强的松对小儿原发性肾病综合症患者PBMC HLA表达的调节作用

目的: 初步探讨糖皮质激素对外周血单个核细胞(PBMC)人类白细胞抗原(HLA)表达的调控作用.方法: 肾病综合征(NS)患儿PBMC体外经IFN-γ联合PHA 刺激诱导活化,用不同浓度强的松干预,采用流式细胞术检测其PBMC组成性、活化后和强的松处理后HLA-Ⅰ/Ⅱ类分子和HLA-DR7分子的表达量并与正常对照组进行分析比较.结果: (1)体外培养NS患儿及正常人PBMC组成性表达HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子和HLA-DR7分子,且NS患儿高于正常人(尤以HLA-Ⅱ类分子突出,为正常人的11.78倍,P＜0.01);(2)体外经 IFN-γ联合PHA活化后HLA-Ⅰ/类分子和DR7分子表达增加(P＜0.01);(3)经不同浓度强的松处理后,HLA-Ⅰ/类分子和DR7分子比活化后表达减少(P＜0.01);(4)经不同浓度强的松预处理后,与活化组比较HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子和HLA-DR7表达减少(P＜0.01),对NS患儿的抑制率要高于正常人,并且HLA-Ⅱ类分子表达的抑制作用表现出剂量依赖性(P＜0.01).结论: NS患儿体内存在异常活化的T细胞;糖皮质激素对IFN-γ诱导活化的PBMC HLA表达有抑制作用.     

肿瘤坏死因子-β对重型再生障碍性贫血患者效应T细胞损伤骨髓造血的影响

目的:研究肿瘤坏死因子-β(TNF-β)对重型再生障碍性贫血(SAA)患者效应T细胞(CD8+HLA-DR+T细胞)损伤骨髓造血的影响,探讨TNF-β在SAA免疫发病中的作用。方法:以免疫磁珠阳性分选15例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞作为效应细胞,以阴性分选去除15名正常人骨髓单个核细胞中CD3+T细胞后作为靶细胞,两者混合培养,于体系中分别加入不同浓度TNF-β(终浓度分别为0、15、25、50 ng/ml)为实验组,并设空白对照组,孵育72小时后,通过流式细胞术以Annexin V检测靶细胞凋亡状况,采用ELISA法测定培养上清液IL-10、IFN-γ水平。结果:空白对照组及3个实验组细胞凋亡比例分别为(49.85±20.33)%、(51.65±20.34)%、(55.94±20.19)%、(57.72±19.45)%,TNF-β终浓度为50 ng/ml组及25 ng/ml组均明显高于空白组和15 ng/ml组细胞凋亡比例(P<0.05),但空白组与15 ng/ml组,25 ng/ml组与50 ng/ml组细胞凋亡比例无显著差异(P>0.05)。空白对照组及各实验组培养上清IL-10浓度分别为(217.99±29.47)ng/ml、(216.47±29.00)ng/ml、(212.15±13.19)ng/ml、(218.01±28.61)ng/ml,各组差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-β终浓度50 ng/ml组培养上清IFN-γ水平[(593.50±48.18)ng/ml]明显高于空白对照组[(544.85±69.77)ng/ml],15 ng/ml组[(567.38±74.51)ng/ml]、25 ng/ml组[(544.05±79.69)ng/ml](P<0.05)。结论:TNF-β能增强SAA患者效应T细胞诱导骨髓造血细胞凋亡,并呈浓度依赖性;高水平的TNF-β可能还促进SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞分泌IFN-γ,两者具有协同细胞毒作用。     

