ZWINT在RLR抗病毒先天免疫信号通路中的作用

目的探究ZWINT(ZW10 interacting kinetochore protein)对TBK1(TANK-binding kinase 1)或仙台病毒(Sendai virus,SeV)诱导的RLR(RIG-I like receptor)抗病毒先天免疫信号通路的影响。方法应用免疫共沉淀的方法检测ZWINT与RLR信号通路分子TBK1、VISA、RIG-I之间的相互作用;用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验验证ZWINT对TBK1或SeV诱导的IRF3二聚化的作用;利用双荧光素酶报告基因实验检测TBK1或SeV介导下ZWINT对干扰素启动子IFN-β的激活效果;通过实时荧光定量PCR实验检测ZWINT对SeV诱导的IFN-β转录的影响。结果 ZWINT与TBK1、VISA和RIG-I都有相互作用,过表达ZWINT增强了TBK1或SeV诱导的IRF3的二聚化水平以及IFN-β启动子的活性,此外,过表达ZWINT也加强了SeV诱导的IFN-β的转录。结论ZWINT是RLR抗病毒先天免疫信号通路中的正调控因子。     

AMPK通过抑制STING调节干扰素免疫应答通路的研究

目的探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)与cGAS-STING通路之间的联系及其在先天免疫中扮演的角色。方法利用CRISPR/Cas9技术、蛋白质印迹、RT-qPCR等方法,探究AMPK对DNA相关免疫通路的调控机制。结果在HT-DNA和cGAMP刺激下,AMPK-/-细胞株的IFN-β的表达量明显高于野生型细胞株,但这种变化在RNA信号通路中并不明显;激活AMPK可以抑制细胞内的DNA信号通路;在DNA信号通路中,AMPK-/-细胞株相较于野生型细胞株,STING在RNA和蛋白水平上都明显升高,即AMPK对cGAS-STING通路的抑制很可能是通过抑制STING起作用。结论AMPK在调节cGAS-STING介导的干扰素免疫应答中起重要作用。     

粉防己碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导卵巢癌细胞自噬

目的:研究粉防己碱(tetrandrine)对人卵巢浆液性囊腺癌SKOV3细胞活力及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测不同作用浓度的粉防己碱对SKOV3细胞活力的影响。采用吖啶橙染色法观察粉防己碱对SKOV3细胞中自噬溶酶体形成的影响。Western blot法检测粉防己碱处理前后SKOV3细胞自噬相关蛋白LC3的表达情况及相关信号通路的变化。最后,采用MTT法检测粉防己碱单用及联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对SKOV3细胞活力的影响。结果:粉防己碱可显著抑制SKOV3细胞的活力(P0.01),作用24 h其半数抑制浓度为15.21μmol/L。吖啶橙染色结果显示,粉防己碱明显促进SKOV3细胞中自噬溶酶体的生成。Western blot实验结果显示,粉防己碱干预后,SKOV3细胞中LC3-Ⅱ和P62蛋白的表达水平明显上调;同时,粉防己碱能明显降低PI3K/AKT/mTOR信号通路中p-mTOR和p-AKT蛋白的水平(P0.01)。自噬抑制剂3-MA增强了粉防己碱对SKOV3细胞活力的抑制作用。结论:粉防己碱可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬,同时,自噬活化参与了粉防己碱对SKOV3细胞生长的抑制作用。     

