机械敏感离子通道Piezo1通过激活β-catenin诱导心房成纤维细胞衰老北大核心CSCD

目的 衰老心房成纤维细胞中新型机械敏感离子通道Piezo1的基因表达明显升高,观察其是否通过激活β-catenin参与心房成纤维细胞的衰老进程。方法 通过酶消化法分离培养3~4周龄雄性C57BL/6小鼠原代心房成纤维细胞,给予叔丁基过氧化氢(TBHP)刺激建立衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性。Western blot检测TBHP(100μmol·L^(-1))处理的细胞中Piezo1、β-catenin/p-β-catenin及衰老相关蛋白p53和p21的表达水平。衰老的小鼠心房成纤维细胞(MAFs)分别给予Piezo1通道抑制剂GsMTx4(3、10μmol·L^(-1))或Piezo1 siRNA,以及β-catenin抑制剂XAV939(3、10μmol·L^(-1));年轻的MAFs给予Piezo1特异性激动剂Yoda1(1、10μmol·L^(-1)),观察对细胞中β-catenin和衰老相关蛋白表达和活性的影响。结果 TBHP处理后,MAFs的SA-β-Gal染色阳性率明显增加,提示细胞发生衰老;且细胞中Piezo1、β-catenin/p-β-catenin和p53/p21的蛋白表达明显增加(P<0.05)。分别抑制Piezo1(GsMTx4/Piezo1 siRNA)或β-catenin(XAV939),可明显降低TBHP诱导的MAFs衰老率,以及减少β-catenin/p-β-catenin,p53/p21等蛋白表达和活性的增加(P<0.05)。而Yoda1可促进年轻细胞衰老,且β-catenin活性和衰老相关蛋白表达升高(P<0.05)。结论 机械敏感离子通道Piezo1通过激活β-catenin诱导心房成纤维细胞衰老的病理过程。     

莪术醇对肝星状细胞内质网应激和凋亡的作用研究

目的 探究莪术醇对肝星状细胞内质网应激和凋亡的作用，阐明其抗肝纤维化作用的机制。方法 将肝星状细胞分为对照组(正常培养)、模型组(1μg·mL^-1脂多糖)和低、中、高剂量实验组(在模型组基础上分别使用12.5、25.0和50.0 mg·L^-1莪术醇处理)组。用噻唑蓝法检测莪术醇对肝星状细胞活力的影响；用流式细胞术检测各组细胞凋亡发生情况和各组活性氧(ROS)的表达；用蛋白质印迹法检测各组B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、内质网应激相关蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶RNA样内质网激酶p-PERK)、半胱氨酸蛋白酶12(caspase12)蛋白表达情况；用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ型(collagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ型(collagenⅢ)mRNA表达情况。结果 对照组、模型组、高剂量实验组细胞ROS表达水平分别为(21.09±4.51)%、(32.78±2.90)%和(72.81±6.89)%; GRP78蛋白相对表达水...     

青蒿琥酯抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及机制研究

目的研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用及其可能机制。方法制备牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组:正常对照组、模型对照组、Art组(5、15、45 mg.kg-1)、阳性对照Col组(0.1 mg.kg-1)。Masson染色观察肝组织病理变化,Jamall法测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,RT-PCR技术检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1),α-肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),用TGF-β1(5μg.L-1)刺激,与Art(终浓度6.25、25、50 mg.L-1)共培养后,检测HSC-T6中Ⅰ型前胶原(procollagenⅠ)mRNA及Ⅰ型胶原(collagenⅠ)蛋白的表达。结果与模型组相比,Art各组能减轻肝组织纤维增生的程度,降低肝组织Hyp含量,使肝组织α-SMA、TGF-β1 mRNA和HSC-T6中procollagenⅠmRNA和collagenⅠ蛋白的表达水平下降。结论 Art有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制HSC活化,降低TGF-β1 mR-NA及collagenⅠ蛋白的表达有关。     

瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4调控肝星状细胞活化增殖作用研究

目的探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4(transient receptor potential vanilloid receptor 4,TRPV4)对肝星状细胞(hepatic stelate cell,HSC)活化增殖的作用及可能的作用机制。方法以含50%CCl4的花生油溶液(1m L·kg-1)皮下注射,建立大鼠肝纤维化模型。应用蛋白印迹等方法在体观察TRPV4及肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白表达变化。以转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)(10μg·L-1)刺激肝星状细胞株(HSC-T6),离体观察TRPV4及α-SMA的蛋白表达变化。应用TRPV4非特异性抑制剂钌红(ruthenium red,Ru)及TRPV4-siRNA特异性沉默TRPV4,观察HSC-T6增殖及α-SMA、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt/PKB)蛋白表达变化。结果肝纤维化组织与TGF-β1活化的HSC中TRPV4及α-SMA蛋白表达明显增加。阻断TRPV4可明显抑制HSC增殖,且α-SMA、Akt蛋白表达明显降低。结论 TRPV4参与调控HSC的活化增殖,调控Akt蛋白磷酸化。     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

木犀草素对肝纤维化进程中肝细胞上皮间质转化的抑制作用

目的:研究木犀草素抑制肝纤维化进程中肝细胞上皮间质转化的作用。方法:大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg),每周2次,连续12周以复制大鼠肝纤维化模型。30只SD大鼠随机均分为正常对照(等容含5%CMC-Na溶液)组、模型(等容含5%CMC-Na溶液)组、木犀草素(100 mg/kg)组。第1次腹腔注射CCl4后灌胃给药,每天1次,连续12周。HE和VG染色检测大鼠肝组织病理学变化,免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)-β1、波形蛋白(Vimentin)、上皮型E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。采用门静脉插管Ⅳ型胶原酶原位灌注法分离大鼠原代肝细胞。实验随机均分为空白对照(等容含10%FBS的DMEM溶液)组、模型(等容含10%FBS的DMEM溶液)组与木犀草素高、中、低浓度(40、20、10 mmol/L)组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测α-SMA、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、E-cadherin、转录因子Snail、白蛋白(ALB)、糖原合成酶(GS)mRNA的表达;Western blot法检测α-SMA、Vimentin、E-cadherin蛋白的表达。结果:与模型组比较,木犀草素组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Vimentin表达减弱,E-cadherin表达增强,肝脏病理学程度减轻;木犀草素高、中、低浓度组大鼠肝组织细胞α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Snail mRNA表达减弱,木犀草素高、中浓度组大鼠肝组织细胞E-cadherin、ALB、GS mRNA表达增强;木犀草素高、中、低浓度组大鼠肝组织细胞α-SMA、Vimentin蛋白表达减弱,E-cadherin蛋白表达增强。结论:木犀草素具有明显抗肝纤维化的作用,其机制可能与木犀草素抑制肝细胞上皮间质转化作用有关。     

原阿片碱对人肝星状细胞HSC-LX2增殖的抑制作用及机制研究

目的:考察原阿片碱对人肝星状细胞HSC-LX2增殖的抑制作用,并对其机制进行初步探讨。方法:采用MTT法测定25、50、100、200、400、500μmol/L原阿片碱作用24 h对HSC-LX2细胞增殖的影响,计算细胞增殖抑制率。另取HSC-LX2细胞分为对照组(含5%胎牛血清的1640培养基)和原阿片碱低、中、高浓度组(100、200、400μmol/L),作用24 h后,流式细胞术测定细胞凋亡率;荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)mRNA的相对表达量,Western blot法测定细胞中α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-2蛋白的相对表达量。结果:25、50、100、200、400、500μmol/L原阿片碱对HSC-LX2细胞的增殖抑制率分别为0、6.9%、18.7%、34.2%、48.9%、53.9%。与对照组比较,原阿片碱低、中、高浓度组细胞中CollagenⅠ、TIMP-1 mRNA相对表达量和α-SMA蛋白相对表达量均显著降低,MMP-2蛋白相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);原阿片碱中、高浓度组细胞的凋亡率和MMP-2 mRNA相对表达量显著升高,α-SMA、CollagenⅢmRNA相对表达量和CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白相对表达量均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:原阿片碱可抑制HSC-LX2细胞增殖,诱导其凋亡,可降低α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP-1表达,升高MMP-2表达有关。     