干扰素γ与抗CD20单克隆抗体对骨髓瘤细胞增殖影响的体外研究

目的：体外研究干扰素γ能否增加多发性骨髓瘤(MM)瘤细胞表面CD20的表达、增强抗CD20单克隆抗体美罗华抗骨髓瘤的作用。方法：将浓度为(0～800)U／ml的重组人干扰素γ(hrγ-IFN)，联合浓度为(0～20)U／ml的美罗华，分别与14例初治(初治组)和16例复发难治(难治组)的MM患者瘤细胞在半固体甲基纤维素培养体系中培养，观察它们对瘤细胞集落形成的影响，并用流式细胞仪测定上述不同浓度hrγ-IFN处理前后瘤细胞表面CD20的表达。结果：hrγ-IFN浓度分别≥50 U／ml或≥100 U／ml可明显增加初治组或难治组瘤细胞表面CD20的表达；单用≥50 U／ml或≥100 U／ml的hrγ-IFN对初治组或难治组瘤细胞集落形成有抑制作用，而单用≥16 U／ml的美罗华只对初治组瘤细胞集落形成有轻度抑制；≥50 U／ml的hrγ-IFN联合≥12 U／ml的美罗华，或≥100 U／ml的hrγ-IFN联合≥16 U／ml的美罗华，对初治组或难治组瘤细胞集落形成的抑制大于单用同浓度的hrγ-IFN或美罗华。结论：体外hrγ-IFN能抑制MM瘤细胞集落形成，并可通过增加瘤细胞表面CD20的表达而增强美罗华对瘤细胞集落形成的抑制作用。     

尼莫地平调控IRS-1对人脑血管外膜成纤维细胞活力和凋亡的影响

目的：探讨尼莫地平对人脑血管外膜成纤维细胞活力、凋亡的影响及其对胰岛素受体底物-1(IRS-1)的调控机制。方法：体外培养人脑血管外膜成纤维细胞,分为NC组、IFN-α组和共同处理组,其中共同处理组分别采用不同浓度（50、100、200μg/ml）的尼莫地平与IFN-α共同处理人脑血管外膜成纤维细胞,分别记作IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR与Western blot分别检测IRS-1表达;分别将pcDNA、pcDNA-IRS-1转染至细胞,分别将si-con、si-IRS-1转染至细胞随后采用尼莫地平处理细胞,采用上述方法检测细胞活力及凋亡率。结果：NC组、IFN-α组、IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组72 h时细胞活力分别为1.16±0.09、0.71±0.07、0.88±0.06、0.96±0.08、1.03±0.11;细胞凋亡率分别为（3.5...     

右美托咪定通过cGAS-STING通路介导的免疫调控机制对胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的：探究右美托咪定（DEX）通过环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合酶-干扰素基因刺激因子（cGAS-STING）通路介导的免疫调控机制对胃癌（GC）细胞恶性生物学行为的影响。方法：将GC细胞株MGC-803随机分为对照组（Control组,空白培养基处理）、DEX低浓度组（DEX-L组,1 ng/ml）、DEX中浓度组（DEX-M组,10 ng/ml）、DEX高浓度组（DEX-H组,100 ng/ml）和DEX高浓度+cGAS抑制剂RU.521组（DEX-H+RU.521组,100 ng/ml DEX+1.0μmol/L RU.521）。CCK-8法检测细胞增殖情况。细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力。Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡率。ELISA检测细胞中IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞cGAS、STING、Ⅰ型干扰素（IFN-Ⅰ）mRNA的表达水平。Western blot检测细胞cGAS、STING、Bax、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP9...     

IFN-γ诱导人单核细胞MICs分子表达

目的：研究IFN-γ对MHC—I类链相关分子（MICs）表达的调节作用。方法：采用密度梯离离心法分离人外周血单个核细胞（PBMC），以免疫磁珠法从PBMC中特异性分选单核细胞，以细胞因子IFN-γ、TNF-α或IFN—α刺激PBMC、纯化单核细胞或单核细胞系U937、THP-1后，以流式细胞术检测单核细胞表面MICs分子表达。结果：IFN-γ选择性上调人PBMC中单核细胞表面MICs表达；IFN-γ对人原代单核细胞及单核细胞系U937、THP-1细胞表面MICs分子表达均有诱导或上调作用，细胞因子TNF—α、IFN—α对单核细胞MICs分子表达无影响。IFN-γ诱导或上调表达的MICs分子不能被MICA或MICB特异性单克隆抗体（mAb）所识别，可能是一种新的MIC分子或MIC等位基因。结论：IFN-γ能诱导或上调人单核细胞表面MICs分子表达。     