乙型肝炎病毒影响肝细胞对双链DNA诱导产生的Ⅰ型干扰素应答

目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)是否影响肝细胞对双链DNA(dsDNA)分子诱导产生的Ⅰ型干扰素应答。方法:以肝癌细胞HepG2以及整合有HBV基因的HepG2.2.15细胞为模型,转染dsDNA分子poly(dA-dT),实时定量RT-PCR检测IFN-β、干扰素应答基因IFIT1与炎症因子TNF-α的表达,Western blot检测NF-κB、IRF3的核转位以及pTBK1的表达。HBV复制型质粒HBV1.3转染HepG2、HBV siRNA转染HepG2.2.15后,实时定量RT-PCR检测细胞中IFIT1的表达。结果:poly(dA-dT)能够诱导HepG2细胞产生Ⅰ型干扰素,在转染后6小时,IFN-β与IFIT1表达达高峰,而后下降,TNF-α的表达与对照组相比没有明显变化。Poly(dA-dT)转染后6小时能检测到TBK1的磷酸化与IRF3的核转位,但NF-κB的核转位不明显。HepG2.2.15细胞在poly(dA-dT)转染后12小时能检测到TNF-α的一过性表达,而IFN-β与IFIT1的表达在72小时才达到高峰,与之对应的:在转染后6小时,没有检测到TBK1的磷酸化与IRF3的核转位。poly(dA-dT)与HBV1.3共转HepG2后,HBV的蛋白表达受到抑制,而将HBV siRNA转染HepG2.2.15后,细胞对poly(dA-dT)的应答明显增强。结论:HepG2与HepG2.2.15能够应对ds-DNA的刺激,通过NF-κB与IRF3信号通路产生Ⅰ型干扰素或炎症因子,但HBV的存在影响了肝细胞对dsDNA产生的固有免疫应答。     

cGAS促进HTLV-1反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答北大核心CSCD

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化;将cGAS表达质粒,转染入HeLa细胞,24 h后再转染入ssDNA90,real-time PCR试验检测HeLa细胞中干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达,免疫印迹试验检测HeLa细胞中干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平;采用siRNA的方法在HeLa和佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA）诱导分化的THP1（PMA-THP1）细胞中沉默cGAS的表达,24 h后再转染入ssDNA90,real-time PCR试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达,免疫印迹试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IRF3和p65的磷酸化水平。结果ssDNA90转染后,HeLa细胞中cGAS的表达升高;转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比,在ssDNA90刺激后,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加,IRF3和p65的磷酸化水平升高;沉默cGAS表达的HeLa和PMA-THP1细胞与对照组细胞相比,在ssDNA90刺激后,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量降低,IRF3和p65的磷酸化水平下降。结论cGAS在HTLV-1的反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答中可能具有促进功能。     

UⅡ／UT系统对LPS刺激枯否细胞固有免疫炎症信号通路TLR4-IRF3的影响

目的：探讨Urotensin Ⅱ（ UⅡ）/UT系统对脂多糖（ Lipopolysaccharide ,LPS）刺激枯否细胞（ Kupffer cell ,KC）固有免疫炎症信号通路Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）-干扰素调节因子3（Interferon regulatory factor 3,IRF3）的影响。方法：体外分离培养大鼠肝KCs,KCs培养上清液促炎性细胞因子IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平采用ELISA分析检测,细胞表面TLR4的表达采用流式细胞技术分析,IRF3基因和蛋白表达情况分别采用real-time PCR和Western blot 分析方法检测。结果：LPS刺激后,KCs培养上清液IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平、细胞表面TLR4表达阳性细胞率及细胞内IRF3 mRNA表达水平均显著升高,UT拮抗剂urantide预处理抑制了LPS刺激诱导KCs对上述分子的上调表达;LPS的应用也造成了KCs胞核内IRF3蛋白表达水平升高,而使胞浆内IRF3蛋白表达水平降低,urantide预处理后,抑制了LPS诱导KCs核内IRF3蛋白上调和胞浆水平下调。结论：UⅡ/UT系统通过对TLR4-IRF3通路的正性调控作用,介导了或至少部分介导了LPS刺激KCs的免疫性炎症分泌效应。     

