糖蛋白贮积症等的实验诊断及应用

溶酶体贮积症是由于溶酶体中某些酸性水解酶的遗传性缺陷,导致相应的底物降解障碍而贮积在溶酶体中,造成细胞结构和功能障碍,进而影响了整个器官结构和功能.按贮积物质的性质分类,有神经鞘脂贮积症(sphingolipidosis),粘多糖贮积症(mucopolysaccharidosis),糖蛋白贮积症(glycoproteinosis)及糖原贮积症(glycogenosis).我室在建立了三种神经鞘脂贮积症的实验诊断及产前诊断方向后,又建立了正常人白细胞、经培养的皮肤成纤维细胞及羊水细胞中α及β-葡糖苷酶,α-甘露糖苷酶及α-岩藻糖苷酶的活性测定。为诊断及产前诊断糖原贮积症亚型(Pompe氏病),神经鞘脂贮积症中的Gaucher氏病及糖蛋白贮积症中的α-甘露糖苷贮积症及α-岩藻糖苷贮积症打下基础。前两种病是溶酶体贮积症中较常见者,后两者是粘多糖贮积症鉴别诊断常涉及者。有关粘多糖贮积症的实验诊断方法见另文.     

杂交贝母非生物碱成分的结构研究

作者研究了五倍子虫瘿水提取物(AEGRC)对α-葡糖苷酶活性的影响。 1) 将p-硝苯基-α-D-吡喃葡糖苷(PNP-苷)与不同浓度的AEGRC预混合,然后依次加入α-葡糖苷酶溶液和N-(1-萘)1,2-乙二胺,通过测定从PNP-苷释放出的p-硝基苯酚,检测α-葡糖苷酶的活性。结果显示,AEGRC对源于杆菌、酵母和肠粘膜的α-葡糖苷     

无精症患者生精细胞检测和精浆生化测定

目的:对无精症患者生精细胞和精浆生化结果进行分析.方法:对92例无精症患者,采用瑞吉氏染色法进行生精细胞检测,吲哚法和Cooper法分别进行果糖和中性α-葡糖苷酶测定.结果:92例无精症患者中,61例未检出生精细胞,其中37例果糖阴性,中性α-葡糖苷酶降低:6例果糖正常,仅中性α-葡糖苷酶降低:18例果糖和中性α-葡糖苷酶均正常.31例发现生精细胞,其中处于精子细胞水平18例、次级精母细胞水平10例、初级精母细胞水平2例、精原细胞水平1例,其中28例果糖和中性α-葡糖苷酶均正常,3例仅果糖降低.结论:精液生精细胞检测和精浆生化测定在无精症病因诊断中有很高的预示性价值.     

串联质谱法筛查新生儿溶酶体贮积症酶活性切值的建立

目的：建立串联质谱法检测6种溶酶体贮积症（LSD）相关酶活性切值的计算方法。方法：采用串联质谱法对26 689名新生儿及7例临床确诊患儿进行6种LSD（糖原贮积症Ⅱ型、法布里病、黏多糖贮积症Ⅰ型、克拉伯病、尼曼-皮克病A/B和戈谢病）相关酶活性检测,将每批次酸性β葡糖脑苷脂酶、酸性鞘磷脂酶、β半乳糖脑苷脂、α-L-艾杜糖苷酸酶、酸性α葡糖苷酶活性中位数的20%以及α半乳糖苷酶活性中位数的30%作为切值。对酶活性结果小于切值70%的标本进行基因诊断。结果：7例临床确诊患儿的酶活性均低于相应切值,提示本研究建立的切值计算方法有效。26 689名新生儿筛查LSD可疑阳性142例（0.53%）,其中β半乳糖脑苷脂缺乏25例、α-L-艾杜糖苷酸酶缺乏1例、α半乳糖苷酶缺乏19例、酸性α葡糖苷酶缺乏97例。确诊LSD患儿8例,其中糖原贮积症Ⅱ型3例、克拉伯病3例、法布里病2例,阳性预测值约为5.6%。6种LSD酶活性切值在3—8月份时均呈下降趋势,在9—12月份时均呈上升趋势,不同月份之间差异有统计学意义（P<0.05）。结论：本研究建立的串联质谱法筛查LSD相关酶活性切值计算方法有效,其中...     

男性不育患者精子形态与精中性α-葡糖苷酶和精浆弹性硬蛋白酶关系的研究

目的研究男性不育患者精子形态与精中性α-葡糖苷酶和精浆弹性硬蛋白酶的关系。方法466例男性不育患者分别根据年龄和精子正常形态百分率分成5组和8组,采用Diff-Quik染色法、酶法和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别进行精子形态、精中性α-葡糖苷酶和精浆弹性硬蛋白酶的检测。结果各年龄组的正常形态精子百分率和精浆弹性硬蛋白酶浓度差异无统计学意义（P〉0．05）,精中性旷葡糖苷酶的活性在41-50岁年龄段显著降低,其他年龄段精中性α-葡糖苷酶的活性差异无统计学意义（P〉0．05）。在精子正常形态百分率不同的8组中,年龄差异不具统计学意义,精浆弹性硬蛋白酶浓度差异无统计学意义（P〉0．05）,精子正常形态百分率大于7．1％的5组精中性α-葡糖苷酶的活性差异无统计学意义,其余三组精中性α-葡糖苷酶的活性与各组精中性α-葡糖苷酶的活性差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论精子正常形态百分率不受年龄和精浆弹性硬蛋白酶浓度影响,而随着精中性α-葡糖苷酶的活性降低而降低,精中性α-葡糖苷酶活性的显著降低可能是导致精子形态畸形的独立因素。     

补肾助育方治疗肾阳亏虚型死精子症

目的:观察补肾助育方治疗肾阳亏虚型死精子症的临床疗效。方法:将符合诊断标准的肾阳亏虚型死精子症患者74例,按随机数字表法分为两组,治疗组37例采用补肾助育方治疗,对照组37例采用右归胶囊治疗。12周后分别记录两组患者临床疗效、死精子率及精浆α-葡糖苷酶、超氧化物歧化酶(superoxide orgotein dismutase,SOD)含量。结果:治疗组有效率为83. 78%;对照组有效率为56. 76%,两组有效率比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。两组治疗后死精子率较治疗前降低,且治疗组显著优于对照组(P 0. 05)。两组治疗后精浆中α-葡糖苷酶与SOD含量较治疗前升高,且治疗组显著优于对照组(P 0. 05)。结论:补肾助育方可明显提高肾阳亏虚型死精子症患者临床疗效,降低死精子率,增加精浆中α-葡糖苷酶和SOD的含量。     

Fabry病神经系统损害的研究进展

Fabry病(法布里病)是X染色体连锁隐性遗传的溶酶体贮积病,其发病机制为编码α半乳糖苷酶A的GLA基因发生突变,导致患者血浆α半乳糖苷酶A的活性部分或全部消失,从而引起神经酰胺三己糖苷为主的鞘糖脂类物质不能分解而聚集各种细胞内,造成各脏器功能受损。其中神经系统损害包括小纤维神经病及脑血管疾病等,对于不明原因的神经疼痛和早发脑卒中患者应考虑Fabry病的可能,以期早期诊治。     

巨噬细胞炎性蛋白1α和载脂蛋白E基因多态性与炎症性肠病易感性的关系

目的 探讨巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)基因和载脂蛋白E(ApoE)基因多态性是否与炎症性肠病(IBD)的发生相关,并探讨这两个基因之间的相互作用.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,在183例IBD患者[包括142例溃疡性结肠炎(UC)患者和41例克罗恩病(CD)患者]以及160名健康对照者中检测MIP-lα和ApoE等位基因和基因型的频率.结果 携带MIP-1α-906(TA)6/(TA)6基因型或者APOE484等位基因可以增加UC的发病风险,UC患者组MIP-1α-906位点(TA)6/(TA)6基因型频率为50%,显著高于正常对照组中的34%(OR=1.909,95%C/=1.204～3.028);UC患者ApoE ε4+基因型频率为40.8%,显著高于正常对照组中的22.5%(OR=2.379,95%CI=1.451～3.896).同时携带MIP-1α-906(TA)6/(TA)6和APOE4ε4的个体发生UC的风险更大(P<0.01,OR=3.288,95%17/=1.777～6.084).而CD组与对照组间的MIP-lα和ApoE基因多态频率差异无统计学意义.结论 MIP-lot基因-906(TA)6/(TA)6多态性和APOFAε4基因多态性可能是UC发病的遗传危险因素;MIP-1α基因多态性与ApoE基因多态性之间有协同作用,ApoEε4等位基因与MIP-1α-906(TA)6/(TA)6基因型同时存在时,患UC的危险性显著提高.

