氟对小鼠成骨细胞增殖与分化及骨保护蛋白和核因子κβ受体活化因子配体mRNA 表达的影响

目的 观察氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、分化、骨保护蛋白(OPG)mRNA及核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响.方法 取出生1～2 d昆明小鼠颅盖骨,分离成骨细胞后进行传代培养.按培养液中加入不同浓度氟化钠(NaF)将成骨细胞分为0(对照)、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3 mol/L组,分别在培养72 h或120 h后检测氟对成骨细胞增殖、分化(碱性磷酸酶,ALP)的影响;提取成骨细胞总mRNA,采用RT-PCR方法分析成骨细胞OPG mRNA、RANKL mRNA表达,并进行半定量分析.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 培养72 h后,成骨细胞增殖组间比较差异有统计学意义(F=13.806,P<0.05);与对照组(0.434±0.010)比较,10-7～10-4mol/L组成骨细胞增殖明显增加(0.448±0.010、0.453±0.013、0.454±0.016、0.449±0.018,P均<0.05),10-3 mol/L组成骨细胞增殖降低(0.401±0.009,P<0.05).成骨细胞ALP活性组问比较差异有统计学意义(F=9.021,P<0.05);其中10-7～10-5 mol/L组[(2.447±0.756)×106、(2.603±0.183)×106、(2.687±0.886)×106 U/L]ALP活性明显高于对照组[(1.677±0.682)×106U/L,P<0.05或<0.01];10-4mol/L组[(1.479±0.366)×106 U/L]ALP活性明显低于对照组(P<0.05).OPG mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=11.299,P<0.05);与对照组(11000±0.000)比较,10-7～10-4 mol/L组表达增强(1.058±0.027、1.053 ±0.026、1.088±0.055、1.069±0.008,P<0.05或<0.01),10-3mol/L组表达降低(0.941±0.029,P<0.05).成骨细胞RANKL mRNA表达组间比较差异无统计学意义(F=1.311,P>0.05).RANKL mRNA/OPG mRNA比值,在104～10-5mol/L组逐渐降低,10-4、10-3mol/L组升高,但组间比较差异无统计学意义(F=1.376,P>0.05).结论 氟对小鼠成骨细胞增殖、分化呈双向调节作用,表现为低剂量刺激而高剂量抑制.低剂量染氟可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,抑制骨吸收;而高剂量可能通过降低OPG的表达来促进破骨细胞的分化、成熟,促进骨吸收.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sodium fluoride(NaF) on proliferation, differentiation and the mRNA expression of osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor κβ ligand (RAN KL) of mouse osteoblasts. Methods Osteoblasts were isolated from calvarias of Kunming mice born in 1 - 2 d and cultured. Various concentrations of NaF(0, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5, 10-4, 10-3mol/L) were added to the culture medium, the proliferation and activity of alkaline phosphatase(ALP) was determined after 72 h or 120 h. The expression of OPG mRNA and RANKL mRNA was analyzed by semi-quantification RT-PCR. Difference among groups was analyzed by One-Way AN0VA. Difference between two groups was analyzed by LSD-t test. Results There was significant difference in cell proliferation among groups after 72 h(F = 13.806, P < 0.05). Compared with control group(0.434 ± 0.010) , the proliferation was significantly induced in 10-7 - 10-4 mol/L groups treated osteoblasts (0.448 ± 0.010, 0.453 ± 0.013, 0.454 ± 0.016, 0.449 ± 0.018, all P< 0.05), and was significantly suppressed in 10-3 mol/L group(0.401 ± 0.009, P < 0.05). There was statistic difference in the activity of ALP among groups(F = 9.021, P < 0.05). Compared with control group (1.677 ± 0.682), the activity of ALP significantly increased in 10-7 - 10-5 mol/L groups[ (2.447 ± 0.756) × 106, (2603 ± 0.183) × 106, (2.687 ± 0.886) × 106 U/L, P < 0.05 or P < 0.01 ] and significantly decreased in 10-4 mol/L group[ (1.479 ± 0.366) × 106 U/L, P < 0.05 ]. There was significant difference in the expression of OPG mRNA among groups(F = 11.299, P< 0.05). Compared with control group (1.000 ± 0.000), the expression of OPG mRNA was significantly increased in 10-7 - 10-4 mol/L groups( 1.058 ± 0.027, 1.053 ± 0.026, 1.088 ± 0.055, 1.069 ± 0.008, P < 0.05 or P < 0.01) , while significantly decreased in 10-3 mol/L group (0.941 ± 0.029, P< 0.05). There was no difference in RANKL mRNA expression among groups (F= 1.311, P> 0.05). The ratio of RANKL/OPG decreased with increasing doses of fluoride and increased in 10-4, 10-3 mol/L groups, but there was no difference between groups(F = 1.376, P> 0.05). Conclusions A biphasic pattern of proliferation and differentiation has been induced in mouse osteoblasts, which manifests stimulation effect in low doses and suppression in higher doses. Low doses of sodium fluoride suppress differentiation and maturation of osteoblasts by increasing expression of OPG mRNA, while high doses of sodium fluoride enhance differentiation and maturation of osteoblasts by decreasing expression of OPG mRNA.     