lncRNA Gm44981抑制心脏衰老的作用和机制研究

目的 分析小鼠心脏衰老过程中长链非编码(lnc)RNA Gm44981的表达水平,探索其抑制心脏衰老的机制。方法 选取3月龄年轻和24月龄年老小鼠各5只,提取心肌组织RNA后,采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Gm44981的表达水平。另选取4月龄快速老化小鼠10只,分为对照组和Gm44981过表达组(构建Gm44981过表达快速老化小鼠模型),各5只。采用qRT-PCR检测对照组和Gm44981过表达组小鼠Gm44981和衰老相关分泌表型(SASP)表达水平,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测SA-β-gal活性,蛋白质免疫印迹试验检测p53和Sirt1衰老相关蛋白表达水平。采用qRT-PCR检测miRNA-34a表达水平。结果 Gm44981在年老小鼠的心肌组织中表达水平较年轻小鼠低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,Gm44981过表达组小鼠Gm44981表达上调,白细胞介素(IL)-1α和IL-6等SASP和SA-β-gal表达下调,p53表达下调,Sirt1表达上调,miRNA-34a表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)...     

茶条槭总黄酮提取物抗小鼠肝纤维化作用及其机制研究

目的研究茶条槭总黄酮提取物(AF)对四氯化碳(CCl 4)致小鼠肝纤维化的保护作用及其作用机制。方法将60只小鼠随机分为模型组、空白对照组、茶条槭总黄酮提取物(AF)高、中、低剂量组(给药剂量分别为400,200和100 mg·kg^-1)和秋水仙碱组(4 mg·kg^-1)。除空白对照组外,其余5组用0.4 g·mL^-1的CCl 4腹壁皮下注射复制小鼠肝纤维化模型,用HE及Masson染色观察肝组织病理变化,用生化试剂盒检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和层黏连蛋白(LN)的含量以及Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的表达水平;用Elisa法检测血清白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平;用免疫组化染色检测小鼠肝脏α-肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;用Real-time PCR检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和信号转导分子-2(SMAD2)mRNA的表达情况;用Western blot技术检测肝组织TGF-β1和SMAD-2的蛋白表达水平。结果与模型组比较,AF高、中剂量组血清ALT、AST、LN含量及Col-Ⅳ、IL-8和IL-6水平均明显降低(P<0.05),肝组织α-SMA表达水平显著下降,CCl 4引起的小鼠肝损伤及纤维化程度明显减轻,肝组织TGF-β1、SMAD2 mRNA及蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AF可减轻实验性小鼠肝损伤并改善肝纤维化程度,其作用机制可能与抑制TGF-β1/SMAD通路的激活有密切关系。     

华蟾素对转化生长因子-β1诱导肝星状细胞激活的作用及机制研究

目的 研究华蟾素对人肝星状细胞(HSCs)LX-2活化的影响及其可能的分子机制。方法 将LX-2细胞分为空白组,对照组和华蟾素低、中、高实验组。空白组予以完全培养基进行培养,对照组予以含10 ng·mL^-1转化生长因子-β1(TGF-β1)的培养基处理,华蟾素低、中、高实验组在对照组的基础上分别予以0.5,1和2 mg·mL^-1华蟾素处理。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测华蟾素对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响;以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(Collagen-Ⅰ)蛋白的表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测α-SMA和Collagen-ⅠmRNA的表达情况;以免疫荧光法检测各组细胞α-SMA蛋白的表达。结果 Western blot和RT-PCR结果显示随着TGF-β1浓度的递增,α-SMA、Collagen-Ⅰ在LX-2细胞中的表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);表明TGF-β1可诱导LX-2细胞活化增殖。CCK-8实验测得华蟾素...     

