S100A4和hMLH1在甲状腺腺瘤和滤泡癌中的表达及其鉴别诊断意义

目的探讨S100A4和hMLH1蛋白在甲状腺滤泡性良、恶性肿瘤中的表达及鉴别诊断意义。方法采用免疫组化PV-9000二步法检测60例甲状腺滤泡型肿瘤中S100A4和hMLH1蛋白的表达。结果 S100A4在甲状腺腺瘤及甲状腺滤泡癌中的阳性表达率分别为26.33%(7/30)和70%(21/30),而在30例癌旁正常组织中的阳性表达率为100%,腺瘤与滤泡癌间差异极显著(P<0.01)。hMLH1蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺滤泡癌中的阳性表达率分别为83.33%(25/30)和20%(6/30),两组差异极显著(P<0.01)。结论 S100A4和hMLH1蛋白在甲状腺滤泡性良、恶性肿瘤中的表达差异,有助于临床的鉴别诊断。     

VEGF、p53在甲状腺肿瘤中的表达意义

目的 :探讨 VEGF、p5 3在甲状腺肿瘤中的表达意义。方法 :用免疫组化 SP法 ,检测甲状腺良性病变 4 0例、甲状腺癌 10 0例中 VEGF、p5 3的表达。结果 :在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、甲状腺乳头状癌、滤泡癌、未分化癌中 ,VEGF表达阳性率分别为 0 %、2 0 .0 %、2 6 .7%、5 7.8%、6 1.9%、6 9.2 % ,p5 3表达阳性率分别为 0 %、15 .4 %、15 .4 %、36 .4 %、4 2 .9%、4 6 .2 % ,均与组织学类型密切相关 (P<0 .0 0 1,P<0 .0 0 1)。 VEGF与 p5 3表达率在甲状腺腺瘤与滤泡癌中 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。两者表达率呈正相关 (R=0 .6 79,P<0 .0 1)。结论 :VEGF、p5 3是鉴别甲状腺良恶性肿瘤及判断其生物学行为的重要参考指标 ,p5 3可上调 VEGF的表达。     

MMP2、MMP9、Galectin-3、CK19、及Ret在甲状腺滤泡型肿瘤中的表达

目的　探讨MMP2、MMP9、Galectin 3、CK19和Ret在甲状腺良、恶性滤泡型肿瘤中的表达情况 ,以及其在病理诊断中的价值。方法　运用免疫组化方法检测 35例甲状腺滤泡癌、36例甲状腺腺瘤MMP2、MMP9、Galectin 3、CK19和Ret的表达情况。结果　MMP2和MMP9在甲状腺滤泡癌表达阳性率为 10 0 % ,而在甲状腺腺瘤中表达分别为 2 7.8%及 4 7.2 % ,二者在良、恶性肿瘤的表达差异极显著 (P <0 .0 1)。Galectin 3表达阳性率分别为 4 8.6 %及13.9% (P <0.0 5 )。CK19在甲状腺滤泡癌中阳性有所增高 ,但与腺瘤比较表达无差异。Ret几乎不在甲状腺滤泡型肿瘤中表达。同时观察 15例甲状腺滤泡癌癌旁组织 ,5种蛋白均不表达或表达甚少。结论　MMP2、MMP9及Galectin-3在恶性甲状腺滤泡型肿瘤中的表达高于良性 ,可能三者与促进甲状腺滤泡型肿瘤的浸润机制有关 ,其免疫组化染色虽无绝对特异性 ,但联合检测可能更有助于临床鉴别诊断     