Abstract：

Objective To investigate whether the macrophage inflammatory protein 1 alpha(MIP-1α)and apolipoprotein E(ApoE)gene polymorphisms,either alone or in combination,affect the susceptibility to inflammatory bowel disease(IBD).Methods Genomic DNA of IBD patients with Crohn's disease(CD,n=41)and with ulcerative colitis(UC,n=142)and healthy controls(n=160)was extracted and genotyped for the MIP-1α and ApoE gene polymorphisms by restriction fragment length polymorphism assay.Results MIP-1α-906(TA)6/(TA)6 homozygotes had a significantly elevated risk of UC(OR=1.909,95%CI=1.204-3.028).The carriers of APOF4ε4 were at a significantly higher risk for UC with OR of 2.379(95%CI=1.451-3.896).And a combination of these two loci,MIP-1α-906(TA)6/(TA)6/APOE4ε4 were strongly associated with a higher risk of UC(OR=3.288;95%CI=1.777-6.084).Conclusion The polymorphisms of MIP-1α-906(TA)6/(TA)6 and ApoE are probably independent genetic risk factors for UC.And the coexistence of both may exert an additive effect on the UC risks.     

黏多糖贮积症I型酶替代治疗后的心脏改变

黏多糖贮积症I型是一种致死性常染色体隐性遗传的贮积疾病,是由于溶酶体α-L艾杜糖苷酶(IDU A)缺乏导致黏多糖沉积。若黏多糖沉积于心肌、延伸至瓣膜松质及扩散至心外冠状动脉内膜,则会出现心肌病和瓣膜关闭不全。病情严重的患者在10岁之内发生充血性心力衰竭和死亡。同种异体造血干细胞移植应用于病情严重的患者,可明显延长生存时间,减轻心室肥厚,保持心脏功能,但瓣膜增厚和关闭不全却无法改善。对那些造血干细胞移植治疗风险/获益比不佳的黏多糖贮积症I型患者,采用人重组IDUA行酶替代治疗不失为一种可行的措施。研究者报道了接受长达…     

2例罕见法布雷病患者应用阿加糖酶α治疗的护理

<正>法布雷病（Fabry）是一种罕见的X连锁遗传溶酶体贮积症，是由于GLA基因突变导致α-半乳糖酶A(α-galacto-sidase A,α-Gal A)的活性降低或完全缺乏，造成代谢底物三己糖酰基鞘执醇（GL-3）及其衍生物脱乙酰基GL-3(Lyso-GL-3)在多脏器贮积，引起多脏器病变甚至引发危及生命的并发症。其临床特点为发作性肢体疼痛和皮肤血管角质瘤，在疾病后期常出现肾脏、心脏等的损害。     

具有-葡糖苷酶抑制活性的松树提取物及其制备

KR2004077976-A将松树皮和叶浸泡于水中,用NaOH调节溶液pH至8~11,得到提取液,再用盐酸调节pH至2~4,离心收集沉淀物,在沉淀物中加入乙醇,离心得到上清液,减压浓缩上清液,浓缩液用己烷提取,即得松树提取物。该制备过程仅需少量有机溶剂。所用松树包括韩国或日本赤松、红松、日本或韩国黑松、刚松、白皮松、日本五叶松、偃松、东北红豆杉、油松、马尾松、雪松和云南松等。该提取物具有α-葡糖苷酶抑制活性,抑制血液对葡萄糖的吸收。在高温和酸性条件下仍能保持α-葡糖苷酶抑制活性。具有-葡糖苷酶抑制活性的松树提取物及其制备…     