腺病毒介导的mPPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达

目的：观察腺病毒介导的mPPARγ1转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达。方法：构建表达小鼠PPARγ1基因的复制缺陷型腺病毒表达载体；将融合80%的ECV304细胞给予不同刺激量（1×104 U/L、5×104 U/L、1×105 U/L和2×105 U/L）的IFN-γ干预；将IFN-γ（1×105 U/L）预刺激并孵育 24 h 的ECV304细胞分成对照组（C）、PPARγ基因过度表达组(P)、PPARγ活化剂曲格列酮干预组(T)以及PPARγ基因过度表达和曲格列酮共刺激组(PT)进行干预，观察不同剂量IFN-γ对ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达的作用，以及PPARγ基因过度表达和/或活化对上述作用的影响。结果：正常ECV304细胞galectin-9基因表达弱。IFNγ孵育24 h后， ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达增加，且galectin-9表达与IFN-γ具有量效关系。PPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导galectin-9基因/蛋白表达，曲格列酮对上述作用无影响；PPARγ1基因转染和曲格列酮共刺激抑制IFN-γ诱导galectin-9基因/蛋白表达与单一PPARγ1基因转染效应相似。正常ECV304细胞PPARγ表达量低，而PPARγ基因过表达和活化不影响内源性PPARγ基因表达。结论：PPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因/蛋白表达可能是PPARγ基因发挥免疫调控作用的一个重要机制。     

15d-PGJ2对肾小管上皮细胞CD40及RANTES表达的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂15d-PGJ2对干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）CD40和RANTES表达的影响。方法：体外培养人近端肾小管上皮细胞株，分组如下：（1）正常对照组；（2）IFN-γ（50μg／ml）组；（3）TNF-α（10ng／ml）组；（4）IFN-γ（50μg/ml）＋TNF—α（10ng／ml）组；（5）IFN-γ（50μg／ml）＋TNF-α（10ng／ml）分别加1、3、5μmol／L15d-PGJ2组；（6）IFN-γ＋TNF-α．刺激＋15d-PGJ2（5μmol／L）＋GW9662（PPARγ特异拮抗剂）1μmol／L组。GW9662和15d-PGJ2分别在IFN-γ和TNF-α刺激前3和2小时加入。分别采用RT-PCR、流式细胞仪（FACS）和酶联免疫法（ELISA）检测CD40和RANTES基因和蛋白的表达水平。结果：正常HK-2细胞中，CD40、RANTES有基础水平表达。IFN-γ能显著上调HK-2细胞CD40蛋白的表达；TNF-α单独刺激对CD40表达无显著影响，但能增强IFN-γ的刺激效应。IFN-γ＋TNF-α显著增加HK-2细胞RANTES的表达和分泌。15d—PGJ2呈剂量依赖式在基因和蛋白水平显著抑制IFN-γ＋TNF-α．诱导的CIMO和RANTES的表达。加入PPARγ特异拈抗剂GW9662后，能够部分逆转15d-PGJ，对CIMO和RANTES表达的抑制效应，但并不能完全阻断其作用。结论：15d-PGJ2部分通过PPARγ介导的信号途径参与抑制IFN-γ＋TNF-α．诱导的人近端肾小管上皮细胞CD40和RANTES的表达，从而在肾脏局部发挥免疫调节和抗炎作用。     

伏马菌素B1对人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的影响

目的:探讨伏马菌素B1(FB1)对体外培养的人外周血单个核细胞表面(HPBMc) HLA-Ⅰ分子表达的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)、Western blot及半定量RT-PCR方法,研究不同浓度FB1(10和50 μmol/L)处理后人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的变化.结果:FCM定量分析结果表明,经FB1处理24 h后,两组FB1处理细胞HLA-Ⅰ的平均荧光强度均较对照组降低(P＜0.05),但是在两个处理组之间无统计学意义.Western blot也证实了上述结果.在mRNA水平上,分别检测了HLA-Ⅰ分子3个等位基因HLA-A,HLA-B,HLA-C的表达情况.结果显示,FB1处理后,HLA-A、HLA-B mRNA的表达均没有明显影响,仅HLA-C mRNA的表达较对照组降低.结论:10和50 μmol/L FB1处理24 h可抑制人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子的表达.     