p53、bcl-2蛋白在鼻NK／T淋巴瘤的表达和细胞凋亡及其预后的关系

目的 :探讨 p5 3、bcl- 2蛋白在鼻 NK/ T淋巴瘤表达 ,及其与细胞凋亡和预后的关系。方法 :应用原位末端标记技术和免疫组织化学 (SP法 ) ,检测 2 4例鼻 NK/ T淋巴瘤中细胞凋亡和 p5 3、bcl- 2蛋白的表达水平。结果 :p5 3、bcl- 2蛋白在鼻 NK/ T淋巴瘤表达的阳性率分别为 6 2 .5 % (15 / 2 4 )和 16 .7% (4 / 2 4 ) ;细胞凋亡与 p5 3蛋白明显负相关 (P<0 .0 0 5 ) ,与 bcl- 2蛋白表达无关 (P>0 .5 )。 p5 3表达和细胞凋亡与患者的预后无关 (P>0 .0 5 )。结论 :鼻 NK/ T淋巴瘤细胞凋亡调控及其发病机制是受多基因调节的复杂过程 ;突变型 p5 3是抑制该肿瘤细胞凋亡的一个重要因子。但瘤细胞凋亡和 p5 3蛋白的表达水平与患者平均生存时间未见明显相关性     

甲状腺肿瘤原位细胞凋亡检测与FHIT表达研究

目的：研究原位细胞凋亡指数及脆性组氨酸三联体在原发性甲状腺肿瘤中表达及其与病变的关系。方法：对于87例原发性甲状腺肿瘤（乳头状腺癌38例,滤泡性腺癌21例,未分化癌5例,腺瘤23例）分别应用原位细胞凋亡检测试剂盒测定凋亡指数及应用免疫组化方法检测脆性组氨酸三联体表达情况。结果：凋亡指数及脆性组氨酸三联体在各甲状腺肿瘤组织均存在表达,凋亡指数在腺癌表达高于腺瘤（P〈0.01）,脆性组氨酸三联体在腺瘤表达显著高于腺癌组（P〈0.05）;凋亡指数及脆性组氨酸三联体灰度值有负相关性（r=-0.39,P〈0.05）。结论：凋亡指数及脆性组氨酸三联体的表达与甲状腺肿瘤显著相关,检测凋亡指数及脆性组氨酸三联体水平对于鉴别甲状腺良恶组织具有重要参考意义。     

Ki-67与p27在肾上腺皮质肿瘤中的表达及意义

[目的]研究Ki-67与p27在良恶性肾上腺皮质肿瘤中的表达情况,探讨它们作为鉴别良恶性肾上腺皮质肿瘤的生物学参考指标的可行性.[方法]采用免疫组化法(SP),检测12例正常肾上腺、10例肾上腺皮质腺癌和60例肾上腺皮质腺瘤中细胞增殖标记Ki-67 抗原(Ki-67)与细胞周期的负性调控因子p27的表达,并分析它们的表达情况与良恶性肾上腺皮质肿瘤之间的关系.[结果]①Ki-67及p27在正常组与腺瘤组比较差异无显著性(P＞0.05),正常组与腺癌组、腺瘤组与腺癌组的表达差异均有显著性(P＜0.05);Ki-67腺癌组阳性表达率高于腺瘤组,腺瘤组P27阳性表达率高于腺癌组.②Ki-67表达指数(Ki-67LI)与p27表达指数(p27LI)呈负相关,即在各组的表达中,Ki-67LI越高,p27LI越低.[结论]检测Ki-67和p27可能为鉴别良恶性肾上腺皮质肿瘤提供辅助生物学参考指标.联合检测Ki-67和p27可能提高鉴别良恶性肾上腺皮质肿瘤的敏感性,可以考虑将Ki-67LI＞4%,p27LI＜13%作为肾上腺皮质肿瘤恶性倾向大的辅助参考标准.     