淡黄木层孔菌子实体提取物治疗呼吸系统炎症、糖尿病,促进酸性菌的生长

本品为淡黄木层孔菌Phellinus gilvus(Schw.)Pat子实体用水、醇或水和醇的混合溶剂提取得到的。具有抑制呼吸系统炎症;防治呼吸系统疾病;通过抑制α-葡糖苷酶(包括麦芽糖酶、蔗糖酶、α-淀粉酶)的活性治,糖尿病,以及促进乳酸菌(特别是嗜酸乳杆菌)的生长等功效。淡黄木层孔菌子实体提取物治疗呼吸系统炎症、糖尿病,促进酸性菌的生长     

血红蛋白H病的生化遗传研究

(1) 本文应用血红蛋白理化性质测定、分子杂交、肽链解离和“指纹法”技术等分析血红蛋白H,明确诊断本文患者为血红蛋白H病,这是国内首次根据血红蛋白结构分析鉴定血红蛋白H病。 (2) 本文采用异丙醇试验和Heinz小体生成试验检查α地中海贫血杂合体,应用此法并结合临床化验,可鉴定出α地中海贫血1(α地_1)和α地中海贫血2(α地_2)杂合体,从而证实本文患者是由母亲遗传α地_1基因和从父亲遗传α地_2基因构成的双杂合体(α地_1/α地_2)。     

男性不育症患者精浆化学成份分析

目的 为了探讨男性不育症患者的发病机理。方法通过检测20例对照组（生育组）与140例观察组（不育组）精浆中的果糖、锌、酸性磷酸酶、中性α-葡糖苷酶、弹性硬蛋白酶、LDH—X、项体酶,综合分析两组精浆中的化学成分变化。结果不育症组精浆中的果糖、锌、中性α-葡糖苷酶、顶体酶每次射精含量都显著低于生育组（P≤0．01）;酸性磷酸酶、LDH—X每次射精含量稍低于生育组,但无统计学意义（P＞0．01）;而不育组弹性硬蛋白酶浓度明显高于生育组（P〈0．01）。结论精浆中的果糖、锌、酸性磷酸酶、中性α-葡糖苷酶、弹性硬蛋白酶、LDH—X、项体酶浓度可以用来综合评估男性患者的生育能力。     

4岁发病的Fabry病1例

Fabry病是由于溶酶体水解酶α-半乳糖苷酶A基因缺陷导致的X连锁隐性脂质贮积病,患者体内酰基鞘鞍醇三己糖进行性贮积,导致周围神经性疼痛,心、脑、肾、眼等多脏器损害,严重者可于青壮年死亡。但由于临床表现缺乏特异性,Fabry病早期诊断困难。本文报道1例男性患儿,4岁起出现双脚脚趾间断性刀割样疼痛,近2年加重伴双手手指胀痛,11岁时来院就医。患儿病程7年,曾接受多种止痛药物治疗无效,尚未出现心、脑、肾、皮肤、眼等脏器合并症,常规生化、免疫、肌电图、神经传导速度、脑影像学检查未见异常,诊断困难。外周血白细胞α-半乳糖苷酶A活性显著降低[1.0 nmol/(h.mg protein),正常对照值24.5～86.1 nmol(h.mg protein)],符合Fabry病诊断。基因分析显示,患儿α-半乳糖苷酶A基因IVS6+2 T>C剪切突变,其母亲及妹妹未携带相同突变,证实IVS6+2 T>C为新发突变。我国Fabry病发生情况不详,患者多起病隐匿,随着疾病进展逐渐出现发作性肢体疼痛及多脏器严重损害,引起尿毒症、心肌病、卒中,残障率及死亡率很高,早期的鉴别诊断至关重要。α-半乳糖苷酶活性检测是诊断Fabry病的关键,基因突变分析有助于确诊并指导家系的遗传咨询。     

肝细胞核因子1α基因突变与年轻的成人发病型糖尿病3

年轻的成人发病型糖尿病(maturity-onset diabetes of the young，MODY)是一种单基因突变所致的糖尿病，其特点为发病年龄小于25岁，无酮症酸中毒，糖尿病传递符合常染色体显性遗传规律，诊断后至少2年内不用胰岛素。MODY是一组遗传异质性疾病，已发现至少有6种基因突变可导致该病：肝细胞核因子(HNF)4α基因(MODY1)、葡     

早产患者TNF-α基因启动子-308位点多态性与胎盘TNF-α mRNA、母血TNF-α表达关系的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子-308G→A多态性与早产遗传易感性的关系.方法 2004年9月至2005年2月对四川大学华西第二医院、四川省妇女儿童医院46例早产患者(根据胎盘病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组21例和早产非感染组25例)母血、胎盘组织和同期足月正常产50例母血、20例胎盘组织进行研究.应用RT-PCR技术测定胎盘组织中TNF-α mRNA的表达水平;采用ELISA法测定母血清TNF-α水平.根据前期研究对TNF-α基因启动子-308位点的基因分型结果,分析该位点不同基因型间早产患者胎盘TNF-α mRNA和母血TNF-α水平的差异,及其不同基因型与绒毛膜羊膜炎的相关性.结果 早产感染组孕妇胎盘组织中TNF-α mRNA及血清中TNF-α水平明显高于早产非感染组和正常足月产组(P<0.05);在早产患者中TNF-α基因启动子-308位点GA(AA)基因型与GG基因型比较,其对应的TNF-α mRNA、TNF-α表达均显著增加(P<0.05),且与绒毛膜羊膜炎的发生密切相关(OR=4.22,95%CI 1.197～14.896).结论 TNF-α基因启动子-308位点多态性与早产、感染性早产的遗传易感性有关,该位点突变引起TNF-α转录、翻译水平改变;TNF-α及其基因多态性可以成为早期预测、诊断早产和官内感染的指标.     

表现为肥厚型心肌病的糖原贮积病

背景:无法解释的左室肥厚常提示诊断为肥厚型心肌病,该病是一种肌小节蛋白基因异常的疾病。由于AM P激活的蛋白激酶γ2(PRKAG2)基因的突变可引起心脏糖原积聚和左室肥厚,类似于肥厚型心肌病,所以假设其他调节糖原代谢的基因突变的患者也可被临床误诊为肥厚型心肌病。方法:对75例连续的无相互关系的肥厚型心肌病患者进行基因分析,检测出40例肌小节蛋白突变,对其余35例患者的PRKAG2、溶酶体相关膜蛋白2(LAM P2)、α半乳糖苷酶(GLA)和α-1,4-葡萄糖苷酶酸(GAA)基因进行研究。结果:没有发现基因缺陷导致的Fabry病(GLA)和Pom pe病(GA…     

土耳其炎症性肠病患者的细胞因子基因多态现象

目的:克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)是肠道的慢性炎症性疾病,其病因还不完全明确。疾病流行的种族差异、家族聚集性和对双生子的研究提供了最重要的证据,表明了遗传因素在炎症性肠病(IBD)的发病机制中发挥作用。该研究目的是研究决定免疫反应水平的等位基因的多态现象,如肿瘤坏死因子α(TNFα)基因、白介素-1β(IL-1β)基因、白介素-1受体拮抗基因(IL-1RN)及白介素-10(IL-10)基因,并研究其在IBD炎性过程中的作用。患者与方法:该研究纳入了经内镜或组织病理学诊断的120例UC患者和70例CD患者。对照组为105例既往未患过任何肠道疾…     

TNF-α和TNF-β基因变异对子宫内膜异位症易感性的联合效应

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)的基因变异对广东籍汉族妇女子宫内膜异位症(内异症)的遗传易感性的联合效应.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP技术)检测82例内异症患者(内异症组)和80例非内异症妇女(对照组)TNF-α基因启动子区域-308位点和TNF-β基因 252位点的等位基因型.结果 结果发现TNF-β 252 AA基因型的个体患内异症的风险是GG基因型的3.33倍(x2=6.562,P＜0.05).TNF-α-308位点基因型频率分布在两组间比较,差异无显著性(x2=0.640,P＞0.05).但TNF-α-308位点与TNF-β 252位点变异基因型之间有协同作用,TNF-α基因-308位点GA与TNF-β基因 252位点GG联合基因型OR值为2.445,TNF-α基因-308位点GA和TNF-β基因 252位点AA联合基因型OR值增高至10.99(P＜0.05).结论 TNF-βAA基因型可能是广东地区汉族妇女内异症的遗传易感因素之一,TNF-α基因-308位点基因多态性与TNF-β基因 252位点之间有协同作用,两位点突变同时存在能显著增加内异症的发病风险.