灶性脑缺血/再灌注损伤后大鼠脑组织tPA表达变化与细胞凋亡研究

目的　探讨大鼠脑缺血 /再灌注后脑组织内组织型纤溶酶原激活物 (t PA)表达变化及与细胞凋亡的关系和意义。方法　采用大鼠局灶性脑缺血 /再灌注模型 ,应用免疫组化染色及原位杂交技术检测脑组织 t PA表达变化 ,TU NEL 染色观察神经元的凋亡及其发生规律。结果　 t PA蛋白及 m RNA在缺血再灌注早期即开始表达 ,主要见于皮质损伤区周围及海马区 ,阳性着色的神经元表达明显 ,血管表达较弱。再灌注 4 8h神经元表达明显增强 ,缺血灶及其周边的微血管内皮表达也明显增强。再灌注 72 h表达有所下降。凋亡细胞主要出现于大脑皮质及尾壳核病变中心区的周围 ,再灌注 4 8～ 72 h达高峰。结论　脑缺血 /再灌注损伤可诱导神经元及血管内皮细胞 t PA表达增加 ,t PA可能通过促进细胞凋亡而介导再灌注损伤。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后FADD mRNA及其蛋白的表达变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内Fas死亡结构域相关蛋白（FADD）mRNA及蛋白的表达变化。方法用半定量的逆转录PCR（RT-PCR）法检测缺血2h再灌注不同时间点缺血半暗带皮质内FADD mRNA的表达,Western blot检测FADD蛋白表达的变化。结果缺血半暗带脑皮质内FADD mRNA及其蛋白的表达于缺血灌注后3h明显升高,再灌注后12h达高峰（P＜0．01）,至再灌注后24h明显下降。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内FADD mRNA及蛋白表达均明显增加,提示FADD可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

高血压对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤组织病理结构的影响

目的研究高血压对脑缺血性损伤的病理及其超微结构的影响。方法用线栓法将肾性高血压大鼠和正常大鼠制成局灶性脑缺血再灌注模型；TTC染色及图像分析系统测定局部脑缺血后不同时间的梗死灶体积．同时HE染色及透射电镜观察大鼠局灶脑缺血再灌注后及假手术组的组织病理及超微结构的变化。结果高血压大鼠与正常血压大鼠相比局部缺血再灌注在同等时间内梗死灶的面积较大，超微结构改变也较明显。结论高血压引起脑内微小动脉的改变．侧支循环减少．加重脑缺血损伤。     

依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠caspase-3、Bcl-2表达的影响

目的 对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠,给予自由基清除剂依达拉奉后,观察再灌注不同时间点脑组织caspase-3和Bcl-2蛋白表达情况,探讨依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 制作局灶性脑缺血再灌注模型.随机分为正常组、假手术组、脑缺血组、依达拉奉组.假手术组于术后,脑缺血组和依达拉奉组于缺血1h后再灌注2h、6h、12h、24h、48h不同时间点,依达拉奉组于再灌注后30min腹腔内及皮下各注射依达拉奉1 次(3mg/kg.wt),30min 后重复1次.按时间点处死大鼠,灌注固定、取脑,行免疫组化染色,观察和计数不同脑区的caspase-3和Bcl-2蛋白表达阳性细胞数.结果 脑缺血组再灌注后2h在大脑额、顶叶皮质和海马均可见到caspase-3和Bcl-2阳性细胞,caspase-3表达高峰在12h;Bcl-2表达高峰在6h.依达拉奉组各时间点caspase-3阳性细胞较脑缺血组明显减少,而Bcl-2阳性细胞数明显增加 (均为P＜0.05).结论 依达拉奉可抑制caspase-3,提高Bcl-2的蛋白表达,对脑缺血再灌注损害有明显的保护作用.     

大鼠脑缺血再灌后凝血酶与PAR-1的表达及意义

目的探讨大鼠脑缺血再灌后凝血酶（thrombin）及蛋白酶活化受体-1（PAR-1）的表达变化及意义。方法栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,用Western Blot方法检测对照组及脑缺血2h再灌注不同时程组（12、24h,3、7d）凝血酶和PAR1蛋白表达水平。结果对照组可以检测到少量凝血酶（thrombin）和PAR-1的表达,两种蛋白于再灌注12h显著上升。3d达高峰（P〈0．01）,7d下降;缺血再灌注后凝血酶与PAR-1的表达呈高度正相关（r=0．934,P〈0．01）。结论凝血酶和PAR-1蛋白的表达增加可能与脑缺血冉灌注损伤的发病机制有关;凝血酶可能通过激活PAR-1参与了再灌注损伤的病理生理过程。