甲状腺肿瘤原位细胞凋亡检测与PPARγ表达的研究

目的：研究原位细胞凋亡指数（apoptosis index，AI）及核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）在原发性甲状腺肿瘤中的表达及其与病变的关系。方法：对87例原发性甲状腺肿瘤组织（乳头状腺癌38例，滤泡性腺癌21例，未分化癌5例，腺瘤23例）分别应用原位细胞凋亡检测（TuNEL）试剂盒测定AI及应用免疫组化方法检测PPARγ表达情况。结果：AI及PPARγ,蛋白在各甲状腺肿瘤组织均有表达，AI在腺癌表达高于腺瘤（P〈0．01），PPARγ在滤泡性腺癌及腺瘤表达显著高于乳头状腺癌及未分化癌（P〈0．01）；AI及PPARγ有正相关性（r=0．554，P〈0．01）。结论：AI及PPARγ的表达与甲状腺肿瘤显著相关，检测AI及PPARγ水平对于鉴别原发性甲状腺滤泡癌具有重要参考意义。     

大肠腺癌p53蛋白表达的临床病理意义

目的 :探讨p5 3蛋白表达在大肠腺癌中的临床病理意义。方法 :采用免疫组织化学Envision二步法检测 4 0例大肠腺癌、 4 0例大肠腺瘤的p5 3表达 ,选 10例正常大肠粘膜作为对照研究 ,分析p5 3蛋白表达与大肠腺癌临床病理因素的关系。结果 :正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠腺癌组织中p5 3蛋白表达逐渐增强 ,且它们间表达差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 :p5 3蛋白表达异常与大肠腺癌发生发展有关 ,检测p5 3蛋白表达对大肠早期腺癌判断、分级、分期和预后估计具有一定指导意义。     

CDK2、p21和p27在生长激素腺瘤中的表达及CDK2抑制剂的体外应用

目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期调节因子p21和p27在生长激素腺瘤中的表达水平,观察CDK2抑制剂环O6-己基甲基鸟嘌呤(O6)对GH3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法构建包含3例垂体和46例腺瘤标本的组织芯片,按Knosp分级将肿瘤分为侵袭组(n=15)和非侵袭组(n=31),免疫组织化学技术分析CDK2、p21和p27的蛋白水平,结合随访信息分析其与临床特性的关系。GH3细胞分为O6组(0. 4μmol/L和4μmol/L)和二甲基亚砜组(DMSO),细胞增殖实验MTS法检测细胞活力; Annexin V实验检测细胞凋亡; Brdu实验检测细胞周期,Western blotting实验检测CDK2、p21和p27变化。结果腺瘤标本中CDK2、p21和p27的H-score评分分别为(104. 8±28. 3)分、(195±39. 2)分、(158. 8±32. 3)分,CDK2在侵袭组表达较非侵袭组明显增高[(140±31. 7)分vs.(87. 8±26. 7)分],p21[(152. 3. 1±35. 2)分vs.(215. 7±41. 2)分]和p27[(118. 1±28. 4)分vs.(173. 7±34. 3)分]则明显降低(P 0. 05)。O6处理GH3细胞后,细胞活力与DMSO组相比,不同剂量O6处理组细胞活力分别为DMSO组的(84. 5±7. 6)%和(76. 2±7. 1)%(24 h)、(75. 7±7. 3)%和(69. 6±6. 2)%(48 h)、(70. 2±6. 4)%和(61. 3±5. 5)%(72 h)。处理24 h后,O6组Annexin V阳性细胞分别为(8. 86±1. 78)%(P 0. 05)和(19. 36±4. 20)%(P 0. 01),而DMSO组为(3. 35±0. 73)%,PI阳性则分别为(3. 82±0. 53)%(P 0. 05)、(10. 14±2. 65)%(P 0. 01)和(1. 34±0. 33)%。Brdu实验显示,O6将GH3细胞阻滞在G1期,分别为(50. 4±4. 1)%和(59. 4±4. 7)%(P 0. 05),DMSO组为(45. 7±3. 7)%。同时,蛋白印迹实验显示,O6处理后p21和p27呈现升高趋势(P 0. 05)。结论 CDK2、p21和p27表达与生长激素腺瘤侵袭密切相关,其抑制剂O6-己基甲基鸟嘌呤诱导GH3细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

