改良Videman法构建兔膝骨关节炎模型的探索

目的 建立操作简便、稳定、高效,便于治疗和疗效观察的兔膝骨关节炎（KOA）模型。方法 选取12只健康雄性新西兰兔,按照随机数表法分为对照组、模型组,每组各6只。使用医用夹板将兔右膝关节伸直位固定,每次固定60 min,每天2次,持续4周进行造模。采用Lequesne MG评分法对兔子右膝关节的运动能力进行评估,观察并记录兔子右膝关节的大体形态,番红O染色判断软骨损伤情况,采用改良Mankin’s关节软骨病理评分法对两组兔子进行比较分析。结果 模型组Lequesne MG评分综合得分为[2.00(0.00,8.00)]分,高于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。观察膝关节大体形态结果,与对照组比较模型组膝关节肿大,关节腔隙变窄,软骨部分磨损,表面质地粗糙。观察番红O染色结果,与对照组比较模型组软骨组织结构紊乱,基质染色减少,潮线不完整,软骨表层不平整,软骨细胞形态呈多样性,排列不规则。观察改良Mankin’s关节软骨病理评分结果,模型组综合得分为[3.00(0.00,7.50)]分,高于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 改良Videman法构建兔KOA...     

右归丸对膝骨关节炎模型鼠软骨组织钙离子调控蛋白表达的影响

目的 观察右归丸对膝骨关节炎（knee osteoarthritis,KOA）模型鼠显微结构和相关蛋白表达的影响,进一步揭示右归丸防治KOA的机制。方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组,右归丸（高、中、低剂量）组,每组10只。采用改良Hulth法制备KOA大鼠模型6周后,分别予相应药物灌胃8周。HE染色法观察软骨组织的形态学变化,并进行Mankin评分;应用免疫组化法检测各组大鼠软骨组织热休克蛋白90α（heat shock protein 90α,Hsp90α）、钙调蛋白（calmodulin,CaM）、钙调蛋白激酶Ⅱ（calmodulin kinase-Ⅱ,CaMK-Ⅱ）和肌球蛋白磷酸酶Rho相互作用蛋白（myosin phosphatase Rho-interacting protein,Mprip）的表达;应用Western blotting检测各组大鼠软骨组织Hsp90α的表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Mankin评分、Hsp90α的蛋白表达显著升高,CaM和Mprip的蛋白表达明显降低（P<0.05）;模型组大鼠关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组相比,右归丸高剂量组大鼠软骨组织Mankin评分、Hsp90α的蛋白表达均明显降低,CaM和Mprip的蛋白表达明显升高（P<0.05）,软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论 右归丸通过促进KOA模型鼠软骨组织的Mprip和CaM蛋白表达、抑制其Hsp90α的蛋白表达来调控钙离子代谢,从而有效保护KOA模型鼠关节软骨,延缓关节软骨退变。     

伤科消炎水凝胶贴膏对骨关节炎模型大鼠的改善作用

目的 研究伤科消炎水凝胶贴膏对骨关节炎模型大鼠的改善作用。方法 将大鼠随机分为空白组、模型组、扶他林组（200 mg/只）、伤科消炎膏组（500 mg/只，含伤科消炎流浸膏50 mg）和伤科消炎水凝胶贴膏组（200 mg/只，含伤科消炎流浸膏50mg），每组8只。除空白组外，其余各组通过在大鼠右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶和L-半胱氨酸构建骨关节炎模型，然后涂抹相应药物，每天换药1次，连续14 d。检测大鼠膝关节肿胀程度，观察大鼠膝关节磁共振成像特征；检测大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平；观察大鼠膝关节组织的病理形态学特征，并进行组织病理学评分及软骨Mankin评分；检测大鼠膝关节组织中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠膝关节严重肿胀，可见明显关节腔积液，外侧半月板前角呈团片状磨损；血清中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平以及组织病理学评分和Mankin评分均显著升高（P<0.05）；膝关节组织中IL-1β、IL-6、TNF-α阳性蛋白表达均增加。与模型组比较，伤科消炎水...     

