小鼠转移性乳腺癌骨髓细胞体外净化移植模型的建立

目的 建立一个小鼠转移性乳腺癌净化后骨髓移植模型，并探讨益康唑（Econazole，Ec）药物净化效果。方法 将小鼠自发性乳腺癌细胞系TSA转染新霉素抗性基因（Neo^R基因）后与小鼠骨髓细胞混合，体外短期培养净化；通过移植后造血恢复，肺转移性结节和小鼠的存活进行评估。结果 接受放射治疗后经尾静脉注射TSA细胞的小鼠均可产生乳腺癌肺转移；Ec体外净化后骨髓移植小鼠造血恢复没有明显延迟，移植后4周内未见肺转移性结节；小鼠的总生存状况明显改善。结论 成功建立了TSA小鼠乳腺癌净化后骨髓移植模型，方法简单、易行、重复性好；Ec可用于转移性乳腺癌净化后骨髓移植。     

骨髓增殖性肿瘤小鼠模型的构建及评价体系的建立

目的：构建携带JAK2-V617F,MPLW515L及CALR-Type I基因突变的骨髓增殖性肿瘤（MPN）移植小鼠模型，并建立移植小鼠模型构建成功的评价体系。方法：获取小鼠骨髓c-kit+细胞：颈椎脱位处死小鼠，分离股骨、胫骨及髂骨，收集骨髓细胞，经过CD117磁珠孵育，分选出c-kit+细胞。构建小鼠原代突变细胞：利用逆转录病毒体系构建GFP标记的基因突变载体，将带有基因突变的逆转录病毒载体经Platinum-E细胞包装后，获取病毒上清，感染小鼠的骨髓c-kit+细胞。构建MPN移植小鼠模型：收集感染后含有突变基因的小鼠原代c-kit+细胞，再经尾静脉植入经致死剂量（8.0 Gy）γ射线照射的同种雌性受鼠体内。评价MPN移植小鼠模型：移植后定期通过尾静脉采血检测小鼠外周血血象变化；观察小鼠脾脏大小及骨髓纤维化的程度。结果：成功获得携带突变基因的小鼠骨髓c-kit+细胞。成功构建MPN移植小鼠：移植小鼠外周血细胞中携带外源植入的GFP阳性细胞，且白细胞（WBC）、血小板（PLT）以及红细胞压积（HCT）均升高；移植小鼠重量减轻、饮水量与摄食量减少；病理分析显示移植小鼠脾脏肿大，并伴...     

混合骨髓移植的实验研究

目的：探讨在异基因骨髓移植治疗白血病中既控制移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）又同时保留移植物抗白血病（ＧＶＬ）作用的移植方案。方法：采用近交系小鼠移植模型，在异基因骨髓、脾细胞移植物中混合一定比例的同基因脾细胞，观察移植后受鼠ＧＶＨＤ死亡率、脾结节数、移植后不同时间骨髓造血重建细胞来源以及受鼠脾脏淋巴细胞对供、受鼠双方来源的刺激细胞增殖反应；采用Ｌ６１５小鼠白血病模型观察混合移植对荷瘤小鼠生存时间及死亡原因的影响。结果：混合移植可以有效减轻ＧＶＨＤ，异基因造血免疫细胞在受鼠体内一过性存留并发挥移植物抗宿主反应，使荷瘤小鼠生存时间明显延长。结论：异基因骨髓、脾细胞移植物中混合一定比例的同基因脾细胞使移植受鼠体内既具有主要组织相容性抗原复合物（ＭＨＣ）不合的免疫活性细胞发挥一过性ＧＶＬ作用，同时减轻了异基因骨髓移植的严重ＧＶＨＤ。     

NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响

本研究探讨自然杀伤（NK）细胞在小鼠异基因骨髓移植（allo—BMT）中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL／6（H-2^b）小鼠为供鼠、BALB／c（H-2^d）小鼠为受鼠，分别在致死剂量和非致死剂量（≤7．0Gy）全身照射（TBI）的预处理条件下进行allo—BMT，移植同时输注供鼠外周T细胞和（或）NK细胞，移植后不同时间检测受鼠外周血白细胞、骨髓CD34^＋细胞数和外周血淋巴细胞中CD3^＋细胞、CD19^＋细胞及供鼠来源的H-2K^b＋细胞表达的百分率，并对不同移植组的存活率、植入与排斥、造血及免疫重建进行比较。结果表明：在致死剂量TBI预处理的移植中，输注NK细胞与不输注NK细胞的移植组比较，存活率显著增高（60天存活率为70％vs 0．0％）；白细胞数、CD19^＋细胞表达及骨髓CD34^＋细胞数恢复快；H-2K^b＋细胞的表达水平高[（86．68±4．45）％vs（4．68±0．32）％]。移植后28天输注NK细胞组CD3^＋细胞表达水平明显低于不输注NK细胞组[（33．69±3．36）％们（50．40±5．06）％，P〈0．01]，移植后60天两组比较差异无显著性（P〉0．05）。在非致死剂量TBI预处理的移植中，移植后30天．异基因骨髓移植组H-2K^b＋细胞表达率明显下降，移植后60天已下降至移植前水平；而输注高浓度和低浓度NK细胞的两组在移植后60天仍能检测到80％以上的H-2^b＋细胞表达。结论：在小鼠allo—BMT中，同种异基因反应性NK细胞可以抑制移植排斥，提高造血干细胞的植入水平，促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。     

川芎嗪对骨髓移植小鼠CD44表达的作用研究

为探讨川芎嗪对骨髓移植小鼠早期造血重建过程中黏附分子CD44表达水平的影响，将BALB／c小鼠随机分为3组：正常对照组，骨髓移植对照组(简称对照组)和骨髓移植 川芎嗪治疗组(简称川芎嗪组)，对照组和川芎嗪组每天分别胃饲生理盐水和川芎嗪。于骨髓移植(BMT)后第7，14，21，28天处死小鼠，计数外周血细胞、骨髓有核细胞，分析骨髓中造血组织面积及成熟红细胞容量，用流式细胞术和免疫组织化学检测骨髓细胞上CD44的表达水平．并于第10天取小鼠脾脏，计数脾集落形成单位。结果显示，骨髓移植后第7，14，21，28天川芎嗪组外周血白细胞、血小板、骨髓有核细胞计数、骨髓中造血组织面积均显著高于移植对照组，外周血红细胞计数在第7，14，21天也较对照组为高；同时．川芎嗪组CFU-S计数明显高于同期移植对照组，骨髓中成熟红细胞容量则显著低于对照组，川芎嗪组C44的表达在第7，14，21，28天明显高于对照组。结论：川芎嗪可提高骨髓移植小鼠骨髓细胞表面CD44的表达水平，促进造血干／祖细胞的归巢，加速移植后骨髓的造血重建。     

混合骨髓移植后过继免疫治疗小鼠白血病

背景：急性白血病自体造血干细胞移植后复发率高,异基因造血干细胞移植后移植相关病死率高,混合造血干细胞移植及移植后过继免疫治疗有可能取长补短,提高疗效。目的：观察自体骨髓混合H-2半相合异体骨髓移植后供体淋巴细胞输注＋白细胞介素2治疗对小鼠白血病的疗效。方法：将Balb/c小鼠经直线加速器照射3Gy后分为白血病模型组、白血病模型照射组、混合移植组、自体骨髓移植组,均尾静脉注射5×10^5K562（GFP＋/NeoR＋）或K562（GFP-/NeoR-）细胞。7d后6Gy照射,自体骨髓移植组移植自体骨髓细胞或联合白细胞介素2治疗;混合移植组移植小鼠自体骨髓细胞混合1/10的H-2半相合异体骨髓细胞后应用白细胞介素2或联合供体淋巴细胞输注治疗。4周后行小鼠外周血及骨髓细胞形态检查,外周血细胞亚群、GFP及NeoR基因测定,肝、脾匀浆细胞GFP和NeoR基因测定。结果与结论：白血病模型组小鼠因骨髓造血功能衰竭于20d内全部死亡,白血病模型照射组小鼠因造血功能衰竭于14d内全部死亡;自体骨髓移植组、混合移植组均有多少不等小鼠无白血病存活超过28d,且混合骨髓移植后及自体骨髓移植后应用白细胞介素2治疗可提高白血病小鼠长期无病生存率,在此基础上联合供体淋巴细胞输注可更进一步提高白血病小鼠长期无病生存率。     

骨髓源干细胞参与的血管内皮更新

背景：研究表明骨髓源干细胞可塑性强,但其参与组织更新及修复的机制在转分化及细胞融合间尚存在争议。目的：通过性别交叉骨髓移植建立雌雄嵌合体小鼠模型,观察骨髓源性干细胞是否参与内皮细胞的更新并探讨其可能的机制。方法：采用雌性C57BL/6-GFP小鼠为供体,雄性C57BL/6小鼠为受体进行骨髓移植建立嵌合体小鼠,并应用流式细胞术分析骨髓嵌合情况。骨髓移植后20周采用Y染色体荧光原位杂交法对脑、肾、肝、脾及心脏组织Y染色体进行标记,荧光显微镜观察各组织器官中血管内皮细胞Y染色体及绿荧光蛋白表达情况。结果与结论：①嵌合体小鼠骨髓细胞流式细胞学检测显示移植骨髓后1周骨髓GFP＋细胞为（7.48±1.38）%、4周时达（73.92±5.57）%,结果表明成功建立性别交叉骨髓移植模型。②骨髓移植后20周嵌合体小鼠脑、肾、肝和脾组织血管壁可见绿荧光蛋白表达,且部分细胞同时表达Y染色体,表明发生骨髓源细胞和血管内皮细胞融合。脑实质及心肌组织未见绿荧光蛋白表达。结果提示骨髓源干细胞可能通过细胞融合机制参与不同组织器官中血管内皮细胞的更新。     

白血病小鼠单倍型相合骨髓移植的归巢

背景:移植后造血干细胞的顺利归巢是单倍相合骨髓移植成功的关键.目的:构建小鼠白血病模型,进行单倍型相合的骨髓移植,动态观察受体小鼠体内移植细胞归巢率及不同时间点的归巢规律.设计、时间及地点:随机对照观察实验,于2005-11/2007-10在福建医科大学实验动物中心清洁级动物实验室进行.材料:供鼠为清洁级近交系C57BL/6小鼠和C57BL/6小鼠与BALB/c 小鼠杂交的雄性F1小鼠,受鼠为清洁级近交系雌性BALB/c小鼠,用于构建白血病小鼠模型.方法:将48只造模小鼠随机分为2组,对照组供鼠为C57BL/6小鼠,实验组供鼠为F1小鼠.实验组进行主要组织相容性复合物单倍型相合的同种异基因骨髓移植,对照组进行主要组织相容性复合物完全不相合的骨髓移植.主要观察指标:移植后1,2,3,4 d动态观察小鼠外周血、骨髓和脾中有核细胞计数,以流式细胞仪检测可与FITC标记的抗鼠H-2Kb单抗结合的供鼠阳性细胞并计算骨髓和脾归巢率.结果:对照组外周血中供鼠来源的细胞数持续下降,脾和骨髓的归巢率均为先升后降,提示供者来源的骨髓细胞在受鼠体内为先归巢再出巢;实验组外周血中供鼠来源的细胞数先下降,再持续上升,骨髓归巢率为下降后上升,脾归巢率为上升后下降,提示供鼠来源骨髓细胞在骨髓中表现为出巢后再归巢,脾中有延迟,与对照组比较,实验组第4天外周血中供鼠细胞数量及骨髓和脾归巢率均增高(P<0.05).结论:主要组织相容性复合物单倍体相合的骨髓移植的归巢规律是先出巢再归巢,归巢的细胞数量和归巢率高于主要组织相容性复合物完全不相合骨髓移植.     

自然杀伤细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响

背景:近几年,自然杀伤细胞与异基因骨髓移植的关系备受关注.目的:探讨自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中对移植排斥、造血及免疫重建的影响.方法:以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0 Gy)全身照射的预处理条件下进行异基因骨髓移植,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)自然杀伤细胞.结果与结论:在致死剂量全身照射的移植中,输注自然杀伤细胞与不输注自然杀伤细胞的移植组比较,存活率显著增高;白细胞计数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞计数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高.移植后28 d,输注自然杀伤细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注自然杀伤细胞组,60 d两组比较差异无显著性意义(P＞0.05).在非致死剂量全身照射的移植中,移植30 d,异基因骨髓组H-2Kb+细胞表达百分率明显下降,60 d已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度自然杀伤细胞的两组在移植后60 d仍能检测到80%以上的H-2Kb+细胞表达.提示,在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性自然杀伤细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率.     

