原发性肺癌血中检测sFas的临床价值

目的：探讨sFas在原发性肺癌中的表达及其临床价值。方法：应用ELISA检测40例原发性肺癌标本及30例良性病变中sFas的表达情况。结果：在不同病理类型中sFas表达差异显著（P〈0．05）;在不同TNM分期中：Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期,sFas表达差异显著（P〈0．05）。在Ⅱ期与Ⅲ期表达差异不显著（P〉0．05）。结论：sFas升高有利于肺癌逃避免疫攻击,有利于其浸润与转移。     

Fascin1和p-ERK表达与神经胶质瘤侵袭性的相关性研究

目的探讨肌成束蛋白(Fascin-1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)与神经胶质瘤侵袭性的相关性。方法选取2016年6月-2018年11月期间,到我院神经外科手术治疗的94例神经胶质瘤患者手术标本,其中有Ⅰ级32例、Ⅱ级28例、Ⅲ级22例、Ⅳ级12例。选取同期正常脑组织标本30例作为对照组。比较各组间血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平以及Fascin1、p-ERK的组织表达情况。结果神经胶质瘤患者血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平显著高于对照组(P0.05);Ⅳ级患者血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平显著高于Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级(P0.05);Ⅲ级患者血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平显著高于Ⅰ级、Ⅱ级(P0.05)。神经胶质瘤Fascin1、p-ERK表达明显高于对照组(P0.05);Ⅲ级～Ⅳ级神经胶质瘤中Fascin1、p-ERK表达明显高于Ⅰ～Ⅱ级(P0.05)。经过Pearson相关性分析,Fascin1、p-ERK与TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9均呈正相关(P0.05)。结论 Fascin1、p-ERK与神经胶质瘤侵袭性有密切关系,可能成为反映神经胶质瘤侵袭能力的敏感指标。     

RUNX3蛋白表达与胃腺癌病理分化程度关系的研究

目的：探讨RUNX3基因表达在胃腺癌中的表达情况及意义。方法：采用兔抗人RUNX3蛋白抗体和ABC免疫组织化学方法检测手术切除的胃癌组织标本中染色阳性细胞数及阳性率。结果：RUNX3表达主要位于细胞核内,细胞浆也有表达,在41例胃腺癌组织中,RUNX3表达的总体阳性率为56.1%,其中低分化腺癌46.6%（7/15）,管状腺癌72.7%（8/11）,腺泡状腺癌66.7%（6/9）,其他类型腺癌33.3%（2/6）,各组间无明显的差异（P〉0.05）。病理分期为Ⅲ、Ⅳ期的胃癌RUNX3表达明显低于Ⅰ、Ⅱ期（46.6%vs70.1%,P〈0.05）,而在Ⅲ、Ⅳ期的胃癌组织中,低分化腺癌组的RUNX3表达阳性率明显低于管状腺癌组（11.1%vs71.4%,P〈0.05）。但患者的年龄、性别分组间RUNX3的表达差异无显著性（P〉0.05）。结论：在胃腺癌组织中,RUNX3的表达阳性率为56.1%,其表达与胃癌的病理分期有关。     

Raf激酶抑制蛋白和p-ERK在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及意义

 目的:探讨Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase, p-ERK)在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及意义。方法:40只Sprague-Dawley （SD）大鼠随机分为2组:正常对照组（N组）和糖尿病肾病组（M组）。苏木精-伊红（hematoxylin-eosin, HE）和过碘酸-雪夫（periodic acid-Schiff,PAS）染色观察肾组织病理改变,免疫组化方法检测各组肾组织RKIP和p-ERK1/2表达,Western blotting 检测各组RKIP和p-ERK1/2的表达。结果:M组大鼠随着病程的延长,血糖升高,出现蛋白尿,肾重增加,肾组织内p-ERK1/2明显增高,RKIP降低,与N组相比有显著差异(P<0.05)。结论: RKIP表达的减少及p-ERK的表达增加可能促进糖尿病肾病的进展。     

人肺癌细胞的肿胀应激及其信号通路分析

目的 通过比较肺癌与对应癌旁组织的含水量、细胞核大小以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)磷酸化激活情况以明确肺癌细胞是否存在肿胀应激。方法 采用干湿质量比较法检测10例人肺腺癌、 12例肺鳞癌以及对应的癌旁正常肺组织新鲜标本的含水量差别。用磷酸化和非磷酸化抗体结合免疫组织化学染色方法,检测30例肺腺癌、 32例肺鳞癌、 10例正常肺泡上皮细胞和10例正常肺支气管上皮细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38 MAPK的表达及磷酸化激活情况。最后采用HE染色结合图像分析软件估算肺腺癌和肺鳞癌的癌细胞和对应癌旁正常肺泡上皮细胞及支气管上皮细胞的细胞核大小差别。结果 干湿质量比较法发现肺鳞癌和肺腺癌的平均含水量均显著高于其对应的癌旁正常组织。免疫组织化学染色发现p38 MAPK在肺腺癌和肺鳞癌及癌旁组织均高表达。ERK在肺腺癌和鳞癌组织均弱表达,但是在肺癌旁组织高表达。JNK在肺腺癌及癌旁组织均弱表达。在肺泡上皮组织和支气管上皮组织中JNK、 p38 MAPK、 ERK1/2均未被磷酸化激活。但是,肺腺癌、肺鳞癌组织中JNK被磷酸化激活,而p38 MA...     

肺癌患者血清糖类抗原水平测定的临床评估

目的 :探讨肺癌患者血清 4项糖类抗原水平的变化及对预后评估的意义。方法 :4项糖类抗原均采用放射免疫分析。结果 :32例不同组织亚型肺癌患者血清 4项糖类抗原水平均显著高于正常对照组及肺良性病变组 (p <0 0 1 ,p <0 0 1 ) ;且腺癌组均显著高于鳞癌及小细胞肺癌组 ,其排序为腺癌 >鳞癌 >小细胞癌。TNM临床分期结果为Ⅰ Ⅱ期组测定值显著低于Ⅲa期组 (p <0 0 5 ) ;Ⅲa期组测定显著低于Ⅲb Ⅳ期组 (p <0 0 5 ) ,而Ⅲb Ⅳ期组更显著高于Ⅰ Ⅱ期组 (p <0 0 1 )。呈肺癌病程较晚 ,水平越高。结论 :肺癌患者血清 4项糖类抗原测定对诊断及预后的评估有一定临床价值。     

胸腺上皮肿瘤组织中基质金属蛋白酶-2活性与Ⅰ型膜型基质金属蛋白酶 mRNA表达的相关性

目的探讨胸腺瘤和胸腺癌中基质金属蛋白酶（MMP）-2、Ⅰ型膜型（MT1）-MMP、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2mRNA的表达和MMP-2蛋白活性的关系。方法分别用real-time逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR,Taqman法）、明胶酶谱法和Filmin situ gelatin-Zymography（FIZ）对正常的胸腺组织（2例）、胸腺瘤（12例）和胸腺癌（2例）患者的新鲜肿瘤组织中MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2mRNA的表达,pro-MMP-2的活性率及活性蛋白的定位进行测定。结果MMP-2、MT1-MMP及TIMP-2mRNA在Ⅰ期与Ⅱ期和Ⅲ期与Ⅳ期中的表达差异均无统计学意义（P〉0．05）,在Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期和胸腺癌3组中差异均有统计学意义（P〈0．01）。在AB、B1型（混合型和淋巴细胞为主型）与B2、B3型（皮质型和多角细胞为主型）以及胸腺癌3组中差异均有统计学意义（P〈0．05）。MMP-2的蛋白活性率（MMP-2／pro—MMP-2＋MMP-2）在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期和胸腺癌各组中差异有统计学意义（P〈0．05）,在AB、B1型与B2、B3型以及胸腺癌各组中的差异均具有统计学意义（P〈0．05）。胸腺瘤各期及各型中MT1-MMP、TIMP-2mRNA与MMP-2蛋白活性表达均呈正相关,且相关程度相似（r=0．7235、r=0．7647、P〈0．005）。MMP-9的蛋白表达在各组间差异均无统计学意义。结论MMP-2、MT1-MMP及TIMP-2的mRNA表达与胸腺瘤临床分期、病理分型相关,MMP-2的活性与MT1-MMP和TIMP-2的表达升高正相关。推测MT1-MMP通过TIMP-2对MMP-2的激活起促进作用。     

血清CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP联合检测在肺癌诊断中的价值

目的探讨癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、鳞状细胞癌抗原（SCC）和胃泌素释放肽前体（ProGRP）在肺癌诊断中的价值。方法采用电化学发光法和酶联免疫法对228例肺癌患者、100例肺良性疾病患者及100例健康对照组者CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP的含量进行检测及比较。结果肺癌组血清CEA、CYFRA21-1、ProGRP的水平明显高于肺良性疾病组和健康对照组（P〈0.05）。肺癌肿瘤标志物的血清水平与其病理类型相关,血清CEA水平在腺癌时显著升高（中位数8.64,四分位数2.72-44.76,P〈0.05）,ProGRP水平在小细胞肺癌中显著升高（中位数152.00,四分位数46.00-1209.00,P〈0.05）,而血清SCC水平则在鳞癌时显著升高（中位数1.30,四分位数0.80-2.55,P〈0.05）。Ⅲ、Ⅳ期肺癌的血清CEA、CYFRA21-1、NSE和SCC水平明显高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌（P〈0.05）。ProGRP＋CEA＋SCC联合检测对肺癌诊断的灵敏度、特异性和约登指数分别为75.9%、81.5%和0.574,灵敏度和约登指数大于各单项标志物的检测。结论 CEA对腺癌、ProGRP对小细胞肺癌以及SCC对鳞癌具有较大的辅助诊断价值,联合检测可明显提高肺癌的灵敏度,为早期诊断治疗提供有力的证据。     

尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达

 目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径及早期生长反应因子1（Egr-1）在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。 方法: 以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs：(1) 采用BrdU掺入实验测定不同浓度（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01 μmol/L）UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs 增殖的影响;(2) 采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、应激活化蛋白激酶（SAPK）、p38 MAPK及Egr-1 mRNA 表达的影响;(3) 采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响。 结果: （1）UⅡ在一定浓度范围（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01　μmol /L）呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P＜0.05);（2）UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P＜0.01或 P＜0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P＜0.01或 P＜0.05),但对p-p38 MAPK无影响;（3）UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P＜0.01或 P＜0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P＜0.01, P＜0.05)。 结论: UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖。     

肺癌患者凝血功能与肺癌分期的关系

目的 探讨肺癌患者凝血功能与肺癌分期的关系.方法 采用ELISA、免疫比浊法检测140例晚期恶性肿瘤患者和30例正常人的凝血、抗凝活性相关的实验室指标,包括血浆纤维蛋白原（ Fb）,抗凝血酶Ⅲ （AT-Ⅲ）,血管性血友病因子 （ vWF）,D-二聚体（ D-D）.结果 晚期恶性肿瘤患者的血浆D-D、Fb、AT-Ⅲ、vWF抗原的水平较正常人显著升高;在肺癌Ⅲ期、Ⅳ期与Ⅰ期相比明显增高（P＜0.05）,差异有统计学意义;Ⅱ期与Ⅰ期相比增高不明显（P〉0.05）,差异没有统计学意义.结论 肺癌患者存在凝血、抗凝、纤溶系统的激活,机体呈现高凝状态,并且高凝状态与肺癌临床分期呈正相关.     

窖蛋白-1在肺癌中的表达及意义

目的 探讨窖蛋白-1（caveolin-1）在不同类型肺癌组织中的表达及其与微血管密度（MVD）和临床病理因素之间的关系。方法 对154例原发性肺癌、相应癌旁正常肺组织及36例淋巴结转移癌行caveolin-1免疫组织化学染色;对154例原发性肺癌行CD34免疫组织化学（SP法）染色并进行微血管密度计数;Western印迹法检测其中50例新鲜肺癌组织及其癌旁正常肺组织中caveolin-1的表达情况。结果 caveolin-1为膜／质表达蛋白,在正常支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞中的阳性率为100％。在肺癌组织中的阳性率为59．1％（91／154）,低于癌旁正常肺组织,P＜0．01;Western印迹结果进一步证实caveolin-1在肺鳞癌、肺腺癌组织中的表达均显著低于癌旁正常肺组织,P＜0．01。caveolin-1在小细胞肺癌（SCLC）和非小细胞肺癌（NSCLC）中的阳性率分别为7．1％和64．3％,二者间差异有统计学意义,P＜0．01。NSCLC中,有淋巴结转移组caveolin-1表达高于无淋巴结转移组（P=0．005）;Ⅲ、Ⅳ期组caveolin-1表达显著高于Ⅰ、Ⅱ期组（P=0．042）,caveolin-1表达与NSCLC的其他临床病理因素及MVD值无关（P＞0．05）。结论caveolin-1其作为一种肿瘤抑制因子的同时,可能还具有促进NSCLC进展和转移的活性。     

RKIP蛋白在多个人肺癌细胞系中的表达下调

目的检测肺癌细胞系中RKIP的表达情况,探讨其与肺癌细胞侵袭、转移的关系。方法RT-PCR法检测多个人肺癌细胞系中RKIP的表达情况,构建表达人RKIP的融合蛋白,纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。ELISA鉴定血清特异抗体效价,Western blot鉴定血清特异抗体并检测肺癌细胞系中RKIP表达。结果成功构建表达人RKIP的融合蛋白,制备的多抗效价达到106,可特异检测细胞内RKIP表达;有转移性的3个肺癌细胞系中RKIP表达明显下调,且在转移性较高的A549细胞中下调更明显。结论获得了效价和特异性都良好的RKIP多抗,适合应用于RKIP的检测。RKIP表达下调与肺癌细胞侵袭、转移有关,有可能成为肺癌治疗的靶点。     

卵巢上皮癌中细胞外信号调节激酶的表达及其与预后的关系

目的: 探讨磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)在卵巢上皮癌组织中的表达及其与肿瘤患者预后之间的关系。方法: 应用Western印迹方法分别测定正常卵巢组织、良性卵巢组织和卵巢上皮癌组织中p-ERK的含量;收集卵巢上皮癌患者的临床资料;应用Kaplan-Meier法和Cox回归对卵巢上皮癌患者进行生存分析。结果: (1)卵巢上皮癌组织中的p-ERK含量明显高于良性卵巢组织和正常卵巢组织(P<0.01),Ⅲ~Ⅳ期卵巢上皮癌组织中p-ERK含量明显高于I~II期(P<0.01),良性卵巢组织中p-ERK含量与正常卵巢组织相比无显著差异(P>0.05);(2)低分化卵巢上皮癌组织中的p-ERK含量高于中、高分化(P<0.01);(3)在不同病理类型卵巢癌中,与浆液性卵巢上皮癌组织相比,未分化腺癌组织中p-ERK含量与其相仿(P>0.05),而黏液性卵巢上皮癌和卵巢子宫内膜样癌组织中p-ERK含量较低(P<0.05);(4)p-ERK含量与生存时间呈负相关,p-ERK含量高的卵巢上皮癌患者生存时间短;(5)卵巢上皮癌患者的生存时间与p-ERK含量、残余灶、肿瘤分期、肿瘤分级以及化疗的疗程有着密切关系(P<0.05),而与肿瘤的病理类型没有相关性(P>0.05)。结论: p-ERK可能是卵巢上皮癌发病机制一个重要的调节激酶;测定p-ERK水平可能对卵巢上皮癌患者预后有预测价值。     

