西安地区幽门螺杆菌vacA基因型与致病性研究

目的:探讨幽门螺杆菌菌株vacA基因型与上消化道疾病的关系。方法:从胃十二指肠疾病患者的胃粘膜活检组织中分离培养到幽门螺杆菌88株。按标准酚-氯仿抽提法提HP基因组DNA。用PCR扩增反应及鉴定,用卡方检验分析vacA在不同胃十二指肠疾病中幽门螺杆菌的差异。结果:88株幽门螺杆菌中vacA s1/m-的阳性率为17.0%,vacA s1/m2的阳性率为55.7%,vacA s1/m1a+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1a的阳性率为2.3%,vacA s1/m1a+m1b的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b的阳性率为17.0%,vacA s2/m2的阳性率为2.3%。结论:西安地区幽门螺杆菌菌株的vacA基因型以s1/m2为主,但vacA各基因亚型均与临床结局无相关性。     

西安地区幽门螺杆菌cagA、cagE、vacA基因型与上消化道疾病的关系

目的:探讨西安地区就医人群幽门螺杆菌(HP)菌株vacA、cagA、cagE基因型与上消化道疾病的关系。方法:选取胃粘膜活检组织中分离培养到幽门螺杆菌的消化性溃疡58例,慢性胃炎30例,采用标准酚-氯仿抽提法提取HP基因组DNA,检测幽门螺杆菌cagA、cagE、vacA在消化性溃疡及慢性胃炎患者胃组织中的表达。结果:88株幽门螺杆菌中cagA的阳性率为100%,cagE的阳性率为100%,vacA s1/m-的阳性率为17.0%,vacA s1/m1a的阳性率为2.3%,vacA s1/m1a+m1b的阳性率为1.1%,vacA s1/m1a+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m2的阳性率为55.7%,vacA s1/m1b+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b的阳性率为17.0%,vacA s2/m2的阳性率为2.3%。结论:西安地区就医人群培养分离的HP菌株中,cagA和cagE阳性率均为100%,与本地区疾病类型和严重程度不相关,不能作为西安地区HP毒力强弱的标志。西安地区就医人群幽门螺杆菌菌株的vacA基因型以s1/m2为主,但vacA各基因亚型均与临床结局无相关性。     

海口地区胃十二指肠疾病患者幽门螺杆菌vacA基因亚型分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)vacA基因亚型在海口地区胃十二指肠疾病患者中的分布.方法 从176例胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,PCR法测定vacA基因亚型.结果 176例患者中的基因型vacAs1 78.98%(139/176),vacAs2 15.34%(27/176),vacAm1 28.41%(50/176),vacAm2 71.59%(126/176);vacA亚型组合形式为:vacAs1/ml 28.41%(50/176),vacAs1/m2 56.25%(99/176),vacAs2/m2 15.34%(27/176),未发现va-cAs2/ml型菌株;消化性溃疡、胃癌、慢性萎缩性胃炎患者H.pylori的vacAs1、vacAm2、vacAs1/m2基因型阳性率高于慢性浅表性胃炎患者(均P<0.01),其余基因型在不同类型疾病中的分布无统计学差异(P>0.05).结论 海口地区胃十二指肠疾病患者H.pylori菌株的优势基因型为vacAs1、vacAm2、vacAs1/m2;在消化性溃疡等严重疾病患者中多见.     

幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系.方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H.pylori,PCR测定VacA基因型.结果:108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性为85株(79%),VacA s1b阳性22株(20%),VacA m1阳性29株(27%),VacA m2阳性77株(71%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为94%(15/16).结论:H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中,无s2型.     

