干扰素-γ诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞表达细胞黏附因子-1和干扰素-γ受体α

目的 以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)为研究对象,探讨干扰素-γ(IFN-γ)对于体外培养的RIMMVECs表达细胞黏附因子-1(ICAM-1)和IFN-γ受体α(IFN-γRα)的影响.方法 体外分离培养RIMMVECs,用不同浓度的IFN-γ对所培养的RIMMVECs进行诱导,通过荧光定量RT-PCR法和流式细胞术,从mRNA和蛋白水平检测活化后的RIMMVECs表达ICAM-1和IFN-γRα的情况.结果 浓度为20 μg/L和40 μg/L的 IFN-γ可以激活RIMMVECs,在mRNA和蛋白水平均能提高ICAM-1的表达,并且6 h时达到高峰;20 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs后,可使其上调表达IFN-γRα mRNA,但是蛋白表达量却随着刺激时间逐渐降低;而40 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs 2 h后,IFN-γRα mRNA 达到峰值,6 h之后,其表达量呈下降趋势,IFN-γRα蛋白浓度也随之逐渐降低;10 μg/L的IFN-γ对于ICAM-1和IFN-γRα的表达无影响.结论 IFN-γ可能是通过影响微血管内皮细胞(MVECs)表面IFN-γRα分子和ICAM-1的表达,从而调控和参与细胞免疫反应和炎症反应.     

T细胞干扰素-γ及其受体与实验性重症肌无力大鼠发病的相关性研究

重症肌无力(myasthenia gravis, MG)是一种由乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor, AChR)抗体介导的自身免疫性疾病,其抗体的产生受诸多细胞因子的调节[1,2].本文应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay, ELISA)和免疫组织化学的方法,初步探讨T细胞干扰素-γ(IFN-γ)及其表面IFN-γ受体(IFN-γR)的表达与实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)大鼠发病的相关性.     

γ-干扰素抗体对早期流产大鼠γ-干扰素、白细胞介素-2、白细胞介素-4的表达及滋养层细胞凋亡的影响

目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)抗体对孕鼠早期流产的影响及其机制.方法:实验孕鼠随机分成流产模型组、IFN-γ抗体组、流产模型+ IFN-γ抗体组及正常对照组.酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清IFN-γ、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)水平,免疫组织化学检测子宫蜕膜组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达,Hoechst 33342荧光染色检测滋养层细胞凋亡情况.结果:血清测定数据显示,流产模型组IFN-γ、IL-2水平高于正常对照组,IL-4水平低于正常对照组;流产模型+IFN-γ抗体组IFN-γ、IL-2水平低于流产模型组,高于IFN-γ抗体组;IL-4水平高于流产模型组,低于IFN-γ抗体组.免疫组织化学Bcl-2和Bax蛋白阳性产物光密度值比值(Bax/Bcl-2)流产模型+IFN-γ抗体组低于流产模型组.结论:大鼠血清中3种细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4表达的改变及滋养层细胞凋亡可能是流产发生的重要因素.应用IFN-γ抗体可降低孕鼠IFN-γ、IL-2水平,升高IL-4水平,抑制滋养层细胞的凋亡,从而使流产率降低.     

γ-干扰素对结核性胸膜炎辅助诊断价值的比较

目的检测结核性胸膜炎及恶性胸膜炎患者胸液的γ-干扰素水平,探讨对结核性胸膜炎诊断的临床价值。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测32例结核性胸膜炎、28例恶性胸膜炎患者胸液γ-干扰素水平。结果结核性胸膜炎患者胸液中含量(430.5±30.87pg/ml)明显高于恶性胸膜炎组(45.6±18.6pg/ml)(<0.01),γ-干扰素作为诊断结核性胸膜炎的敏感性、特异性、准确性分别为100.0%、92.5%、96.8%。结论检测胸液中γ-干扰素对诊断结核性胸膜炎有较大的辅助意义。     

γ干扰素cDNA在胃癌细胞中的表达研究

实验用构建的正向连入人ＩＦＮ－γｃＤＮＡ片段的重组表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－γ－ＩＦＮ，以Ｌｉｐｏ－ｆｅｃｔｉｎ介导法将重组载体转染入胃癌细胞７９０１中，挑选出Ｇ４１８抗性克隆，地塞米松诱导其分泌ＩＦｔＩ－γ经活性测定筛选出高分泌ＩＦＮ－γ的细胞株ＲＰＭ７９０１－７（１７２５ＩＵ／ｍｌ），Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实ＩＦＮ－γｃＤＮＡ确已导入该细胞株中。体外培养过程中，ＲｐＭ７９０１细胞与转染了对照质粒ｐＭＡＭｎｅｏ的细胞ｐＭ７９０１及野生型７９０１细胞在形态，生长能力等方面无明显差别，而经地塞米松诱导的ＲpＭ７９０１细胞则与之有显著差异。裸鼠体内接种显示，经诱导的ＲｐＭ７９０１细胞在致瘤性上显著低于野生型７９０１细胞及ｐＭ７９０１细胞。经基因转移后可高分泌ＩＦＮ－γ的肿瘤细胞为肿瘤的基因治疗提供了资料。     