蛇床子素骨靶向药物对体外培养大鼠成骨细胞护骨素、核因子-κB受体活化因子配基表达的影响

目的观察蛇床子素骨靶向药物(NSC-OST)对体外培养的大鼠成骨细胞(OB)护骨素(OPG)及核因子κB受体活化因子配基(RANKL)表达的影响。方法不同浓度的NSC-OST作用于成骨细胞7 d,采用ELISA法检测成骨细胞OPG、RANKL的表达。结果终浓度为10-6mmol/L和10-5mmol/L组促进成骨细胞OPG的表达作用高于空白对照组(P<0.01);10-7、10-6mmol/L和10-5mmol/L组具有抑制大鼠成骨细胞表达RANKL的作用(P<0.01);终浓度为10-6、10-5mmol/L的NSC-OST可显著上调OPG/RANKL的比值(P<0.01)。结论适当浓度的NSC-OST可促进成骨细胞OPG的表达,抑制RANKL分泌,上调OPG/RANKL的比值。     

神经生长因子对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子表达的调控研究

目的探讨在支气管哮喘中神经生长因子(NGF)对T1亚群辅助淋巴细胞(Th1)与T2亚群辅助淋巴细胞(Th2)类细胞因子表达的调控作用机制。方法于2004年3月至2004年12月对中南大学湘雅二医院应用鸡卵清蛋白(OVA)建立鼠哮喘模型,并将SD大鼠随机分为4组:哮喘组、正常对照组、外源性NGF干预组(NGF组)、抗NGF抗体干预组(抗NGF抗体组),每组8只。模型建立后取肺组织分别作以下研究:通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测哮喘组和对照组NGFmRNA;同时测定4组Th1类细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、Th2类细胞因子白细胞介素4(IL-4)的mRNA表达改变。结果(1)哮喘组与对照组相比较:肺组织NGFmRNA表达明显增强[(90.4±7.6)%对(51.8±12.3)%,P<0.01];IL-4mRNA表达明显增强[(48.0±8.1)%对(19.4±8.4)%,P<0.05],IFN-γmRNA表达明显减低[(32.8±8.1)%对(43.4±8.9)%,P<0.01];哮喘组中肺组织的NGFmRNA相对表达量与IFN-γ/IL-4mRNA表达比值呈显著负相关(r=-0.963,P<0.01)。(2)NGF组与哮喘组相比较,IL-4mRNA表达显著增高[(62.0±12.2)%对(48.0±8.1)%,P<0.01];IFN-γmRNA表达显著降低[(19.9±8.1)%对(32.8±8.1)%,P<0.01]。(3)抗NGF抗体干预组与哮喘组相比较,肺组织中IL-4mRNA表达显著减低[(20.1±7.1)%对(48.0±8.1)%,P<0.01],IFN-γmRNA表达显著增高[(45.4±9.4)%对(32.8±8.1)%,P<0.05]。结论NGF下调Th1类细胞因子表达,上调Th2类细胞因子表达,由此参与促进放大哮喘Th1/Th2类细胞因子免疫失衡效应。     

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系原癌基因、核心结合因子1mRNA表达的影响

目的观察不同浓度巴戟天含药血清对体外培养成骨-破骨细胞共育体系中原癌基因(C-FOS)、核心结合因子(Cbfa)1 mRNA表达的影响。方法提取24 h内新生SD乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用5周龄SD大鼠双侧股骨、胫骨的骨髓基质细胞,加入集落细胞刺激因子(M-CSF)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞。采用碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色、电镜扫描等鉴定破骨细胞,体外建立成骨-破骨细胞共育体系,设置低、中、高三种浓度巴戟天含药血清组和不含药血清组,干预3 d后提取各组总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组C-FOS、Cbfa1 mRNA表达量。结果不同浓度巴戟天含药大鼠血清对成骨-破骨细胞共育体系C-FOS有抑制作用,对Cbfa1 mRNA的表达有促进作用。高浓度含药血清组两者的表达差异显著(P<0.05,P<0.000 1)。结论巴戟天含药血清可抑制成骨-破骨细胞共育体系C-FOS的表达,促进Cbfa1 mRNA的表达,从而达到降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性,促进骨形成。     

雌二醇对成骨细胞OPG和RANKL的影响

目的探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)作用下体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及雌激素治疗骨质疏松的机制。方法采用不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2刺激培养的大鼠成骨细胞(OB),RT-PCR方法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果原代OB呈多角形、梭形,传代OB胞核较大,细胞质内见黑色颗粒,细胞形态为多角形或梭形,见突起,三代细胞碱性磷酸酶染色阳性,胞质见大量灰黑色颗粒,细胞鉴定符合成骨细胞特征。不同浓度(10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2对OB OPG mRNA表达具有显著的增强作用(P<0.05),其中10-8mol/L 17β-E2对OB OPG mRNA表达最高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而10-10mol/L 17β-E2对成骨细胞OPG mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无显著差异(P>0.05),10-10、10-9、10-7mol/L 17β-E2对成OB RANKL mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无明显差异(P>0.05),其中10-8mol/L17β-E2对OB RANKL mRNA的表达具有明显的抑制作用,其与对照组比较差异明显(P<0.05)。结论雌激素治疗骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞OPG表达、抑制RANKL表达相关。     

低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6.1和Nkx-6.2 mRNA表达的影响

目的 研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6.1、Nkx-6.2 mRNA表达的影响,探讨低碘导致脑发育迟滞的可能分子作用机制.方法 20只雌性Wistar大鼠按体质量随机分为2组:低碘组和对照组,均饲以低碘饲料(含碘量为13.66 μg/kg),分别饮用去离子水和含碘200 μg/L的碘酸钾溶液,3个月时采用化学发光免疫分析法检测大鼠血清甲状腺激素水平,然后将雌鼠与正常饲养的Wistar雄鼠进行交配,分别取孕16 d、新生期及生后20日龄仔鼠脑组织,采用实时荧光定量PCR检测Nkx-6.1、Nkx-6.2 mRNA的表达.结果 ①低碘组大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平[(0.89±0.20)、(0.32±0.16)nmol/L,(3.33±0.61)、(3.28±0.80)pmol/L]均明显低于对照组[(1.04±0.06)、(39.42±14.68)nmoL/L,(4.83±0.33)、(26.99±4.48)pmol,t=2.71、6.52、5.70、12.89,P<0.05或<0.01].②对照组孕16 d、新生期及20日龄仔鼠脑组织Nkx-6.1 mRNA表达水平分别为(1.90±0.23)×10-3、(1.86±0.40)×10-4、(1.11±0.27)×10-4,各日龄间比较差异有统计学意义(F=827.58,P<0.01),随着日龄增加Nkx-6.1 mRNA表达水平明显下降,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.01);低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6.1 mRNA表达水平分别为(1.16±0.16)×10-3、(3.44±0.49)×10-4、(3.58±0.64)×10-4,差异有统计学意义(F=297.25,P<0.01),但变化趋势与对照组不同,孕16 d表达水平最高,与新生期及20日龄比较,差异有统计学意义(P<0.01);低碘组与对照组比较,孕16 d明显降低(t=10.14,P<0.01).而新生期及20日龄则明显增高(t值分别为9.69、13.81,P均<0.01).③对照组和低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6.2 mRNA表达水平分别为(1.03±0.19)×10-2、(1.33±0.10)×10-3、(8.79±0.87)×10-2和(0.31±0.03)×10-2、(1.53±0.13)×10-3、(7.51±0.86)×10-2,组间比较差异有统计学意义(F值分别为1293.02、1065.83,P均<0.01),随着日龄增加,两组表达趋势一致,20日龄最高,孕16 d次之,新生期最低;低碘组20日龄仔鼠与新生期及孕16 d比较,差异有统计学意义(P均<0.01),对照组新生期仔鼠与孕16 d比较,差异有统计学意义(P<0.01);低碘组与对照组比较,孕16 d及20日龄明显降低(t值分别为14.35、4.05,P均<0.01),而新生期仔鼠则明显增高(t=4.78,P<0.01).结论 同源盒基因Nkx-6.1、Nkx-6.2mRNA表达水平改变可能与低碘导致脑发育迟滞有关.     

维生素D抗炎机制对糖尿病大鼠骨代谢的影响

目的 探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠炎症因子及骨代谢指标的影响.方法 6～8周龄雄性SD大鼠30只,链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型.将糖尿病大鼠分为2组：糖尿病组、维生素D组.选取健康同龄大鼠10只作为正常对照组.维生素D组给予1,25（OH）2D3（0.1μg·kg＾-1·d＾-1）溶于0.05 ml花生油灌胃,正常对照组及糖尿病组给予花生油0.05 ml/d灌胃.12周后处死各组大鼠,测定血清白介素17（IL-17）、钙、磷、骨钙素、24 h尿钙、24 h尿白蛋白（UAlb）水平;免疫组化法检测肾皮质内IL-17的表达;荧光定量RT-PCR检测骨组织骨钙素mRNA表达水平.结果 （1）糖尿病组24 h尿钙、24 hUAlb显著高于正常对照组[分别为（0.31±0.18）比（0.01±0.01） mmol/24 h、（1.15±0.13）比（0.43±0.09） mg/24 h,t值分别为5.125、13.948,均P＜0.05];维生素D组24 hUAlb显著低于糖尿病组[（0.82±0.13）比（1.15±0.13） mg/24 h,t=-5.798,P＜0.05].（2）与正常对照组、维生素D组相比,糖尿病组血清IL-17、肾皮质IL-17表达显著升高[分别为（494±28）比（137±18）、（250±20）pg/ml,（165.0±7.0）比（81.9±5.6）、（119.1±6.6）,t值分别为34.229、-23.263、29.238、-15.475,均P＜0.05].（3）与正常对照组、维生素D组相比,糖尿病组血清骨钙素、骨组织骨钙素mRNA表达显著降低[分别为（485±123）比（752±239）、（621±161）pg/ml,（19.8±2.9）比（24.1±2.9）、（22.9±3.1）,t值分别为-3.147、2.158、-3.220、2.265,均P＜0.05].（4）血清IL-17与血清骨钙素呈负相关（r=-0.544,P＜0.05）.结论 维生素D可抑制糖尿病大鼠IL-17等炎症因子的表达,改善骨代谢.     

