丙泊酚经HIF-1α信号通路对头颈鳞状细胞癌SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的 探讨丙泊酚经HIF-1α信号通路对头颈鳞状细胞癌SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法 体外培养SCC-74细胞,丙泊酚低剂量组、丙泊酚中剂量组和丙泊酚高剂量组分别给予终浓度为2.5、10、20 μg/mL的丙泊酚,对照组给予等量DMEM培养液,继续培养48 h后收获细胞,检测SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭情况,同时检测SCC-74细胞中Akt、p-Akt、HIF-1α、Fas、FasL、Bcl-2、Bax蛋白和mRNA水平。结果 与对照组比较,各丙泊酚剂量组SCC-74细胞增殖率和侵袭数降低,细胞凋亡率增加(P＜0.05);与对照组比较,各丙泊酚剂量组SCC-74细胞中p-Akt蛋白、Bcl-2蛋白和mRNA水平降低,HIF-1α、Fas、FasL和Bax蛋白和mRNA水平增高,呈剂量依赖性(P＜0.05)。各组SCC-74细胞中Akt蛋白和mRNA水平无统计学差异(P＞0.05)。结论 丙泊酚通过激活HIF-1α信号通路,抑制SCC-74细胞增殖和侵袭,促进SCC-74细胞凋亡。     

瑞戈非尼联合哌立福辛诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨瑞戈非尼联合哌立福辛(AKT抑制剂)对人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。 方法 不同浓度瑞戈非尼(1、5、10、15、20、25 μmol/L)处理肝癌细胞后,通过CCK-8检测其细胞存活率;再设置不同浓度瑞戈非尼(0、5、10、20 μmol/L)处理肝癌细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡;用免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9的表达情况;设置哌立福辛组(10 μmol/L)、瑞戈非尼组(20 μmol/L)及双药联合组(哌立福辛10 μmol/L联合瑞戈非尼20 μmol/L),检测细胞凋亡及相关蛋白表达变化。 结果 从5 μmol/L浓度起,瑞戈非尼可剂量依赖性的抑制肝癌细胞增殖(P＜0.05);Bcl-2及p-AKT表达下调,Bax、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9表达上调(P＜0.05);瑞戈非尼和哌立福辛双药联合应用后,细胞凋亡率、Bax表达量明显增加(P＜0.05),Bcl-2、p-AKT表达量下降程度均较单独应用哌立福辛及瑞戈非尼明显(P＜0.05)。 结论 瑞戈非尼通过增加p21、p27、Bax、caspase-8、caspase-9的表达,减少Bcl-2、p-AKT的表达,来诱导肝癌细胞凋亡,并且瑞戈非尼与哌立福辛双药联合应用后,明显增加肝癌细胞凋亡率,为药物治疗肝癌提供新的理论基础和思路。     

NFATc1对人肺腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响

目的 探究NFATc1对肺腺癌NCI-H1299细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,以及NFATc1发挥作用的生物学机制。方法 通过Realtime PCR检测NFATc1在三种肺腺癌细胞系中的相对表达水平,利用慢病毒载体构建稳定敲减NFATc1的NCI-H1299细胞系。MTT检测NFATc1对细胞增殖能力的影响,平板克隆形成实验检测NFATc1对克隆形成能力的影响,Transwell检测NFATc1对细胞迁移和侵袭能力的影响,流式细胞术检测NFATc1对细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测NFATc1对凋亡、EMT相关蛋白和MAPK信号通路蛋白表达的影响。结果 肺腺癌NCI-H1299细胞系中NFATc1表达水平相对较高。沉默NFATc1表达可以显著抑制细胞增殖(P＜0.05)、克隆形成(P＜0.05)、迁移(P＜0.05)和侵袭(P＜0.05)能力,抑制细胞周期在G1期(P＜0.05),促进细胞凋亡(P＜0.05)。Bax、Cleaved caspase-3和E-Cadherin蛋白表达增加(P＜0.05),CDK4、c-Myc、ERK、p-ERK和N-Cadherin蛋白表达降低(P＜0.05)。结论 在人肺腺癌NCI-H1299细胞中抑制NFATc1表达,可以显著抑制细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制MAPK信号通路相关。     

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的：探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3（RBMS3-AS3）对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法：培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平,Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RBMS3）蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组（细胞正常培养）、si-RBMS3-AS3组（转染RBMS3-AS3小干扰RNA）、阴性序列组（转染乱序无意义阴性序列）、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组（共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA）和si-RBMS3-AS3+阴性序列组（共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列）,四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果：宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）,而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）。与对照组或阴性序列组相比,si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低（P < 0.05）,细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05）。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较,si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高（P < 0.05）,细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与上调RBMS3表达有关。     

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的：探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3（RBMS3-AS3）对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法：培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞，实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平，Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RBMS3）蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组（细胞正常培养）、si-RBMS3-AS3组（转染RBMS3-AS3小干扰RNA）、阴性序列组（转染乱序无意义阴性序列）、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组（共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA）和si-RBMS3-AS3+阴性序列组（共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列），四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell检测细胞侵袭能力，Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果：宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05），而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）。与对照组或阴性序列组相比，si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低（P < 0.05），细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05）。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较，si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高（P < 0.05），细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭，并促进细胞凋亡，这可能与上调RBMS3表达有关。     

甘草提取物的有效部位诱导人宫颈癌HeLa细胞株凋亡及对凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响

目的 研究甘草提取物的有效部位(GL)体外诱导HeLa细胞凋亡情况及对Caspase家族蛋白表达的调控,进一步阐明GL的抑癌机制。方法 将25 μg/mL的GL作用于HeLa细胞24 h后,采取MTT比色法,吖啶橙/溴乙锭荧光双染法,透射电子显微镜法,观察GL诱导HeLa细胞凋亡情况,并采用Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示,GL可以有效抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量-时间相关性。AO/EB双染色及透射电镜观察发现GL作用HeLa细胞24 h后,可见大量早期凋亡细胞。Western blot测定结果显示,药物组Pro-caspase-9蛋白表达量与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);Cleaved-caspase-3蛋白表达量高于对照组。结论 GL能够促进Caspase-3、Caspase-9酶原活化,具有体外诱导HeLa细胞凋亡的作用。     

基于槲皮素标记的金属有机框架放疗联合阿霉素诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的 探讨基于槲皮素(Quercetin,QU;3,3′,4′,5,7-五羟基黄酮)标记的金属有机框架(Zr metal organic frameworks,Zr-MOF)放疗(Radiation therapy,RT)联合阿霉素(Doxorubicin,DOX)对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法 将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、RT组、阿霉素处理组(Zr-MOF-DOX+RT)、QU处理组(Zr-MOF-QU+RT)及联合处理组(Zr-MOF-QU-DOX+RT);采用细胞克隆形成法检测各处理组HeLa细胞的增殖活性;蛋白印迹法及免疫荧光法检测各组细胞凋亡蛋白Caspase-3及缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达水平。结果 联合处理组细胞的增殖能力明显低于其他各组,差异具有统计学意义(P＜0.05);联合处理组HIF-1α蛋白表达量明显低于其他各组(P＜0.05),联合处理组Caspase-3蛋白的表达含量明显高于其他各组(P＜0.05)。结论 基于槲皮素标记的金属有机框架放疗联合阿霉素对HeLa细胞的抑制作用更显著,联合处理组通过上调凋亡蛋白Caspase-3及下调HIF-1α蛋白表达进而产生更强的抗肿瘤作用。     

ABL2在肺癌中的作用及机制研究

目的 探究ABL2在肺癌中的作用及其机制。方法 采用Realtime PCR方法检测ABL2在肺癌组织和癌旁组织中的表达情况。然后建立稳定低表达ABL2的肺腺癌A549细胞株;通过MTT、细胞迁移和克隆形成实验检测细胞增殖和迁移能力的变化情况;Western blot检测EMT、凋亡和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果 肺癌组织中ABL2的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.001)。在A549细胞系中沉默ABL2后,与对照组相比,48 h后细胞的迁移能力减弱(P＜0.001),从第3天开始细胞的生长速度开始明显减缓(P＜0.05),15天后形成的平均克隆数也减少(P＜0.01)。Western blot结果显示,沉默ABL2后上皮细胞标志物E-cadherin表达升高(P＜0.001),间质细胞标志物N-cadherin(P＜0.001)、Vimentin(P＜0.01)及Snail(P＜0.001)表达降低。凋亡相关蛋白Bcl-XL表达下降(P＜0.01),BAX表达上调(P＜0.001)。PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K P110(P＜0.05)、AKT(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)蛋白的表达都明显降低。结论 沉默ABL2基因能够通过PI3K/AKT信号通路促进细胞凋亡,抑制肺癌细胞的增殖和迁移。     

miRNA-409-3p表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响

目的 探讨微小RNA-409-3p(miRNA-409-3p)表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响。方法 将HeLa细胞分为正常对照组、NC对照组和miRNA-409-3p mimic组,RT-PCR法检测不同宫颈组织及转染miRNA-409-3p mimic后各组细胞中miRNA-409-3p mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测Fip200、LC3、Caspase-3蛋白的表达。结果 宫颈癌组织中miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平显著低于正常宫颈组织和癌旁组织(P＜0.05);通过转染miRNA-409-3p mimic后,miRNA-409-3p mimic组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组显著上调(P＜0.05),NC对照组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组无统计学差异(P＞0.05)。miRNA-409-3p mimic组HeLa细胞增殖率较正常对照组和NC对照组显著降低(P＜0.05)。给予顺铂干预后,miRNA-409-3p mimic组细胞增殖显著被抑制(P＜0.05);同时,miRNA-409-3p mimic组细胞中Fip200蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著低于正常对照组和NC对照组(P＜0.05)。结论 miRNA-409-3p在宫颈癌组织中低表达,可能与宫颈癌的发生发展有关,上调miRNA-409-3p水平可以抑制HeLa细胞增殖,增加HeLa细胞对顺铂的敏感性。     

新疆黑种草子总黄酮体外抗宫颈癌活性研究

目的：检测新疆民族药材黑种草子总黄酮的体外抗宫颈癌活性,并初步探讨新疆黑种草子总黄酮成分的体外抗肿瘤机制。方法：以宫颈癌细胞株SiHa和HeLa为实验对象,分为空白对照组和处理组（2.5、5、10、15、20、25、50 μg/mL）,使用MTT法检测不同浓度的黑种草子总黄酮体外对宫颈癌细胞株的抗增殖活性,最终确定有效药物浓度范围及半数抑制率（IC₅₀）,通过划痕实验检测其对宫颈癌细胞株的抗迁移作用,使用流式细胞术分别检测对照组和处理组宫颈癌细胞凋亡率。结果：与空白对照组相比较,黑种草子总黄酮处理组SiHa和HeLa细胞的增殖均受到抑制,并呈浓度依赖性,黑种草子总黄酮对SiHa细胞株的IC₅₀为16.935 μg/mL,对HeLa细胞株的IC₅₀为18.366 μg/mL。处理前后划痕宽度比较发现,SiHa细胞株空白对照组的肿瘤细胞相对迁移距离为（223.333±13.868）px,处理组的相对迁移距离为（56.333±10.970）px;HeLa细胞株空白对照组的肿瘤细胞相对迁移距离为（360.667±15.308）px,处理组的相对迁移距离为（13.000±3.606）px。黑种草子总黄酮处理可诱导SiHa和HeLa细胞发生凋亡,SiHa细胞株10、15、25 μg/mL组凋亡率分别为（8.5±0.5）%、（35.9±1.3）%、（85.7±1.6）%;HeLa细胞株10、15、25 μg/mL组凋亡率分别为（5.3±0.4）%、（11.4±0.8）%、（85.9±1.9）%,与空白对照组比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论：新疆黑种草子总黄酮在体外具有抗宫颈癌细胞增殖和迁移的药理活性,同时能够诱导宫颈癌细胞株发生凋亡。     

miR-362靶向Six1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的作用机制研究

目的 探讨miR-362靶向Six1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法 选取本院宫颈癌患者142例,测定宫颈癌组织及癌旁组织中miR-362的表达水平;同时设Hela癌细胞组、miR-362mimics组、miR-362inhibitor组,测定各组癌细胞活力、癌细胞单克隆形成数目、癌细胞凋亡率、细胞周期、穿膜孔数以及Hela宫颈癌液miR-362、Six1 mRNA水平。结果 宫颈癌组织中miR-362 mRNA表达水平低于癌旁组织(P＜0.05)。有淋巴血管间隙浸润、病理学分期越高、TNM分期越高、有淋巴结转移、浸润深度越深,miR-362mRNA表达率越低(P＜0.05)。miR-362mimics组OD值、存活率水平低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组OD值、存活率水平高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组克隆形成数目低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组克隆形成数目高于Hela癌细胞组、miR-362 mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组细胞凋亡率高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组细胞凋亡率低于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组G₁期高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组G₁期低于Hela癌细胞组、miR-362 mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组细胞穿膜数低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组穿膜数高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组miR-362 mRNA表达水平高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组miR-362 mRNA表达水平低于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组Six1 mRNA表达水平低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组Six1 mRNA表达水平高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。结论 miR-362在宫颈癌的发生和发展过程中发挥了肿瘤抑制作用;其机制与miR-362通过负调节Six1抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭有关。     

紫云英苷通过抑制HIF-1α诱导的糖酵解途径发挥抗卵巢肿细胞作用的研究

目的 探讨紫云英苷在2 D及3 D细胞培养条件下对人卵巢癌OVCAR-8细胞的增殖作用及其可能机制。方法 采用CCK-8试剂盒检测紫云英苷在2 D培养水平对OVCAR-8细胞增殖活力的作用;采用3 D细胞增殖活性检测试剂盒检测紫云英苷在3 D培养水平对OVCAR-8细胞增殖活力的作用;采用划痕实验检测紫云英苷对OVCAR-8细胞迁移能力的作用;采用凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平;采用Western blot法在2 D及3 D培养条件下检测紫云英苷对OVCAR-8细胞细胞凋亡相关蛋白Bcl2(B-cell lymphoma 2)、Bax(Bcl-2-associated X protein)和cleaved-caspase-3以及糖酵解相关蛋白Glut(Glucose transporter)1、Glut3、HK2(Hexokinase 2)、PDK(Pyruvate dehydrogenase lipoamide kinase)1、PDK3以及HIF(Hypoxia-inducible factor)-1α的蛋白表达水平的影响;采用ELISA试剂盒检测HK2活性。结果 4~100 μmol/L紫云英苷在2 D培养条件下对OVCAR-8细胞增殖均有抑制作用, 且呈剂量-时间依赖效应关系(P＜0.05);紫云英苷可在3 D培养条件下明显抑制OVCAR-8细胞增殖(P＜0.05);同时, 紫云英苷可明显抑制OVCAR-8细胞迁移能力。此外, 紫云英苷处理后细胞凋亡水平明显增高, 且紫云英苷处理在2 D及3 D培养条件下均可抑制Bcl2、Glut1、Glut3、HK2、PDK1和PDK3蛋白的表达, 增加Bax及cleaved-caspase-3蛋白水平并抑制3 D培养诱导的HIF-1α的蛋白表达, 此外, 紫云英苷在2 D 培养条件下可抑制HK2活性, 均呈一定的剂量依赖效应关系(P＜0.05)。结论 紫云英苷在2 D及3 D培养条件下对卵巢癌OVCAR-8细胞增殖均具有抑制作用。且可能通过抑制HIF-1α诱导的糖酵解通路以及激活线粒体凋亡通路。     

lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性T淋巴细胞白血病细胞增殖、侵袭的实验研究

目的 探讨lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性淋巴细胞白血病(T-acute lymphocytic leukemia,T-ALL)细胞增殖和侵袭的影响。方法 以2018年6月—2021年3月收治的57例T-ALL患者为观察对象(T-ALL组),另选55例同期健康体检者为对照组。qRT-PCR检测T-ALL组和对照组及T-ALL T淋巴细胞CCRF-CEM细胞株中lncRNA XIST水平;对CCRF-CEM细胞转染si-lncRNA XIST以沉默lncRNA XIST、转染miR-375模拟物以过表达miR-375;采用CCK-8法、Transwell侵袭实验法及流式细胞术检测CCRF-CEM细胞的增殖、侵袭及凋亡情况;荧光素酶报告基因方法检测lncRNA XIST靶基因;Western blot检测Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结果 与对照组比较,T-ALL组的lncRNA XIST、Notch1 mRNA表达明显增加(P＜0.05),而miR-375水平明显下降(P＜0.05),且T-ALL组患者Notch1蛋白水平明显高于对照组(P＜0.001)。转染si-lncRNA XIST沉默lncRNA XIST后,CCRF-CEM细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。荧光素酶报告基因显示miR-375是lncRNA XIST的靶点。CCRF-CEM细胞转染miR-375后,细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。转染si-lncRNA XIST可以明显上调miR-375水平、下调Notch1 mRNA水平,同时下调Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结论 lncRNA XIST在T-ALL患者中呈高表达,可能通过miR-375-Notch1轴影响白血病细胞生物学功能。     

丹参酚酸B调控ROS抑制大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡

目的 验证丹参酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)抑制人大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡,进一步通过活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)阐述其可能机制。方法 体外培养大肠癌细胞HCF-116,分成HCT-116组、HCT-116+H₂O₂组、HCT-116+SalB组、HCT-116+SalB+N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)组。分组干预后,采用MTT法检测细胞存活率、平板克隆实验检测细胞增殖、流式细胞术检测ROS含量、细胞周期及细胞凋亡率。结果 SalB对HCT-116细胞具有抑制作用,且在一定浓度范围内呈正相关(P＜0.01);SalB、H₂O₂促进HCT-116细胞内ROS生成(P＜0.01),ROS清除剂NAC预处理可清除由SalB产生的ROS(P＜0.01);SalB抑制HCT-116细胞增殖(P＜0.01)并促进其凋亡(P＜0.01),该作用可被NAC部分逆转(P＜0.05);SalB引起HCT-116细胞G0/G1周期阻滞(P＜0.01),NAC预处理完全逆转SalB导致的周期阻滞(P＜0.05)。结论 SalB可通过增加HCT-116细胞内ROS水平引起细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,并促进其凋亡。     

miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 观察miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞(GSCs)生物学行为的影响,并研究其作用机制.方法 成功从胶质瘤患者病灶组织中分离出GSCs并予以培养、传代及鉴定,分为空白对照组(生理盐水溶液)、miR-182 mimics组(细胞转染miR-182 mimics)及阴性对照组(细...     

miR-182对直肠癌细胞增殖、侵袭及Foxo3a/Wnt/β-catenin通路的调节作用

目的 研究miR-182对直肠癌细胞增殖、侵袭及Foxo3a/Wnt/β-catenin通路的调节作用。方法 收集2016年6月—2019年7月手术切除的直肠癌组织及癌旁组织,培养直肠癌细胞株HT29、SW620、HCT-116及正常肠上皮细胞HIEC,检测miR-182的表达量。将SW620细胞进行分组处理,对照组用不含药物的RPMI-1640培养基处理,NC组转染NC模拟物、miR-182组转染miR-182模拟物。采用MTS法检测各组细胞增殖活力,采用Transwell检测侵袭活力,采用Western blot检测Foxo3a/Wnt/β-catenin通路分子的表达。结果 直肠癌组织中miR-182的表达量(2.14±0.55)明显高于癌旁组织(1.06±0.24)(P＜0.05);HT29、SW620、HCT-116细胞中miR-182的表达量明显高于HIEC(P＜0.05),且SW620细胞中miR-182表达增加最显著;miR-182组细胞的增殖活力(0.92±0.15)明显高于对照组(0.52±0.08)和NC组(0.55±0.07)(P＜0.05),侵袭数目(39.49±7.61)明显多于对照组(23.25±5.85)和NC组(21.84±4.77)(P＜0.05),迁移数目(44.12±9.29)明显多于对照组(29.39±6.18)和NC组(32.83±6.68)(P＜0.05);Foxo3a的表达水平(0.36±0.07)明显低于对照组(0.83±0.15)和NC组(0.86±0.12)(P＜0.05);Wnt2的表达水平(0.86±0.15)明显高于对照组(0.62±0.09)和NC组(0.58±0.07)(P＜0.05);β-catenin的表达水平(0.79±0.15)明显高于对照组(0.41±0.07)和NC组(0.45±0.08)(P＜0.05)。结论 miR-182能够促进直肠癌细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向Foxo3a/Wnt/β-catenin通路相关。     

m白术内酯Ⅰ通过TLR4/MyD88通路调控肺癌A549细胞增殖侵袭的研究

目的 探究白术内酯Ⅰ在肺癌进程中的作用及分子机制。方法 用qRT-PCR和免疫组化实验检测肺癌组织和癌旁组织中TLR4及MyD88的mRNA和蛋白的表达;Transwell侵袭实验及MTT实验检测白术内酯Ⅰ(100 μM/L)对A549细胞侵袭、增殖能力的影响;Western blot检测白术内酯Ⅰ对TLR4及MyD88蛋白表达的作用。结果 qRT-PCR及免疫组化结果显示,相对于癌旁组织,TLR4及MyD88的mRNA和蛋白在肺癌组织中高表达(P＜0.05);与对照组相比,白术内酯Ⅰ处理组A549细胞侵袭能力显著下降,增殖活力显著抑制(P＜0.05);Western blot结果显示,白术内酯Ⅰ抑制TLR4及MyD88蛋白表达水平(P＜0.05)。结论 白术内酯Ⅰ通过抑制TLR4/MyD88通路抑制肺癌A549细胞侵袭转移。     

癌源性外泌体对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的 探究乳腺癌细胞来源的外泌体对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响。方法 使用超速离心法对人乳腺癌MCF-7细胞培养液中的外泌体进行提取和纯化,通过透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小,Western blot实验鉴定外泌体的标志蛋白。以外泌体与MCF-7细胞共培养48 h后的细胞为实验组,以未处理的MCF-7细胞为对照组。用MTT法、克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、流式细胞术实验和Western blot实验检测乳腺癌源性外泌体对MCF-7细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭、凋亡及上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响。结果 透射电子显微镜下外泌体的形状为典型的杯托状或者凹的半球状结构,直径40~110 nm;Western blot实验结果显示外泌体标志性蛋白CD9及CD81均明显表达;MTT和克隆形成实验结果显示,实验组细胞增殖及克隆形成能力较对照组明显增强(P＜0.05);划痕实验和侵袭实验结果显示,与对照组相比,实验组细胞迁移及侵袭能力明显增强(P＜0.001);流式细胞术分析显示,在外泌体刺激的乳腺癌细胞中,凋亡细胞的百分比显著低于对照组(P＜0.05);Western blot结果显示,乳腺癌来源的外泌体增加了N-cadherin和Vimentin的表达,降低了E-cadherin表达,促进了乳腺癌EMT过程(P＜0.05)。结论 乳腺癌细胞来源的外泌体能增强肿瘤细胞的细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,促进乳腺癌EMT过程,并抑制肿瘤细胞凋亡。表明肿瘤来源外泌体可能作为细胞间信号转导的介质,在促进肿瘤生长和转移的信息传递方面发挥重要作用。