5-氟脲嘧啶与γ-干扰素作用于Lovo细胞的实验观察

目的观察5-氟脲嘧啶与γ-干扰素联合应用对人结肠癌Lovo细胞株的影响。方法采用Lovo结肠癌细胞体外培养,流式细胞仪检测细胞生长、增殖和凋亡的变化。结果 5-氟尿嘧啶与γ-干扰素联合应用后,细胞增殖率下降指数为0.82～1.99,而细胞凋亡率增加指数为2.48～4.89。结论 5-氟尿嘧啶与γ-干扰素联合应用可降低肿瘤细胞的增殖和提高肿瘤细胞的凋亡。     

γ-干扰素受体在山羊颈动脉体的表达

目的:检测γ-干扰素受体(IFNGR)在雌性山羊颈动脉体中是否存在,探讨γ-干扰素(IFN-γ)是否可以影响山羊颈动脉体的活动。方法:采用免疫组织化学SP法,观察IFNGR在山羊颈动脉体内的分布特点;利用IPP 6.0图像半定量分析系统分析IFNGR在颈动脉体实质细胞和非实质细胞上的表达量差异。结果:在颈动脉体内IFNGR免疫阳性产物广泛分布,在Ⅰ型细胞、Ⅱ型细胞、血管内皮细胞和神经纤维均有不同程度的阳性染色。IFNGR强阳性产物分布在实质细胞(Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞)中;中等或强阳性产物分布在颈动脉体小叶间的血管内皮细胞中;弱阳性产物分布在小叶内的血管内皮细胞中;图像分析表明,IFNGR在实质细胞的相对表达量与非实质细胞结构相比差异有统计学意义。结论:颈动脉体的实质细胞(Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞)可能是IFN-γ作用的主要靶细胞,提示IFN-γ可能通过位于颈动脉体的Ⅰ、Ⅱ型细胞上的IFNGR,影响Ⅰ、Ⅱ型细胞对动物机体血液中的化学信息的感知和传递,实现IFN-γ对心血管功能的调节。     

大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的 原核表达大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10,并对其进行鉴定。方法 从大鼠脾细胞中提取RNA,用RT-PCR方法得到IP-10cDNA,双酶切将其插入pET-32a（＋）载体中。重组质粒pET-32a（＋）-IP-10经酶切、PCR及测序鉴定后转化大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。结果 所获得的大鼠IP-10克隆,经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS-PAGE和Westem blot分析获得证实。结论 已成功构建原核表达载体pET-32a（＋）-IP-10,并使其在大肠杆菌中获得了融合表达。     

内毒素和γ-干扰素对鼠巨噬细胞胆固醇清除受体-β类I型表达的影响

目的 :探讨内毒素、γ 干扰素对鼠巨噬细胞胆固醇清除受体 β类I型 (SR β1 )表达及功能的影响。 方法 :采用Northernblot及蛋白质免疫印迹法测定经内毒素和干扰素处理后的巨噬细胞SR β1受体在mRNA转录及蛋白翻译水平的表达。结果 :用内毒素处理巨噬细胞 8h可使SR β1受体在mRNA转录及蛋白翻译水平均下调 ( 5 4%和5 3 % ) ,而干扰素则可使之下调 5 7%和 5 4% ,并呈现浓度依赖性和时间依赖性。结论 :( 1 )内毒素、干扰素在mRNA和蛋白双重水平下调SR β1的表达 ,明显降低SR β1调节胆固醇代谢的作用。 ( 2 )内毒素通过降低SR β1的表达及功能 ,在动脉粥样硬化过程中起着不可忽视的作用。     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。     