α-硫辛酸减轻糖尿病大鼠肾脏损伤的机制

研究α-硫辛酸对链脲佐菌素致糖尿病大鼠肾脏损伤的作用和机制.α-硫辛酸减轻糖尿病大鼠肾皮质氧化应激水平,降低糖基化终末产物[(0.087±0.003对0.103±0.014)pg/mg蛋白,P<0.05]及其受体蛋白(1.81±0.04对2.67±0.01,P<0.01)和转化生长因子β mRNA(1.51±0.20对2.04+0.08,P<0.05)表达,降低肾小球系膜区面积和Ⅳ型胶原水平,改善肾功能.     

糖耐量受损和2型糖尿病患者血清C反应蛋白与胰岛素敏感指数、脂联素的关系

目的分析糖耐量受损(IGT)、2型糖尿病患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)与血糖、血胰岛素、血脂、胰岛素敏感性、胰岛素分泌功能、血清脂联素等的相关性。方法用减少样本数的Bergman微小模型技术结合静脉葡萄糖耐量试验检测正常人、IGT、2型糖尿病患者的胰岛素敏感指数(SI)及急性胰岛素反应(AIR),同时测定受试者的体重指数(BMI)和腰臀比(WHR),检测空腹状态下血脂、血清hs-CRP、脂联素水平。结果正常组血清hs-CRP[0.40(0.21~1.67mg/L)]显著低于IGT[3.56(1.73~9.47mg/L)]及2型糖尿病组[2.46(1.04~6.66mg/L)](均P<0.01),正常组的SI[(6.6±2.4)×10-4(min·mU/L)-1]和脂联素[7.77(6.35~10.70mg/L)]显著高于IGT[分别为(1.5±1.1)×10-4(min·mU/L)-1,4.29(3.59~6.22mg/L)]及2型糖尿病组[分别为(1.5±1.0)×10-4(min·mU/L)-1,3.46(2.37~4.72mg/L)](均P<0.01)。后两组间这些值差异均无统计学意义。2型糖尿病组AIR[27.4(-2.5~76.5mU/L)]显著低于正常组[(270.5±128.3)mU/L]及IGT组[(213.3±154.4)mU/L](均P<0.01),正常组与IGT组之间差异无统计学意义。血清hs-CRP与高密度脂蛋白(HDL)、SI、脂联素呈负相关(P<0.05或P<0.01),与收缩压(SBP)、空腹血糖(FPG)、BMI、WHR、餐后2h血糖(PPG)、空腹胰岛素(FINS)、餐后2h胰岛素(PSI)呈正相关(P<0.05或P<0.01),在校正BMI、WHR后,hs-CRP与SI、脂联素仍存在负相关(P<0.05或P<0.01),与FPG、PPG正相关(均P<0.01)。多元逐步回归分析显示以hs-CRP为应变量,脂联素进入方程(P<0.01)。结论IGT及2型糖尿病患者血清hs-CRP水平显著升高,hs-CRP与SBP,BMI、WHR、FPG、PPG、FINS、PSI正相关,与HDL、SI,尤其是与脂联素负相关,提示hs-CRP升高与代谢综合征、IGT、2型糖尿病及动脉粥样硬化的发生有关。     

弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝mRNA表达和细胞免疫水平的影响

目的 探讨弓形虫感染对大鼠大脑组织神经丝(NF)mRNA表达和细胞免疫水平的影响.方法 将4周龄雄性SD大鼠分成两组(每组10只):弓形虫感染组腹腔感染2×10~(10)个/L弓形虫速殖子悬液2 ml;对照组腹腔注射灭菌生理盐水2 ml.9周后,应用RT-PCR法检测大鼠大脑组织中高相对分子质量NF(NF-H)、中相对分子质量NF(NF-M)和低相对分子质量NF(NF-L)mRNA表达水平:流式细胞术检测大鼠外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞;酶联免疫吸附试验测定其血清γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平.结果 大鼠弓形虫感染9周后,大脑组织NF-L、NF-H mRNA表达量(0.51±0.06、0.68±0.05)较对照组(0.79±0.03、0.76±0.05)明显下降(t值分别为3.41、2.17,P<0.01或<0.05);NF-M mRNA表达量(0.69±0.02)与对照组(0.72±0.03)比较.差异无统计学意义(t=2.09,P>0.05).弓形虫感染组大鼠的CD4~+T细胞[(32.19±5.01)%]和CD8~+T细胞[(20.06±2.28)%]与对照组[(35.82±3.71)%、(22.06±3.90)%]比较,差异均无统计学意义(t值分别为1.69、1.88,P均>0.05).弓形虫感染组大鼠血清IFN-γ[(6.03±0.16)ng/L]、TNF-α[(18.05±1.93)ng/L]、IL-4[(15.76±1.59)ng/L]水平均高于对照组((4.77±0.13)、(9.54±1.57)、(5.67±0.42)ng/L,t值分别为2.81、2.74、2.63,P均<0.05].结论 弓形虫感染可导致大鼠大脑组织中NF亚单位mRNA表达水平下降,血清IFN-γ、TNF-α、IL-4水平升高.     