病毒感染后表达下调的RNF167抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-β

目的探讨RNF167对病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-β的调控作用。方法 RNA病毒VSV和DNA病毒HSV-1感染小鼠腹腔巨噬细胞后,Western blot检测RNF167的表达水平。利用RNA干扰减少小鼠原代腹腔巨噬细胞中RNF167的表达后,病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞,实时荧光定量PCR法检测IFN-β的mRNA水平,ELIAS法检测细胞上清中IFN-β的浓度。Western blot法检测IFN-β的转录因子IRF3的磷酸化(p-IRF3)水平。结果VSV感染巨噬细胞4和8 h后,RNF167表达水平显著下降(P0.01),而HSV-1感染后RNF167的表达没有显著变化。si-RNF167降低小鼠腹腔巨噬细胞RNF167表达水平后,与对照细胞相比,感染RNA病毒后细胞中IFN-β的mRNA水平及上清中IFN-β水平显著下降(P0.01),p-IRF3水平也显著下降。而感染HSV-1病毒后上述指标均无差异。结论 RNF167能够特异性地调控RNA病毒感染的巨噬细胞中IFN-β的表达。     

DUT通过靶向RIG-I正调控RLR介导的抗病毒信号通路

目的探究DUT(deoxyuridine triphosphate nucleotidohydrolase, dUTPase)对RIG-I(retinoic acid-inducible gene I)介导的RLR(RIG-I-like receptors)抗病毒先天免疫的研究。方法采用免疫共沉淀的方法检测DUT与RIG-I之间的相互作用以及DUT对RIG-I介导的泛素化修饰的影响;应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验验证DUT对RIG-I或仙台病毒(Sendai virus,SeV)诱导的IRF3二聚化的作用;利用双荧光素酶报告基因实验检测RIG-I或SeV介导的DUT对干扰素启动子IFN-β的激活效果;通过实时荧光定量PCR实验检测DUT对SeV诱导的IFN-β转录的影响。结果 DUT与RIG-I相互作用,过表达DUT促进RIG-I或SeV诱导的IRF3的二聚化水平以及IFN-β启动子的活性。此外,过表达DUT也加强了SeV诱导的IFN-β启动子的转录水平,研究结果还表明DUT促进RIG-I泛素化修饰及RIG-I K63泛素化修饰,并且通过与RIG-I之间的相互作用增强RNF135、MEX3C、TRIM4介导的RIG-I K63泛素化修饰。结论 DUT是RIG-I介导的针对RNA病毒天然免疫应答的正调节因子。     

PAK5/β-catenin信号通路在乳腺癌细胞多药耐药中的作用及机制

目的探讨PAK5是否通过β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞的耐药。方法采用药物浓度递增法构建耐药细胞模型。CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力。Western blot法检测PAK5蛋白表达。罗丹明染色观察细胞荧光表达强弱。免疫荧光及免疫共沉淀实验检测PAK5与β-catenin的相互关系。结果与亲本细胞相比,耐药细胞增殖能力增强;罗丹明染色显示耐药株细胞荧光强度减弱。Western blot实验结果表明耐药细胞中PAK5表达增加。PAK5过表达细胞增殖能力增强。与对照组细胞相比,PAK5过表达组细胞IC50值明显增加,而PAK5干扰组的IC50值则明显降低。细胞免疫荧光定位实验显示,PAK5过表达后,β-catenin表达增加。免疫共沉淀实验表明,PAK5可与β-catenin结合并影响其表达。结论PAK5促进乳腺癌细胞产生耐药,且可能是通过β-catenin信号通路,因此PAK5可能成为治疗乳腺癌患者的新靶点。     

