手术操作与胃癌微转移的关系

目的 探讨手术操作与胃癌微转移的关系.方法 采用巢式逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测70例胃癌病人手术前、后外周血细胞角蛋白(CK20) mRNA及癌胚抗原(CEA) mRNA的表达情况,并以20例健康志愿者作为阴性对照组,以10例胃癌组织作为阳性对照组.结果 CK20 mRNA及CEA mRNA在术前阳性表达率分别为32.9%和51.4%,而术后二者的阳性表达率分别为62.9%和70.0%,术后阳性率明显高于术前(χ2=12.62、5.06,P<0.05).20例健康志愿者无1例阳性表达.结论 手术操作可以促使胃癌发生微转移.     

胃癌组织中runx3 mRNA和蛋白的表达及其临床意义

目的: 探讨runx3基因mRNA及其蛋白在胃癌与正常胃粘膜组织中的表达差异及其临床病理相关因素之间的关系. 方法: 采用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot技术对临床60例胃癌新鲜标本及其周围正常粘膜组织中runx3基因和蛋白的表达进行检测,并对其表达和各临床病理参数的关系进行分析. 结果: RT-PCR结果显示runx3mRNA在胃癌组织标本中的表达量相对值(0.7542±0.1284)低于正常胃癌粘膜组织中的表达量(0.8427±0.0541),两组比较差异有统计学意义(t=4.941, P＜0.0001);Western Blot结果显示runx3蛋白在胃癌组织标本中的积分光密度值(10828±988.9)明显低于在正常胃粘膜组织中的光密度值(47833±7566),两组比较差异有统计学意义(t=35.57, P＜0.0001). 结论: runx3 mRNA及其蛋白在胃癌组织中的表达量明显低于正常组织. Runx3基因的表达异常在胃癌的发生发展过程中起着重要作用.     

新的端粒酶相关蛋白T-STAR在胃癌组织中的表达

目的:探讨新的端粒酶相关蛋白(T-STAR)与胃癌发生、发展的关系. 方法:用半定量RT-PCR的方法检测32例人胃癌及相应癌旁组织中T-STAR mRNA的表达水平. 结果:T-STAR在胃癌组织及癌旁组织中的表达水平分别为4.28±1.31,1.62±0.56(P＜0.01),低分化胃癌T-STAR的表达水平为4.75±1.13,显著高于中分化胃癌中的表达水平3.39±1.19(P＜0.05). 结论:T-STAR在胃癌组织中高表达,且与病理分化程度相关,在胃癌的发生和发展中起重要作用.     

转基因JAK3体外长期扩增T淋巴祖细胞的实验研究

目的探讨激活JAK3信号传导通路是否能够体外长期扩增调控T淋巴祖细胞并评价其定向分化潜能的可行性。方法构建含有JAK3基因的逆转录病毒载体MG I-F2JAK3,内含有绿色荧光蛋白(GFP)和两个可以结合小分子二聚化合物AP20187的结合位点F36v。将该载体转入小鼠的骨髓造血干细胞中,在无血清培养基X-V ivo15培养体系中扩增,分为4组:空白对照组;AP20187组;干细胞因子(SCF)组;AP20187+SCF组。对扩增的细胞进行流式细胞仪检测免疫分型,定向分化、胸腺内注射等研究。结果AP20187+SCF组可以使转导的造血细胞获得长期大量对数级的扩增,扩增50 d后细胞可以达到1.2×1012倍±0.2×1012倍,所扩增的细胞为最早期的T淋巴祖细胞,表型为C-k ith iCD44+CD25-TN。该祖细胞群在SCF+IL-7+IL-3培养条件下,可定向分化为Thy1.2阳性的T淋巴细胞,并在小鼠的胸腺内可定向分化为GFP+CD3+和GFP+CD4+双阳性的成熟T淋巴细胞。结论AP20187联合SCF激活JAK3信号,可以大量扩增最早期的T淋巴祖细胞。该祖细胞具有定向分化为成熟T淋巴细胞的功能。该系统有助于研究T淋巴细胞的发生发育。     