TRPV1/SIRT1介导吴茱萸次碱抗AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞衰老

目的探讨吴茱萸次碱(rutaecarpine,Rut)对长寿蛋白SIRT1表达及AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)衰老的影响。方法采用AngⅡ(1μmol·L^-1)孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞72 h,预先加入不同浓度的Rut(0.3、1、3μmol·L^-1),采用TRPV1拮抗剂CAPZ(10μmol·L^-1)和AMPK抑制剂Compound C(1μmol·L^-1)探讨TRPV1/AMPK是否介导Rut的保护效应。SA-β-Gal测定衰老细胞数目,DCFH-DA法测定细胞ROS水平。划痕愈合结合Transwell检测VSMCs迁移。Western blot检测VSMCs中长寿蛋白SIRT1和衰老相关蛋白p53、p21的表达以及p-AMPK水平。结果Rut明显地抑制AngⅡ诱导的VSMCs衰老和ROS生成,并抑制VSMCs迁移。预先给予TRPV1拮抗剂可取消Rut这一保护作用。AngⅡ可降低SIRT1的表达,给予Rut可剂量依赖性地恢复SIRT1的表达,且下调其下游衰老相关蛋白p53和p21的表达。AngⅡ可抑制p-AMPK,加入Rut能恢复p-AMPK水平。CAPZ和Compound C可消除Rut升高SIRT1表达的效应。结论Rut可上调SIRT1表达,抑制AngⅡ诱导的VSMCs衰老和迁移,其机制可能激活TRPV1/AMPK信号途径。     

肝宁方含药血清对人肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的研究肝宁方含药血清对人肝星状细胞(HSC-LX2)增殖及凋亡的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组,每组10只,空白对照组与TGF-β1组SD大鼠给予生理盐水灌胃,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组SD大鼠给予肝宁方灌胃给药(7mL·kg^-1·d^-1),连续灌胃10d后取血离心,制备干燥血清粉末备用。将HSC-LX2分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组。根据分组加入相应的20%大鼠血清对HSC-LX2进行培养造模。CCK8检测各组HSC-LX2细胞增殖率;流式细胞术检测各组HSC-LX2细胞的周期和细胞凋亡;qRT-PCR以及Western blotting分别检测各组α-SMA、Samd2、Samd3、Samd4、Samd7 mRNA及蛋白的表达。结果CCK8结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组HSC-LX2增殖受到抑制;流式细胞术结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组HSC-LX2周期停滞在G0/G1期并能促进细胞凋亡;qRT-PCR及Western blotting结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组α-SMA、Samd2、Samd3、Samd4 mRNA及蛋白的表达受到抑制,Samd7 mRNA及蛋白的表达增强。结论肝宁方具有抑制HSC-LX2增殖、促进HSC-LX2凋亡的作用,其作用与调控TGF-β1/Samd信号通路相关。     

BMP-9在胆道闭锁肝纤维化中的作用机制研究

目的 探讨骨形态发生蛋白9（BMP-9）在胆道闭锁（BA）肝纤维化中的作用机制。方法 选取14例BA患 儿肝组织标本为BA组,5例胆总管囊肿（CBD）患儿肝组织标本为CBD组,HE染色对肝组织进行肝纤维化评估,免疫 组化染色检测BMP-9、p-SMAD1/5表达情况,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测肝组织BMP-9及DNA 结合抑制因子 1（ID1）mRNA 表达水平。培养人肝星状细胞 LX-2,用重组转化生长因子（rTGF）-β1 与重组 BMP （rBMP）-9处理,蛋白质印迹法检测细胞中SMAD1/5、p-SMAD1/5、ID1蛋白及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况, qPCR检测细胞中α-SMA及ID1 mRNA表达情况。结果 BA组肝组织中BMP-9及p-SMAD1/5蛋白、BMP-9及ID1 mRNA表达水平均高于CBD组;在BA组中重度肝纤维化患儿BMP-9蛋白、BMP-9及ID1 mRNA的表达高于轻度肝 纤维化患儿（P＜0.05）。LX-2细胞经rTGF-β1、rBMP-9处理后,α-SMA蛋白及α-SMA mRNA表达水平均升高（P＜ 0.05）。LX-2细胞加入不同剂量rBMP-9之后,其下游通路中p-SMAD1/5、SMAD1/5、ID1、α-SMA蛋白,及ID1、α-SMA mRNA表达均较0 μg/L组升高（P＜0.05）。结论 在BA患儿肝组织中BMP-9、p-SMAD1/5、ID1表达水平较CBD患 儿增高,与肝纤维化严重程度有关。BMP-9可通过SMAD/ID1信号通路激活人肝星状细胞LX-2,促进纤维化进程。     

