苦参碱联合高三尖杉酯碱抑制急性髓系白血病HL-60细胞增殖的研究

目的 探讨苦参碱(MAT)联合高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖的抑制作用,寻找经济有效的抗白血病中药.方法 应用CCK8法检测HHT、MAT单药对HL-60细胞的增殖抑制情况,以低于50％抑制浓度(IC50)的HHT与低于10％抑制浓度(IC10)的MAT联合用药,检测联合用药对HL-60细胞的增殖抑制情况.结果 HHT、MAT单独用药时,随着药物浓度增加,对HL-60细胞增殖抑制作用逐渐增强,与剂量呈依赖关系,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).HHT、MAT对HL-60细胞IC50分别为0.042、780 mg/L.MAT对HL-60细胞IC10是32 mg/L,与各相应浓度HHT单独用药比较,不同浓度(0.002 5、0.005 0、0.010 0、0.020 0、0.040 0 mg/L)HHT与MAT(25 mg/L)分别联合用药对HL-60细胞增殖的抑制率均升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 中药提取物HHT、MAT有抑制HL-60细胞增殖作用,联合用药能增强抑制作用.     

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

目的:观察膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用。方法:不同浓度的MK886作用于HL-60细胞不同时间后,CCK-8测定其对HL-60细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot法检测mPGES-1、Bax、Bcl-2蛋白的表达,ELISA法检测PGE2。结果:HL-60细胞株高表达mPGES-1。MK886可时间、剂量依赖性地抑制HL-60细胞mPGES-1表达和PGE2合成,同时细胞增殖受到抑制,凋亡增加,Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。结论:MK886可抑制HL-60细胞增殖,诱导凋亡,其机制与下调mPGES-1表达、抑制PGE2合成和调控Bcl-2/Bax等有关。     

淋系分化抗原在急性髓细胞白血病及髓系分化抗原在急性淋巴细胞白血病的表达及疗效观察

目的　探讨淋系分化抗原在急性髓性细胞白血病及髓系分化抗原在急性淋巴细胞白血病的表达及疗效。方法　采用流式细胞术检测 70例急性白血病的免疫表型 ,其中急性髓细胞白血病 32例 ,急性淋巴细胞白血病 38例。 32例急性髓细胞白血病有 9例除表达髓系抗原外 ,尚有淋巴抗原表达。 38例急性淋巴细胞白血病有 11例除表达淋系抗原外 ,尚有髓系抗原表达。结果　 9例LY+ AmL病人用常规DA方案化疗仅 1例缓解 ,11例MY+ ALL病人用标准DVP方案化疗无一缓解。LY+ AmL的病人改用DOAP方案化疗 ,有 2例获缓解 ,缓解率 2 5 %。MY+ ALL改用QOAP方案化疗有 2例获缓解 ,1例获部分缓解 ,缓解率 18.1% ,有效率 2 7.2 %。结论　对于LY+ AmL及MY+ ALL病人其化疗方案的选择应AML与ALL两者兼顾方可提高缓解率。     

急性髓系白血病细胞异常免疫表型表达的研究

应用免疫酶标染色法检测了５９例急性髓系白血病患者的白血病细胞免疫表型，结果表明，ＣＤ２，ＣＤ５，ＣＤ７，ＣＤ１０，ＣＤ１９，ＣＤ２２淋系抗原的表达率分别为１６．９％，１１．９％，１６．９％，１５．３％，１０．２％和６．８％。进一步分析结果表明，在Ｍ３病例细胞中，ＣＥ２，ＣＤ１０和ＣＤ１９抗原表达阳性率明显高于Ｍ５组，而ＣＤ７抗原表达阳性率明显低于Ｍ５组。     

急性髓系白血病Evil基因表达的研究

目的:探讨急性髓系白血病中Evil基因表达及意义.方法:应用RT-PCR方法检测了94例急性髓系白血病(AML,包括初治19例,复发23例,缓解22例)患者及10名正常对照Evil基因的表达.结果:10名正常人骨髓单个核细胞中无Evil mRNA的表达.AML患者Evil基因总的阳性表达率为18.1%(17/94),M5型未见表达,其中初治、复发、缓解组的Evil基因阳性率分别为26.5%、17.4%、0,初治和复发组差别无显著性(P=0.554).M3患者中Evil、PML/RARα双阳性组与PML/RARα单阳性组相比复发率高(P＜0.05),早期死亡率高.Evil阳性的AML患者多数生存期短.结论:Evil基因是一个原癌基因,在髓系白血病的发病中起重要作用,是髓系白血病预后不良的一个指标.     