连续股神经阻滞对兔膝骨关节炎模型疼痛的疗效与作用机理初步研究

目的 探究连续股神经阻滞对兔膝骨性关节炎(KOA)模型的疼痛治疗效果及可能的作用机制.方法 建立KOA兔模型.观察空白组、模型组和实验组(A、B、C、D和E组)动物行为学的变化,比较疼痛反应,然后使用ELISA法检测各组兔滑膜液中TNF-α、IL-1和IL-6的表达,HE染色观察KOA兔滑膜软骨组织形态学变化,最后使用免疫组化的方法测定滑膜和软骨组织中基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达.结果 相比于模型组,连续股神经阻滞能显著缓解KOA兔的疼痛(P＜0.05或P＜0.01);滑膜软骨组织损伤及周围炎性反应明显减轻;实验组兔滑膜液中TNF-α、IL-1和IL-6的表达也显著下降(P＜0.05或P＜0.01),其中C组、D组和E组更为明显(P＜0.01);另外,连续骨神经阻滞处理使KOA兔滑膜和软骨组织中MMP-3和TIMP-1的表达显著下调(P＜0.05或P＜0.01),改善了MMP-3/TIMP-1的失衡.结论 连续骨神经阻滞可以显著缓解KOA兔的疼痛反应,改善滑膜软骨损伤,其机制可能与下调滑膜液中TNF-α、IL-1和IL-6的表达以及改善滑膜和软骨中MMP-3、TIMP-1的异常表达有关.     

复元胶囊对兔膝骨关节炎MMP-3、IL-1及SOD含量的影响

目的观察复元胶囊对兔膝骨关节炎（KOA）软骨组织变化及血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、白细胞介素-1（IL-1）、基质金属蛋白酶3（MMP-3）含量的影响。方法新西兰兔32只,随机分为复元胶囊组、壮骨关节丸组、模型组和正常组,除正常组外,其余各组均按照Hulth法造模建立膝KOA动物模型,复元胶囊组、壮骨关节丸组分别给予复元胶囊组、壮骨关节丸灌胃,正常组及模型组给予0．9％氯化钠溶液。灌胃4周后分别随机选取6只采取血清检测SOD活性及MMP．3、白细胞介素-1（IL-1）的含量,采用HE染色光镜观察软骨组织病理改变。结果复元胶囊组软骨细胞明显增加,微血管管壁基本恢复正常,复元胶囊组血清中MMP-3、IL-1含量低于其他组（P〈0．05）;SOD含量高于其他组（P〈0．05）。结论使用复元胶囊可显著降低兔膝关节局部MMP-3、白细胞介素-1（IL-1）的含量,提高SOD的活性,从而有利于抑制滑膜炎症,缓解KOA早期的疼痛、肿胀症状,延缓关节软骨的退变。     

“杜仲-当归”调控NLPR3炎症小体对骨关节炎大鼠改善作用的研究

目的：探究药对“杜仲-当归”对骨关节炎（osteoarthritis,OA）大鼠膝组织的改善效果及对NLPR3炎症小体的调控。方法：24只雄性SD大鼠随机挑选18只采用前交叉韧带切断术（ACLT）进行OA造模，随后将大鼠分为正常组、OA模型组、杜仲-当归组和阳性药物组，每组6只，后两组分别给与“杜仲-当归”或西乐葆和奥泰灵混合液治疗8周。收集大鼠外周血，ELISA测定IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平；另取大鼠膝关节软骨组织，HE染色观察病理改变，番红-固绿染色观察软骨钙化情况并行OARSI评分，免疫组化和TUNEL染色分别检测膝关节软骨组织Caspase1、CollagenⅡ表达和软骨细胞凋亡情况，Western blot检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、p53、p21、NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Pro-Caspase-1蛋白表达。结果：与正常组相比，OA模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均显著上升（P<0.01），膝关节损伤明显，OARSI评分显著升高（P<0.0...     