内源性β干扰素维持M1型巨噬细胞极化状态抑制肝癌细胞增殖和侵袭

目的研究内源性β干扰素(IFN-β)对M1型巨噬细胞极化状态及M1型巨噬细胞介导抗肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外建立单核系肿瘤细胞U937来源的M1巨噬细胞U937-M1模型,用实时定量PCR、ELISA及流式细胞术鉴定其表型。通过干扰IFN-β1基因或用抗体中和IFN-β,检测M1/M2巨噬细胞表型标志物表达的变化;用实时定量PCR和Western blot法检测干扰素调节因子1(IRF1)及IRF5的表达。收集不同处理组的U937-M1细胞培养上清为条件培养基(CM),分别培养Hep G2细胞及SMMC-7721细胞,用CCK-8法和TranswellTM侵袭实验分别检测CM对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。结果与未激活型U937-M0细胞相比,U937-M1细胞白细胞介素12p35(IL-12p35)、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CD86表达显著增强;而两组均低表达CD206。阻断內源IFN-β作用后,与U937-M1细胞相比,上述M1型巨噬细胞相关表型标志物表达明显减弱;反之,M2型巨噬细胞表型标志物IL-10和CD206表达增强;且IRF1及IRF5表达均减弱;阻断IFN-β作用后,M1型巨噬细胞对肝癌细胞增殖及侵袭的作用从抑制转变为促进。结论阻断內源IFN-β后,M1型巨噬细胞极化状态以及U937-M1介导抗肝癌效应受到抑制;IFN-β可能参与调节IRF1和IRF5的表达,维持M1型巨噬细胞极化状态和功能。     

β干扰素联合全反式维甲酸通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制HepG2人肝癌细胞增殖并促进其凋亡

目的研究β干扰素(IFN-β)和全反式维甲酸(ATRA)联合应用对Hep G2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3(JAK2/STAT3)通路在其中可能的机制。方法分别用1000 U/m L IFN-β、10μmol/L ATRA及1000 U/m L IFN-β联合10μmol/L ATRA处理Hep G2细胞24 h,采用MTT法检测Hep G2细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)和磷酸化的信号转导子与转录激活子3(p-STAT3)、维甲酸-干扰素诱导死亡相关基因19(GRIM-19)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax蛋白的表达。结果 IFN-β、ATRA作用于细胞后,Hep G2细胞增殖受到抑制,同时诱导细胞发生凋亡,IFN-β联合ATRA联合处理作用更强;Hep G2细胞中p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达在IFN-β或ATRA作用下减弱,GRIM-19和Bax蛋白表达升高。IFN-β联合ATRA处理作用更强。结论 IFN-β联合ATRA通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制Hep G2人肝癌细胞的增殖并促进其凋亡。     

TCRVβ7.1基因转染对肝癌细胞刺激的外周血单个核细胞ERK信号通路和IFN-γ表达的影响

目的： 研究肝癌特异性识别基因TCRVβ7.1表达重组体转染外周血单个核细胞(PBMCs)后对T细胞细胞因子表达的影响和信号通路的激活作用。方法: 以肝癌特异性T细胞受体Vβ7.1转染PBMCs,流式细胞仪检测TCRVβ7.1表达量;Western blotting检测ERK1/2表达量及磷酸化水平（p-ERK）的改变;用ELISA法检测白细胞介素-4（IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）的表达量。结果: TCRVβ7.1基因转染健康人PBMCs并得到有效表达,转染TCRVβ7.1基因的PBMCs 与肝癌细胞共培养后ERK蛋白磷酸化水平明显高于未转染组(P<0.01)。p-ERK1/2水平与T细胞激活有关。ELISA结果表明,转染PBMCs细胞与肝癌细胞共培养后,IFN-γ水平明显高于未转染组,而IL-4无明显改变。结论: TCRVβ7.1转染PBMCs与肝癌细胞共培养后,ERK信号通路被激活,IFN-γ表达增高。     

Wnt/β-catenin信号通路对哮喘大鼠气道平滑肌细胞迁移能力的影响

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响。方法建立哮喘大鼠模型,原代培养大鼠气道平滑肌细胞(ASMC),采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法分别检测正常大鼠平滑肌细胞和ASMC中β-catenin信号通路mRNA和蛋白表达水平;采用Transwell迁移实验检测ASMCs的迁移能力,并分析应用β-catenin siRNA对其迁移能力的干预作用。结果 RT-PCR和Western blot结果显示哮喘大鼠ASMCs中β-catenin的mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高;β-catenin特异性siRNA能够降低ASMCs中β-catenin mRNA和蛋白表达水平;沉默β-catenin能够显著降低ASMCs的迁移能力。结论哮喘大鼠模型ASMCs的迁移能力显著增强,β-catenin信号通路的异常激活可能参与了这一生物学事件。     