调节性B细胞在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）是常见的髓系原始细胞单克隆性恶性增殖的造血系统疾病,但是其免疫学机制目前尚不清楚。一般认为参与恶性肿瘤免疫反应的细胞包括调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）、效应性T细胞（effective T cells,Teff）和B细胞等。B细胞具有活化T细胞、产生抗体等功能,近年发现一群具有免疫调节功能的B细胞（调节性B细胞,regulatory B cells,Breg）,能够对Treg、Teff等细胞起调节作用。深入研究Breg细胞在AML的免疫学发病机制有重要意义。因此,本文就Breg细胞在AML中的研究进展进行综述。     

FHIT对急性髓系白血病细胞HL60影响的研究

目的:进行外源FHIT基因转染人白血病细胞缺乏FHIT表达的HL60,研究FHIT基因对转染细胞生长的生物学影响。方法:构建pEGFP-FHIT真核表达质粒(实验组)与质粒pEGFP-N1(对照组)。分别电穿孔法转染HL60细胞。应用荧光显微镜、RT-PCR、Westernblot检测转染基因的转录和表达情况。四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术研究转染基因对HL60细胞体外增殖、凋亡情况的影响,并与转染对照质粒的细胞株进行比较。结果:经PCR、酶切和DNA测序证实pEGFP-FHIT真核载体构建成功。荧光显微镜下实验组HL60细胞可见绿色荧光,转染率为40%。RT-PCR和Westernblot分别从mRNA和蛋白水平检测到FHIT的表达。MTT检测结果显示:转染后实验组抑制率明显升高,细胞增殖受到抑制(P<0.05)。流式细胞术结果显示:实验组细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:转染FHIT基因对白血病细胞HL60的生长有抑制作用,并能诱导其凋亡。     

急性髓系白血病细胞异常免疫表型表达的研究

应用免疫酶标染色法检测了59例急性髓系白血病（AML）患者的白血病细胞免疫表型，结果表明CD2、CD5、CD7、CD10、CD19、CD22淋系抗原的表达率分别为16．9％（10／59）、119％（7／59）、16．9％（10／59）、15．3％（9／59）、102％（6／59）和6．8％（4／59）。进一步分析结果表明，在M3病例细胞中，CD2、CD10和CD19抗原表达阳性率明显高于M5组，而CD7抗原表达阳性率则明显低于M5组。结合临床，CD2、CD19阳性的AML病例对化疗治疗及应优于CD2、CD19阴性的AML病例；CD7阳性的AML病例的疗效与预后则比CD7阴性的AML病例差。提示部分AML病例的白血病细胞存在不同程度异常免疫表型的表达，且与疗效及预后有一定关系。     

FHIT对急性髓系白血病细胞HL60影响的研究

目的:进行外源FHIT基因转染人白血病细胞缺乏FHIT表达的HL60,研究FHIT基因对转染细胞生长的生物学影响。方法:构建pEGFP-FHIT真核表达质粒（实验组）与质粒pEGFP-N1（对照组）。分别电穿孔法转染HL60细胞。应用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot检测转染基因的转录和表达情况。四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞术研究转染基因对HL60细胞体外增殖、凋亡情况的影响,并与转染对照质粒的细胞株进行比较。结果:经PCR、酶切和DNA测序证实pEGFP-FHIT真核载体构建成功。荧光显微镜下实验组HL60细胞可见绿色荧光,转染率为40%。RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测到FHIT的表达。MTT检测结果显示:转染后实验组抑制率明显升高,细胞增殖受到抑制（P＜0.05）。流式细胞术结果显示:实验组细胞凋亡率明显增加（P＜0.05)。结论:转染FHIT基因对白血病细胞HL60的生长有抑制作用,并能诱导其凋亡。     

免疫疗法治疗急性髓系白血病的新进展

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）是最常见的白血病,发病率居高不下,尽管随着科技的发展,可以延长其生存期,但对新型治疗方法的需求仍十分紧迫。当前的癌症免疫学和免疫疗法概念具有相关性,因此可以考虑从免疫治疗的角度上治疗AML,但在设计针对这种白血病的合理免疫疗法时,还应考虑AML免疫失调的独特方面。本文主要从改善免疫系统和白血病靶标之间的平衡,直接针对白血病的抗体,T细胞和NK细胞进行干预,使用呈递白血病抗原的增强抗原呈递细胞重新设计并重新激活患者T细胞的疫苗三方面进行综述。     