硫化氢对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α含量的影响

目的实验研究硫化氢(H2S)对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,探讨H2S在烧伤大鼠肠道黏膜屏障功能中发挥的作用。方法将104只健康雄性SD大鼠随机分为烧伤组(96只)和正常对照组(8只),其中烧伤组又分为单纯烧伤组(n=32)、炔丙基甘氨酸(PPG)干预组(n=32)、硫氢化钠(NaHS)干预组(n=32)。各烧伤组分别于伤后2d、7d、14d、21d四个时相点取8只SD大鼠回肠组织,匀浆后取上清液用ELISA方法检测各组大鼠肠道组织中IFN-γ、TNF-α的含量变化情况。正常对照组适应性饲养1周后取回肠组织,检测IFN-γ、TNF-α的含量。结果与正常对照组相比,单纯烧伤组、NaHS干预组、PPG干预组各时相点TNF-α和IFN-γ水平均明显升高(P<0.05),在烧伤后2d TNF-α水平最高,烧伤后14d IFN-γ水平达到最高值,之后呈逐渐下降趋势。NaHS干预组各时相点TNF-α水平较单纯烧伤组均明显降低(P<0.05),而IFN-γ水平明显升高;PPG干预组各时相点TNF-α水平较单纯烧伤组均升高,差异有统计学意义(P<0.05),而IFN-γ均降低。结论 H2S可以显著降低烧伤大鼠肠道组织TNF-α水平,升高IFN-γ的水平,表明H2S可减轻肠道炎性反应,保护肠道黏膜屏障作用,为烧伤后应用外源性H2S加强肠道黏膜屏障功能提供了新思路。     

鸡干扰素-γ抗球虫作用研究进展

干扰素-γ（IFN-γ）是一种重要的细胞因子,主要由T细胞、NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和双向免疫调节作用。重组鸡干扰素-γ（rChIFN-γ）已被证明与鸡球虫病的免疫有关。本文就鸡干扰素-γ（ChIFN-γ）的生物学特性及其抗球虫作用的研究进展作一综述。     

小鼠γ-干扰素真核表达质粒的构建和鉴定

目的克隆小鼠γ-干扰素(γ-IFN)基因,构建并鉴定小鼠γ-干扰素真核表达质粒.方法从BALB/c小鼠脾脏提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出小鼠γ-干扰素基因, 分别用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切扩增片段和pcDNA3.1(-),定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(-),构建成真核表达质粒pcDNA3.1(-)γ-IFN.转化产物通过PCR扩增筛选,双酶切鉴定;阳性克隆进行序列分析.结果 RT-PCR产物电泳可见一约500bp大小目的片段.PCR和双酶切电泳结果均证实已插入约500bp的γ-IFN基因片段;阳性克隆测序结果表明克隆的小鼠γ-干扰素基因完全正确.结论成功构建了小鼠γ-干扰素真核表达质粒,为进一步气道内实施哮喘小鼠基因治疗打下了坚实基础.     

不同类型动脉粥样硬化病人血清中白细胞介素17及γ-干扰素表达的分析

目的研究动脉粥样硬化患者体内白细胞介素17（interleukin 17,IL-17）及γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）的水平与动脉粥样硬化疾病的严重程度的关系。方法收集2016年黑龙江省医院心内科住院的37例患者,将病人分成急性冠脉综合征组与慢性冠脉病患者组,分析两组病人的年龄、性别,危险因素分布情况,并对这两组病人血清中IL-17与IFN-γ水平进行检测。结果分析表明急性冠脉综合征和慢性冠脉病两组患者在年龄、性别、冠心病危险因素方面的情况差异,均无统计学差异（P〉0.05）;对不同组别间IL-17及IFN-γ因子表达情况分析显示,急性冠脉综合征组患者与正常组相比IL-17表达明显降低[（22.19±5.02）pg/mL比（44.90±9.41）pg/mL],IFN-γ明显升高[（7.48±3.60）pg/mL比（5.30±0.71）pg/mL]而慢性冠脉病组与正常组相比IL-17和IFN-γ差异均无统计学意义（P〉0.05）;急性冠脉综合征患者血清中IL-17与IFN-γ因子相关性分析结果显示两者间具有负相关的趋势（r＝－0.69）。结论血清IL-17水平可随冠心病病情严重程度而降低,对评价不同类型动脉粥样硬化具有诊断价值。     

γ-干扰素联合结核蛋白芯片对肺结核的诊断价值

目的：探讨γ-干扰素联合结核蛋白芯片对肺结核患者的临床诊断的意义。方法收集本院2013年7月~2014年2月72例确诊肺结核患者的血清,检测γ-干扰素、结核蛋白芯片,评价两者在肺结核诊断中的应用价值。结果肺结核患者中,结核蛋白芯片的阳性率为62.5%(45/72),γ-干扰素的阳性率为88.9%(64/72),两者联合的阳性率为97.22%(70/72),与单项检测的阳性率相比差异均有统计学意义(<0.05)。结论γ-干扰素联合结核蛋白芯片能够提高肺结核患者阳性检出率。     