乌头注射液对膝关节骨性关节炎模型兔体内COMP、p53蛋白、BMP-2等因子的影响

目的:考察乌头注射液对膝关节骨性关节炎(KOA)模型兔体内软骨寡聚基质蛋白(COMP)、抑癌基因p53编码蛋白(p53蛋白)、骨形成蛋白2(BMP-2)等因子的影响,探讨该注射液治疗KOA的作用机制。方法:将24只兔随机分为空白组、模型组、玻璃酸钠组、乌头注射液组,每组6只。除空白组兔不作任何处理外,分别在第1、4、7天时于模型组、玻璃酸钠组、乌头注射液组兔关节腔注射2%木瓜蛋白酶溶液-0.03 mol/L L-半胱氨酸溶液以建立KOA模型;在造模成功后第1、4、7天时,分别于其关节腔注射生理盐水、玻璃酸钠注射液、乌头注射液各0.1 mL/kg。上述4组兔分别在给药结束后抽取关节液,采用酶联免疫吸附法测定COMP和p53蛋白含量;肉眼观察兔膝关节软骨形态;取膝关节软骨组织,采用苏木精-伊红法染色后于光镜下观察组织形态学改变并进行Mankin评分;采用PV二步法制作膝关节软骨组织的免疫组化标本,检测BMP-2的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组兔膝关节软骨边缘破坏,软骨面有缺损;组织形态学观察结果显示,膝关节软骨组织结构明显不规则,软骨细胞可见明显扩大,有白泡样改变,细胞间分布紊乱,...     

益气升清方调节HIF-1α/NLRP3信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响

目的 探究益气升清方调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组（S组）,模型组（M组）,益气升清方低、中、高剂量组（3.465、6.930、13.860 g/kg）及益气升清方高剂量+HIF-1α激活剂DMOG组（13.860 g/kg益气升清方+40 mg/kg DMOG）,每组15只。采用线栓法构建脑卒中模型。造模成功后进行神经功能缺陷评估;TTC染色评估脑梗死体积;ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平;HE染色检测缺血皮质区病理变化;TUNEL染色检测神经元凋亡;Western blot检测焦亡及HIF-1α/NLRP3通路相关蛋白表达。结果 与S组比较,M组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、胞膜穿孔蛋白D-N端（GSDMD-N）、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均上升（P<0.05）;与M组比较,低、中、高剂量益气升清方组神经功能缺陷评分、梗死体积、I...     

骨性关节炎患者软骨中炎性细胞因子的表达及其临床意义

目的初步探讨正常软骨与骨性关节炎（OA）软骨中炎性细胞因子——白介素（IL）-6、缺氧诱导因子（HIF）-α、基质金属蛋白酶（MMP）-3等的表达差异。方法收集2013年1∽6月该院收治的7例OA患者（观察组）的软骨标本及9例其他患者（对照组）的健康软骨标本。采用苏木精-伊红（HE）染色法观察软骨病理学表现,采用蛋白质印迹法检测两组患者软骨中IL-6、HIF-α、MMP-3的表达情况。结果观察组患者软骨中软骨细胞减少,细胞簇集,可见软骨细胞变性、坏死,软骨厚度变薄,基质染色不均匀,有异染性;IL-6、HIF-α、MMP-3的表达明显高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 IL-6、HIF-α、MMP-3可能在OA的发病中具有重要作用,有望为临床治疗OA开辟一条重要途径。     