436例糖尿病足截肢相关因素分析

目的 研究与糖尿病足溃疡截肢相关的重要因素.方法 回顾性分析436例糖尿病足溃疡患者的人口学资料、糖尿病及相关疾病治疗、足溃疡严重程度、溃疡大小、是否合并感染和血生化结果.根据是否截肢将436例患者分为未截肢组和截肢组.结果 436例患者中有97例患者被截肢,截肢率为22.2%.与未截肢组患者相比,截肢组患者的年龄、性别、足病病程和血糖水平差异无统计学意义.但截肢组的外周血管疾病发病率更高(94.8%vs 86.1%,P<0.05),血白细胞计数[(10.80±6.03 vs 8.09±3.59)×10~9/L,P<0.01]、超敏C反应蛋白[(10.2+6.2 vs 6.9+6.1)mmol/L,P<0.01]明显增高,血浆白蛋白[(35.0±5.1 vs 36.8±5.0)g/L,P<0.01]、血红蛋白[(104.3±18.9 vs 114.1±21.0)g/L,P<0.01]、血清总胆固醇[(4.2±0.9 vs 4.7±1.3)mmol/L,P<0.01]、甘油=三酯[(1.2±0.5 vs 1.6±1.3)mmol/L,P<0.01]、高密度脂蛋白胆固醇[(1.1±0.5 vs 1.2±0.3)mmo/L,P<0.01]、低密度脂蛋白胆固醇[(2.7±0.8 vs 3.0±1.0)mmol/L,P<0.05]明显降低.多因素逐步logistic回归分析显示,外周血管病变、血白细胞计数、血清总胆同醇、超敏C反应蛋白为截肢的独立危险因素.结论 足溃疡严重程度、外周血管病变、炎症因素和营养不良可能是截肢相关的重要因素.     

大黄酸改善糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素敏感性并增强肝脏PPARγ和GLUT-2的表达

目的 探讨大黄酸改善高脂喂养联合链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠血糖及肝脏胰岛素敏感性的作用及其可能机制.方法 (1)55只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC,n=15)和糖尿病组(DM,n=40).NC组以基础饲料喂养,DM组以高脂饲料喂养5周后给予一次性腹腔注射STZ(30ms/kg),其中30只成模大鼠再分为糖尿病模型组(DM-C)和糖尿病大黄酸治疗组(DM-T),后者即开始大黄酸灌胃(100 mg·kg-1·d-1),灌胃11周后处死动物,收集标本,记录体重、肝重,测定空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆同醇(TC)、HbA1C、糖化血清蛋白(GSP)等生化指标,放射免疫法测定血清胰岛素浓度(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI)及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).(2)免疫组化法检测肝脏组织中PPARγ的表达,Western印迹法检测肝脏组织中葡萄糖转运蛋白2(GLUT-2)表达.结果 实验结束时,测得DM-C组FBG[(22.57±3.23 vs 7.11±1.44)mmoL/L,P<0.01]、TG[(0.89±0.29 vs 0.58±0.17)mmoL/L,P<0.01]、HbA1C[(12.49±1.96 138 8.36±0.84)%,P<0.01]、GSP[(57.29±4.14 vs13.43±2.70)μmol/L,P<0.01]和肿瘤坏死因子α[TNF-α,(1.365±0.133 vs 1.233±0.159)μg/L,P<0.05]较NC组均显著升高.DM-C组肝重指数亦明显高于NC组(0.032±0.004 vs 0.024±0.002,P<0.01),FINS与NC组无明显差别,ISI较NC组下降明显[In(ISI),-5.46±0.61 vs -4.81±0.75,P<0.05],HOMA-IR较NC组升高[In(HOMA-IR),2.34±0.64 vs 1.70±0.78,P<0.05].DM-C组肝脏PPARγ [11 131.7(5 723.1-18 979.4) vs 48 782.1(21 576.7-108 829.5),P<0.01]和GLUT-2(0.98±0.35vs 1.29±0.27,P<0.05)表达较NC组有明显下降趋势.而DM-T组大鼠的FBG[(15.94±3.16)mmol/L]、HbA1C[(10.51±1.74)%]和GSP[(47.31±6.09)μmol/L]、In(HOMA-IR)(1.86±0.30)等较DM-C组均显著降低(P<0.05或P<0.01),In(ISI)(-4.97±0.29)较DM-C组升高明显(P<0.05).肝脏PPARγ/[35 156.3(24 554.3-86 660.9)],GLUT-2(1.55±0.55)蛋白表达水平较DM-C组明显增强(P<0.05或P<0.01).结论 大黄酸可降低糖尿病大鼠血糖、HbA1C及GSP、改善糖尿病大鼠胰岛素敏感性,其机制可能与增强PPARγ、GLUT-2蛋白表达有关.     

糖尿病大鼠胰岛β细胞Fox01表达对细胞凋亡的影响

以高糖高脂饲料及链脲佐菌素诱导SD大鼠建立2型糖尿病模型,结果发现叉头转录因子(Fox01)[细胞核内(15.00+1.15 vs 6.45±0.62)%,P<0.05]、半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)[(23.73±1.48vs 6.30±2.20)%,P<0.01]在糖尿病大鼠胰岛β细胞的表达和β细胞凋亡率[(22.29±1.84 vs 6.25±2.42)%,P<0.01]均高于正常大鼠;并且Fox01(核内)与caspase-3高表达的胰岛细胞正是发生凋亡的胰岛细胞.因此,Fox01可能参与2型糖尿病胰岛β细胞凋亡的调控.     