干扰素-γ对脂肪间充质干细胞免疫调节相关基因表达的影响

目的探讨IFN-γ对脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)免疫调节相关基因表达的影响。方法体外分离培养ADSCs,应用流式细胞术对3代细胞表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和HLA-DR进行检测;并将细胞置于骨和脂肪诱导分化培养基中进行诱导分化,检测其多向分化潜能。实验分为正常对照组和IFN-γ处理组(IFN-γ浓度1000 u/ml),处理24h后,通过实时定量PCR方法检测各组细胞免疫调节、趋化因子、粘附分子以及生长因子相关基因的表达情况。结果 IFN-γ处理后,显著上调2种免疫调节因子基因(IDO-1和HLA-G5)在ADSCs表达水平,显著上调2种粘附分子基因(ICAM-1和VCAM-1)表达水平,显著上调3种趋化因子基因(CXCL9、CXCL10和CXCL11)表达水平(0.01)。结论 IFN-γ刺激可以上调ADSCs部分免疫调节因子、粘附分子和趋化因子基因表达,对生长因子基因表达影响不大。     

γ-干扰素对大鼠胚胎基底前脑及隔区核团胆碱能神经元分化的影响

为了研究γ-干扰素(IFNγ)对大鼠胚胎基底前脑及隔区核团胆碱能神经元分化的作用,采用免疫组织化学方法对胆碱能神经元的特异性标记酶-胆碱乙酰基转移酶(ChAT)进行染色,ChAT阳性细胞的数量反映了胆碱能神经元的数量,并用14C-乙酰CoA作底物来检测ChAT活性。结果显示,IFNγ处理过的实验组,ChAT阳性细胞数量显著增加,ChAT活性也增加,这种增加被大鼠抗小鼠IFNγ单克隆抗体(Ab-IFNγ)完全拮抗。采用流式细胞术对细胞周期进行分析,细胞周期及细胞百分率无明显改变。用MAP2标记神经细胞,神经细胞数基本未增加。以上结果提示:IFNγ不能促进基底前脑和隔区神经元增殖,胆碱能神经元表达增加不是因为神经元数目增加而是分化的结果。     

干扰素γ对实验性大鼠肺纤维化、肺组织干扰素γ和转化生长因子β表达的影响

目的：研究干扰素γ（IFN-γ）对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化实验模型肺泡炎和肺纤维化的影响,并探讨其对肺纤维化影响的可能机制。方法：60只SD大鼠随机分为正常对照组（N组）、模型对照组（M组）和干扰素γ组（R组）,每组各20只大鼠。于造模后3、7、14、28天分批处死动物,留取肺组织,观察肺泡炎和肺纤维化的程度,测定肺组织中的羟脯氨酸含量、IFN-γmRNA、转化生长因子β（TGF-β）mRNA的表达。结果：M组、R组大鼠肺泡炎3、7、14、28天均较N组严重,7天时最重,R组14天时肺泡炎显著高于M组;M组、R组肺纤维化评分及肺羟脯氨酸含量14、28天均高于N组,于28天最重;R组肺组织IFN-γmRNA表达3、7、14、28天均显著高于M组;R组肺组织中TGF-βmRNA表达在3天显著高于M组（P〈0.05）。结论：在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化早期给予干扰素γ并不能减轻肺部炎症和肺纤维化,可能与其促进肺组织IFN-γ、TGF-β基因表达有关。     

流产模型大鼠卵巢黄体γ-干扰素、白介素-4的表达及与流产相关性

目的:研究γ-干扰素(IFN-γ)及白介素-4(IL-4)等细胞因子在流产过程中发挥的作用及其机制.方法:实验孕鼠随机分为正常孕组、流产模型组、流产模型+IFN-γ抗体组.均于孕12d剖腹观察妊娠结局并取材,酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清IFN-γ、 IL-4水平,免疫组织化学技术检测卵巢黄体IFN-γ、 IL-4蛋白表达情况.结果:血清测定数据显示,流产模型组IFN-γ水平高于正常孕组,IL-4水平低于正常孕组;流产模型+IFN-γ抗体组IFN-γ水平低于流产模型组,IL-4水平高于流产模型硎组.免疫组织化学阳性细胞光密度值变化趋势与血清测定结果基本一致.结论:IFN-γ、 IL-4与流产具有相关性,大鼠血清与卵巢黄体中两种细胞因子表达的改变可能是流产发生的重要因素之一.