木瓜蛋白酶对兔膝关节骨关节炎滑膜病变的诱导作用

目的 探讨木瓜蛋白酶诱导兔膝关节骨关节炎模型的滑膜病理变化。方法 纳入30只新西兰大白兔,随机分为对照和模型组,模型组动物均采用木瓜蛋白酶注射方式制备膝关节骨关节炎模型,术后2、4、6周,分别取两组各5只动物,处死后获得滑膜组织标本,观察一般情况,对两组不同时间的滑膜进行Mankin评分;苏木精-伊红（HE）染色观察病理变化;酶联免疫法检测滑膜血管内皮生长因子（VEGF）和白细胞介素-1β（IL-1β）表达水平。结果 木瓜蛋白酶单次注射后第2周,对模型组动物进行病理观察,可见膝关节出现严重的滑膜炎性反应,滑膜细胞与下层疏松纤维及血管组织均明显增生,并存在大量淋巴浆细胞浸润;随着时间推移,炎性反应逐渐减轻。随着注射时间的延长,模型组Mankin评分、VEGF和IL-1β表达水平均呈下降趋势,对照组无明显变化;模型组木瓜蛋白酶注射后2、4周的Mankin评分、VEGF和IL-1β表达水平均显著高于对照组（P < 0.05）,注射后6周的Mankin评分、VEGF和IL-1β表达水平与对照组化比较差异无统计学意义。结论 木瓜蛋白酶可以诱导兔膝关节骨关节炎模型,木瓜蛋白酶单次注射后第2周,兔膝关节滑膜炎性反应严重,第4、6周时炎性反应逐渐减轻。     

苍术内酯对骨关节炎大鼠软骨损伤修复和软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨苍术内酯（AT）对骨关节炎大鼠软骨损伤修复和软骨细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法 60只7～8周龄SPF级雄性SD大鼠，48只大鼠采用前后交叉韧带断离术建立骨关节炎（OA）模型，造模成功大鼠采用随机分为模型组、AT低、中、高剂量组，各12只，另设对照组（12只）。AT低、中、高剂量组腹腔注射5、10、20 mg/kg AT，对照组及模型组给予等量生理盐水，连续30 d。观察大鼠软骨组织形态计算Mankin’s评分；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平；苏木精-伊红（HE）染色观察软骨组织病理学变化；TUNEL法检测大鼠软骨组织细胞凋亡情况；实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测大鼠软骨组织中微RNA-98-5p(miR-98-5p)表达、高迁移率族蛋白2(HMGA2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA表达；蛋白质印迹法（Western blotting）检测大鼠HMGA2、GSK-3β、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关...     

膝关节骨性关节炎患者NLR、OPN、HIF-α水平与膝关节功能、肌力相关性分析

目的 分析膝关节骨性关节炎(KOA)患者中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、骨桥素(OPN)、乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平与膝关节功能、肌力的相关性。方法 选取2020年4月—2021年5月收治的KOA 82例作为KOA组,另选取同期健康体检者40例作为健康对照组。比较2组及不同病情程度KOA患者NLR、OPN、HIF-1α水平及膝关节功能[骨性关节炎自评量表(WOMAC)评分]、肌力[峰力矩(PT)、腘绳肌与股四头肌峰力矩比值(H/Q)],采用Spearman相关性分析探讨KOA患者NLR、OPN、HIF-1α水平与膝关节功能、肌力的相关性。结果 KOA组中性粒细胞、NLR、OPN、HIF-1α水平和WOMAC评分、H/Q均高于健康对照组,伸膝肌群和屈膝肌群PT低于健康对照组(P<0.01)。KOA患者随着病情逐渐加重,NLR、OPN、HIF-1α水平和WOMAC评分、H/Q逐渐升高,伸膝肌群和屈膝肌群PT逐渐降低(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,KOA患者NLR、OPN、HIF-1α水平分别与WOMAC评分、H/Q呈正相关,与伸膝肌群和屈膝...     