TAMs激活Src-RhoA通路上调免疫抑制因子表达及促进直肠癌细胞增殖和EMT

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)对直肠癌增殖和EMT的影响及其作用机制。方法用佛波酯(PMA)及白介素4(interleukin 4,IL-4)诱导人单核巨噬细胞(THP1),使其分化为M2型TAMs,采用流式细胞仪检测CD163和CD16的阳性表达率;TAMs与SW837细胞共培养48 h,通过CCK-8法检测SW837细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测IL-10和TGF-β1的表达量,Western blot分析E-cadherin、N-cadherin、IL-10、TGF-β1蛋白的表达以及Src、RhoA蛋白的磷酸化水平;Src通路抑制剂SU6656作用细胞后,分别用CCK-8和流式细胞仪检测SW837细胞活力和细胞总死亡率,Western blot检测细胞中IL-10、TGF-β1、E-cadherin和N-cadherin的表达量。结果 THP1分化诱导为TAMs后,CD163的阳性表达率明显高于CD16的阳性表达率(P0.01);和SW837、SW837+THP1+PMA、SW837+THP1+IL-4细胞相比,SW837与TAMs共培养后使SW837细胞活力明显升高(P0.05),SW837细胞总死亡率明显降低(P0.01),N-cadherin表达量明显升高,Ecadherin表达量明显降低,IL-10和TGF-β1蛋白表达量明显升高;TAMs激活直肠癌SW837细胞中Src-RhoA通路,使Src、RhoA蛋白的磷酸化水平明显升高;和SW837+TAMs细胞相比,SW837+TAMs+SU6656细胞活力明显降低,细胞总死亡率明显升高,E-cadherin蛋白表达量明显升高,N-cadherin蛋白表达量明显降低,IL-10和TGF-β1蛋白表达量明显降低。结论肿瘤相关巨噬细胞通过激活Src-RhoA通路产生免疫抑制因子、促进了直肠癌的增殖和EMT。     

METTL3抑制抗病毒先天免疫信号转导

目的 进一步探究甲基转移酶样蛋白3（methyltransferase-like protein 3,METTL3）对抗病毒先天免疫信号转导过程的影响。方法 在HEK293T细胞中过表达以及敲低METTL3,利用不同的病毒感染细胞后,通过免疫印迹法检测Ⅰ型干扰素信号通路中上游激酶TANK结合激酶1（TANK binding kinase 1, TBK1）以及下游转录因子干扰素调节因子3（interferon regulatory factor 3,IRF3）和核因子κB（NF-κB）p65亚基活化情况,水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus, VSV）复制标志分子VSV-G表达水平。通过尾静脉注射VSV建立小鼠感染模型,观察Mettl3敲除小鼠(Mettl3^F/F;Mx1-Cre)和对照小鼠(Mettl3^F/F)生存率以及肝系数和肺系数的变化情况;通过ELISA检测小鼠血清Ⅰ型干扰素IFN-α和IFN-β的产生情况。结果 HEK293T细胞中过表达METTL3后TBK1、p65以及IRF3的磷酸化减弱,VSV-G...     

SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路促进细胞炎症因子释放

目的：探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法：双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测ORF7a蛋白对p65磷酸化及入核的影响,免疫共沉淀及免疫荧光技术检测ORF7a的作用靶标蛋白。结果：报告基因试验表明ORF7a显著激活NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖性（P<0.001）,而对AP-1报告基因的激活无明显影响。ORF7a显著上调细胞因子TNF-α、IL-β及IL-8 mRNA表达（P<0.05）。Western blot结果显示ORF7a显著增强p65蛋白磷酸化（P<0.05）及p65的入核（P<0.01）。免疫共沉淀实验发现ORF7a与NF-κB信号通路分子IKKβ蛋白存在相互作用,免疫荧光实验也证实ORF7a与IKKβ具有共定位。结论：SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路,进而促进细胞中炎症因子的释放。     

辐照促进肿瘤细胞分泌cGAMP和NO增强Ⅰ型干扰素应答

目的 揭示辐照诱导环鸟苷酸-腺苷酸（cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate, c GAMP）和一氧化氮（nitric oxide, NO）调节抗肿瘤Ⅰ型干扰素表达的新机制。方法 RT-qPCR技术检测Ifnb、Cxcl10、Il6和Nos2基因的表达。免疫印迹技术检测cGAS-STING信号通路激活和诱导型一氧化氮合酶（nitric oxide synthase 2 inducible, iNOS）的蛋白表达;液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）和ELISA检测细胞内外cGAMP的含量。通过使用LRRC8 volume-regulated anion channel(LRRC8/VRAC)和iNOS抑制剂阻断cGAMP释放和NO产生。结果 辐照处理肿瘤细胞MC38后,显著诱导了p-STING、p-TBK1和p-IRF3的表达;相应地,Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达也大幅度升高（P<0.001）;辐照处理Cgas或Sting基因敲除的MC38细胞后,Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达明显下降...     

γ-干扰素通过激活JAK/STAT信号转导途径上调小鼠系膜细胞内HMGB1表达

目的:本实验以小鼠系膜细胞为研究对象,IFN-γ为刺激物,通过检测JAK/STAT信号途经的激活及HMGB1mRNA及蛋白表达,探讨γ干扰素刺激系膜细胞HMGB1表达上调的可能机制。方法:常规培养小鼠系膜细胞(Mousemesangial cell,MMC),无血清培养基同步化后分为正常对照组、IFN-γ(500 U/ml)刺激组和INF-γ+AG490(INF-γ500 U/ml+AG490 200μmol/ml)组。Western blot检测JAK、STAT1和HMGB1蛋白的表达变化,RT-PCR检测HMGB1mRNA的表达变化。结果:Western blot结果显示IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞JAK、STAT1磷酸化和STAT1核转位,并呈时间依赖性;AG490能够降低IFN-γ介导的JAK1、JAK2、STAT1的活化,并呈时间依赖性。IFN-γ能够上调系膜细胞中HMGB1mRNA及蛋白表达,并随着刺激时间延长,其相对表达量呈上升趋势,AG490处理后,系膜细胞中HMGB1mRNA蛋白表达降低,并随时间延长而下调。结论:IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞HMGB1表达上调,JAK/STAT信号通路激活可能是其主要机制之一。     

Notch1信号通过TRAF6参与TLR4介导的NF-κB激活

目的观察Notch1和TLR4信号交叉调控NF-κB激活并探讨其可能的作用机制。方法体外培养RAW264.7细胞,LPS刺激RAW264.7细胞后检测Notch1信号激活以及Notch1信号抑制剂DAPT对TNF-α、IL-6和IL-1β表达的影响,Western blot检测DAPT对IKKα/β磷酸化以及NF-κB p65活化的影响,并检测DAPT对TLR4信号通路IKKα/β上游信号My D88和TRAF6表达的影响。结果 LPS刺激RAW264.7细胞后能显著提高Notch1信号蛋白NICD和目的蛋白Hes1表达,DAPT能明显抑制NICD和Hes1的表达。LPS诱导TNF-α、IL-6和IL-1β表达和释放能被DAPT抑制但被Notch1信号激动剂jagged1增强。DAPT能够抑制LPS介导的TRAF6表达和IKKα/β磷酸化,促进NF-κB p65核转位,但DAPT对LPS诱导My D88的表达没有明显的影响。结论 Notch1和TLR4信号存在交叉对话,Notch1通过TRAF6调控NF-κB活化参与TLR4介导的免疫应答。