PI3k／Akt蛋白及mRNA在60例胃癌中的表达及意义

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶 B（Akt）在胃癌组织及远端正常组织中的表达情况,分析其表达与胃癌临床病理特征之间的关系。方法应用免疫组化 S-P 法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测60例胃癌组织和25例正常胃组织（距癌边缘10 cm 以上的胃组织）中 PI3K、Akt 蛋白及 mRNA 的表达。结果PI3K、Akt 在胃癌组织中的表达均明显高于在远端正常胃组织中的表达,差异有统计学意义（P ＜0．01）,二者在胃癌组织中的表达均与胃癌的分化程度、TNM 分期、浸润深度、淋巴结转移情况相关（P ＜0．05）。结论PI3k／Akt 蛋白及 mRNA 参与了胃癌的发生、发展、浸润转移,在胃癌的癌变过程中起着重要作用。     

细丝蛋白A在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨细丝蛋白A(filamin A,FLNa)在胃癌组织中的表达水平及其临床意义。方法本研究应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法(SP法),检测47例胃癌组织,及距胃癌组织边缘5 cm以上的显微镜下无癌浸润的正常组织中mRNA及蛋白的表达情况。结果 FLNa蛋白和mRNA在胃癌组织及正常胃组织中的表达阳性率分别为0.345±0.048、0.562±0.085和29.8%、78.7%,较正常胃组织明显降低(P<0.05)。结论胃癌组织中FLNamRNA和蛋白的表达较正常组织均降低,这可能与胃癌的发生、发展有关。因此,检测FLNa的表达可能对胃癌的临床治疗及预后判断有一定价值。     

胃癌组织中肝素酶mRNA的表达意义

目的:探讨肝素酶mRNA在胃癌及其癌旁组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系. 方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝素酶mRNA在47例手术切除的胃癌组织及癌旁组织中的表达. 结果:胃癌组织中肝素酶表达阳性率明显高于相应的癌旁组织(74.5% vs 19.1%, P<0.01). 肝素酶阳性表达率与胃癌患者的肿瘤直径、有无淋巴结转移、浸润深度以及TNM分期有关,而与胃癌患者的年龄、性别、分化程度及有无远处转移无关. 结论:肝素酶的高水平表达促进了胃癌的生长、浸润及转移,与胃癌预后不良有关系.     

人胃癌中端粒酶活性表达的研究

目的 探讨人胃癌组织中端粒酶的活性表达。方法 采用端粒重复序列扩增法（ｔｅｍｏｌｅｒｉｃ ｒｅｐｅａｔａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ，ＴＲＡＰ）检测４２例原发性胃癌及相应的癌旁组织中端粒酶活性。结果 在４２例胃癌中，有３５例端粒酶呈阳性，而癌旁组织中仅有２例阳性。结论 端粒酶激活与胃癌的发生有关，并可能成为诊断胃癌的肿瘤标记物。     

胃癌患者外周血癌细胞ＣＥＡmRNA表达与胃癌微转移关系的研究

目的 定性检测胃癌患者外周血CEA（癌胚抗原）mRNA表达，对预测胃癌微转移的意义。方法 应用RT-PCR（U降转录-聚合酶链反应）ELISA(酶联免疫吸附试验）同时检测40例胃癌、14例胃炎患者及20例健康成人对照外周血CEAmRNA和CEA蛋白。结果 40例胃癌患者CEAmRNA阳性率为60%（24/40），而健康者对照均为阴性，外周血CEAmRNA的表达与胃癌远处转移密切相关，且随着病期进展而增加。结论 CEAmRNA检测是预测胃癌微转移的有效指标。血中CEAmRNA的阳性提示肿瘤的早期转移。     

定量监测Janus激酶3基因变化在移植物抗宿主病中的初步研究

目的 观察异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后外周血单个核细胞Janus激酶3（JAK3）mRNA表达水平的变化,探讨其与移植物抗宿主病（GVHD）之间的关系。方法 采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）技术连续监测26例allo—HSCT后不同时问83份外周血单个核细胞JAK3 mRNA表达水平。结果 26例进行allo—HSCT的患者,14例患者移植后未发生GVHD,JAK3／ABL mRNA表达水平中位数为8．71;1例发生急性GVHD（aGVHD）,JAK3／ABL为31．94;11例发生慢性GVHD（cGVHD）,JAK3／ABL为19．23。连续观察4例患者,移植后1个月的JAK3／ABL表达水平与移植前比较无变化,但随着GVHD的出现,JAK3／ABL表达水平又很快升高,并且随着GVHD治疗好转,JAK3／ABL表达水平又很快下降。结论 GVHD患者JAK3 mRNA表达水平与GVHD的病情演变相关。     

