杀菌-通透性增加蛋白对烫伤大鼠脂多糖结合蛋白和CD14 mRNA表达的影响

目的观察烫伤后重组杀菌通透性增加蛋白（ｒＢＰＩ２１）对内毒素增敏系统脂多糖结合蛋白／脂多糖受体ＣＤ１４（ＬＢＰ／ＣＤ１４）及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）ｍＲＮＡ表达的影响及其意义。方法采用大鼠３５％Ⅲ°烫伤模型,动物分为正常对照组（８只）、烫伤组（１２只）和ｒＢＰＩ２１治疗组（１２只）。烫伤组和ｒＢＰＩ２１治疗组动物分别于伤后１２和２４小时活杀。留取组织和血标本采用半定量ＲＴＰＣＲ方法,分别检测组织ＬＢＰ、ＣＤ１４、ＴＮＦαｍＲＮＡ表达及器官功能指标。结果ｒＢＰＩ２１治疗可明显抑制局部组织ＬＢＰ／ＣＤ１４ｍＲＮＡ表达（Ｐ＜００５００１）,并不同程度抑制肝、肺及肾组织ＴＮＦαｍＲＮＡ表达水平（Ｐ＜００５００１）。同时,ｒＢＰＩ２１治疗组动物血清谷丙转氨酶水平明显降低（Ｐ＜００１）,而小肠组织二氨氧化酶活性显著高于烫伤组（Ｐ＜００５）。结论烫伤早期应用ｒＢＰＩ２１可部分减轻肠源性内毒素移位诱发的病理损害,其作用机理可能与ｒＢＰＩ２１对体内多种组织ＬＢＰ／ＣＤ１４ｍＲＮＡ表达的下调效应有关。     

脂多糖对THP-1细胞CD14诱导表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对THP-1细胞CD14诱导表达的影响。方法应用不同质量浓度(0.1~50 mg/L)的LPS刺激培养48 h的THP-1细胞,并测定其CD14mRNA、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL-6)表达的变化。结果正常培养条件下,THP-1细胞CD14表达量极低,而LPS对单核巨噬细胞THP-1具有显著的诱导激活作用,在较低质量浓度剂量刺激下即可被活化,表现为CD14mRNA表达量迅速增加,同时,LPS可诱导THP-1细胞产生TNF-α和IL-6,并在一定范围内呈剂量依赖关系。结论LPS可导致THP-1细胞活化,显著上调CD14mRNA的表达,并诱导产生炎症介质TNF-α和IL-6。     

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的人单核巨噬细胞株表达CD14的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞表达CD14的影响。方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS 100ng/mLrhLBP)、低剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组及高剂量抑制肽组,后3组分别给予10、100和1000ng/mL抑制肽。用RTPCR和蛋白定量方法(Westernblot)测定CD14mRNA和蛋白的表达,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果LBP抑制肽显著抑制LPS刺激后U937细胞CD14的mRNA与蛋白表达,同时也抑制了TNFα的分泌,较LPS组有显著差异。结论LBP抑制肽通过抑制由CD14介导的LPS信号跨膜转导和TNFα的分泌,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。     

内毒素对巨噬细胞膜CD14表达的影响及与膜脂微环境关系

目的 研究内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)刺激下巨噬细胞膜脂改变对CD14表达的影响。方法 LPS体外刺激巨噬细胞，用Western blot及RT-PCR检测随时问变化细胞膜CD14 mRNA及蛋白表达的变化；同时观察膜脂微环境变化对CD14表达的影响。结果 LPS刺激巨噬细胞1h CD14表达增加，5h达高峰，8h降至正常水平；而CD14 mRNA水平3h达高峰，5h降低。LPS刺激巨噬细胞5h后细胞膜脂成分降解，膜脂流动性降低，CD14表达增加；用脂质体预处理后膜脂含量增加，膜脂流动性增加，CD14表达降低。结论 LPS体外刺激能上调巨噬细胞膜CD14表达，且此调节作用可能至少发生在转录水平；LPS刺激巨噬细胞使主要膜脂成分降解，膜流动性降低，这可能是LPS上调CD14的重要原因。     

内毒素介导Kupffer细胞脂多糖受体CD14的表达

目的　观察内毒素刺激下肝Kupffer细胞 (KCs)膜上脂多糖 (LPS)受体CD14的表达及其在细胞因子分泌中的作用。方法　从Wistar大鼠肝组织中分离出KCs ,培养 12h并调整细胞浓度为 1× 10 6/ml/孔 ,将细胞分为 2组。①LPS组 :每孔加入不同浓度LPS(0、10 0ng/ml ,1、10 0 μg/ml) ;②PI PLC组 :每孔先加入 1U磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI PLC)后再加入不同浓度LPS。用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素 (FITC)标记的羊抗兔IgG对KCs进行免疫染色 ,流式细胞仪 (FCM)测定FITC阳性KCs数及其荧光强度(FI) ,并用酶联免疫法或放免法测定培养液中TNFα和IL 6的含量变化。结果　随着LPS浓度增加 ,LPS组FITC阳性细胞数显著增多 ,其FI逐渐增强 ,培养液中TNFα和IL 6的含量也逐渐增高 (P <0 .0 1) ;PI PLC组FITC阳性细胞数及FI较LPS组明显减少和减弱 ,培养液中TNFα和IL 6的含量在低浓度LPS刺激时差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,在高浓度LPS时刺激时才明显增加 (P <0 .0 5 )。结论　LPS能上调KCsCD14表达 ,同时伴有多种细胞因子分泌 ;PI PLC对内毒素介导KCs分泌细胞因子有一定抑制作用     

烫伤大鼠脂多糖受体CD14 mRNA在肺内皮细胞中的表达

目的：研究烫伤大鼠脂多糖受体CD14基因在肺中的表达及其定位，探讨急性肺损伤的发病机制。方法：采用5D大鼠30％—35％三度烫伤模型，分别于8、24、48、72h活杀，留取肺组织标本检测CD14 mRNA的表达；留取血标本检测内毒素、IL-4的含量。结果：烫伤后大鼠肺内皮细胞cD14 mRNA表达上调，分别于烫伤后24、48h出现高峰，烫伤后血内毒素和IL-4含量均明显增高。相关分析显示，内毒素刺激机体后引起IL-4的显著升高。结论：大鼠烫伤后，存在内源性内毒素血症，肺内皮细胞cD14 mRNA表达上调，与烫伤后急性肺损伤的发生密切相关，内毒素刺激可引起机体抑制性炎症因子IL-4的显著增加。     

CD14在B1细胞的表达研究

目的：比较分析小鼠B1细胞和B2细胞CD14的表达,探索B1细胞在天然免疫中的作用.方法：取正常C57BL/6小鼠的腹腔和脾细胞,anti-IgM免疫磁珠分选B1和B2细胞,提取总RNA后用半定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测CD14 mRNA的表达,以anti-CD14抗体、anti-CD19抗体流式细胞仪分析CD14分子在B1和B2细胞表面的表达;进一步给予小鼠腹腔内注射脂多糖（LPS）,于不同时间点分选B1细胞,RT-PCR检测CD14 mRNA表达水平的变化.结果：RT-PCR及流式细胞仪检测结果显示CD14在正常小鼠B1细胞有较低水平的表达,而B2细胞几乎没有表达,LPS刺激后B1细胞的CD14表达水平明显升高.结论：CD14表达于正常小鼠B1细胞,并且可能在B1细胞对LPS的应答中具有重要作用.     

结核分枝杆菌感染对THP-1细胞CD14表达的影响

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响.方法:Mtb以10:1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型.采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达.结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%.结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加.     

脂多糖对干燥综合征患者唇腺上皮细胞表达TLR4及CD14的影响

目的 探讨LPS-TLR4-CD14信号传导通路在干燥综合征(sjogren's syndrome,SS)发病机制中的作用。 方法 选择解放军第285医院风湿科2015年3月-2016年3月收治SS患者7例为研究组;另5例排除SS诊断,且无其他疾病的作为对照组。①取患者唇腺组织进行体外培养,一周后采用抗细胞角蛋白19的单克隆抗体PAP法对新生细胞和唇腺组织细胞进行染色,以鉴定新生细胞来源。②分别于培养成功的新生细胞PSS组和对照组加入浓度为1 μg/ml的内毒素(lipopolysaccharide,LPS),在继续培养后1、8、12、24、48、72 h时间点提取细胞总RNA,采用RT-PCR法分别检测不同时间点TLR4、CD14 mRNA的表达。③对新生细胞pSS组分别加入浓度为1、10、100、103、104、105 ng/ml的LPS,对照组不加LPS,继续培养24 h后分别检测TLR4和CD14 mRNA表达。 结果 ①结果显示新生细胞和唇腺组织中导管上皮细胞染色为阳性反应,唇腺组织中的淋巴细胞、腺泡细胞呈阴性反应,证明本次培养的新生细胞来源于唇腺组织的导管上皮细胞。②在新生细胞中加入LPS,作用1 h后TLR4和CD14 mRNA表达增强,分别于8、12 h后达高峰期,作用72 h后明显下降。③浓度为1 ng/ml的LPS即可引起PSS组新生细胞TLR4和CD14 mRNA表达显著增高,随着LPS浓度的增高,TLR4和CD14 mRNA表达持续升高,当LPS浓度达到104 ng/ml以上时,TLR4和CD14 mRNA表达呈平台期,变化不显著。 结论 经LPS刺激后,唇腺导管上皮细胞高表达TLR4和CD14 mRNA,且反应在一定范围内呈时间、浓度依赖性,由此推断LPS-TLR4-CD14信号转导通路参与了SS的发病机制,进而揭示感染与SS发病有关。      

杀菌—通透性增加蛋白对烫伤大鼠脂多糖结合蛋白和CD14mRNA表？…

目的 观察烫伤后重组杀菌－通透性增加蛋白对内毒素增敏系统－脂多糖结合蛋白／脂多糖受体ＣＤ１４（ＬＢＰ／ＣＤ１４０及肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ表达的影响及意义。方法 采用大鼠３５％Ⅲ°烫伤模型,动物分为正常对照组,烫伤组和ｒＢＰＩ２１治疗组。烫伤组和ｒＢＰＩ２１治疗组动物分别于伤后１２和２４小时活杀。     

不同剂量X射线诱导体内及体外小鼠巨噬细胞CD14的剂量效应关系

目的：观察不同剂量X射线照射在体内及体外对小鼠巨噬细胞CD14表达的影响。方法：采用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD14阳性细胞数。体内实验选择16 h、体外实验选择4 h,低剂量为0.05～0.20 Gy、高剂量为0.5～6.0 Gy。 结果：整体照射时,低剂量X射线使CD14表达明显增强,而较高剂量X射线（大于2.0 Gy）明显抑制CD14表达;在体外照射时,0.075 Gy和2.000 Gy以内的较高剂量X射线也使CD14表达明显增强,而4.0~6.0 Gy 的剂量使J774A.1细胞的CD14表达明显受到抑制。 结论：低剂量X射线在体内及体外均能诱导小鼠巨噬细胞的CD14表达;小于2.0 Gy时也能增强CD14的表达,而剂量大于2.0 Gy时CD14的表达呈剂量依赖性下降,而且在体外的变化更明显。     

不同剂量电离辐射诱导J774A.1细胞TLR4及其相关细胞因子的表达及意义

目的: 观察不同剂量X射线照射对J774A.1细胞TLR4的表达及分泌IL-12及IL-18的影响,进一步探讨Toll信号通路的机制。方法: 将体外培养的J774A.1细胞分为低剂量（0.075 Gy）和高剂量（2.000 Gy）照射组,各组分别设假照组和照射后4、8、16、24 及48 h的不同时间组。采用流式细胞术检测J774A.1细胞表面TLR4阳性细胞数,ELISA法检测IL-12及IL-18的分泌量。结果：低剂量X射线照射后,早期IL-12（4 h）和IL-18（4 h）分泌量均上调,然后逐渐回降到假照水平。高剂量X射线照射后4～24 h IL-12分泌量与假照组比较一直保持较高水平（P<0.05或P<0.01）,至48 h时恢复正常水平;而IL-18分泌情况与低剂量组相似,与假照组比较在照后4 h时分泌增多（P<0.05）,然后逐渐回复到假照水平。结论：电离辐射使巨噬细胞TLR4表达增高,同时使其分泌的IL-12及IL-18的分泌量增加,促进了小鼠的固有免疫反应。     

rhGH、IGF-1对烧伤小鼠CD14 mRNA转录的影响

目的:探讨rhGH、IGF-1对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞(Mα)CD14 mRNA转录的影响.方法:在体实验:20只小鼠被随机地分成A、B组(烧伤前连续5 d分别给予rhGH和生理盐水)和C、D组(假烫前连续5 d分别给予rhGH和生理盐水).离体实验:10只小鼠被分成E、F组(烧伤和假烫组),Mψ加入rhGH(0,1.6,8,40 ng/ml)和IGF-1(0,0.2,1,5μg/m1)培养.用细胞原位杂交方法,观察了全身应用rhGH及体外培养加入rhGH、IGF-1对小鼠巨噬细胞CD14 mRNA转录的影响.结果:在体实验:(1)预先肌注rhGH,可使假烫组小鼠腹腔MψCD14mRNA的转录明显增加.(2)烧伤后腹腔MψCD14mR-NA的转录也明显增加,预先应用rhGH的小鼠烧伤后不会出现MψCD14 mRNA的过度转录.(3)体外培养实验:rhGH(40ng/ml)可使烧伤小鼠Mψ CD14 mRNA转录增加,其他浓度无显著改变,IGF-1各浓度均增加CD14 mRNA的转录.结论:rhGH、IGF-1可能通过增加MψCD14基因表达使Mψ易于被激活,从而有利于免疫功能的增强.rhGH的这一作用可能通过IGF-1来实现.烧伤后应用0.2 mg/(kg@d)剂量的rhGH不会引起Mψ的过度激活.     

TGF-β1、TNF和维拉帕米对烧伤小鼠CD14表达的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子(TNF)和维拉帕米对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞(Mψ)CD14表达的影响.方法:BALB/c小鼠被随机地分成烧伤组和假烫组,将收集到的腹腔巨噬细胞分别加入不同浓度TGF-β1(0.02,0.20,2.00μg/ml)、TNF(0.1,1.0,10.0 μg/ml)和维拉帕米(10,100,1 000 pm01/ml)培养.用细胞原位杂交方法,观察TGF-β1、TNF和维拉帕米对小鼠MψCD14 mRNA表达的影响.结果:(1)烧伤后腹腔MψCD14 mRNA的表达明显增加.(2)0.02,0.20 μg/ml TGF-β1可使烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达增加,2 μg/ml则可使烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达减少.TNF、维拉帕米各浓度对烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达均无明显影响.结论:TGF-β1能通过改变MψCD14 mRNA的表达,调节其功能状态.TNF、维拉帕米对烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达无明显影响.     

CD14在胆道阻塞所致继发性肝损伤中的作用

目的研究胆总管阻塞小鼠肝脏CD14表达的变化及其影响。方法应用小鼠胆总管阻塞模型,观察胆总管阻塞7,14,28d后血浆内毒素水平(LPS)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肝组织肿瘤坏死因子(TNF-α)及肝脏CD14表达。结果胆总管阻塞7,14,28d后小鼠出现明显的肝损害,表现为ALT、AST、血浆内毒素(LPS)水平、肝组织TNF-α的增高,肝组织CD14表达水平随着阻塞时间的延长而逐渐增高。结论胆道阻塞后小鼠发生了肠源性内毒素血症(IETM)及肝损害,肝组织CD14表达水平显著升高并发挥了重要的作用。     

枯否细胞功能状态与CD14表达的关系

目的　探讨KCs的功能状态与CD14表达的关系。方法　采用卡介苗 (BCG)致免疫性肝损伤的动物模型 ,并应用SDS -PAGE电泳和Westernblot印迹分析枯否细胞表面CD14的表达。结果　BCG可诱导肝KCsCD14表达上调 ,且其表达强度与枯否细胞的活化程度及肝损伤程度呈正相关。结论　KCsCD14的表达与KCs活化状态密切相关 ,提示通过调整KCs的功能状态可能减轻LPS等致肝损伤作用     

IL-6和IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞CD14清道夫受体mRNA表达的影响

目的：探讨感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御细胞转化为致炎效应细胞的分子机制。方法：通过体外培养肺泡巨噬细胞，施加IL-6和IL-10刺激，应用RT-PCR方法观察肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体（SR）mRNA的表达变化。结果：在基因转录水平，IL-6对CD14表达呈时间-剂量依赖性上调，对SR的表达呈进行性下调；IL-10对SR表达呈时间-剂量依赖性上调，下调CD14表达。结论：促炎因子IL-6对肺泡巨噬细胞SR表达下调及CD14表达上调可能是感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御转化为致炎效应细胞的机制之一，抗炎因子IL-10可能对这一转化过程起到一定的抑制作用。