川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨下骨中miR-20b/VEGF和BMP2/Smad1通路的影响

目的:研究川芎嗪对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨下骨中微小核糖核酸miR-20b/血管内皮生长因子(VEGF)和骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad1通路的影响,并探讨川芎嗪防治KOA的作用机制。方法:取健康雄性SD大鼠18只,随机分为正常对照组、模型组、川芎嗪组,每组6只。对后两组大鼠通过膝关节腔注射4%木瓜蛋白酶溶液建立KOA模型。末次注射后第2天起,川芎嗪组大鼠灌胃川芎嗪混悬液(100 mg/kg)2 m L,正常对照组、模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续6周。给药结束后,暴露大鼠双侧膝关节软骨进行大体情况观察。截取大鼠膝关节,进行切片和苏木精-伊红(HE)染色,在显微镜下观察组织病理学变化,并采用改良的Mankin’s评分进行组织学评分。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠软骨下骨组织中VEGF、BMP2、Smad1的mRNA表达和miR-20b表达水平;采用Western Blot法检测VEGF、BMP2、Smad1的蛋白表达水平。结果:模型组和川芎嗪组大鼠的膝关节均出现不同程度的软骨损伤;与正常对照组比较,模型组大鼠膝关节软骨组织Mankin’s评分显著升高(P<0.01);软骨下骨组织中BMP、Smad1的m RNA和蛋白表达以及miR-20b表达水平均显著降低,VEGF的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,川芎嗪组大鼠关节软骨组织Mankin’s评分显著降低(P<0.01);软骨下骨组织中BMP、Smad1的mRNA和蛋白表达以及miR-20b表达水平均显著升高,VEGF的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:川芎嗪能修复KOA模型大鼠损伤的关节软骨,其机制可能是通过上调软骨下骨中miR-20b表达水平,促进VEGF mRNA降解继而抑制VEGF蛋白的表达,同时激活BMP-2/Smad1信号通路而实现的。     

丹参酮Ⅱ_A治疗肾缺血-再灌注损伤及对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA治疗肾缺血-再灌注损伤及其对缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法选用Wistar大鼠66只,随机分为正常组、缺血组、缺血-再灌注组（1h、3h、5h）、丹参酮ⅡA组（1h、3h、5h）及假手术组（1h、3h、5h）。每组6只。各组均先切除右肾,取左肾研究。取左肾部分皮髓质用4%的多聚甲醛固定,进行切片HE染色及免疫组化检测各组肾HIF-1α蛋白的表达水平,另一部分采用荧光定量PCR检测各组肾HIF-1α mRNA的表达水平。取左肾后立即通过下腔静脉采血,检测MDA、TNF-α、Urea及Scr。结果 （1）Urea、HIF-1α蛋白及HIF-1α mRNA分别在假手术组1h、3h、5h增高,与正常组比较,差异有显著意义（P〈0.05）。（2）Urea、Scr、MDA、TNF-α分别在正常组、缺血组、缺血-再灌注组（1h、3h、5h）增高（P〈0.05）。HIF-1α mRNA在缺血组呈高表达,缺血-再灌注组（1h、3h、5h）呈低表达。HIF-1α蛋白在缺血组和缺血-再灌注组（1h、3h、5h）均呈高表达。（3）Urea、Scr、MDA、TNF-α、HIF-1α蛋白表达水平在丹参酮ⅡA组（1h、3h、5h）均较缺血-再灌注组降低（P〈0.05）,而HIF-1α mRNA表达水平在丹参酮ⅡA组（1h、3h、5h）增高（P〈0.05）。（4）HE染色：与正常组比较,假手术组、缺血组变化不明显,其余各组均有不同程度肾小球、肾间质充血,肾小管上皮细胞水肿、细胞内玻璃样变及脂肪变性。缺血-再灌注组肾小管腔内蛋白管型明显。丹参酮ⅡA组仅个别标本存在蛋白管型,水肿减轻。结论丹参酮ⅡA可减轻肾缺血-再灌注损伤,可增强HIF-1α mRNA的表达和降低HIF-1α蛋白的表达。     

