HIF-1α基因沉默对缺氧环境人下咽癌FaDu细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对缺氧环境人下咽癌FaDu细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 培养人下咽癌FaDu细胞，随机分为对照组(常氧)、CoCl₂组(采用200μmol/L CoCl₂化学缺氧方法)、CoCl₂+Cki组(缺氧+转染空质粒)和CoCl₂+HIF-1αi组(缺氧+转染HIF-1α siRNA)。构建HIF-1α siRNA转染人下咽癌FaDu细胞，划痕、迁移和侵袭实验观察HIF-1α基因沉默对缺氧环境人下咽癌FaDu细胞增殖、迁移和侵袭的影响。Western blot检测各组HIF-1α和MMP-2表达。结果 与对照组相比，CoCl₂组人下咽癌FaDu细胞增殖(t=4.477,P<0.05)、迁移细胞数(t=3.814,P<0.05)和侵袭细胞数(t=3.392,P<0.05)显著增加；与CoCl₂组相比，CoCl₂+Cki组人下咽癌FaDu细胞增殖(t=2.081,P>0.05)、迁...     

腺病毒介导突变体HIF-1α基因对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察突变体HIF-1α基因在体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)内的表达以及对其增殖的影响.方法 以LacZ为对照,用野生型HIF-1α、单突变体HIF-1α564和双突变体HIF-1α564 803转染体外培养的大鼠VSMCs,Western blot测定HIF-1α蛋白表达:MTS/PES法确定大鼠VSMCs的增殖状态.结果 Western blot结果显示以LacZ组的密度扫描结果为1,HIF-1α564(3.284±0.582),HIF-1α564 803(4.026±0.445)与野生型HIF-1α(2.429±0.765)相比差异有显著性(P＜0.05),HIF-1α564与HIF-1α564 803组之间差异无显著性(P＞0.05).MTS/PMS比色结果显示:转染的第1天HIF-1α(0.242±0.020),HIF-1α564(0.234±0.021),HIF-1α564 803(0.223±0.020)3组均可抑制VSMCs增殖,与对照LacZ组(0.256±0.020)相比差异有显著性(P＜0.05),但是各组间差异无显著性(P＞0.05).转染第3,5,7天HIF-1α564,HIF-1α564 803组较HIF-1α组相比,差异有显著性(P＜0.05),尤以HIF-1α564 803组抑制大鼠VSMCs增殖能力最显著(P＜0.05).第7天HIF-1α564 803组Hoechst 33258与TUNEL双重荧光染色提示大鼠VSMCs发生了凋亡.结论 腺病毒介导的突变体HIF-1α基因能抑制大鼠VSMCs的增殖,突变体较野生型HIF-1α抑制作用更强,且双突变体HIF-1α564 803能诱导大鼠VSMCs发生凋亡.     

miR-155-5p mimic靶向HIF-1α对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制

【摘要】 目的 探讨miR-155-5p mimic靶向缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制。 方法 取对数期生长的A549细胞,将未经转染的细胞设为Control组,miR-155 mimic及HIF-1α分别转染至A549细胞,设为miR 155 mimic组和HIF-1α组;再将两者共同转染于A549细胞,设为mimic+HIF-1α组。采用荧光素酶报告基因检测miR 375与SLC7A11的靶向关系,利用RT PCR检测各组细胞miR 155-5p及HIF-1α mRNA表达水平,Edu染色检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中各蛋白表达。结果 HIF-1α是miR 155-5p-mimic的靶向基因。与Control组相比,miR-155-mimic组HIF-1α-mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均升高（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。与Control组相比,miR-155-mimic组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）,HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量升高,E cadherin蛋白表达量降低（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）。结论 miR-155-5p可通过靶向抑制HIF-1α表达抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化及VEGF/P38通路相关。     

低氧诱导因子1α、2α在不同海拔健康世居藏族及移居汉族的水平及意义

目的 探讨低氧诱导因子(HIF)-1α、HIF-2α.在不同海拔藏、汉族的水平及意义.方法 研究对象为2010年6至8月3个海拔高度的健康体检者,分为平原汉族组(P组,海拔5 m),中度海拔藏、汉族组(M1和M2组;海拔2260 m)及高海拔藏、汉族组(H1组和H2组,海拔4380 m),每组20名.应用ELISA方法测定血清HIF-1α、HIF-2α的水平,分析其与动脉血氧分压(PaO2)、血红蛋白(Hb)的相关性.结果 H2组HIF-1α水平[(6.06±1.85)μg/L]高于P组[(4.56 ±0.85)μg/L]、M1组[(4.41±1.05) μg/L]和M2组[(4.59±1.03) μg/L](均P＜0.05);H1组HIF-1α水平[(5.27±0.98) μg/L]高于M1组(P＜0.05).H2组HIF-2α水平[(0.83 ±0.48) μg/L]高于P组[(0.33±0.11) μg/L]、M1组[(0.14 ±0.06) μg/L]和M2组[(0.24 ±0.11) μg/L](均P＜0.01);M1组HIF-2α水平低于P组和H2组(均P＜0.01);H1组HIF-2α水平[(0.18 ±0.16)μg/L]低于P组和H2组(均P＜0.05).汉族组HIF-1α、HIF-2α水平与PaO2呈负相关(r=-0.475、-0.551),与Hb呈正相关(r =0.433、0.463)(均P＜0.01);藏族组HIF-1α、HIF-2α与Pa02无线性相关(r=-0.270、-0.198),HIF-1α与Hb无线性相关(r=-0.141)(均P＞0.05),HIF-2α与Hb正相关(r=0.325,P＜0.05).结论 藏、汉族在不同低氧环境下,HIF-1 α、HIF-2α变化不同,HIF-2α在Hb的调节方面可能起着较HIF-1α更为重要的作用.     

尼古丁对人RPE细胞及HUVEC的影响

目的探讨尼古丁对人视网膜色素上皮(RPE)细胞和血管内皮细胞(HUVECs)中血管内皮生长因子(VEGF)表达及形成新生血管能力的影响。方法 MTT法检测尼古丁对两种细胞增殖的影响;划痕及成管实验检测其对HUVECs迁移、成管的影响;RT-PCR和Western blotting法检测两种细胞经尼古丁处理后VEGF、PEDF mRNA及蛋白的表达。结果尼古丁促进HUVECs增殖、迁移、成管(P<0.05),但对ARPE-19细胞增殖无影响(P>0.05),且高浓度(100μmol/L)时抑制细胞增殖(P<0.01)。尼古丁以剂量和时间依赖方式促进两种细胞VEGF mRNA及蛋白的表达,抑制PEDF mRNA及蛋白的表达,上调VEGF/PEDF基因表达的比率(P<0.05)。结论尼古丁可上调ARPE-19细胞和HUVECs中VEGF/PEDF基因表达的比率,促进HUVECs增殖、迁移、成管。     

HIF-1对结直肠腺癌细胞凋亡的影响

【目的】探讨结直肠腺癌组织中HIF-1α、P53蛋白的表达及与凋亡的关系。【方法】采用免疫组化S-P法检测62例结直肠腺癌中HIF-1α、P53、MDM2蛋白的表达,用末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEI法)检测凋亡。【结果】结直肠癌组织中HIF-1α、P53、MDM2蛋白阳性率分别为46.77%(29/62),61.3%(41/62)和25.8%(16/62)。MDM2阳性率随组织学分级和临床分期有增高的趋势,并在B和C D期之间有显著差异(P<0.05)。癌组织HIF-α阳性表达组的AI显著高于HIF-1α。阴性组(P<0.01);P53阴性组A1显著高于P53阳性组(P<0.05)。HIF-1α阳性P53阴性表达组AI显著高于HIF-1α阴性P53阳性组(P<0.01),HIF-1α与p53表达呈显著负相关(r=-0.31,P<0.01);HIF-1α与呈显著正相关(r=0.43,P<0.05)。MDM2阳性表达组AI显著低于其阴性组(P<0.01)。MDM2阳性HIF-1α阴性组AI显著低于MDM2阴性HIF-1α阳性组(P<0.05),MDM2与HIF-1α负相关(r=-0.24,P<0.05)。【结论】HIF-1α可诱导结直肠癌肿瘤细胞凋亡,其机制可能与P53和MDM2有关。     

苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌细胞株增殖的抑制作用及机制研究

【目的】观察苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】以不同浓度苦参碱干预K-ras基因突变型人结肠癌SW480细胞,采用新型四唑氮盐(MTS)做比色分析测定细胞增殖,流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡,细胞划痕法观察细胞侵袭转移能力的变化,Western blotting方法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路下游关键激酶MEK1/2蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,0.125~1 mg/m L浓度的苦参碱能显著抑制SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,有效抑制结肠癌细胞的移行,降低MEK1/2蛋白的表达(P0.05),其作用强度随药物浓度增加有升高的趋势。【结论】苦参碱可能通过下调MAPK信号通路下游MEK1/2蛋白的表达,有效抑制SW480细胞的增殖和移行,并促进其凋亡。     

姜黄素通过抑制HIF-1α影响MDA-MB-231细胞增殖和迁移作用

目的研究姜黄素(Cur)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移作用的影响,并探讨其作用机制。方法用姜黄素处理MDA-MB-231细胞,利用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)检测姜黄素的半抑制浓度IC50,然后通过结晶紫染色分析Cur对MDA-MB-231细胞细胞克隆形成的作用,通过划痕实验检测姜黄素对细胞迁移能力的影响。然后用姜黄素,低氧诱导因子(HIF-1α)、小分子干扰RNA和HIF-1α激动剂去铁敏(DFO)处理细胞,通过荧光定量PCR(q-PCR)、Western blot分辨检测细胞内HIF-1α,细胞迁移相关蛋白(β-catenin,E-cadherin)的表达情况。最后用姜黄素和DFO处理细胞,通过划痕实验检测细胞迁移作用的影响。结果姜黄素作用MDA-MB-231细胞24h IC50为13.373μmol/L,且随浓度增加抑制能力逐步增强,实验组相对于空白对照组差异有统计学意义(P0.05),显著抑制细胞的克隆形成。10μmol/L的姜黄素作用细胞6 h后显著抑制细胞的迁移速率,DFO激活HIF-1α后能拮抗姜黄素的作用。姜黄素能够显著抑制细胞内HIF-1α的表达,并伴随β-catenin表达下调及Ecadherin的上调。结论姜黄素可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并能通过抑制HIF-1α/β-catenin信号通路抑制MDAMB-231细胞的迁移侵袭,为临床治疗乳腺癌提供了理论依据。     

三突变型低氧诱导因子-1α对人微血管内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响

目的观察重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人微血管内皮细胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白表达的影响。方法三突变型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空载腺病毒载体(Ad-Null)分别在HEK293A细胞大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,终点稀释法测定病毒滴度;双荧光素酶报告系统检测三突变型HIF-1α与野生型HIF-1α的转录活性;各重组腺病毒载体以最佳转染复数转染体外培养的hMVECs,Western blotting测定HIF-1α和VEGF蛋白表达;MTS检测Ad-HIF-1α564/402/803对细胞增殖的影响。结果三突变型HIF-1α转录活性显著高于野生型HIF-1α(P<0.001);Ad-HIF-1α564/402/803组HIF-1α和VEGF蛋白表达量高于Ad-HIF-1αnature及其他组;VEGF蛋白表达水平与HIF-1α呈剂量依赖关系。Ad-HIF-1α564/402/803组第3、5天吸光度值均显著高于Ad-HIF-1αnature及其他组(P<0.01)。结论三突变型HIF-1α在体外常氧条件下稳定高效表达,可诱导hMVECs VEGF蛋白表达上调,促进hMVECs增殖。     

血清HIF-1α、VEGF水平与急性呼吸窘迫综合征临床预后的关系

目的探讨血清低氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)水平与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者预后的关系及临床意义。方法采用前瞻性对照研究,选择本院2016年8月至2017年12收治的ARDS患者98例为研究对象,选择本院同期体检健康者30例作为对照组。根据ARDS患者治疗后30 d随访结局将患者分为死亡组(48例)和存活组(50例)。记录受试者入院24 h内急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭评分(SOFA)、氧合指数(PaO2/FiO2)、肺损伤评分(LIS),检测两组受试者血清HIF-1α、VEGF水平,采用Logistic回归分析影响ARDS患者预后的危险因素,ROC曲线分析血清HIF-1α、VEGF对ARDS患者不良预后的预测价值。结果 ARDS组患者血清HIF-1α、VEGF水平、APACHEⅡ、SOFA、LIS评分分别为(99.27±18.04)ng/L、(134.52±24.46)ng/L、(19.88±5.14)分、(7.81±1.42)分、(1.68±0.72)分,显著高于对照组的(46.18±8.39)ng/L、(41.96±7.59)ng/L、(14.26±4.73)分、(3.48±0.63)分、(0.28±0.05)分,差异均有统计学意义(P0.05);ARDS组患者PaO2/FiO2水平为(164.37±27.39)mm Hg,显著低于对照组的(394.36±65.68)mm Hg,差异有统计学意义(P0.05)。死亡组ARDS患者血清HIF-1α、VEGF水平、APACHEⅡ、SOFA、LIS评分显著高于存活组,差异均有统计学意义(P0.05);PaO2/FiO2水平显著低于存活组,差异有统计学意义(P0.05)。Logistic分析显示,血清HIF-1α水平、VEGF水平、APACHEⅡ评分、LIS评分、PaO2/FiO2是影响ARDS患者预后的危险因素(P0.05);血清HIF-1α、VEGF水平预测ARDS患者不良预后的曲线下面积分别为0.943、0.914(P0.05)。结论 ARDS患者血清HIF-1α和VEGF水平升高,检测血清HIF-1α和VEGF水平对监测ARDS患者疾病进程和预后判断具有一定参考价值。     

大肠癌中MTA1和HIF-1α的表达与淋巴管生成的关系

【目的】 探讨大肠癌中转移相关基因1(MTA1)&#65380;缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达及其与淋巴管生成的关系&#65377;【方法】 用免疫组织化学SP法检测81例大肠癌中MTA1&#65380;HIF-1α蛋白的表达及D2-40标记的淋巴管密度&#65377;【结果】 81例大肠癌中MTA1&#65380;HIF-1α阳性表达率分别为66.7%和63%,MTA1和HIF-1α的表达均与大肠癌Duke?蒺s分期和淋巴结转移相关(P < 0.05)而与组织学分级和浸润深度无关(P > 0.05),大肠癌中MTA1和HIF-1α蛋白表达呈正相关(P < 0.05),MTA1和HIF-1α蛋白过表达病例肿瘤旁淋巴管密度分别为18.4 ± 4.9&#65380;18.0 ± 5.3,高于MTA1和HIF-1α不表达和弱表达病例(15.6 ± 4.5&#65380;15.4 ± 4.2),两者的差异有统计学意义(P < 0.05)&#65377;【结论】 MTA1和HIF-1α蛋白的过表达可能促进了大肠癌旁淋巴管的生成,在肿瘤淋巴结的转移中起一定作用&#65377;     

白细胞介素33对人肝癌Hep3B细胞与Huh-7细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白细胞介素33(IL-33)对人肝癌Hep3B细胞和Huh-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法取对数生长期人肝癌Hep3B细胞和Huh-7细胞,将其分为20 ng/L组、40 ng/L组、60 ng/L组及对照组。除对照组外的其他组细胞加入相应浓度的IL-33,24 h后采用四甲基偶氮唑盐法测定各组细胞的增殖能力。另取细胞,将细胞分为实验组及对照组,仅实验组加入终浓度为60 ng/L的IL-33,培养24 h后采用细胞划痕实验及侵袭实验分别检测细胞的迁移及侵袭能力。结果各浓度组的Hep3B细胞和Huh-7细胞增殖活性均高于对照组(均P<0.05),60 ng/L组的Hep3B细胞和Huh-7细胞增殖活性高于20 ng/L组、40 ng/L组(均P<0.05),但20 ng/L组与40 ng/L组差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,实验组Hep3B细胞和Huh-7细胞的迁移率和侵袭能力更低(均P<0.05)。结论 IL-33可能同时具有促进人肝癌Hep3B细胞和Huh-7细胞增殖,和抑制其迁移、侵袭的作用。     

二氮嗪预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞HIF-1α mRNA表达及增殖的影响

目的:观察二氮嗪(DZ)预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)增殖和HIF-1α mRNA表达的影响.方法:培养SD大鼠MMECs,随机分为4组(n=24):正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、二氮嗪组(DZ组)、DZ+Mito KATP特异性阻断剂5-羟葵酸(5-HD)预处理组(DZ+5-HD组).DZ组加入100 μmol/L DZ,DZ+5-HD组加入100 μmol/L DZ前2 h加入100 μmol/L 5-HD预处理2 h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2 h复氧2 h.Hoechst染色观察凋亡细胞形态,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测HIF-1α mRNA转录水平.结果与N 组比较,细胞增殖率H/R组显著降低(P<0.01),HIF-1α显著升高(P<0.01);与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高(P<0.05),HIF-1α显著升高(P<0.01);DZ+5-HD组与H/R组比较差异无统计学意义.结论:DZ可上调HIF-1α mRNA的表达,促使细胞增殖,从而实现促进心肌微血管的新生.     

miR-122通过AXL/HIF-1α通路抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

【摘要】 目的 探讨miR-122对子宫内膜癌细胞（RL-952）增殖、上皮间质转化(EMT)及受体酪氨酸激酶(AXL)/缺氧诱导因-1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法 体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952,将细胞分为空白对照组(仅用培养基)、阴性对照组(转染miR-122 NC)、miR-122 mimics组(转染miR-122 mimics),采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-122水平,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹（WB）法检测AXL、HIF-1α蛋白以及EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 与空白对照组、阴性对照组相比,miR-122 mimics组RL-952细胞转染后48小时细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、AXL、HIF-1α、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均显著下降（P＜0.05）,E-cadherin、α-catenin蛋白表达、细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组比较,细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、细胞凋亡率、细胞AXL、HIF-1α、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 过表达miR-122可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,促进细胞凋亡,可能是通过抑制AXL/HIF-1α通路而实现。     

食管鳞癌组织中乏氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子及微血管密度测定

目的:探讨食管鳞癌组织中乏氧诱导因子(HIF-1α的表达与血管生成的关系.方法:采用免疫组织化学SP技术检测46例食管鳞癌及26例癌旁正常组织中HIF-1α、血管内皮细胞生长因子(VEGF蛋白的表达,用CD34抗体标记肿瘤组织血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).结果:食管鳞癌组织中HIF-1α、VEGF的阳性率分别为41.31%(19/46)、58.70%(27/46),MVD为46.12±7.64;均高于癌旁正常组织(P＜0.05).HIF-1α、VEGF的表达与食管鳞癌组织学分级和TNM分期无关(P＞0.05),与淋巴结转移及浸润深度有关(P＜0.05).食管鳞癌组织中HIF-1α的表达与VEGF表达及MVD均呈正相关(P＜0.05).结论:HIF-1α与食管癌新生血管形成有关.     

球状脂联素对卵巢微血管内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成的影响

目的 分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响.方法 采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素受体以及血管内皮细胞标记vWF;通过血管生成因子(VEGFA)处理检测卵巢微血管内皮细胞在Matrigel上的毛细管形成特性.重组的球状脂联素蛋白处理卵巢微血管内皮细胞,通过MTS检测细胞增殖;细胞划痕愈合法检测细胞迁移;Matrigel基质胶的血管形成,Western blot检测单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化激活.结果 分离出的细胞表现为卵泡刺激素受体阴性,黄体生成素受体阳性,vWF阳性,且VEGFA能够促进血管生长,具有卵巢特异的血管内皮生长特性.高剂量浓度(1 μg/mL和3μg/mL)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管内皮细胞数量分别增加(158.72± 14.50)％和(186.50±4.20)％,促进细胞增殖(P＜0.01);高剂量浓度(1μg/mL和3μg/mL)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管划痕愈合率分别为(49.43±3.43)％(P＜0.05)和(69.67±1.2)％(P＜0.01);3μg/mL的脂联素处理卵巢微血管内皮细胞形成的毛细管状长度为对照组的7.63±0.66倍(P＜0.01).3μg/mL的球状脂联素蛋白处理饥饿处理后的卵巢微血管内皮细胞培养15 min后pAMPK/AMPK、30 min后pAMPK/AMPK显著高于未加入蛋白处理的对照(P＜0.01).Compound C抑制了球状脂联素促进的卵巢微血管内皮细胞的管状结构形成及AMPK磷酸化激活.结论 成功分离了卵巢微血管内皮细胞,球状脂联素蛋白能够通过激活AMPK信号途径促进卵巢微血管内皮细胞的血管新生.     

TNF-α/HIF-1α/VASP途径在肺癌A549细胞增殖和粘附中的作用研究

【目的】 肺癌是目前世界癌症导致死亡排名第一的肿瘤,其中肿瘤细胞的增殖和转移与肺癌的死亡率密切相关。最近的调查显示肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与肿瘤的侵袭和转移相关,但是具体的机制仍不清楚。本实验旨在以肺癌A549细胞作为模型,研究TNF-α/HIF-1α/VASP途径在肺癌A549细胞的增殖和粘附中的作用。 【方法】 常规培养A549细胞,用MTT法和adhesion assay分别检测不同浓度的TNF-α对A549细胞增殖和粘附的影响。在随后的实验中采用高浓度的TNF-α刺激(120 ng/mL)作为刺激因素,分别用sh-RNA和pEGFP-C1-VASP敲除或过表达VASP、用siRNA和pEGFP-C1敲除或过表达HIF-1α,MTT法和adhesion assay分别检测细胞增殖和粘附水平,PCR检测HIF-1α和VASP在mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测HIF-1α和VASP蛋白的表达。同时采用Luciferase assay 的方法检测HIF-1α与VASP启动子区域结合的状态。 【结果】 (1)高剂量TNF-α可以促进HIF-1α表达,从而下调VASP表达水平,抑制肺癌A549细胞增殖和粘附。(2)与空载质粒pEGFP-C1组相比,瞬时转染VASP过表达质粒pEGFP-C1-VASP后,A549细胞的增殖能力显著增加(P<0.05),粘附能力显著增加(P<0.05)。相反,与Scrambled-shRNA组比较,通过转染VASP shRNA特异性敲降VASP后,A549细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),粘附能力显著降低(P<0.05)。(3)选择高浓度TNF-α(120 ng/mL)处理A549细胞24小时后,与空载质粒pEGFP-C1组相比,瞬时转染HIF-1α过表达质粒pEGFP-C1-HIF后,HIF-1α的表达在mRNA 和蛋白水平都显著增加(P<0.05),与此同时VASP的表达在mRNA和蛋白的水平显著降低(P<0.05)。相反,与Scrambled-siRNA组比较,通过转染HIF siRNA特异性敲降HIF-1α后, HIF-1α的表达在mRNA 和蛋白水平都显著降低(P<0.05),与此同时VASP的表达在mRNA和蛋白的水平显著增高(P<0.05)。(4)在给予肿瘤坏死因子-α诱导的细胞中,通过转染HIF siRNA特异性敲降HIF-1α表达后,TNF-α带来的HIF-1α的升高被部分抵消了(P<0.05)。(5)Luciferase assay 的检测结果提示HIF-1α可以与VASP启动子区域结合从而在转录水平上抑制VASP的表达。 【结论】 高浓度TNF-α通过增加HIF-1α的表达,调控并抑制VASP蛋白的表达,从而降低肺癌A549细胞增殖和粘附,从而发挥抗肿瘤的作用。     

HIF-1α、VEGF及AMH在多囊卵巢综合征中的表达及其临床意义

  目的  研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和抗苗勒管激素(AMH)在多囊卵巢综合征(PCOS)中的表达水平,探讨其临床意义。  方法  选择2018年6月—2020年6月湖州市中心医院收治的130例PCOS患者为观察组,同期100例健康女性为对照组,采用免疫化学发光法检测卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、孕酮(P)和雌二醇(E2)水平,酶联免疫吸附法检测血清HIF-1α、VEGF和AMH水平,分析HIF-1α、VEGF和AMH的相关性及对PCOS的预测价值。  结果  观察组患者的FSH[(5.81±0.92)mU/mL]、LH[(10.54±0.72)mU/mL]、PRL[(398.55±80.47)ng/mL]、T[(7.76±2.27)nmol/L]、P[(5.29±0.92)nmol/L]、E2[(118.63±42.78)pmol/L]显著高于对照组(t值为3.179、12.150、4.284、11.223、43.724、3.955,均P＜0.05)。观察组患者HIF-1α[(163.12±25.17)pg/L]、VEGF[(257.03±30.45)pg/L]和AMH[(7.29±1.02)pg/L]显著高于对照组(t值为42.592、31.612、47.194,均P < 0.05)。HIF-1α与VEGF、AMH水平均呈正相关(r=0.811、0.848、0.762,均P < 0.05)。血清HIF-1α、VEGF及AMH曲线下面积分别为0.764、0.731、0.742,95%CI分别为0.681~0.852、0.634~0.819、0.649~0.827。  结论  PCOS患者HIF-1α、VEGF及AMH水平显著升高,对PCOS具有较高的预测价值,可作为临床诊断的指标。      

HIF-1αsiRNA重组腺病毒对缺氧肺微血管内皮细胞HIF-1α和ET-1表达的影响

目的研究缺氧诱导因子-1αsiRNA重组腺病毒(Ad/siHIF-1α)对缺氧肺微血管内皮细胞(RPMVECs)HIF-1α及其下游基因ET-1表达的影响。方法原代培养肺微血管内皮细胞(RPMVECs);应用HEK293细胞大量扩增Ad/siHIF-1α。将RPMVECs分6组:A组(正常对照:常氧下5%CO2、95%空气、37℃培养);B组(含100μmol/L COCl2培养基培养4h);C组(Ad/siHIF-1α感染24h后,加入COCl2培养4h);D组(Ad/siHIF-1α感染48h后,加入COCl2培养4h);E组(Ad/siHIF-1α感染72h后,加入COCl2继续培养4h);F组(单纯腺病毒感染72h后,加入COCl2培养4h)。采用荧光定量PCR法检测HIF-1α和ET-1mRNA表达;Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达;ELISA法检测ET-1蛋白表达。结果与B组比较,C、D及E组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白表达显著下调,差异有显著性(均P<0.05);与B组比较,C、D及E组ET-1mRNA、ET-1蛋白也相应下调,差异有显著性(均P<0.05)。...     

黄连素调控GRP78表达对内皮细胞新生血管的抑制作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在内皮细胞新生血管中的表达及黄连素的干预作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,利用4-苯基丁酸（4-PBA）5mmol/L,毒胡萝卜素（TG）300nmol/L,TG300nmol/L联合低、中、高剂量（50、75、100滋mol/L）黄连素分别作用24h,对照组为正常培养的HUVEC。采用噻唑蓝（MTT）法、划痕法、MatrigelMatrix胶法分别检测细胞增殖、迁移、成血管能力,qRT-PCR法、Westernblot法分别检测HUVEC中血管内皮生长因子（VEGF）、GRP78、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）mRNA和蛋白表达,免疫荧光法观察GRP78在细胞内的定位。结果≤100滋mol/L的黄连素对HUVEC增殖无明显影响（P＜0.05）。与对照组比较,4-PBA组细胞迁移、成血管能力均明显减弱（均P＜0.05）;TG组细胞迁移、成血管能力均明显增强（均P＜0.05）,HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显升高（均P＜0.05）。与TG组比较,黄连素低、中、高剂量干预组细胞迁移、成血管能力均明显减弱（均P＜0.05）,HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显降低（均P＜0.05）。在荧光显微镜下观察,GRP78分布于内皮细胞的细胞膜上。结论GRP78在HUVEC新生血管过程中发挥重要作用,黄连素可能通过抑制GRP78表达从而抑制内皮细胞血管新生。