EFFECTS OF CURCUMIN ON PROLIFERATION AND APOPTOSIS IN ACUTE MYELOID LEUKEMIA CELLS HL-60

Curcuministhemajoringredientofextractsfromcurryfamilywidelyusedasayellowspiceandfoodadditive.Ithasavarietyofpharmacologicaleffectsincludinganti-inflammation,antioxidant,decreasingbloodlipid,enhancingphagocaryosisofmonocyte-macrophagesystemandregulatinghumanimmunityfunction.Ithasbeenshowntohaveanticarcinogenicpropertiesinanimalmodelsincludingcutaneous,gastrointestinaltractandbreastcancercausedbymanykindsofcarcinogenesisagents[1].Invitrostudieshaveshownthatcurcuminselectivelyinhibitgrowthofsomep…     

阿斯匹林抑制白血病细胞增殖的实验研究

目的以人急性髓细胞性白血病细胞系HL-60为模型,研究非甾体类抗炎药阿斯匹林(ASA)对HL-60细胞生长的影响.方法利用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,并分析剂量反应曲线;通过流式细胞仪(FCM)了解其对细胞周期的影响.结果(1)ASA在浓度为(2.5～10.0)mmol/L作用72h后,HL-60细胞增殖抑制随浓度增加而增加,其IC 50值为8.97mmol/L;并且2.5mmol/L ASA与100μg/ml Ara-c有协同作用;(2)ASA处理后HL-60细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增多.结论结果提示一定浓度ASA在体外能抑制HL-60细胞增殖,抑制率与ASA剂量相关;ASA抑制HL-60细胞增殖可能与其干扰细胞周期有关.     

黄芩苷作用HL-60细胞前后c-myc基因表达的变化

 目的 研究中药黄芩苷（baicalin）对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增生、凋亡的影响及探讨c-myc基因在其中的作用。方法 培养人髓系白血病细胞株HL-60细胞,应用MTT法绘制细胞生长曲线观察黄芩苷对HL-60细胞增生的影响;DNA凝胶电泳观察细胞凋亡;RT-PCR检测黄芩苷作用前后c-myc基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测黄芩苷作用前后c-myc蛋白表达水平的变化。结果　细胞生长曲线结果示黄芩苷能明显抑制HL-60细胞增生,半数抑制浓度（IC50）约为20μmol／L,DNA 片段化的检出表明黄芩苷能有效诱导HL-60细胞凋亡;黄芩苷作用后HL-60细胞c-myc基因和蛋白的表达水平均下降,并且随作用时间延长,表达下降更明显。结论 黄芩苷能有效抑制HL-60细胞增生,诱导其凋亡,c-myc基因可能参与了黄芩苷抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡的过程。     

乙酰紫草素诱导急性髓系白血病HL-60细胞发生铁死亡的作用及分子机制

目的:探究乙酰紫草素诱导急性髓系白血病HL-60细胞发生铁死亡的作用及分子机制。方法:采用1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL和8 μg/mL的乙酰紫草素干预HL-60细胞24 h和48 h,CCK-8实验检测乙酰紫草素对HL-60细胞增殖活力的影响;Western blot检测铁死亡相关蛋白［转录调节因子p53、胱氨酸/谷氨酸反向转运体(XCT）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、膜蛋白转铁蛋白受体1(TFR1/CD71)、铁蛋白重链1(FTH1)］的表达水平;采用GSH/GSSG检测试剂盒检测不同浓度乙酰紫草素干预HL-60细胞24 h后细胞内GSH、GSSG的含量变化;采用4 μg/mL的乙酰紫草素和0.1 μmol/L细胞铁死亡抑制剂（Ferrostatin-1,Fer-1）共同干预HL-60细胞24 h,Western blot检测铁死亡相关蛋白p53、XCT、GPX4、CD71、FTH1的表达水平。结果:与对照组和DMSO组相比,不同浓度的乙酰紫草素对HL-60细胞的增殖均具有较强的抑制作用;乙酰紫草素显著升高p53和CD71的表达水平,显著降低XCT、GPX4和FTH1的表达水平,其中4 μg/mL乙酰紫草素干预HL-60细胞24 h,各蛋白表达水平变化最明显;乙酰紫草素显著减少GSH的含量（P＜0.000 1）,显著提高GSSG/GSH的比值（P＜0.000 1）;Fer-1将显著升高的p53和CD71以及显著降低的XCT、GPX4和FTH1的表达水平逆转。结论:乙酰紫草素一方面可能通过上调p53的表达,抑制XCT的表达,减少GSH含量,进而抑制GPX4的表达,促进HL-60细胞发生铁死亡;另一方面通过上调CD71（TFR1）的表达,下调FTH1的表达,从而影响HL-60细胞内铁稳态促进铁死亡的发生。     

Small‐molecule Hedgehog inhibitor attenuates the leukemia‐initiation potential of acute myeloid leukemia cells