幽门螺杆菌及其vacA基因亚型和cagA基因与胃上皮HLA-DR抗原表达的关系

【目的】探讨幽门螺杆菌及其空泡毒素基因 (vacA)亚型、细胞毒素相关基因 (cagA)与胃上皮HLA DR抗原表达间的关系。【方法】①自 39例幽门螺杆菌阳性患者中分离培养出 39株幽门螺杆菌菌株 ,采用PCR方法鉴定 39株菌株的ca gA及vacA亚型 ;②采用HLA DR小鼠抗人单克隆抗体 ,对上述已行cagA及vacA亚型鉴定的幽门螺杆菌阳性患者及 2 2例阴性患者的胃窦活检标本行免疫组化染色。【结果】①幽门螺杆菌阳性患者胃上皮HLA DR表达较阴性患者更显著 ;②幽门螺杆菌定植密度与胃上皮HLA DR抗原表达程度间存在正相关 ;③感染cagA 菌株患者较感染cagA-株者胃上皮HLA DR抗原表达更明显 ;④本研究中vacAs1a/m2亚型占 90 % ,故未对不同vacA亚型与胃上皮HLA DR表达间的关系进行统计分析。【结论】①幽门螺杆菌感染可诱导胃上皮HLA DR抗原异常表达 ;②cagA 菌株可能通过胃上皮HLA Ⅱ类分子介导而与宿主发生更为密切的相互作用 ,从而较cagA-菌株引起更为显著的胃上皮损伤。     

幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及其对常用抗生素的敏感性.方法 从胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,用PCR测定VacA基因型,并采用琼脂稀释法进行对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑3种抗生素的药物敏感性试验.结果 108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性85株(78.7%),VacA s1b阳性22株(20.4%),VacA m1阳性29株(26.9%),VacA m2阳性77株(71.3%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90.0%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为93.8%(15/16).对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑的耐药率分别为18.5%、5.6%、65.7%,对阿莫西林耐药的20株菌株中,19株为VacA s1a型.结论 H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中.本地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药率较低,对甲硝唑的耐药率较高,而对阿莫西林耐药的菌株多数为VacA s1a型.     

PCR方法测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因

目的建立幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因的PCR测定方法.方法应用多聚酶链反应方法对62例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定.结果62株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因,所有菌株的vacA基因型均为sla/m2型.cagA基因的总阳性率为56.45%;慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为55.56%、54.17%和63.64%(P＞0.05).结论本研究建立的PCR测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因方法敏感性高、特异性强.     

浙江省幽门螺杆菌cagA、vacA基因型的流行病学研究

目的 调查浙江地区幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)基因型的分布及其与临床疾病的关系.方法 采用特异引物聚合酶链反应(PCR)分析262株幽门螺杆菌的vacA基因多态性分布特点,并对其进行初步统计分析.结果 浙江8个地区分离培养的Hp菌株262株,VacA m1b基因型占27.10%(71/262);VacA m2基因型占64.89%(170/262);VacA m1b-m2基因型占4.20%(11/262);不同地区间VacA s区基因型和VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05).慢性胃炎分离株中VacA m1b基因型占26.47%(27/102);VacA m2基因型占66.67%(68/102);VacA m1bm2基因型占2.94%(3/102).消化性溃疡分离株中VacA m1b基因型占29.41%(40/136);VacA m2基因型占61.76%(84/136);VacA m1bm2基因型占3.68%(5/136).胃癌分离株中VacA m1b基因型占16.67%(4/24);VacA m2基因型占75.00%(18/24);VacA m1bm2基因型占4.17%(1/24).不同临床疾病间VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论 浙江8个地区Hp菌株的优势基因型为cagA 、vacAs1/m2,vacA的s区和m区的分布与分布个体的临床类型无关.     

海南汉族居民胃十二指肠疾病与幽门螺杆菌cagA,vacA和babA2基因型的关系

目的 调查海南汉族慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌患者中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) babA2、cagA、vacA基因型和亚型的分布,探讨H.pylori基因型差异与临床感染结局的关系。方法 自176例胃十二指肠疾病患者的胃镜活检胃黏膜标本中分离幽门螺杆菌菌株,提取幽门螺杆菌DNA,用聚合酶链反应检测H.pylori的cagA、vacA（vacAs1/ vacAs2/ vacAm1/ vacAm2）及babA2基因型。 结果 176例患者中H.pylori cagA的阳性率72.72%（128/176）;babA2 54.55%（96/176）;vacAs1 73.30%（129/176）;vacAm2 67.05%（118/176）;vacAs1/cagA 65.34%（115/176）;vacAs1/babA2 51.70%（91/176）;cagA/babA2 50.00% (88/176);vacAs1/cagA/babA2 51.14% (90/176)。慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者中vacAs1、cagA、cagA/ vacAs1基因型阳性率明显高于慢性浅表性胃炎患者(P<0.05)。其他基因型在各疾病间分布的差异无统计学显著性意义(P>0.05)。结论 海南汉族H. pylori感染的优势基因型为cagA, vacAsl, vacAm2, cagA/vacAs1。慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃癌患者中vacAs1、cagA 、cagA/vacAs1基因型更多见。未发现babA2基因型与H.pylori临床感染结局的相关性。 【关键词】 幽门螺杆菌 cagA基因 vacA基因 babA2基因 聚合酶链反应     