氟和铝对大鼠血常规和血生化指标的影响

目的 探讨氟和铝对大鼠血常规和血生化指标的影响.方法 健康Wistar大鼠56只,体质量130～200 g,按体质量随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组、低氟+铝组、中氟+铝组、高氟+铝组7组,每组8只,灌胃给予不同剂量的氟化钠和三氯化铝,剂量分别为(0+0)、(100+0)、(200+0)、(300+0)、(100+10)、(200+10)、(300+10)mg/L,时间为90 d.实验期满后,检测血常规,项目包括红细胞数(RBC)、红细胞平均容积(MCV)、白细胞数(WBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC),血小板数(PIJT)、淋巴细胞数(LYM)、红细胞体积分布宽度(RDW);检测肝、肾功能血清生化指标,包括天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素(Urea)、彤L酐(Cr);称取肝、肾质量,计算脏器系数.结果 大鼠RBC、HCT、MCV各组间比较,差异有统计学意义(F值分别为3.202、3.316、2.915,P均<0.05).RBC、HCT,低氟组[(7.59±2.40)×10~(12)个/L、0.51±0.11]、中氟组[(8.60±1.16)×10~(12)个/L、0.55±0.05]、高氟组[(9.23±0.60)×10~(12)个/L、0.54±0.03]、低氟+铝组[(9.25±0.79)×10~(12)个/L、0.53±0.04]、中氟+铝组[(7.98±2.14)×10~(12)个/L、0.49±0.08]、高氟+铝组[(7.61±3.17)×10~(12)个/L、0.49±0.16]均明显高于对照组[(4.46±3.10)×10~(12)个/L、0.31±0.16,P<0.05或<0.01];MCV,中氟组[(64.06±6.51)fl]、高氟组[(58.67±1.13)fl]、低氟+铝组[(57.78±1.57)fl]、中氟+铝组[(63.04±10.64)fl]均明显高于对照组[(78.54±15.57)fl,P<0.05或<0.01].大鼠血清AST、Urea各组间比较,差异有统计学意义(F值分别为2.847、5.549,P<0.05或<0.01);血清AST水平,低氟组[(399.00±54.99)U/L]、中氟组[(465.60±76.99)U/L]、高氟组[(465.80±75.41)U/L]、低氟+铝组[(346.00±69.26)U/L]、中氟+铝组[(437.40±68.31)U/L]、高氟+铝组[(403.00±30.61)U/L]明显高于对照组[(336.67±94.34)U/L,P<0.05],高氟组明显高于高氟+铝组(P<0.05);血清Urea水平,中氟组[(7.70±0.52)mmol/L]、高氟组[(8.44±1.30)mmol/L]、低氟+铝组[(7.83±0.62)mmol/L]、中氟+铝组[(7.73±0.47)mmol/L]、高氟+铝组[(7.70±0.21)mmol/L]明显高于对照组[(6.55±0.50)mmol/L,P<0.05或<0.01],低氟组明显低于低氟+铝组(P<0.01),高氟组明显高于高氟+铝组(P<0.05).低氟组肝脏脏器系数(2.94±0.36)高于低氟+铝组(2.60±0.15,P<0.05).结论 氟及氟和铝对大鼠血常规和肝、肾功能血清生化指标有一定程度的影响,大鼠红细胞增生而细胞体积变小,质量下降,肝、肾功能受损.铝对不同剂量氟所起的作用不同.     

Bone mineral homeostasis in spontaneously diabetic BB rats. II. Impaired bone turnover and decreased osteocalcin synthesis

Bone morphology and function were studied in male spontaneously diabetic BB rats after 3-4 weeks of diabetes. The tibia and lumbar vertebrae weights were decreased, but the bone calcium percentage remained normal. Bone volumes in the tibial metaphysis and the first lumbar vertebra were normal on quantitative histomorphometry. Osteoclast, osteoblast, and osteoid surface percentages, however, and the calculated daily mineral apposition rate in the tibia (1.0 +/- 0.4 vs. 5.6 +/- 0.6 microns/day) and vertebra (0.2 +/- 0.1 vs. 2.3 +/- 0.2 microns/day) were all severely decreased in diabetic rats. Plasma osteocalcin concentrations were also markedly decreased in diabetic rats (24 +/- 2 vs. 108 +/- 10 ng/ml); the half-times of [125I]osteocalcin were similar in diabetic and nondiabetic rats, indicating that decreased plasma osteocalcin was due to decreased synthesis. Plasma osteocalcin levels were more decreased than expected from their suppressed 1,25-dihydroxyvitamin D3 levels, and 1,25-dihydroxyvitamin D3 injections did not increase plasma osteocalcin in diabetic rats as they did in nondiabetic rats. Bone osteocalcin content was normal in diabetic rats. Photon absorptiometry of tibiae showed a similar bone mineral content in diabetic and nondiabetic rats. Biomechanical properties of diabetic rat femora were all in the normal range. Nondiabetic semistarved rats with the same body weight as diabetic rats exhibited a similar delay in bone growth as diabetic rats, but the osteoblast and osteoid surfaces were normal, and the mineral apposition rate was normal (tibia) or slightly decreased (vertebra). Plasma osteocalcin concentrations were also normal in semistarved rats. Thus, the number and/or function of osteoblasts are severely suppressed in diabetes, and this results in decreased osteoid surface, mineral apposition rate, and plasma osteocalcin levels; moreover, these changes cannot be explained by simple weight loss.     