抑制Hedgehog信号通路对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养U87细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24h,MTT法检测环王巴明对U87细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对U87细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对U87细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对U87细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.11±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.81±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.87±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.22±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.87±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.66±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.48±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.58±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.40±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞糖基化终产物受体表达的研究

目的：探讨糖基化终产物 (AGEs）)对人单核细胞源树突状细胞（MDCs）糖基化终产物受体（RAGE） 表达的影响。 方法： 用免疫磁珠分离人外周血CD14+单核细胞，经含rhGM-CSF（100 μg/L）和rhIL-4（50 μg/L）的RPMI-1640培养，使其分化为MDCs，采用RT-PCR和Western blotting法，观察糖基化-白蛋白（AGE-BSA）对MDCs RAGE mRNA和蛋白表达的影响，同时检测培养液上清中IFN-γ和IL-12的浓度。 结果： AGE-BSA诱导DCs RAGE mRNA和蛋白的表达（P＜0.05），高于空白对照组，并且明显促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌（P＜0.05）。BSA干预组与空白对照组相比差异无显著（P＞0.05）。 结论： AGEs能够上调DCs RAGE的表达，并且促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌，这可能是糖尿病通过DCs促进动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

干扰素和肿瘤坏死因子对人脐静脉内皮细胞表达HLA-Ⅱ类抗原的影响

采用cell-ELISA法对IFN-α、γ及rTNFα单独或协同影响人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达HLA-Ⅱ类抗原作了定量观察。结果表明,IFNγ直接刺激 HUVEC可依浓度和时间依赖的方式提高其 HLA-Ⅱ类抗原表达量,而rTNFα、IFNα单独处理HUVEC无效。当rTNFα和IFNγ同时诱导时,对HUVEC表达HLA-DR、DP、DQ均表现抑制作用。但是,当先用IFNγ诱导HUVEC 24h后,再加入rTNFα则发现DR、DP、DQ的表达升高,起促进作用。     

催乳素刺激Jurkat细胞热休克蛋白90的表达及地塞米松的干预作用

目的：探讨催乳素刺激下Jurkat细胞的热休克蛋白（HSP90）的表达状况以及地塞米松对这种表达的影响。方法：以四组不同浓度催乳素（25、50、100、200ng/ml）刺激Jurkat细胞,采用RT-PCR和Western blot检测刺激前后HSP90的表达水平;另将四种不同浓度的地塞米松（10^-9-10^-6mol/L）和高浓度催乳素（100ng/ml）与Jurkat细胞共同孵育,同法检测地塞米松干预后HSP90的表达水平。结果：所有浓度催乳素刺激Jurkat细胞在mRNA和蛋白质水平表达的HSP90均显著高于空白对照组（P〈0.05）,且表达水平随刺激浓度增加而升高,但当浓度高于100ng/ml以上时升高不明显。加入不同浓度地塞米松和高浓度催乳素孵育的Jurkat细胞表达HSP90水平与对照组比较有显著下降（P〈0.05）,且随地塞米松浓度升高而降低。结论：催乳素可刺激Jurkat细胞HSP90的表达,而地塞米松可抑制此效应且有剂量依赖关系。     

γ-干扰素通过激活JAK/STAT信号转导途径上调小鼠系膜细胞内HMGB1表达

目的:本实验以小鼠系膜细胞为研究对象,IFN-γ为刺激物,通过检测JAK/STAT信号途经的激活及HMGB1mRNA及蛋白表达,探讨γ干扰素刺激系膜细胞HMGB1表达上调的可能机制。方法:常规培养小鼠系膜细胞(Mousemesangial cell,MMC),无血清培养基同步化后分为正常对照组、IFN-γ(500 U/ml)刺激组和INF-γ+AG490(INF-γ500 U/ml+AG490 200μmol/ml)组。Western blot检测JAK、STAT1和HMGB1蛋白的表达变化,RT-PCR检测HMGB1mRNA的表达变化。结果:Western blot结果显示IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞JAK、STAT1磷酸化和STAT1核转位,并呈时间依赖性;AG490能够降低IFN-γ介导的JAK1、JAK2、STAT1的活化,并呈时间依赖性。IFN-γ能够上调系膜细胞中HMGB1mRNA及蛋白表达,并随着刺激时间延长,其相对表达量呈上升趋势,AG490处理后,系膜细胞中HMGB1mRNA蛋白表达降低,并随时间延长而下调。结论:IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞HMGB1表达上调,JAK/STAT信号通路激活可能是其主要机制之一。     