中国镇江地区幽门螺杆菌vacA基因型状况及其与胃十二指肠疾病关系的研究

目的：调查中国镇江地区幽门螺杆菌（H．pylori）vacA基因型状况及其与胃十二指肠疾病关系。方法：在微氧环境下取胃黏膜标本中分离培养出H．pylori共36株,以聚合酶链反应（PCR）方法检测其基因组DNA中vacA基因型。结果：36株H.pylori临床株中vacA信号序列类型中sla、s2所占比例分别为83．3％、13．9％,未发现slb型。vacA中间序列类型中m1、m2所占比例分别为16．7％、75％。分别有1株和3株vacA信号序列和中间序列未能分型。基因型组合sla／m2、sla／m1、s2／m2所占比例分别为61．1％、19．4％、8．3％。Hpylori菌株vacA各基因型在胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌四组疾病中的分布差异均无显著性（P〉0．05）。结论：sla、m2和sla／,m2分别是中国镇江地区Hpylori菌株vacAs、m区及其组合的优势基因型。但本研究未能证实H．pylori菌株vacA基因型与胃十二指肠疾病的相关性。     

Dominant cagA/vacA genotypes and coinfection frequency of H. pylori in peptic ulcer or chronic gastritis patients in Zhejiang Province and correlations among different genotypes, coinfection and severity of the diseases

Background Almost half of the world’s population suffer from the Helicobacter pylori (H. pylori) infection, but only some individuals develop gastric diseases with clinical symptoms. One reason for the phenomenon may be the different pathogenicity of infected H. pylori strains. The presence of cytotoxin-associated gene A (cagA) and expression of vacuolating cytotoxin activity encoded by vacuolating cytotoxin gene A (vacA) are considered the two major virulent markers of H. pylori. The aim of this study was to detect dominant cagA/vacA genotypes and coinfection frequency of H. pylori in patients with peptic ulceration (PU) or chronic gastritis (CG), and to determine correlations among different cagA/vacA genotypes, coinfection and severity of the diseases. Methods For each of 139 patients in Zhejiang Province who had been diagnosed as PU or CG based on clinical symptoms and gastroscopy, two gastric biopsy specimens (one from antrum and the other from corpus) for H. pylori isolation were taken by two different disinfected biopsy forceps. One hundred and fifty-six H. pylori strains were isolated from both the antrum and corpus biopsy specimens of 78 patients (36 PU and 42 CG). PCRs were performed to detect cagA genes, and signal (s) and middle (m) regions of vacA genes in the H. pylori isolates. The amplified fragments of dominant vacA gene s and m subtypes from representative H. pylori isolates were sequenced after TA cloning. Dominant cagA/vacA genotypes of the H. pylori isolates, coinfection frequency and correlations among the different genotypes, coinfection and severity of the diseases were determined.Results Of the H. pylori strains isolated from the antrum specimens, 96.2% were cagA gene positive, as were 97.4% of the H. pylori strains isolated from the corpus specimens. Only one s region subtype (s1a) and four m region subtypes m1, m2, m1b and m1b-m2 of vacA gene were found. The proportions of vacA gene subtypes s1a/m1, s1a/m2, s1a/m1b and s1a/m1b-m2 in the 83 strains isolated from the antrum specimens were 7.2%, 61.5%, 30.1% and 1.2%, respectively, while those in the other 84 strains isolated from the corpus specimens were 9.5%, 58.3%, 28.6% and 3.6%, respectively. s1a/m2 (58.3% vs 30.1%, χ2=13.47, P&lt;0.01) and then s1a/m1b (28.6% vs 9.5 %, χ2=9.88, P&lt;0.01) were the dominant vacA gene subtypes in the H. pylori isolates. The dominant H. pylori genotype was cagA+s1a/m2 (59.0% from antrum specimens and 57.1% from corpus specimens), and followed by cagA+s1a/m1b (28.9% from antrum specimens and 27.4% from corpus specimens). Sixteen of 78 patients (20.5%) were infected with two or three H. pylori strains with different genotypes. However, no statistically significant differences among cagA occurrence, the different vacA subtypes and PU or CG could be found (each P&gt;0.05). Similarities of the nucleotide sequences from vacA gene s region PCR products of six isolates and from vacA gene m region PCR products of four isolates were 93.2% to 98.3% and 93.8% to 97.6%, respectively, compared to the reported corresponding sequences.Conclusions The dominant genotypes of H. pylori in PU or CG patients in Zhejiang area may be cagA+ s1a/m2 and cagA+ s1a/m1b. Numerous coinfections with different H. pylori strains in PU or CG patients indicate diversity of the infected H. pylori origins. s and m regions of vacA gene from different H. pylori isolates show high nucleotide sequence similarities. cagA gene positive rate, different vacA gene subtypes and coinfection with different H. pylori strains are not closely associated with severity of the diseases.     

球形幽门螺杆菌vacA基因的克隆及序列测定

目的：克隆球形幽门螺杆菌(HpC)vacA基因全长片段，并进行序列分析。方法：采用亚抑菌浓度的抗生素作用，使幽门螺杆菌(Hp)标准株NCTC11637发生球形变异，收集球形Hp。从HpC基因组DNA中特异扩增出vacA基因片段，扩增的目的片段经纯化回收后克隆到pMD-18T中，转化人大肠杆菌JM109。阳性重组质粒用PCR及双酶切鉴定，并进行序列测定。结果：从HpC基因组DNA中扩增出3888bp的vacA基因，构建重组质粒pMD-18T-vacA，酶切产物的大小与预期相符。测序结果显示，HpC与已公布的HpvacA基因序列的同源性达99.8％。结论：成功地对HpC vacA基因进行体外扩增及构建原核重组质粒pMD-18T-vacA，并经酶切及序列分析所验证，证明HpC含有完整的vacA基因，其可能与Hp的致病性有关。     

潜水人群铜绿假单胞菌基因多位点序列遗传分型

目的 研究海军潜水人群铜绿假单胞菌分离株的遗传基因型,明确海军潜水人群铜绿假单胞菌携带株的流行特征.方法 用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术、以铜绿假单胞菌7个管家基因acsA、aroE、guaA、mutL、nuoD、ppsA和trpE内部特定核酸片段作检测靶,对随机抽样海军潜水员携带的64株铜绿假单胞菌进行目的基因扩增和测序,应用Pseudomonas aeruginosa MLST数据库对测序结果进行分析,以获得检测靶基因的多位点序列信息;应用Bionumerics 4.0的LIAN,SplitsTree和eBURST分析程序对获得的MLST进行进一步的生物信息学分析,以获得流行株的遗传特征.结果 64株铜绿假单胞菌中53株可分为19个ST型,11株未能分型;其中ST274和ST260是优势克隆株,分别占18.75％(12/64)、15.62％ (10/64).结论 海军潜水人群携带的铜绿假单胞菌具有遗传多样性和优势基因型,MLST分型对于研究海军潜水人群携带的铜绿假单胞菌遗传差异与流行特征具有重要意义.     

重复序列PCR与多位点分型技术在白假丝酵母菌基因分型中的比较

目的应用多位点序列分型技术（MLST）和重复序列聚合酶链反应（REP—PCR）对临床分离出的白假丝酵母菌进行分型,并对两种方法作出应用评价。方弦收集上海地区医院中真菌性阴道炎分离出的40株白假丝酵母菌,选择合适引物进行扩增,通过电泳比较分析获得REP—PCR分型。选择7对管家基因进行PCR反应并测序,将测序结果与标准序列进行比对,获得由7对管家基因组成的等位基因谱,最终得到相应的序列分型。结果REP-PCR中Ca22-Ca22引物对得到电泳条带最优,40株白假丝酵母菌共分成7种REP—PCR型;MLST分型得出29种,且均为新型。结论MLST分辨率较REP—PCR高,但由于REP—PCR分型方法更为快捷、经济,更适用于实验室大量菌株分型和临床分型。MLST则更客观,更适合用于进化学的研究及全球性流行病学的调查研究。     

慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌babA2和cagA及vacA基因型分析

目的 :研究慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌 (Hp) bab A2、cag A、vac A基因型的分布 ,探讨 Hpbab A2、cag A、vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。方法 :用聚合酶链反应测定 5 8株从浙江省慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2基因、cag A基因和 vac A基因亚型。结果 :5 8株 Hp中 bab A2、cag A、vac A s1a、vac A m1、vac A m2基因的阳性率分别为 87.9%、10 0 %、93.1%、1.7%、65 .5 %。慢性胃炎和消化性溃疡患者感染的Hp bab A2、vac A s1a、vac A m2基因阳性率差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :从浙江地区慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2、cag A、vac A基因型均以 bab A2阳性、cag A阳性和 vac A s1a/ m2型为主 ,未发现 Hp bab A2、cag A和 vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLST 联合SCCmec 基因分型与耐药性分析

目的 了解滨州医学院附属医院MRSA 菌株多位点序列分型（MLST）联合SCCmec 基因型分布 和各种基因型的耐药特征。方法 采用聚合酶链反应（PCR）对MRSA 菌株进行MLST 联合SCCmec 基因分型； 采用WalkWAY96PLUS PC33 药敏板检测MRSA 抗菌药物敏感性。结果 SCCmec 基因分型结果以Ⅲ型为 主（63/67 株，占94.03%），MLST 分型共检测出6 种基因型：ST 88、ST 121、ST 221、ST 82、ST 239 及ST 399， 其中以ST 239（61/67，91.04%）为主，耐药性分析显示SCCmec Ⅲ型MRSA 菌株表现为多重耐药。结论 ST239-MRSA-SCCmec Ⅲ型菌株为鲁北地区MRSA 主要流行菌株，该型菌株对多种抗生素呈多重耐药； MLST 联合SCCmec 基因分型方法是MRSA 遗传背景研究简便快速的方法。     

ICU病房血流感染白色念珠菌的多位点序列分型研究

目的调查四川大学华西医院ICU病房白色念珠菌血流感染现状,探讨其分子流行病学特征。方法收集2009～2011年四川大学华西医院全院送检的血培养分离所得白色念珠菌。对ICU病房血流感染白色念珠菌采用多位点序列分型(multilocus sequencing typing,MLST)分析菌株间的亲缘关系。结果 2009～2011年华西医院送检的血培养标本共分离念珠菌135株,以白色念珠菌为主(51株,37.8%)。进行MLST分型的17株白色念珠菌来自ICU病房的15名患者,标本来源包括外周血15份,中央静脉导管2份(有两名患者分别取外周血和中央静脉导管各1份且均培养出白色念珠菌)。17株菌经MLST分型得到15个序列型(sequence type,ST),其中3株菌具有相同的ST型,另外14株菌分别具有14个不同ST型。经聚类分析,5株菌(29.4%)归为Group 46克隆组,2株菌(11.8%)归为Group 47克隆组,其余10株菌为单体型。分离自同一患者外周血和中央静脉导管的2株菌(Calb-36和Calb-40)经MLST分型证实是同一克隆株。结论白色念珠菌为华西医院念珠菌血症的首要致病菌。ICU病房血流感染白色念珠菌的主要流行株属于Group46和Group47克隆组。我院ICU病房目前尚不存在白色念珠菌血流感染的暴发流行,但有导管相关性白色念珠菌血症的感染发生。     

幽门螺杆菌vacA 基因表型与体外空泡毒性的关系

目的：研究不同vacA基因表型的幽门螺杆菌（HP）对HeLA细胞,RK－13细胞,SGC－7901细胞的空泡毒性作用,方法：分离培养30株临床胃粘膜标本中的HP菌株,抽提其总RNA和浓缩含空泡毒素（VacA)的培养上清,应用RT－PCR方法分析vacA基因表型,应用体外细胞空泡毒性试验观察其空泡毒性作用,结果：全部菌株的信号序列均为sla;vacA基因中区表型为m1型3株（10％）,m2型27株（90％）,m1型菌株对3种细胞均有空泡毒作用,m2型对HeLa细胞无空泡毒作用,但其中20株（（74％）对RK－13细胞,SGC7901细胞株有泡毒作用,结论：HP菌株vacA基因m区是与靶细胞结合的亚单位,不同m型菌株对同一种细胞产生不同的空泡毒性作用,表明靶细胞膜上可能存在不同的受体。     

幽门螺杆菌空泡毒素基因的单链构象多态性研究

目的 应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性,借此区分不来源的Ｈｐ。方法 用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃,十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增,其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交,对３例具不同ＳＳＣＰ带型的十二指肠溃疡（ＤＵ）患者的Ｈｐ进行基因序列分析。结果 ｖａｃＡ的两种产物ｖａｃＡ１和ｖａｃＡ２各占７６．５％（１１４／１４９）和２３．５