肿瘤坏死因子与甲状腺细胞凋亡及相关蛋白的检测和表达的意义

目的　探讨肿瘤坏死因子 a(TNF a)诱导Graves病甲状腺细胞凋亡与相关蛋白表达在Graves病 (GD)发病关系中的意义。方法　采用免疫组织化学S P方法检测 5 0例Graves病患者TNF a,并检测对照组对Fas表达的影响。采用原代细胞培养方法进行细胞培养 ,细胞培养液中的sFas含量采用ELISA法检测。Fas/sFasmRNA检测采用半定量RT PCR法。结果　含有TNF aGD组细胞凋亡率为 92 6 % ,显著高于对照组的凋亡率 (36 0 % ) (P <0 0 1)。其含有TNF aGD组甲状腺细胞sFas、Fas/sFasmRNA含量与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 1)。结论　TNF a诱导Graves病甲状腺细胞凋亡及凋亡相关蛋白sFas、Fas/sFasmRNA有一定水平的表达 ,这些改变可能是TNF a破坏甲状腺细胞的重要机制之一。     

凋亡相关基因p53和bcl-2蛋白在前列腺癌的中表达及其临床意义

目的 :探讨细胞凋亡相关基因bcl 2、p5 3在前列腺癌中的表达及意义。 方法 :应用免疫组织化学ABC法 ,检测 3 6例前列腺癌 (Pca) ,2 0例前列腺增生 (BPH )组织和 11例正常前列腺组织 (NP)中bcl 2、p5 3蛋白表达。结果 :①Pca和BPH组bcl 2蛋白阳性表达率明显高于NP组 (P <0 .0 5 ) ,而Pca组与BPH组阳性率无显著性差异。Pca组 p5 3蛋白阳性表达率明显高于BPH组和NP组 (P <0 .0 5 ) ,而BPH组与NP组阳性率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。②在Pca组中bcl 2蛋白阳性 10例 ,其中Ⅰ、Ⅱ级肿瘤组阳性 4例 ,Ⅲ、Ⅳ级肿瘤组 6例 (P <0 .0 5 ) ;p5 3蛋白阳性 12例 ,其中Ⅰ、Ⅱ级肿瘤组阳性 5例 ,Ⅲ、Ⅳ级肿瘤组 7例 (P <0 .0 5 )。显示bcl 2、p5 3蛋白表达随着病理分级的增高而增高。③p5 3蛋白表达阳性率≤ 5年生存组明显高于>5年生存组 ,呈负相关 (P <0 .0 5 )。bcl 2蛋白表达与生存期无关 (P >0 .0 5 )。结论 :p5 3、bcl 2蛋白的异常表达与前列腺癌的发生发展、病理分级及预后有关。     

MDM2、p53在卵巢肿瘤组织及细胞系的表达和意义

目的　研究MDM 2 (murinedoubleminute 2 )和 p5 3在卵巢肿瘤组织、细胞系表达及与卵巢癌发生关系。 方法　①用细胞培养、蛋白质提取、Western免疫印迹法检测 17个卵巢癌细胞系MDM 2、p5 3蛋白表达。②用免疫组化SP法检测卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MDM 2、p5 3蛋白的表达。结果　① 17个卵巢癌细胞系MDM 2蛋白p90表达阳性率为 11 8% (2 / 17) ;p5 3的阳性表达率为 3 5 3 % (6/ 17) ,2例MDM 2表达阳性出现在野生型卵巢癌细胞株。②在卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MDM 2的阳性表达率分别为 :2 0 % (2 / 10 )、2 5 % (2 / 8)和 2 5 % (5 / 2 0 ) ;p5 3的阳性表达率分别为 2 0 % (2 / 10 )、3 7 5 % (3 / 8)和 60 % (12 / 2 0 )。 3组中 ,MDM 2阳性表达率无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而 p5 3在卵巢癌中的阳性表达率显著高于卵巢良性上皮性肿瘤和交界性上皮性肿瘤 (P <0 0 5 )。结论　p5 3的异常表达与卵巢肿瘤的恶性表型相关。在卵巢癌的发生发展过程中 ,p5 3的异常表达比MDM 2更有意义。MDM 2表达阳性可能在无 p5 3基因突变的卵巢癌细胞发生、发展过程中起一定作用     