rhTPO对异基因造血干细胞移植模型造血重建的作用

目的：探讨重组人血小板生成素（rh TPO）对异基因造血干细胞移植模型造血重建的作用。方法：以C57BL/6小鼠为供鼠，BALB/c小鼠为受鼠，分离供鼠骨髓单个核细胞，预处理后，给予受鼠尾静脉注射供鼠骨髓单个核细胞5×106/只，建立异基因造血干细胞移植模型，移植后d 28用流式细胞术检测受鼠骨髓造血干细胞植入情况。将建模成功后的受鼠随机分为两组，实验组于移植后d 1开始注射rh TPO，对照组注射生理盐水，两组均连续注射14 d。移植后d 1、3、7、14、21观察两组受鼠外周血及骨髓造血情况。结果：移植后28 d，受鼠骨髓H-2Kb表达率为43.85%(>20%)，受鼠嵌合成功。移植后d 3、7、14、21，实验组受鼠血小板数高于对照组，比较差异具有统计学意义（P<0.05）。两组小鼠在移植后d 1、3、7均出现骨髓造血功能抑制，但实验组骨髓造血增生较对照组好。移植后d 14、21，两组小鼠骨髓造血功能均较前有所恢复，且实验组恢复明显。结论：rh TPO能有效刺激异基因造血干细胞移植后血小板生成，并促进移植后骨髓造血恢复及造血重建。     

人多药耐药基因—1及二氢叶酸还原酶基因共转导小鼠造？…

耐药基因转导骨髓细胞对化疗病人造血系统的保护作用已受到人们的重视。本研究利用多药耐药基因－１（ｍｄｒ－１）及二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）双基因转染小鼠骨髓细胞,观察造血细胞对两种耐药谱化疗药物的抵抗能力。结果表明,所用逆转录病毒载体转染率达到１５％左右,转基因骨髓细胞ＣＦＵ－ＧＭ对ｔａｘｏｌ及ＭＴＸ的耐药能力明显增强,说明外源基因在祖细胞中的正确表达;转基因骨髓细胞回输给同系小鼠７个月后,ＦＣＭ技术     

Drug selection of MDR1-transduced hematopoietic cells ex vivo increases transgene expression and chemoresistance in reconstituted bone marrow in mice

The MDR1 (multidrug resistance) gene, transferred to hematopoietic cells, is expected to protect them from anticancer chemotherapy and may serve as a selectable marker, restoring gene expression in vivo. Appropriate selection strategies, however, need to be established. To investigate whether preselection ex vivo affects chemoresistance, murine bone marrow cells were retrovirally transduced with high-titer or, as a model for suboptimal gene expression, low-titer retroviruses and exposed to daunomycin or colchicine for 48-96 h. Selection significantly increased chemoresistance of clonogenic progenitor cells. In tissue culture, the entire target population was rendered highly drug resistant after MDR1 transfer with high-titer viruses. If transduction was performed under suboptimal conditions, drug selection increased the frequency of chemoresistant colonies up to 40% over the number of unselected cells. Colchicine and daunomycin were equally efficient in increasing drug resistance ex vivo, but colchicine-preselected cells rescued lethally irradiated mice under conditions where daunomycin-selected bone marrow cells failed to do so. Hence, while hematopoietic cells can be protected by MDR1, the selection strategy is critical for repopulation of bone marrow with transduced cells. Preselection in culture before transplantation significantly increased P-gp expression and chemoresistance in vivo in mice reconstituted with transduced bone marrow cells. This study may help to facilitate the use of MDR1 as a selectable marker in gene therapy of the hematopoietic system. Gene Therapy (2000) 7, 348-358.     

提高多药耐药基因导入人CD34^＋细胞转导效率的探讨

目的 探讨逆转录病毒介导的多药耐药基因导入人ＣＤ３４＾＋细胞的影响因素,以提高基因转导效率。方法 用流式细胞术（ＦＣＭ）检测不同组合细胞因子及人骨髓基质细胞＋细胞因子支持的基因转导效率;用造血祖细胞集落培养观察耐药性;用ＦＣＭ检测不同浓度柴杉醇素对基因转导细胞的作用。     