S100β对炎症条件下嗅鞘细胞的作用及机制

目的:明确S100β对干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)诱导的炎症条件下嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的作用,并探讨其发挥作用的机制。方法:将采用改良差速贴壁联合胰酶限时消化3 min法纯化培养的大鼠OECs分为空白对照组、炎症模型组、S100β组等3组,每组种板1×106/ml;空白对照组采用常规培养体系培养OECs,炎症模型组采用重组IFN-γ诱导炎症建立OECs体外炎症模型,S100β组在炎症模型组基础上加入S100β蛋白进行干预;采用免疫荧光染色进行OECs鉴定及纯度分析;利用MTT法检测OECs的增殖情况并筛选IFN-γ诱导OECs炎症模型的适宜浓度;利用TUNEL染色法判断各组OECs的凋亡状况;采用Real-Time PCR检测各组OECs表达炎症相关因子i NOS、IL-1β、TNF-α的mRNA水平。根据以上结果,判断在炎症环境中S100β对OECs的影响及可能机制。结果:采用改良方法原代培养的大鼠OECs能够获得80%纯度;与5 ng/ml的浓度相比,10 ng/ml的IFN-γ对OECs的抑制率更高,凋亡细胞更多;与炎症模型组比较,S100β干预组细胞增殖能力升高,凋亡细胞减少;炎症相关因子i NOS、IL-1β以及TNF-α的基因表达水平下降。结论:S100β可以下调IFN-γ激活的炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-α的基因表达水平,提示S100β可能是通过抑制炎症因子的表达从而减少了OECs凋亡的发生。本研究结果为深入研究S100β联合嗅鞘细胞移植对周围神经损伤的修复作用奠定了基础。     

槐耳颗粒免疫调控CXCL1在乳腺癌中的作用研究

目的研究CXCL1与乳腺癌增殖转移的相关性,为乳腺癌发病机制提供线索,探究中药槐耳颗粒对乳腺癌发生发展的影响及其发挥效应的机制,为乳腺癌的治疗提供理论依据。方法分别设置1 nmol/ml CXCL1组、0.1 nmol/ml CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体处理组、5 mg/ml槐耳颗粒组、10 mg/ml槐耳颗粒组及空白对照组6组。CCK8检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测槐耳颗粒组与空白对照组CXCL1表达量,ELISA检测各组细胞Survivin、VEGF、MMP13的表达量。结果 CCK8检测细胞增殖活性:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞增殖活性明显增高且存在剂量依赖关系,有统计学意义(P0.05);与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞增殖活性明显降低(P0.05);与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞增殖活性明显降低(P0.05)且存在剂量依赖关系;流式测细胞凋亡结果:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞凋亡率明显降低(P0.05)且存在剂量依赖关系,与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞凋亡率明显增高(P0.05),与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞凋亡率明显增高且随浓度增加作用增强(P0.05);CXCL1表达量:与空白对照组相比,槐耳颗粒组CXCL1表达量明显降低(P0.05),且存在剂量依赖关系;survivin、VEGF、MMP13表达量:与空白对照组相比,CXCL1处理组蛋白表达量明显增高(P0.05)且存在剂量依赖关系,anti-CXCR2中和抗体处理组蛋白表达量明显降低(P0.05),槐耳颗粒组蛋白表达量明显降低(P0.05)且存在剂量依赖关系。结论乳腺癌中CXCL1通过与其受体CXCR2结合促进survivin的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖抑制其凋亡,促进乳腺癌的发生;同时通过促进VEGF与MMP13的表达促进肿瘤血管的生成及细胞外基质的降解,提示CXCL1可能促进肿瘤转移。中药槐耳颗粒可通过抑制CXCL1表达而有效抑制乳腺癌细胞的增殖以及侵袭转移从而达到治疗效果。     

基于CD80/CTLA-4途径探究IL-7对脓毒症T淋巴细胞功能的机制研究

目的 基于CD80/CTLA-4途径探究IL-7对脓毒症T淋巴细胞功能的影响。方法 选取我院2021年1月1日～2023年6月6日收治的104例脓毒症患者,分离患者外周血中T淋巴细胞并纯化,刺激培养T淋巴细胞并分为3组,即对照组、IL-7组和CYAL-4组。流式细胞仪分别检测T淋巴细胞凋亡率和增殖代数;ELISA检测淋巴细胞IL-7、IFN-γ、TNF-α水平;流式细胞仪检测淋巴细胞表面CD80表达;免疫荧光法检测T淋巴细胞表面CTAL-4表达。结果 与对照组相比,IL-7组和CTAL-4组T淋巴细胞凋亡率明显降低（分别为45.17±4.02、48.06±4.08）,T淋巴细胞增殖代数（分别为6.01±1.04、5.92±1.02）、T淋巴细胞中IL-7（分别为115.46±9.07、112.39±9.01）、IFN-γ（分别为21.46±2.15、20.07±2.12）、TNF-α（分别为347.15±2.26、340.87±12.08）水平明显增加（P<0.05）;但IL-7组T淋巴细胞凋亡率、增殖代数、IL-7、IFN-γ、TNF-α水平和CTAL-4组相比差异无统计学意义...     