分化性甲状腺肿瘤中脆性组氨酸三联体和垂体肿瘤转化基因-1表达与临床意义

目的 研究脆性组氨酸三联体(FHIT)、垂体肿瘤转化基因-1(PTTG-1)在分化性甲状腺肿瘤中表达及其与病变的关系.方法应用免疫组化方法检测96例原发性甲状腺肿瘤[腺癌56例(腺癌组),腺瘤40例(腺瘤组)]标本中FHIT、PTTG-1表达.结果FHIT蛋白在腺癌表达显著低于腺瘤(P<0.01),PTTG-1在腺癌表达高于腺瘤(P<0.01).分化性甲状腺癌中癌转移23例与非转移33例、高预后指数(≥65)与低预后指数(<65)中FHIT(P<0.01,P<0.05)、FITG-1蛋白(P<0.05,P<0.01)表达均有统计学意义.结论检测FHIT及PTTG-1水平对于鉴别原发性甲状腺肿瘤良恶性具有重要参考意义,其表达水平可能是判断甲状腺癌预后的观测指标.     

宫颈腺癌中IMP3和p16~(INK4a)的表达及意义

目的探讨宫颈腺癌中胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白(IMP3)和p16INK4a蛋白的表达及意义。方法运用免疫组化SP法观察IMP3和En Vision法观察p16INK4a在宫颈25例良性腺上皮(BEG)、10例原位腺癌(AIS)和50例浸润性腺癌(ECA)中的表达,同时随机选取IMP3不同程度阳性表达病例25例进行IMP3 mRNA原位杂交检测。结果 IMP3在BEG、AIS和ECA中阳性率分别为16%(4/25)、90%(9/10)和78%(39/50),差异显著(P0.01);p16INK4a阳性率分别为0(0/25)、100%(10/10)和82%(41/50),差异显著(P0.01)。ECA中,IMP3和p16INK4a在浆液性腺癌中的阳性率(均为100%,3/3)均高于宫颈型(76.19%,32/42和83.33%,35/42)和子宫内膜样型(80%,4/5和60%,3/5);腺癌中,IMP3在高分化腺癌与中-低分化腺癌中的阳性率比较差异显著(P0.05)。IMP3和p16INK4a分别在不同年龄、组织学类型及FIGO分期中表达差异均不显著(P0.05)。ECA中,IMP3和p16INK4a共同阳性率为64%(32/50),阴性率4%(2/50),两者表达的关联性较低(Kappa值为0.002,P0.05)。结论 IMP3和p16INK4a在宫颈腺上皮的良、恶性病变鉴别诊断中有重要参考价值,IMP3表达与肿瘤分化程度相关;IMP3和p16INK4a联合运用可辅助临床ECA的诊断。     

原发性甲状旁腺功能亢进症84例临床病理分析

目的探讨原发性甲状旁腺功能亢进症(PHPT)的临床病理特征。方法回顾性分析2010-01—2014-04间北京世纪坛医院84例手术治疗PHPT的临床病理资料,其中甲状旁腺腺瘤54例(64.3%),甲状旁腺增生17例(20.2%),甲状旁腺癌13例(15.4%)。结果 3组患者诊断年龄、性别均无差异,但癌组患者术前血钙及PTH水平明显高于腺瘤组及增生组(P0.05)。甲状旁腺腺瘤(46/54)及腺癌(9/13)中单发肿瘤多见(85.2%和69.2%,P0.05),增生(3/17)中单发少见(17.6%,P0.05),3组标本最大径差异不显著(P0.05)。甲状旁腺腺瘤有完整包膜,肿瘤细胞无异型性;甲状旁腺癌包膜不完整,可见肿瘤细胞侵犯包膜,血管内瘤栓形成,瘤细胞核仁明显,染色质粗,部分可见核分裂象;甲状旁腺增生外形不规则,多数无包膜。免疫组化:PTH和p53在3组中阳性率差异不显著(P0.05);Ki-675%在癌组中阳性率较腺瘤组、增生组明显升高分别为30.8%、9.3%和0(P0.05);Syn和CgA在癌组中阳性率较腺瘤组、增生组明显降低(P0.05)。结论原发性甲状旁腺功能亢进症的不同病理学类型在临床表现、大体标本、HE染色及免疫组化等方面各有特点,血钙和血PTH,免疫组化Ki-67、Syn和Cg A可辅助鉴别甲状旁腺肿瘤的良、恶性,为甲状旁腺疾病的诊断提供依据。     