多药耐药基因转染的脐血细胞对白血病小鼠化疗的骨髓保护作用

目的探讨转染多药耐药(mdr1)基因的脐血单个核细胞(MNC)对急性髓系白血病小鼠的骨髓保护作用及疗效。方法通过逆转录病毒介导的方法将含有人全长cDNAmdr1基因导入脐血MNC,即逆转录病毒上清液与脐血MNC体外共培养;将接种人髓系白血病细胞系(HL60细胞)的SCID小鼠分成3组A组(观察组)经鼠尾静脉注射转染mdr1的脐血MNC2×106/只,共2次;B、C两对照组小鼠以同样剂量、方法分别注射未转染mdr1的脐血MNC和等容积的生理盐水。3组白血病SCID小鼠在每周递增高三尖杉酯碱剂量化疗下,通过检测小鼠外周血白细胞数、瘤细胞阳性率、组织病理和HL60细胞表面抗原(CD33)等观察转基因小鼠和对照小鼠对抗癌药物的耐受性及抗肿瘤疗效。同时分别采用PCR技术、免疫组化方法和柔红霉素排出试验检测mdr1基因在小鼠体内的表达和功能。结果①体外成功地将mdr1基因导入脐血MNC,转染率达30%左右;②用HL60细胞2×106接种于经亚致死量照射的SCID小鼠可成功制成白血病动物模型;③采用程序性移植转基因细胞方法成功建立了mdr1转基因脐血细胞移植小鼠模型,并可作为白血病临床前期体内评价mdr1基因保护骨髓作用;④转基因脐血细胞移植小鼠对高三尖杉酯碱耐受性高于正常剂量的5~6倍,外周血白细胞维持在3.0×109/L左右,外周血涂片瘤细胞降至5%以     

提高多药耐药基因导入人CD_(34)~ 细胞转导效率的探讨

目的　探讨逆转录病毒介导的多药耐药基因 (mdr1)导入人CD34 细胞的影响因素 ,以提高基因转导效率。方法　用流式细胞术 (FCM)检测不同组合细胞因子及人骨髓基质细胞 细胞因子支持的基因转导效率 ;用造血祖细胞集落培养观察耐药性 ;用FCM检测不同浓度紫杉醇素对基因转导细胞的作用。结果　细胞因子SCF Flt配体 (FL) IL 3组合支持的基因转导效率高于其它组合 (SCF IL 6 IL 3,SCF IL 6 IL 3 Tpo ,SCF IL 3)。骨髓基质细胞 细胞因子 (SCF FL IL 3)支持的基因转导效率 (2 0 .5 % )又高于单纯用该组细胞因子的转导效率 (15 .2 % ) ,并且前者形成的抗性集落形成细胞数多于后者。在 10ng ml紫杉醇作用下基因转导CD34 细胞的阳性率可达 38.5 %。结论　骨髓基质细胞 细胞因子 (SCF FL IL 3)对基因转导有较强的促进作用 ;一定浓度的紫杉醇具有富集基因转导细胞的作用     

Toward gene therapy for Gaucher disease

We are studying the transfer and expression by retroviral vectors of the human glucocerebrosidase (GC) gene into bone marrow cells as a model of gene therapy for genetic diseases of hematopoietic cells. A simple retroviral vector (G2) was developed that contains a normal human GC cDNA under the control of the Moloney murine leukemia virus long-terminal repeat (LTR) enhancer/promoter. Murine bone marrow was transduced with the G2 vector and maintained in long-term bone marrow culture (LTBMC). Expression of the human GC gene in the transduced murine LTBMC cells exceeded the level of endogenous murine GC mRNA. Murine bone marrow cells were also transduced with G2 and transplanted into irradiated syngeneic recipients. High levels of GC gene transfer and expression were seen in day-12 CFU-S foci, and to a lesser extent in the hematopoietic organs 4 months after gene transfer/bone marrow transplant (BMT). Human bone marrow, from a patient with Gaucher disease, was also used in studies of GC gene transduction. Gene transfer into 35-40% of the Gaucher hematopoietic progenitor cells was achieved, following prestimulation of the marrow with recombinant hematopoietic growth factors. Equal rates of gene transfer were obtained using either total marrow mononuclear cells or progenitor cells enriched 100-fold by immunomagnetic bead separation. GC gene transduction corrected the enzymatic deficiency of the Gaucher marrow. Our results demonstrate the potential utility of retroviral vector-mediated gene transfer for gene therapy of Gaucher disease. Current efforts are aimed at achieving more consistent in vivo GC expression in the murine BMT model and demonstrating transduction of pluripotent human hematopoietic stem cells.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

Gene therapy for breast cancer

Gene therapy for advanced breast cancer is expected to be useful therapeutic approach. Strategies in ongoing clinical protocols can be divided into four: (1) suppression of oncogenes or transduction of tumor suppressor genes; (2) enhancement of immunological response; (3) transduction of suicide genes; (4) protection of bone marrow using drug resistance gene. We have started clinical study of multidrug resistance (mdr1) gene therapy. Advanced breast cancer patients received high dose chemotherapy and autologous peripheral blood stem cell transplantation (PBSCT) with mdr1-transduced hematopoietic cells, and then were treated with docetaxel. 2 patients have been treated so far, and in vivo enrichment of mdr1-transduced cells with docetaxel treatment was seen. Both patients are in complete remission and have no apparent adverse effect from mdr1 gene transduction.     

Expression of human glucocerebrosidase in long-term reconstituted mice following retroviral-mediated gene transfer into hematopoietic stem cells

A retroviral vector (GTN) in which the glucocerebrosidase (GCase) cDNA is driven by the Moloney murine leukemia virus (Mo-MuLV) long terminal repeat (LTR) was tested for transfer efficiency and expression of the GCase gene in long-term reconstituted mice. Eleven W/Wv mice were transplanted with unselected GTN-infected bone marrow cells and 10 of these mice were analyzed 3 months later. Seven of these 10 mice (70%) contained the intact proviral genome in bone marrow, spleen, and thymus. Of these 7,3 mice contained a high-copy number of the provirus in all the hematopoietic tissues tested. The mice contained anywhere from one to four proviral integration sites that were the same in all three tissues, indicating that these mice have been repopulated by one or more transduced multipotential hematopoietic stem cells. Five months after transplantation, bone marrow from the eleventh mouse was transplanted into secondary recipient animals. The secondary recipients contained the intact proviral genome in the bone marrow, spleen, thymus, and macrophages 4 months after the secondary transplantation. This further supports the conclusion that hematopoietic stem cells have indeed been targeted. Human GCase RNA was detected in all 7 mice containing the proviral DNA. These results demonstrate expression of the human GCase gene in the progeny of repopulating hematopoietic stem cells of mice following gene transfer.     

mdr-1和DHFR双基因共转染人CD34+细胞拓宽造血细胞耐药谱的体外研究

目的　探讨将多药耐药基因 (mdr 1)和二氢叶酸还原酶基因 (DHFR)同时导入人CD3 4 细胞 ,以拓宽造血细胞耐药谱 ,改善骨髓耐受联合化疗的可行性。方法　将以造血细胞中高表达的逆转录病毒载体FMCF为基本结构骨架 ,通过引入IRES序列构建获得含mdr 1和DHFR(L2 2Y)双耐药基因的逆转录病毒载体pSF DIM ,通过脂质体介导包装 ,单嗜性和双嗜性包装细胞上清交叉感染提高病毒滴度。低温离心病毒上清转染人脐血CD3 4 细胞 ,用流式细胞仪检测P gp的表达 ,基因组PCR检测外源性耐药基因的整合 ,CFU GM培养观察耐药性变化。结果　逆转录病毒载体pSF DIM转导人脐血CD3 4 细胞后 ,P gp的表达较未转基因组增加了 10 .98% ;基因组PCR同时检测到两种外源性耐药基因的整合 ;与未转基因组比较 ,在 48nmol/L甲氨蝶呤和 10ng/ml及 12ng/ml紫杉醇 (商品名Taxol)浓度水平 ,CFU GM集落形成显著增加 (P <0 .0 5 )。结论　重组双耐药基因逆转录病毒载体pSF DIM可以有效介导mdr 1和DHFR双耐药基因进入人脐血CD3 4 细胞并且获得共表达 ,拓宽了造血细胞耐药谱     

移植GM—CSF基因修饰的骨髓细胞对小鼠造血恢复的影响

探索粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的骨髓细胞促进照射鼠骨髓移植后造血功能恢复的可行性。通过基因转移造血细胞进行骨髓移植的小鼠模型动态观察移植鼠外周血细胞数量、肝脾及骨髓形态学,CFU-S,CFU-GM及血清GM-CSF活性的变化。结果表明,实验组小鼠外周血白细胞与中性粒细胞计数,CFU-S及脾脏CFU-GM明显高于对照组(P<0.05),而各组间骨髓CFU-GM计数无显著性差异(P>0.05);组织学显示实验小鼠肝脾造血组织明显增多,而各组间骨髓象改变不大,并且血清GM-CSF活性也较对照组明显升高(P<0.01)。结论提示,给γ射线照射小鼠移植GM-CSF基因修饰的骨髓造血细胞能显著加快造血恢复的过程。