大鼠溃疡性结肠炎组织中JAK2 mRNA的表达

目的探讨大鼠溃疡性结肠炎中JAK2的mRNA表达情况,初步阐明蛋白酪氨酸激酶JAK/信号传导子和转录激活子STAT信号通路在溃疡性结肠炎中调控的分子生物学机制。方法建立大鼠溃疡性结肠炎模型,提取结肠组织总RNA,经半定量RT-PCR检测JAK2 mRNA的表达情况。结果溃疡性结肠炎模型组JAK2的mRNA水平高于正常组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 JAK2在溃疡性结肠炎的发生、发展中起一定作用。     

凋亡抑制蛋白Livin在胃癌组织中的表达

目的: 探讨一种新的凋亡抑制蛋白Livin的2种异构体在胃癌组织中的表达.方法: 采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌组织中的Livin α和Livin β的表达.结果: 46例胃癌组织中Livin表达的阳性率为58.7%,相应的癌旁组织中Livin不表达或表达很低.结论: Livin的两种异构体在胃癌组织中的表达使其可能成为胃癌的分子标记物或胃癌治疗的新靶点.     

RT-PCR检测胃癌患者外周血癌细胞CEAmRNA预测胃癌微转移的研究

肿瘤的浸润和转移是影响肿瘤患者预后的重要因素 ,肿瘤的转移大多通过淋巴结及血循环 ,因此检测淋巴结、血液及骨髓中的肿瘤细胞对肿瘤的诊断、分期、复发及预后判断和治疗方案的选择均有重要的指导意义。通常进入淋巴结、血液、骨髓中的肿瘤细胞数量极其微量 ,用传统的病理学、免疫组织化学等方法较难检测到微量的癌细胞。逆转录聚合酶链反应 (ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＲＴ ＰＣＲ)可望解决这个问题[1] 。本文采用ＲＴ ＰＣＴ技术 ,选择ＣＥＡｍＲＮＡ为胃癌微转移的靶…     

人胃癌中端粒酶活性表达的研究

目的　探讨人胃癌组织中端粒酶的活性表达。方法　采用端粒重复序列扩增法 (temolericrepeatamplificationprotocol,TRAP)检测 4 2例原发性胃癌及相应的癌旁组织中端粒酶活性。结果　在 4 2例胃癌中 ,有 35例端粒酶呈阳性 ,而癌旁组织中仅有 2例阳性。结论　端粒酶激活与胃癌的发生有关 ,并可能成为诊断胃癌的肿瘤标记物     

肺癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨CK19 mRNA、CEA mRNA能否作为判断肺癌血源性微转移的参考指标.方法取67例肺癌患者及37例健康体检者外周血,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测上述两个指标的表达.结果肺癌组外周血中CK19 mRNA阳性率(57.6%)及CEA mRNA阳性率(52.2%)均显著高于健康对照组的2.7%和5.4%(均P＜0.01),两个指标联合检测能将对肺癌微转移诊断的灵敏度提高至76.1%;CK19 mRNA的表达与临床分期相关(P＜0.01),CEA mRNA的表达与组织类型相关(P＜0.05).结论 CK19 mRNA和CEAmRNA可作为判断肺癌血源性微转移的参考指标,两者联检可提高诊断价值.     

胃癌组织miR-9的表达及其与临床病理的关系

目的观察miR-9在胃癌组织中的表达水平及其与临床病理的相关性。方法采用实时荧光定量PCR方法分别检测28例胃癌及正常胃组织中miR-9的表达水平,并分析其表达情况与临床病理资料的关系。结果胃癌组织miR-9的表达水平[0.0078(0.0031~0.0142)]显著低于相应正常胃组织[0.0177(0.0084~0.0311),P<0.05],尤其是伴淋巴结转移者[0.0021(0.0006~0.0685)]miR-9表达水平明显降低。结论胃癌组织中miR-9低表达,且与胃癌淋巴结转移有关。     