前列腺癌p53、bcl-2、bax基因表达与凋亡、增殖的关系

目的　研究前列腺癌组织中细胞增殖与细胞凋亡 ,及其相关蛋白表达意义。方法　采用原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)及免疫组织化学ABC法对 3 6例前列腺癌 (Pca)和 11例正常前列腺 (NP)组织石蜡切片 p5 3、bcl 2、bax、PCNA蛋白及细胞凋亡检测。结果　前列腺癌细胞的增殖指数和细胞凋亡指数较NP明显增高 ,且AI/PI比值较正常组织AI/PI低 (P <0 0 1) ;随着肿瘤分级的增加 ,细胞增殖水平明显增加 (P <0 0 1)。p5 3蛋白表达与前列腺癌细胞增殖水平相关 ;bcl 2蛋白表达与细胞凋亡水平相关 (P <0 0 5 ) ;bax基因表达与凋亡无关 ,但发现它们的bcl 2 /bax的比值与凋亡有关 ,结果显示 :高bcl 2 /bax比值多见于低凋亡组 ;低bcl 2 /bax比值多见于高凋亡组。结论　细胞增殖与细胞凋亡均参与了前列腺癌的发生、发展。p5 3基因与细胞增殖水平的调控有关。bcl 2和bax在细胞凋亡调节中起到重要作用 ,由于bcl 2蛋白过量表达引起bcl 2 /bax失平衡 ,在前列腺癌发生、发展过程中起到重要作用。     

结直肠黏膜上皮良恶性病变的CpG岛甲基化表型差异和病理机制初探

目的探究正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠腺癌(colorectal cancer,CRC)的Cp G岛甲基化表型(CIMP)差异及相关分子病理机制。方法随机选取中国人民解放军火箭军特色医学中心送检结直肠组织160例,按照组织病理改变分为正常黏膜组、低级别腺瘤组、高级别腺瘤组、CRC组,每组40例,采用甲基化实时荧光定量PCR(Methylight)法检测CIMP相关基因甲基化状态;使用高通量测序法("Next-generation"sequencing technology,NGS)检测CRC中62个肿瘤易感基因的突变负荷;利用真核表达载体技术过表达CRC细胞LOVO的甲基化转移酶3 A(DNMT3A),采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q PCR)及免疫组化技术检测DNMT3A、Cyclin D1、p16的基因及蛋白表达。结果正常黏膜组的CIMP-0占比为50%(20/40例),CIMP-L占比50%(20/40例),无CIMP-H;低级别腺瘤组中CIMP-0为32.5%(13/40例),CIMP-L为67.5%(27/40例),无CIMP-H;高级别腺瘤组中CIMP-0占12.5%(5/40例),CIMP-L占75%(30/40例),CIMP-H占12.5%(5/40例); CRC组中CIMP-0占5%(2/40例),CIMPL占77.5%(31/40例),CIMP-H占17.5%(7/40例)。CRC组中CIMP相关基因甲基化发生数量和肿瘤易感基因的突变数量呈正相关,线性回归方程R=0.130,P=0.022;过表达DNMT3A后,SW620细胞DNMT3A mRNA及蛋白表达量明显上升(P0.001),p16基因发生甲基化,p16基因mRNA及蛋白表达量下降(P0.05),Cyclin D1基因甲基化状态未发生变化,仍为非甲基化状态,但Cyclin D1基因及蛋白表达量上升(P0.001)。结论①启动子区Cp G岛甲基化是导致肿瘤发生的重要机制之一,其可能通过甲基化使肿瘤易感基因序列的稳定性下降,导致更易发生致癌突变。②DNA甲基转移酶3A过表达可引起肠癌细胞CIMP表型改变并继而导致相关基因的沉默或活化。     

姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制

目的:观察中药提取物姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞株A549生长抑制率和对细胞凋亡相关因子表达的影响,探索姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制。方法:实验于2003-10/2004-10在上海东方医院中心实验室完成。用购于中科院上海细胞所肺腺癌细胞株A549,将培养的A549细胞暴露于姜黄素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及两者联合中,分4组,每组6孔,姜黄素组(40μmol/L姜黄素)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组(25μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)、联合组(40μmol/L姜黄素与25μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合)、对照组(RPMI1640细胞培养液)。①用四氮唑蓝法测定姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组以及联合组的吸光值,根据吸光度值计算肺癌细胞株A549细胞生长抑制率。②应用ApoAlert半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶系列比色法凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达。③反转录聚合酶链反应测定凋亡调控蛋白bcl-2/bax的表达。结果:①抑制率:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺腺癌A549细胞的抑制明显低于姜黄素,25μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用24h细胞抑制率仅有(2.65±1.416)%;两药联合对肺腺癌A549细胞的抑制作用明显增加[高达(30.97±1.318)%,P<0.01]。②凋亡相关因子:联合组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达明显高于姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组、对照组[联合组:(50.77±0.812),(73.31±0.730)μmol/L;姜黄素组:(23.61±0.398),(26.84±1.511)μmol/L;肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组:(9.63±1.024),(14.21±0.138)μmol/L;对照组:(3.69±0.486),(2.87±0.633)μmol/L,P<0.01];联合组、姜黄素组的bcl-2/bax明显高于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组(2.55±0.138,2.24±0.197,0.58±0.046,P<0.01)。结论:肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞耐受,姜黄素可能通过调整bcl-2/bax的表达,进而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族,增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性。     

碱性成纤维细胞生长因子在结直肠癌组织中的表达及临床、病理意义

目的：研究bFGF在结直肠癌组织中的表达，探讨bFGF在肿瘤血管生成中的作用及其可能作用机制。方法：应用免疫组织化学方法检测40例结直肠腺癌组织、25例结直肠腺瘤组织和40例正常对照组织中bFGF、CD34的表达，以图象分析软件进行半定量测定。结果：以CD34标记的微血管密度在癌症组、腺瘤组、正常对照组间呈递减改变。bFGF在癌症组中阳性率为90%（36/40）；在腺瘤组中阳性率为76%（19/25）；在正常对照组中阳性率为7.5%（3/40）。CD34在三组中均100%表达阳性。bFGF的平均积分光密度癌症组比腺瘤组和正常对照组高（0.260 2±0.066 34vs0.163 5±0.045 76vs0.081 3±0.022 70，F=90.782, P<0.01）,CD34的平均积分光密度癌症组比腺瘤组和正常对照组高（0.258 4±0.07325vs 0.164 8±0.048 33 vs 0.083 4±0.016 23,F=89.224, P<0.01），bFGF和CD34在癌症组织、腺瘤组织中均呈两两相关。bFGF和CD34的表达在癌症组、腺瘤组的相关系数分别为0.641和0.840。结论：结直肠腺癌组织中bFGF表达增多对肿瘤血管生成起促进作用。关键词：bFGF、CD34；结直肠腺癌     

沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高。转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低。空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)%、(7.94±0.19)%、(7.93±0.17)%、(4.62±0.13)%。TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P0.01)。干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P0.01)。结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关。