Aberrant activation of the Hedgehog signaling pathway has been implicated in the maintenance of leukemia stem cell populations in several model systems. PF‐04449913 (PF‐913) is a selective, small‐molecule inhibitor of Smoothened, a membrane protein that regulates the Hedgehog pathway. However, details of the proof‐of‐concept and mechanism of action of PF‐913 following administration to patients with acute myeloid leukemia (AML) are unclear. This study examined the role of the Hedgehog signaling pathway in AML cells, and evaluated the in vitro and in vivo effects of the Smoothened inhibitor PF‐913. In primary AML cells, activation of the Hedgehog signaling pathway was more pronounced in CD34⁺ cells than CD34^? cells. In vitro treatment with PF‐913 induced a decrease in the quiescent cell population accompanied by minimal cell death. In vivo treatment with PF‐913 attenuated the leukemia‐initiation potential of AML cells in a serial transplantation mouse model, while limiting reduction of tumor burden in a primary xenotransplant system. Comprehensive gene set enrichment analysis revealed that PF‐913 modulated self‐renewal signatures and cell cycle progression. Furthermore, PF‐913 sensitized AML cells to cytosine arabinoside, and abrogated resistance to cytosine arabinoside in AML cells cocultured with HS‐5 stromal cells. These findings imply that pharmacologic inhibition of Hedgehog signaling attenuates the leukemia‐initiation potential, and also enhanced AML therapy by sensitizing dormant leukemia stem cells to chemotherapy and overcoming resistance in the bone marrow microenvironment.     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

HL-60细胞向单核系和粒系分化的比较蛋白质组学研究

背景与目的：已有研究发现NSC67657和全反式维甲酸可以诱导HL-60细胞分别向单核系和粒系分化。本研究比较分析不同诱导剂诱导HL-60细胞向单核系和粒系分化前后以及分化中的蛋白表达差异,发现与单核系和粒系分化有关的关键蛋白。方法：分别采用粒系分化诱导剂全反式维甲酸和单核系分化诱导剂NSC67657诱导HL-60细胞分化,MTT法检测细胞增殖情况：流式细胞技术分析细胞表面特异性分化抗原（CD11b／CD14）的表达,根据CD14表达情况计算细胞分化百分率;细胞化学染色对HL-60的两系分化进行验证。改良双向电泳分离技术对HL-60细胞全蛋白进行分离,PDQuest软件分析寻找差异蛋白点,基质辅助激光解吸-飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）对蛋白点进行分析,RT-PCR和免疫印迹对差异蛋白ICAT进行验证。结果：全反式维甲酸和NSC67657均抑制HL-60细胞增殖,并分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化。在2μmol／LATRA和10μmol／LNSC67657作用5d后．CD11b和CD14的表达均在90％以上,细胞化学染色支持细胞两系分化的结论。蛋白质组学分析表明,HL-60细胞分别向粒系和单核系分化后,有25个差异蛋白点的变化趋势在两系分化中是相同的,有10个差异蛋白点在单核系分化后表达有差异。有15个差异蛋白点在粒系分化后表达有差异：ICAT是其中差异蛋白之一,通过基因和蛋白水平验证．发现ICAT在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化过程中表达升高,而在粒系和非处理细胞中表达无显著性差异。结论：双向电泳／MOLDI-TOFMS对HL-60细胞分化前后细胞全蛋白进行分析．发现了一批与两系分化有关的蛋白分子．为关键蛋白的筛选及其功能研究提供了重要的启示。     

WT1 isoform expression pattern in acute myeloid leukemia

WT1 plays a dual role in leukemia development, probably due to an imbalance in the expression of the 4 main WT1 isoforms. We quantify their expression and evaluate them in a series of AML patients.Our data showed a predominant expression of isoform D in AML, although in a lower quantity than in normal CD34+ cells. We found a positive correlation between the total WT1 expression and A, B and C isoforms. The overexpression of WT1 in AML might be due to a relative increase in A, B and C isoforms, together with a relative decrease in isoform D expression.     

紫草素衍生物SK36对白血病HL-60细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨紫草素衍生物5,8-二甲基-2-β-羟基-异戊酰紫草素(5,8-dimethyl-2-β-hydroxy-isovaleryl shikonin,SK36)对人白血病细胞株HL-60增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:CCK-8法检测SK36对HL-60细胞的增殖抑制作用;光学显微镜下观察细胞形态的变化;AnnexinⅤ /PI 双标记法检测细胞凋亡率;FCM法检测caspase-3活性;JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位.结果:SK36能明显抑制HL-60细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;在光学显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化;FCM法检测结果显示,SK36作用HL-60细胞24和48 h时的细胞凋亡率分别为(55.55±2.88)%和(72.12±14.50)%,明显高于对照组;caspase-3活性增加,线粒体跨膜电位发生崩塌,且随着时间的延长其效应更加明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:SK36在体外可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡 .