左归降糖益肾方对糖尿病肾病MKR鼠肾组织TGF-β1及CTGFmRNA表达的影响

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体缺失转基因鼠(MKR鼠)转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)基因mRNA表达的影响。方法:MKR鼠60只,按性别、空腹血糖、体重随机分为4组,即空白组,模型组,左归降糖益肾方组(28.8 g·kg-1),阳性药物组(格列喹酮0.003 9 g·kg-1与盐酸贝那普利0.001 3 g·kg-1),每组15只,同龄C57鼠10只作为正常组,除正常组与空白组外,其余各组高脂喂养联合单侧肾切除造成糖尿病肾病(DN)小鼠模型,造模后8周ig给予相应药物8周,留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠。电化学法检测空腹血糖(FBG),常规生化法检测血清肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量,ELISA检测尿微量白蛋白含量;并取新鲜肾组织,RT-PCR检测肾组织TGF-β1及CTGF mRNA的表达水平;其余组织4%多聚甲醛固定24 h,HE及Masson染色观察肾组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG,SCr,BUN及尿微量白蛋白含量明显升高(P0.01);与模型比较,左归降糖益肾方能明显降低DN小鼠FBG,降低SCr,BUN及尿微量白蛋白含量(P0.01);下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平(P0.05,P0.01),疗效等同于阳性药物组;与空白组比较,模型组肾组织肾小球体积缩小,肾小球萎缩,球囊腔增宽,球囊腔壁层细胞增多且异形化,左归降糖益肾方能明显改善肾组织病理损伤。结论:左归降糖益肾方可以通过下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平,从而抑制肾组织纤维化的发生发展。     

辣蓼对大肠埃希菌性腹泻小鼠肠黏膜的修复作用

目的:研究辣蓼对大肠埃希菌性腹泻小鼠的干预作用,并探讨其可能的作用机制。方法:选取160只昆明种小鼠随机分为正常组,模型组,小檗碱组,辣蓼低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组采用腹腔注射致病性大肠埃希菌建立小鼠腹泻模型。辣蓼低、中、高剂量组分别灌胃2.5,5,7.5 g·kg-1辣蓼水提液,小檗碱组给予盐酸小檗碱0.025 g·kg-1,正常组及模型组以等体积生理盐水,每天给药2次。分别于成模后的第1,2,4,6天各组随机抽取5只动物,取十二指肠,光镜下观察病理形态学变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肠组织中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肠组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),Smad3及Smad7 mRNA表达水平。结果:病理学观察发现辣蓼干预后可以明显减轻腹泻小鼠十二指肠黏膜损伤;ELISA结果表明,与正常组比较,模型组小鼠肠黏膜TNF-α和IL-1β的含量明显增多(P0.01);与模型组比较,辣蓼中、高剂量组能降低小鼠肠黏膜TNF-α和IL-1β的含量(P0.05,P0.01)。Real-time PCR结果表明,与正常组比较,模型组TGF-β1,EGFR表达量均明显升高(P0.05,P0.01),Smad7 mRNA表达量明显降低(P0.05,P0.01),药物干预后,与模型组比较,各给药组可不同程度调节肠组织中TGF-β1,EGFR,Smad3及Smad7 mRNA表达量(P0.05),且呈现一定的剂量依赖关系。结论:辣蓼对大肠埃希菌性腹泻有良好的治疗作用,其作用机制可能与减少肠组织炎症因子释放、改善肠道黏膜屏障、干预TGF-β/Smads信号转导有关。     

补肾调冲方对去卵巢大鼠性激素水平及下丘脑雌激素受体α、雌激素受体β mRNA表达的影响

[目的]探讨补肾调冲方对去卵巢大鼠血清性激素水平及下丘脑雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)mRNA表达的影响。[方法]以假手术组为对照,将去卵巢大鼠随机分为去卵巢空白组,补肾调冲方高、中、低剂量组,已烯雌酚组。采用放射免疫分析法测定血清雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)水平,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测下丘脑ERα、ERβmRNA表达。[结果]去卵巢大鼠血清FSH、LH水平升高,E2及下丘脑ERα、ERβmRNA水平降低,补肾调冲方大鼠血清E2有升高趋势,FSH有降低趋势,补肾调冲方能降低去卵巢大鼠血清LH水平,升高下丘脑ERα、βmRNA的表达。[结论]补肾调冲方在改善去卵巢大鼠性激素水平同时,可能通过影响ERα、ERβmRNA的表达,提高ER的生物效应,从而降低更年期综合征的发生。     

归芪聪志汤对VD模型大鼠海马神经元Claudin-1,TGF-β表达的影响

目的:研究归芪聪志汤对血管性痴呆(varscular dementia,VD)模型大鼠学习记忆和海马神经元紧密连接蛋白1(Claudin-1)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠120只,按随机数字表选10只大鼠作为假手术组,其余大鼠制备VD模型,选成功模型大鼠随机分为5组,分别为模型组、阳性组和归芪聪志汤低、中、高剂量组。归芪聪志汤低、中、高剂量组给药量分别为9.9,19.8,39.6 g·kg-1·d-1。阳性组给予脑复康吡拉西坦胶囊0.3 g·kg-1·d-1。假手术组、模型组给予等量水。每日1次。连续灌胃治疗28 d后,Morris水迷宫予以行为学检测,实时荧光定量PCR(Real-time PCR),免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组海马组织Claudin-1,TGF-β基因和蛋白表达。结果:灌胃治疗28 d后,与假手术组比较,VD模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长、跨原平台次数明显减少(P0.01),大鼠海马的Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.05),大鼠海马的TGF-βmRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠逃逸潜伏期均缩短,跨原平台次数均增多(P0.01),大鼠海马的Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.05),大鼠海马的TGF-βmRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.05),归芪聪志汤中剂量组与脑复康吡拉西坦胶囊组优于其他组(P0.05)。结论:归芪聪志汤能够显著改善VD大鼠的学习记忆能力,可能与调节脑组织细胞间黏附作用、抑制炎性因子表达等有关。     

桑叶对糖尿病小鼠肝脏Toll样受体基因表达的影响

目的:探讨桑叶水提物对糖尿病小鼠肝组织Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)基因表达量的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:ICR小鼠随机分为正常组(6只),糖尿病组。糖尿病组小鼠利用高脂高糖饲料喂养10周联合多次注射链脲佐菌素(STZ)建立高脂饲养和STZ共同诱导的小鼠糖尿病模型。造模成功小鼠随机分为模型组,二甲双胍组(600 mg·kg~(-1)),桑叶高、中、低剂量组(8,4,2 g·kg~(-1)),每组6只,灌胃(ig)给药,每周测空腹血糖,于实验中后期行口服糖耐量实验,ig给药10周后,测定小鼠血清胰岛素、总胆固醇、甘油三酯和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测小鼠肝组织中TLR1~9表达量。结果:糖尿病模型小鼠经桑叶水提物治疗后,进水量减少,显著降低空腹血糖,改善糖耐量,显著降低血脂,增加胰岛素含量,改善胰岛素抵抗,同时降低血清中TNF-α(P0.05,P0.01)。Realtime PCR结果显示,糖尿病小鼠肝脏组织TLRs受体中TLR1,TLR2,TLR3,TLR7,TLR8和TLR9表达明显高于正常组(P0.05,P0.01),TLR5表达明显低于正常组;桑叶给药组后,桑叶中剂量组肝组织中的TLR7,TLR8和TLR9表达量,显著降低于模型组(P0.05,P0.01)。结论:桑叶水提物的降糖作用可能与抑制糖尿病模型小鼠肝组织中TLRs受体有关。     

复方苦参注射液对放射性肺损伤的肺保护作用

目的:观察复方苦参注射液对放射性肺损伤模型模型小鼠转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad3蛋白(Smad3),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:使用美国XStrahl小动物精准放疗辐照研究平台(SARRP),实施单次20 Gy双侧肺野照射建立放射性肺损伤小鼠模型,将32只小鼠随机分为正常组、模型组、复方苦参注射液组(5 g·kg~(-1)),地塞米松注射液组(0.5 mg·kg~(-1))。正常组和模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,连续腹腔注射4周。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理;免疫组化(IHC)检测小鼠肺组织E-钙粘蛋白(E-cadheren),波形蛋白(Vimentin)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测组小鼠肺组织中TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测组小鼠肺组织中TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin通道蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺系数显著升高(P0.01),且小鼠肺脏出现炎症细胞浸润,肺间质水肿、充血,肺泡结构破坏,部分肺泡萎缩。与模型组比较,复方苦参注射液组小鼠肺脏炎症细胞浸润及肺间质病变减轻,小鼠肺组织E-cadheren的水平显著升高(P0.01),小鼠肺组织Vimentin的水平显著降低(P0.01),TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin表达水平显著降低(P0.01)。与地塞米松注射液组比较,复方苦参注射液小鼠肺部病理形态学改变相仿,E-cadheren,Vimentin,TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin表达水平未见明显差异。结论:复方苦参注射液能够改善放射性肺损伤模型小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制上皮间质转化(EMT)相关的TGF-β_1,Smad3,GSK-3β和β-catenin mRNA及通道蛋白表达,进而促进E-cadheren表达、抑制Vimentin蛋白表达,最终抑制EMT的发生有关。     

双益方改善2型糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗的药效及作用机制

目的:进行双益方对2型糖尿病模型大鼠的药效作用实验,分析其作用机制。方法:采用高脂饲养加25 mg·kg~(-1)剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法建立2型糖尿病大鼠模型,将成模动物随机分为模型组,二甲双胍组[灌胃(ig),85 mg·kg~(-1)],双益方高、中、低(ig,2 000,1 000,500 mg·kg~(-1))剂量组。进行双益方对2型糖尿病模型大鼠的体重,饮食量,饮水量,二便情况,血糖,糖耐量测定(oral glucose tolerance test,OGTT),糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,Hb A1c),糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP),胰岛素等指标的检测,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B),蛋白激酶(Akt),磷酸化的蛋白激酶(p-Akt),糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)的表达,Western blot测定骨骼肌组织胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1),磷酸化的胰岛素受体底物-1(p-IRS-1),葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,Glut4)表达的影响。结果:与模型组比较,双益方可降低2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),Hb Alc水平及胰岛素抵抗指数(Homa-IR),缓解2型糖尿病模型大鼠饮食量多、饮水量多、二便量大及体重减轻的状况(P0.05,P0.01),降低血清胰岛素、糖化血清蛋白、糖化血清蛋白及随机血糖(P0.05,P0.01),其中双益方高剂量组药效较好;双益方可显著升高2型糖尿病模型大鼠骨骼肌p-IRS-1,Glut4的表达(P0.01,P0.05);双益方可显著升高2型糖尿病模型大鼠肝脏p-Akt的表达,显著降低PTP1B,p-GSK-3β的表达(P0.01,P0.05)。结论:双益方可有效调节2型糖尿病模型大鼠糖代谢紊乱,促进胰岛素分泌,改善胰岛素抵抗;调节骨骼肌PI3K/Akt,肝脏Akt/GSK-3β信号转导通路可能是该复方治疗2型糖尿病的作用机制。     

抵当汤及其拆方对糖尿病大鼠心肌TGF-β1,TGF-β RⅡ及Smad7蛋白表达的影响

目的:探讨糖尿病对大鼠心肌转化生长因子-β1(TGF-β1),转化生长因子-β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)及人信号转导分子7(Smad7)蛋白表达的影响及抵当汤及其拆方的干预作用。方法:105只SD雄性大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型。成模后分为模型组、抵当汤干预组、水蛭虻虫组、桃仁大黄组和缬沙坦组,以12只正常SD雄性大鼠作为正常组,分别给予相应处理。8周末,利用全自动生化仪检测空腹血糖(FBG),HE染色观察心肌病理形态学变化,Western blot法检测TGF-β1,TGF-βRⅡ及Smad7蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌组织细胞肥大,炎症细胞浸润较明显,心肌TGF-β1及TGF-βRⅡ蛋白表达明显升高,Smad7蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,抵当汤可以明显减轻糖尿病大鼠心肌组织的病理改变,抵当汤明显下调大鼠心肌TGF-β1蛋白及TGF-βRⅡ蛋白表达,明显上调Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01)。拆方组大鼠与糖尿病模型大鼠组比较,TGF-β1蛋白下调,心肌组织损伤也有好转,但均不如全方明显。结论:抵当汤可减缓糖尿病大鼠心肌纤维化病变,其机制可能与下调糖尿病大鼠心肌中TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达,上调Smad7蛋白的表达有关,同时表明,抵当汤全方对DCM病变的防治作用优于拆方,"泻热化瘀通络"治法与抑制TGF-β1/Smad7信号转导通路有关。     

益气活血利水汤对肝纤维化模型大鼠Necdin-Wnt信号通路的影响

目的:观察益气活血利水汤对肝纤维化模型大鼠necdin-Wnt信号通路的影响,探讨益气活血利水汤抗肝纤维化的作用机制。方法:60只SD大鼠中随机抽取12只为正常组,造模成功的45只大鼠随机分为益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组(n=12),益气活血利水汤(14.4 g·kg~(-1))组(n=11),秋水仙碱组(Col组,n=11)和模型组(n=11)。正常组和模型组灌胃(ig)生理盐水,益气活血利水汤组ig益气活血利水汤9.6,14.4 g·kg~(-1)·d~(-1),Col组ig Col 0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)。10周后观察两组的血清透明质酸(hyaluronan acid,HA),层黏蛋白(laminin,LN),Ⅲ型前胶原(typeⅢprocollagen,PCⅢ),Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,CⅣ)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察其病理表现,Masson染色观察胶原蛋白变化,观察各组necdin,β-链蛋白(β-catenin),过氧化物增殖激活受体(PPARγ)蛋白和mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,纤维化分期的标准(Metavir)评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,Col组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,METAVIR评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01);与Col组比较,益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,METAVIR评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01);与益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组比较,益气活血利水汤(14.4 g·kg~(-1))组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,Metavir评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01)。与正常组比较,模型组PPARγ蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,Col组PPARγ蛋白及mRNA表达显著升高(P0.01);与益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组比较,益气活血利水汤(14.4 g·kg~(-1))组PPARγ蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:益气活血利水汤可抑制necdin-Wnt/β-catenin通路的活性,解除Wnt/β-catenin对PPARγ的抑制,具有抗肝纤维化的效果。     

青娥方提取物对D-半乳糖致衰老小鼠的延缓衰老作用及机制

目的:探讨青娥方提取物对D-半乳糖致衰老模型小鼠的延缓衰老作用。方法:将小鼠随机分为空白组、衰老模型组、阳性药组、青娥方提取物低、中、高剂量组。除空白组颈背部皮下注射生理盐水外,其余各组均颈背部皮下注射D-半乳糖溶液,空白组和模型组均用0.5%羧甲基纤维素钠水溶液灌胃;阳性药组维生素E(0.1 g·kg-1)及青娥方提取物低、中、高剂量组(0.4,0.8,1.6 g·kg-1)剂量的青娥方提取物的羧甲基纤维素钠水溶液灌胃6周后进行转棒仪疲劳实验;同时测定肝脏中谷胱甘肽(GSH),丙二醛(MDA),总抗氧化能力(T-AOC),一氧化氮(NO),一氧化氮合酶(NOS)等抗氧化生化指标;血清中尿素氮(BUN),乳酸脱氢酶(LDH)等抗疲劳生化指标;并采用实时定量PCR检测海马抗氧化基因锰超氧化物歧化酶(Mn SOD),过氧化物酶-3(Prdx-3)mRNA的表达。结果:转棒疲劳仪行为学实验,与空白组比较,模型组小鼠在转棒停留时间明显缩短(P0.01)。青娥方提取物各剂量组与模型组相比,均可以显著延长小鼠在转棒仪上的停留时间(P0.05,P0.01)。生化指标测定模型组血清与空白组相比,BUN,MDA,NO,NOS的含量均升高(P0.05),而LDH含量降低(P0.05);各给药组均能明显改善上述指标(P0.05,P0.01)。肝组织生化指标,与空白组GSH含量及T-AOC比较模型组均显著降低(P0.01),MDA,NO,NOS含量均显著升高(P0.05,P0.01),而给药组较模型组相比,各指标均显著改善(P0.05,P0.01)。实时定量PCR结果显示,模型组海马Mn SOD mRNA表达水平较空白组降低(P0.05),给药组与模型组相比,海马Mn SOD,Prdx-3 mRNA的表达显著提高(P0.05,P0.01)。结论:青娥方提取物能显著提高机体抗氧化能力,发挥延缓衰老和抗疲劳作用。