膝关节骨性关节炎与髋关节退变的相关性研究

目的探讨膝关节骨性关节炎与髋关节退变的相关性,以指导临床治疗工作。方法创建一类去双前肢直立联合Malthus法模型,以该模型为基础检测各项指标,其宗旨是明确膝关节骨性关节炎与髋关节退变间的关联性。结果对HE、甲苯胺蓝、CollagenⅡ、MMP-13进行染色,进而其他组相比较,Hulth组大鼠膝关节软骨Mankin评分与MMP-13阳性细胞比例最高、CollagenⅡ阳性细胞比率最低;和其他组相比,Malthus组大鼠同侧髋关节软骨Mankin评分与MMP-13阳性细胞比例最高、CollagenⅡ阳性细胞比率最低,软骨退行病变最严重。膝关节骨性关节炎(KOA)患者中,膝关节疼痛、僵硬、关节活动范围减缩以及X线检查结果和髋关节对应症状无相关性或相关性微小。结论去双前肢直立联合Malthus组大鼠膝关节退变更为显著,大鼠的KOA可促使其髋关节退变更为严重化,对统计学结果进行分析,得出人体KOA和髋关节的退变之间无相关性的结论。     

髌骨内推对兔膝骨关节炎(KOA)关节液IL-1β、iNOS和NO的影响及对KOA的效果

目的研究髌骨内推(patellar inward pushing method,PIPM)对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型关节液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量的影响,探讨髌骨内推对膝骨关节炎的治疗作用及机制。方法新西兰兔30只,随机分成5组,即空白组(control)、模型组(model)、盐酸氨基葡萄糖组(GH)、髌骨内推组(PIPM)和髌骨内推联合盐酸氨基葡萄糖组(PIPM+GH),每组均为6只,除空白组外其余4组采用改良Hulth法建立KOA模型,各组采取相应的处理措施,连续治疗8周,观察各组实验兔膝关节活动、关节液中IL-1β、i NOS和NO的水平及关节软骨病理学形态变化。结果 PIPM+GH组与模型组相比,活动度增加,差异具有统计学意义(P<0.05);PIPM组、PIPM+GH组与模型组相比,兔膝关节液IL-1β、i NOS、NO含量及关节软骨观察评分均降低,差异有统计学意义(P<0.05);PIPM组与GH组相比,活动度增加、关节液IL-1β、i NOS、NO含量及关节软骨观察评分降低,但差异均没有统计学意义(P>0.05);PIPM+GH组与GH组相比,关节液i NOS、NO含量及关节软骨观察评分均降低(P<0.05),差异具有统计学意义。结论髌骨内推能降低兔KOA关节液中IL-1β、i NOS和NO含量,减少细胞炎症因子释放,促进关节软骨损伤的修复,对KOA均具有良好的治疗作用,其治疗效果与盐酸氨基葡萄糖胶囊没有明显差异,但两者联合治疗较单独运用效果更好。     