树突状细胞上调MHC Ⅰ类相关抗原A表达对NK细胞活性的影响

目的:观察单核细胞、未成熟和成熟树突状细胞(DCs)表达MHC Ⅰ类相关抗原A(MICA)的情况,以及DCs表达MICA后对NK细胞活性的影响.方法:用流式细胞术分别检测单核细胞、未成熟DC(iDCs)以及LPS、TNF-α、CD40L、IL-15和IFN-α分别刺激的成熟DCs表面MICA的表达,并观察DCs表达MICA后对NK细胞表达CD69、细胞毒活性和分泌IFN-γ的影响.最后用流式细胞术检测重组NKG2D/Fc蛋白和抗IL-12单克隆抗体(mAb)对DCs激活NK细胞的影响.结果:单核细胞不表达MICA,iDCs低表达MICA.LPS、TNF-α和CD40L对DCs表达MICA无影响;但IFN-α和IL-15可促进DC上调MICA表达.DCs表达MICA后可促进NK细胞表达CD69、分泌IFN-γ、杀伤K562细胞.NKG2D/Fe蛋白可抑制NK细胞的杀伤活性和分泌IFN-γ;而抗IL-12mAb仅抑制IFN-γ分泌.结论:MICA在DCs表面的表达受局部微环境影响,且DCs表达MICA后可增强NK细胞的活性.     

干扰素α对Jurkat细胞中CCR5表达的影响

目的:通过研究干扰素(IFN-α)对Jurkat E6-1细胞内CCR5 mRNA表达及基因表达调控的影响,探讨采用干扰素治疗相关疾病的方法。方法:用不同浓度的IFN-α刺激处于对数生长期的CD4+T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞。培养48小时后,提取细胞的总RNA,逆转录成cDNA,进行RT-PCR和Real time-PCR扩增目的基因CCR5;利用脂质体转染荧光素酶报告系统检测Jurkat E6-1细胞内CCR5活性变化情况。结果:(1)IFN-α在浓度为100 U/ml时对CCR5 mRNA的表达有明显抑制作用;在浓度为1 000 U/ml时对CCR5 mRNA的表达表现为增强作用;在浓度为10 000 U/ml时对CCR5 mRNA的表达增强作用有所减弱。(2)当IFN-α的浓度为100 U/ml时荧光素酶的活性最低;当IFN-α的浓度为1 000 U/ml时荧光素酶的活性最高;当IFN-α的浓度为10 000 U/ml时荧光素酶的活性又有所减低。结论:IFN-α作为一类很好的免疫调节、抗病毒生物制剂,不同剂量在一定范围内会对细胞CCR5的表达有显著影响。     

巨噬细胞瘤苗免疫调节作用的研究

目的 观察巨噬细胞肿瘤疫苗对细胞毒性T细胞（CTL）反应及Th1／Th2型细胞因子分泌的调节作用。方法 分别采用MTT法和比色法检测肿瘤细胞杀伤率和清液上乳酸脱氢酶（LDH）含量,采用Western印记法与ELISA法检测脾细胞内及分泌入培养上清的IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子。结果 巨噬细胞肿瘤疫苗接种组的淋巴细胞肿瘤细胞杀伤率与培养上清液LDH水平分别为（36．70±21．02）％和（0．29±0．15）U／ml,明显高于热灭活肿瘤细胞接种组、石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。肿瘤细胞冻融物刺激72h后,各组免疫小鼠的脾细胞内均可检测到IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子;同时巨噬细胞肿瘤疫苗接种组脾细胞培养上清中,IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ含量分别为（7．97±3．15）pg／ml、（0．44±0．11）pg／ml、（1．83±0．85）pg／ml和（9．16±4．64）pg／ml,IL-2、IFN-γ的水平均高于热灭活肿瘤细胞接种组和石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。结论 巨噬细胞肿瘤疫苗可诱导机体产生特异性抗肿瘤反应,能够促进Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。