替米沙坦对糖尿病大鼠心肌脂联素及其受体1表达的影响

目的 观察替米沙坦对糖尿病大鼠心肌脂联素及其受体1表达的影响,探讨替米沙坦对糖尿病大鼠心肌病变的保护作用及机制.方法30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,糖尿病组和糖尿病替米沙坦治疗组(替米沙坦组).用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型.成模后,替米沙坦组予以替米沙坦(5 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃12周.实验结束时,测定心功能,用酶联免疫法检测血浆和心肌脂联素水平,用RT-PCR方法检测心肌脂联素受体1(AdipoR1)mRNA表达,用Western印迹法检测心肌脂联素受体1、磷酸化的磷酸腺苻激活的蛋白激酶-α(AMPK-α)、葡萄糖转运子4(GluT_4)蛋白表达.结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠12周时出现心重/体重增加[(4.38±0.07对2.99±0.67)g/kg,P<0.05],心功能降低,血浆和心肌脂联素水平降低[(1.09±0.03对1.87±0.05)μg/ml,(0.12±0.02对0.21±0.02)μg/mg蛋白,均P<0.05],心肌脂联索受体1 mRNA和蛋白表达降低(0.35±0.08对0.78±0.11,0.34±0.07对0.77±0.08,均P<0.05),心肌磷酸化AMPK-α和GluT_4蛋白表达降低(0.47±0.12对0.72±0.10,0.41±0.09对0.79±0.08,均P<0.05).与糖尿病组比较,替米沙坦治疗12周后心室重/体重降低[(3.49±0.39对4.38±0.07)g/kg,P<0.05],心功能改善.血浆和心肌脂联素水平升高[(1.41±0.02对1.09±0.03)μg/ml,(0.16±0.01对0.12±0.02)μg/mg蛋白,均P<0.05],心肌脂联素受体1 mRNA和蛋白表达增加(0.48±0.06对0.35±0.08,0.47±0.09对0.34±0.07,均P<0.05),心肌磷酸化AMPK-α和GluT_4表达水平均升高(0.57±0.10对0.47±0.12,0.52±0.10对0.41±0.09,均P<0.05).结论糖尿病大鼠心肌脂联素及其受体1的表达水平降低.替米沙坦上调糖尿病大鼠心肌脂联素及其受体1的表达水平,促进心肌葡萄糖氧化,从而改善心功能.     

间歇性高血糖对胰岛β细胞功能和凋亡的影响

目的 观察间歇性高血糖和持续性高血糖对糖尿病大鼠胰岛β细胞功能和凋亡的影响.方法 雄性GK大鼠22只,随机分为持续高血糖组(HG)、波动性高血糖组(FG),11只Wistar大鼠作为正常对照组(NG).FG组每天定时腹腔注射超短效胰岛素类似物诺和锐并错时给予葡萄糖,造成1d中血糖浓度大幅度波动模型.HG和NG组给予生理盐水注射.制模6周后,进行葡萄糖耐量试验及胰岛素释放试验以评估胰岛β细胞的功能.以免疫组化染色及形态测量半定量分析胰岛素表达,TUNEL法观察胰岛细胞的凋亡并计数胰岛中β细胞凋亡率.结果 (1)FG组空腹血糖及糖负荷后15、30、60、120 min血糖均显著高于HG组(均P<0.01),FG组葡萄糖曲线下面积(AUCg)也高于HG组[(1 012.14±82.62对813.60±56.70)ng·ml~(-1)·h~(-1)·10~4,P<0.01];糖负荷后15、30、60、120 min胰岛素水平、胰岛素曲线下面积/葡萄糖曲线下面积(AUCi/AUCg)及15 min胰岛素增值/血糖增值(Δ115'/ΔG15')较HG组降低[(0.55±0.18对0.95±0.28,0.43±0.17对0.85±0.21,0.47±0.11对0.76±0.16,0.58±0.13对1.08±0.26)ng/ml;(9.56±2.53对21.36±4.16)×10~(-7);(3.95±3.45对27.02±8.62)×10~(-7),均P<0.05].(2)FG组胰岛素染色阳性面积、胰岛素染色阳性率和积分光密度均低于HG组(均P<0.05).(3)FG组β细胞凋亡率显著高于HG组[(24.17±7.25对16.55±5.11)%,P<0.01].结论 波动性高血糖可能较持续性高血糖对胰岛β细胞功能的损害更加明显,β细胞凋亡增加可能是血糖波动导致胰岛功能改变的机制之一.     

硒对氟中毒鸡淋巴细胞亚群及脾淋巴细胞凋亡的影响

目的 观察硒对慢性氟中毒鸡血液、脾脏CD4~+,CD8~+淋巴细胞亚群以及脾淋巴细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 将8日龄海蓝褐雏鸡180只按体质量随机分为3组:对照组、氟中毒组、硒拮抗组,每组60只,分别饲以含氟195、1000、1000 ms/kg、含硒0.08、0.08、4.00 mg/kg的全价日粮.于30、60、90 d用流式细胞术检测外周血和脾脏中CD4~+、CD8~+淋巴细胞水平,TUNEL法检测脾淋巴细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,30、60、90 d氟中毒组外周血CD4~+淋巴细胞水平降低[(35.36±4.27)%vs(24.29±2.96)%、(47.65±5.42)%vs(41.62±3.96)%、(49.58±3.98)%vs(42.35±6.03)%,P<0.05或<0.01],CD4~+/CD8~+比值也明显降低[(1.701±0.145)%vs(1.393±0.163)%、(2.712±0.345)%vs(1.781±0.201)%、(2.438±0.356)%vs(1.973 ±0.229)%,P<0.05或<0.01];与氟中毒组比较.30、60、90 d硒拮抗组外周血中CD4~+淋巴细胞水平升高[(29.40±3.38)%、(45.40 ±6.01)%、(46.85 ±5.25)%,P<0.05或<0.01],60、90 d时CD4~+/CD8~+比值明显回升[(2.004±0.314)%、(2.211±0.229)%,P均<0.01].与对照组比较,30、60、90 d氟中毒组脾脏中CD4~+淋巴细胞水平降低[(47.33±5.35)%vs(41.91±4.83)%、(49.28±5.24)%vs(41.26 ±4.56)%、(34.31±4.15)%vs(29.33 ±2.89)%,P均<0.01],CD4~+/CD8~+比值也明显降低[(1.927±0.244)%vs(1.525±0.265)%、(1.847±0.224)%vs(1.640±0.198)%、(1.265±0.174)%vs(0.878 ±0.092)%,P<0.05或<0.01];与氟中毒组比较,60、90 d硒拮抗组脾脏中CD4~+淋巴细胞水平升高[(44.87±5.43)%、(32.62 ±3.37)%,P均<0.05],而30、60、90 d时CD4~+/CD8~+比值明显回升[(1.703 ±0.201)%、(1.772±0.215)%、(0.991±0.124)%,P<0.05或<0.01].30、60、90 d时氟中毒组鸡脾淋巴细胞凋亡指数[(2.31 ±0.36)%、(2.76±0.22)%、(3.04 ±0.29)%]明显高于对照组[(1.14 ±0.21)%、(1.23±0.23)%、(1.29 ±0.20)%],而60、90 d时硒拮抗组[(2.42 ±0.32)%、(2.73±0.39)%]低于氟中毒组,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01).结论 一定程度的硒摄入能减少氟中毒鸡淋巴细胞的凋亡、改善失衡的淋巴细胞亚群来拮抗氟的毒性.     

高脂喂养大鼠内脏脂肪组织C反应蛋白的表达

高脂饲料喂养10周的SD肥胖大鼠腹部内脏脂肪含量明显高于对照组[(26±6 vs 13±3)g,P<0.01],高脂组大鼠腹部内脏脂肪中C反应蛋白(CRP)mRNA水平较对照组高(0.901±0.085 vs 0.402+0.036,P<0.01),高脂组门静脉[(743.8±95.8 vs 558.3±118.3)ms/L,P<0.01]和外周静脉血清CRP浓度[(596.3±38.9 vs 485.8±30.2)mg/L,P<0.05]均高于对照组.高脂组门静脉血清CRP浓度显著高于外周静脉(P<0.01),但对照组差异无统计学意义.提示腹部内脏脂肪产生的CRP可能是肥胖者循环CRP的重要来源之一.     

八面蒙脱石联合莫沙必利灌胃对急性坏死性胰腺炎大鼠回肠NF-κB活化的影响

目的 探讨八面蒙脱石对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠回肠黏膜NF-κB活化的影响.方法 120只雄性SD大鼠按完全随机法分为假手术组、ANP组、莫沙必利组、八面蒙脱石组和莫沙比利+八面蒙脱石(联合)组,每组24只大鼠.采用胰胆管内逆行注射牛磺胆酸钠诱导大鼠ANP模型;假手术组开腹注射生理盐水后关腹.各治疗组于造模前30 min分别给予相应药物灌胃1次.术后3、6、12 h分批处死动物.取胰腺组织行病理检查;取血测定TNF-a、IL-1水平;取回肠观察超微结构的改变;免疫组化法检测回肠黏膜NF-κB的表达;Western blotting法检测回肠组织IκBa水平.结果 与假手术组比较,ANP组胰腺损伤明显,血TNF-a、IL-1水平明显升高[(36.79±1.14)pg/ml对(9.00±0.01)pg/ml,(25.17±1.93)ng/ml对(3.45±0.11)ng/ml,P值均＜0.05],回肠绒毛高度显著下降[(0.25±0.22)×10~(-6)m对(1.50±0.33)×10~(-6)m,P＜0.05],柱状细胞指数显著降低[(2.40±1.65)×10~6个/m对(13.5±4.28)×10~6个/m,P＜0.05],NF-κB表达增加(6.92±1.54对1.28±0.29,P＜0.05),IκBa蛋白水平下降(3.30±1.99对24.32±1.93).莫沙必利组和八面蒙脱石组的各项指标与ANP组均无显著差异.联合组的血TNF-a、IL-1水平[(30.57±0.39)pg/ml和(13.45±1.26)ng/ml]、回肠绒毛高度和柱状细胞指数[(1.05±0.28)×10~(-6)m和(10.10±2.50)×10~6个/m]、NF-κB活化(4.32±1.57)和IκBa蛋白水平(15.99±1.26)均与ANP组有统计学差异(P值均＜0.05).结论 八面蒙脱石联合莫沙必利灌胃能减少ANP大鼠回肠黏膜NF-κB的大量激活,减轻胰腺和回肠黏膜的损伤程度.