基于LKB1/AMPK信号通路探究金雀异黄酮对癫痫大鼠海马神经元凋亡和自噬的影响

摘要：目的:基于肝激酶B1（LKB1）/5’-磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）信号通路探究金雀异黄酮对癫痫大鼠海马神经元凋亡和自噬的影响。方法:于腹腔内注射氯化锂与匹罗卡品诱导建立癫痫大鼠模型,随机分为5组（每组12只）:模型组、金雀异黄酮低剂量组(7 mg·kg-1)、金雀异黄酮高剂量组(14 mg·kg-1)、金雀异黄酮(14 mg·kg-1)+空载（空载质粒）组、金雀异黄酮(14 mg·kg-1)+LKB1敲低（LKB1 siRNA质粒）组,另取12只Wistar大鼠,腹腔内注射等剂量生理盐水作为正常对照组,以金雀异黄酮和质粒分组给药干预后,检测各组大鼠癫痫评分及平均癫痫发作时间;以跳台实验检测各组大鼠学习记忆能力;以原位末端标记法（TUNEL）染色检测各组大鼠海马神经元凋亡率;以酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒测量各组大鼠血清致炎因子环氧化酶-2（COX-2）、白细胞介素（IL）-1β、IL-17水平;以免疫印迹检测各组大鼠脑组织自噬、凋亡及LKB1/AMPK通路蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达水平显著升高（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著降低（P＜0.05）;与模型组相比,金雀异黄酮低、高剂量组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白caspase-3、Bax表达水平显著降低（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著升高（P＜0.05）,且金雀异黄酮低、高剂量组间各指标差异均有统计学意义（P＜0.05）;与金雀异黄酮高剂量组相比,金雀异黄酮+LKB1敲低组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白caspase-3、Bax表达水平显著升高（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:金雀异黄酮可通过激活LKB1/AMPK信号而减轻癫痫大鼠炎症,增强脑组织自噬,抑制大鼠海马神经元凋亡,提高其学习记忆能力,改善其癫痫症状。     

白细胞介素-1在骨性关节炎的水平及作用

目的测定正常组、早、中和晚期膝骨关节炎（KOA）患者血清和关节液中白细胞介素-1（IL-1）水平的变化,探讨IL-1在KOA发病中所起的作用及其用于临床上判断KOA早期病理变化的可能性。方法应用酶联免疫吸附技术（ELSIA）检测10例健康体检者和30例早、中、晚期KOA患者血清和关节液中IL-1水平,通过关节镜观察并切取关节滑膜组织,标本分别行甲苯胺蓝染色,光镜下观察。结果KOA患者早、中、晚期血清和关节液中IL-1含量显著高于正常对照组,且随病情的进展而含量逐渐升高,差异有统计学意义（P〈0.01）,关节液中IL-1水平与Mankin分值之间呈高度正相关,关节液IL-1水平越高,关节软骨的病变程度越重。结论IL-1与KOA患者免疫炎症有关,其水平高低可反映病情活动变化情况。     

黄连素下调NRAV和PI3K/AKT通路减轻RSV感染致HEp-2细胞的损伤

目的 探讨长链非编码RNA NRAV(LncRNA NRAV)和PI3K/AKT通路在黄连素(berberine, BE)减轻RSV感染致HEp-2细胞损伤中的机制。方法 将HEp-2细胞感染RSV,并用BE、PI3K激活剂740Y-P处理或过表达NRAV。qRT-PCR检测NRAV、RSV-F、NS2表达水平;CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;ATP检测试剂盒检测ATP水平;Western blot检测细胞PI3K、AKT、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达;MitoSOX染色检测细胞线粒体ROS(mtROS);ELISA检测细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平。结果 过表达NARV细胞凋亡率、RSV活性增加,敲低后结果相反;BE能显著抑制NRAV和PI3K/AKT通路(P<0.05),改善线粒体功能、诱导线粒体自噬,提高细胞的活性、降低凋亡率（P<0.05）,并降低NLRP3炎性小体活化水平和IL-1β、IL-6、IL-8...     

大黄素对膝骨关节炎大鼠软骨细胞铁死亡的影响及机制研究

目的 探讨大黄素对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞铁死亡的影响及其机制。方法 96只SD大鼠分为假手术(Sham)组、KOA组、大黄素(EMO)组、大黄素+Nrf2抑制剂(EMO+ML385)组，每组24只，除Sham组外，其余组均采用改良Hulth法构建KOA模型。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)水平；肉眼观察膝关节大体形态；番红O-固绿染色观察膝关节软骨组织病理形态学；原位末端标记(TUNEL)染色检测膝关节软骨细胞凋亡率；生化试剂盒检测膝关节软骨组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、亚铁离子(Fe²⁺)水平；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹或免疫组化检测膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA或蛋白表达。结果 ...