抑制lncRNA LINC01503通过靶向调控miR-335-5p对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01503对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将人肺癌H1299细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01503组(转染si-LINC01503)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01503组(转染pcDNA-LINC01503)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-335-5p组(转染miR-335-5p mimics)、si-LINC01503+anti-miR-NC组(共转染si-LINC01503和anti-miR-NC)、si-LINC01503+anti-miR-335-5p组(共转染si-LINC01503和anti-miR-335-5p)、miR-NC+WT-LINC01503组(共转染miR-NC和WT-LINC01503)、miR-NC+MUT-LINC01503组(共转染miR-NC和MUT-LINC01503)、miR-335-5p+WT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和WT-LINC01503)和miR-335-5p+MUT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和MUT-LINC01503)。采用RT-qPCR检测miR-335-5p和LINC01503的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化;双萤光素酶报告基因实验验证LINC01503与miR-335-5p的靶向关系。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);与Ⅰ/Ⅱ期阶段相比,Ⅲ/Ⅳ期肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);LINC01503高表达的患者短期生存率显著低于LINC01503低表达的患者(P<0.05)。与正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,肺癌细胞系H1299、A549和SPC-A-1中miR-335-5p的表达水平显著降低,LINC01503的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-335-5p、抑制LINC01503表达均可抑制H1299细胞的活力、迁移和侵袭,抑制细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。LINC01503靶向调控miR-335-5p的表达,干扰miR-335-5p表达能逆转抑制LINC01503表达对H1299细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制lncRNA LINC01503表达可抑制肺癌细胞的活力、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR-335-5p有关。     

非小细胞肺癌组织SOX4基因突变分析

目的研究不同病理类型和病理分期的非小细胞肺癌组织中SOX4基因序列突变情况,探讨SOX4基因在肺癌发生过程中的作用。方法PCR扩增肺癌及癌旁组织SOX4基因HMG-box,并对经单链构象多态性分析有差异的20例病例进行测序。DNA及氨基酸序列比较利用Clustal和DNAStar软件。结果90例肺癌组织标本中,有18例发生碱基突变。其中,鳞癌有7例,腺癌5例,腺鳞癌混合型6例,对照的癌旁组织中未检测出突变。临床Ⅱ、Ⅲ期的突变率明显高于Ⅰ期。结论SOX4基因突变与肺癌肿瘤的病理类型无关,但与其病理分期有很大关系,提示SOX4基因突变可能与肺癌的发展和转移有某种关系,为探索SOX基因突变与人类肿瘤发生之间的关系提供了分子依据。     

P选择素在几种恶性肿瘤中表达的临床意义

研究P选择素在胃癌、肾癌、肺癌、胶质瘤及卵巢肿瘤中表达的临床意义。应用免疫组化LSAB法分别检测P选择素在上述肿瘤中的表达。结果显示P选择素在上述肿瘤中阳性表达率分别为胃癌 5 3 3% (32 / 60例 )、肾癌 5 5 % (11/ 2 0例 )、肺癌 5 4% (2 7/ 5 0例 )、胶质瘤 61 5 % (2 4/ 39例 )、卵巢恶性肿瘤 5 3 3% (16/ 30例 )。P选择素不仅在肿瘤血管内皮上表达 ,亦在肿瘤细胞膜上表达。胃癌患者P选择素阳性者平均生存期和 5年生存率显著低于阴性者。此外 ,III、IV期肿瘤患者P选择素阳性表达率显著高于I、II期患者。P选择素与上述肿瘤的浸润转移相关 ,并可能是一种新的肿瘤转移及预后指标。     

基于数据挖掘分析GPR35表达对肺腺癌预后的影响

研究数据挖掘分析GPR35表达对肺腺癌预后的影响,并明晰其参与的分析调控网络。方法 利用Oncomine数据库挖掘GPR35在肺腺癌组织中的表达情况;利用Kaplan-Meier Plotter进行肺腺癌患者生存周期分析;利用Coexpedia数据库分析GPR35参与的分子调控网络。结果 GPR35在人体正常组织中均有表达,其中胰腺组织和骨髓来源的CD33+细胞含量较高。相比于正常肺组织,GPR35基因在肺腺癌组织中呈现高表达,而在肺鳞癌以及大细胞肺癌中,未见明显变化。GPR35基因在肺腺癌组织中,男性患者相对于女性患者呈现高表达,而其表达在StageⅠ和StageⅣ均明显上调,且StageⅣ中GPR35的表达高于其他三期的患者;肺腺癌组织中存在EGFR L858R突变的患者,其GPR35的表达相对于无突变的患者明显上调。GPR35的表达水平对肺腺癌患者的总生存时间有着显著影响。与低表达组相比,GPR35高表达组肺腺癌患者的总存活时间降低（P＜0.05）;GPR35的表达水平对LUSC患者的总生存时间未见显著影响（P＞0.05）。GPR35参与多种肿瘤相关的分子调控网络。结论 大样本数据挖掘能迅速准确地获取肺腺癌组织中GPR35表达的相关信息,为深入研究奠定基础。     

Aberrant methylation and loss expression of RKIP is associated with tumor progression and poor prognosis in gastric cardia adenocarcinoma

Raf kinase inhibitory protein (RKIP) has been identified as a member of a novel class of molecules which implicated in cancer progression and suppress the metastatic spread of tumors. The aim of this study was to investigate the promoter methylation and expression of RKIP, determine the prognostic significance of RKIP in gastric cardia adenocarcinoma (GCA). MSP approach and immunohistochemistry methods were used respectively to examine methylation status and protein expression of RKIP in GCA tissues. The frequency of RKIP methylation in GCA tumor tissues (62.1 %) was significantly higher than that in corresponding normal tissues (4.1 %) and was associated with TNM stage, histological differentiation, depth of invasion, LN metastasis, distant metastasis or recurrence, and upper gastrointestinal cancers (UGIC) family history. Positive staining of RKIP in GCA tumor tissues (34.5 %) was significantly decreased than that in corresponding normal tissues (84.1 %) and was associated with RKIP methylation. RKIP may act as a tumor suppressor gene in GCA by regulation of the Raf-1/MEK/ERK signaling pathway. GCA patients in stage III and IV, with positive UGIC family history, and hypermethylation and down-expression of RKIP were most likely to develop metastatic disease and also showed the worse survival. RKIP methylation in GCA was an independent prognostic marker for survival using multivariate Cox regression analysis (P = 0.04). In all, aberrant hypermethylation of RKIP may be one of the mechanisms that lead to loss or down expression of the gene in GCA especially in individuals with UGIC family history. Additionally, hypermethylation and loss of RKIP expression may be used as a marker to predict clinical outcome of GCA.     

雷公藤甲素通过ERK通路诱导肺癌A549细胞自噬

目的:研究雷公藤甲素(tripchlorolide,TP)对肺癌A549细胞活力及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法:应用TP作用于肺癌A549细胞后,MTT法检测细胞活力;吖啶橙染色(AO)法在荧光显微镜下观察细胞自噬状态;GFP-LC3质粒转染实验观察细胞胞质中绿色点状聚集的自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况及有关的信号通路ERK蛋白水平的变化。结果:TP可以显著抑制肺癌A549细胞的增殖(P0.05),并呈一定的剂量-时间依赖关系。TP作用于肺癌A549细胞48 h后,细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多。GFP-LC3转染实验结果显示在100 nmol/L TP处理后,细胞胞质中出现绿色点状聚集的自噬小体,而正常培养组极少细胞有自噬小体形成;同时转染GFP-control质粒的细胞在100 nmol/L TP处理及正常培养条件下均未观察到点状聚集的自噬小体产生。TP作用于肺癌A549细胞48 h后,与对照组相比,100 nmol/L TP组LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.01),同时p-ERK/ERK蛋白水平也显著升高(P0.01);与100 nmol/L TP组相比,TP+3-MA组LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著下降(P0.01),同时p-ERK/ERK蛋白水平也显著下降(P0.01)。结论:TP可显著抑制肺癌A549细胞活力并诱导细胞发生自噬,这种作用可能与影响ERK的磷酸化有关。