胃癌差异表达基因的克隆测序及临床应用

目的 筛选数个在胃癌及癌前病变中检出率高的胃癌差异表达片段。方法 以筛选了的gcys-10,gcys-12,gcys-13,gcys-16这4个新基因片段为研究对象，将它们克隆入T载体中进行测序，根据序列设计引物，采用RT－PCR方法检测胃癌细胞株GC7901、胃粘膜细胞株GES－1以及胃癌、胃粘膜活检标本。结果 4个差异基因表达片段测序后经过同源性检索均为新基因，被基因库收录，收录呈为AF054171，AF071052，071053,某某071056。根据这些基因设计的4对引物均能从GC7901总RNA中扩增出相应产物，而gcys-10的引物未能从GES－1细胞株中扩增出相应产物。gcys-10在50例活检标本中的检出率分别为：萎缩性胃炎83.3%，肠腺化生81.8%，疣状胃炎58.3%，胃癌88.9%，胃溃疡50.0%，十二指肠溃疡0，急性胃炎0。在17例胃癌手术标本的检出率为94.1%。结论gcys-10,gcys-12,gcys-13,gcys-16均为胃癌差异表达基因，其中gcys-10在胃癌及胃癌前病变中检出率非常高，其表达的变化可能对胃癌的早期发展有意义。     

桥粒芯糖蛋白3基因在鼻咽癌中表达的初步研究

目的 从纯化鼻咽组织全基因组表达谱数据中筛选出鼻咽癌发病相关的候选靶基因桥粒芯糖蛋白3（DSG3）,利用半定量逆转录（sqRT）-PCR进一步研究DSG3基因在纯化鼻咽部组织中反义RNA（aRNA）中的表达。方法采用RNA保护技术保存组织标本（22例鼻咽癌患者及12例鼻咽部正常或存在炎性黏膜上及组织者）,显微切割获得鼻咽癌组织标本中的癌细胞、鼻咽部非癌组织标本中的黏膜上皮细胞,提取每一例纯化组织标本RNA,线性扩增获得足量aRNA,通过sqRT-PCR进一步研究候选靶基因DSG3在两种不同鼻咽纯化细胞aRNA中的表达。结果在纯化鼻咽癌组织和鼻咽部非癌组织全基因组表达谱中,DSG3基因表达值分别为2、06±1、60和0．48±0．23,表达相差4．24倍,两组比较差异有统计学意义（df=16,t=2．145,P=0．048）。sqRT-PCR检测纯化鼻咽癌组织及非癌组织aRNA中DSG3基因的表达,分别为3．54±2．69和0．95±0.23,两组差异亦有统计学的意义（df=32,t=3．307,P=0．002）。结论 利用全基因组芯片构建基因表达谱结合sqRT-PCR等实验研究,可筛选出与鼻咽癌发病相关的候选靶基因,DSG3基因高表达是鼻咽癌发生发展过程中的再要促瘤因素。     

胃癌患者外周血CEA mRNA的检测及意义

目的 探讨胃癌患者外周血中CEA mRNA的表达及临床意义。方法 采用巢式RT-PCR技术检测70例胃癌患者手术前、后外周血CEA mRNA的表达情况，并以20例健康志愿者为阴性对照组，以10例新鲜胃癌组织作阳性对照。结果 CEAmRNA术前阳性表达率为51．4％，阳性表达率与组织学类型、TNM分期具有显著相关性（P〈0．05），而与肿瘤的部位、患者性别无相关性（P〉0．05）；20例健康志愿者无1例阳性表达，10例胃癌组织均为阳性表达。结论 CEA mRNA作为标志物检测胃癌血循环微转移是可靠的，对于指导临床诊断、治疗及判断预后具有重要意义。     

膀胱移行细胞癌中MT-3的表达及其临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌中金属硫蛋白(MT-3 mRNA)的表达与早期诊断、临床分级和预后的相关性.方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,对12例正常膀胱黏膜和23例膀胱肿瘤MT-3mRMA的表达进行了检测.结果12例正常膀胱黏膜中MT-3 mRNA表达为0%,18例膀胱癌MT-3 mRNA有表达为78.3%并对其进行了临床生物学行为的观察和比较.结论MT-3的表达与膀胱移行细胞癌的早期诊断相关,可能成为一种新的肿瘤标志物.RT-PCR方法检测膀胱肿瘤时具有相对敏感、特异和结果可靠等优点.