吲哚-3-原醇对乙醛所致精密肝切片中星状细胞活化的影响

目的利用精密肝切片(PCLS)技术,研究吲哚-3-原醇(I3C)对乙醛活化肝星状细胞(HSCs)的作用及其机制。方法将200～800μmol.L-1的I3C及700μmol.L-1乙醛与PCLS共同孵育6h,免疫组化法分析肝切片中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,并检测培养液中谷胱甘肽S-转移酶(GST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达量及组织丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(Hyp)含量。结果200～800μmol.L-1I3C可不同程度的减少乙醛激活的HSCs,并可明显降低乙醛升高的培养液中GST、LDH活性和肝组织中MDA和Hyp含量(P<0.05或P<0.01),呈良好的浓度依赖性。I3C给药组与乙醛对照组比较,培养液中TGF-β1含量降低(P<0.01),MMP-1/TIMP-1蛋白表达比值升高(P<0.01)。结论I3C能有效拮抗乙醛所致的HSCs活化,其机制与降低细胞氧化应激和促进基质胶原降解有关。     

鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响及机制

目的探讨鬼针草总黄酮(TFB)对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响及机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、TFB大、中、小剂量组和秋水仙碱阳性药对照组,采用腹腔注射猪血清诱导肝纤维化模型,造模后灌服相应的受试药物。ELISA法测定大鼠血清Ⅲ型前胶原酶(PCⅢ)、Ⅳ型胶原酶(CⅣ)含量;免疫组化法测定肝组织中Ⅰ型胶原蛋白的表达;RT-PCR技术检测肝组织中Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达情况;Western blot检测肝组织中Smad2蛋白的表达。结果与模型组相比,TFB能明显降低肝纤维化大鼠血清中PCⅢ、CⅣ含量,抑制肝组织中Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β1 mRNA及Ⅰ型胶原、Smad2蛋白的表达。结论 TFB能明显降低免疫性大鼠肝纤维化胶原含量,其机制可能与降低TGF-β1表达进而抑制肝星状细胞活化减少胶原生成有关。     

桦褐孔菌提取物介导LXRs信号通路调控肝纤维化

目的 探究桦褐孔菌提取物(Inonotus obliquus extract, IOE)介导肝X受体(liver X receptors, LXRs)信号通路调控肝纤维化。方法 采用腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide, TAA)建立小鼠肝纤维化模型。同时,通过口服灌胃给予不同浓度IOE及水飞蓟素连续干预4周。末次给药后,小鼠安乐死收集肝脏和血清。检测不同浓度IOE对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)存活率的影响。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)10μg·L^-1刺激HSCs 2 h,给予IOE(0、5、10、25μmol·L^-1)处理6 h。测定小鼠血清谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,观察肝脏组织病理学改变,并通过Western blot和RT-PCR法检测小鼠肝脏和活化HSCs中α-SMA、collagenⅠ、炎症因子以及LXRα/β的蛋白和mRNA表达。结果 IOE可以明显降低TAA诱导的肝纤维化小鼠血清转氨酶水...     

丹酚酸B对转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的：观察丹酚酸B（Sal B）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肺成纤维细胞增殖及分化的影响。方法：将人胚肺成纤维细胞（MRC-5）随机分为6组：对照组（未加入TGF-β1或Sal B）;1μmol/L Sal B组;10μmol/L Sal B组;10ng/mL TGF-β1组;TGF-β1（10ng/mL）＋1μmol/L Sal B组;TGF-β1（10ng/mL）＋10μmol/L Sal B组。采用MTT法观察各组细胞增殖情况;RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞α-SMA mRNA和蛋白的表达情况;免疫荧光方法检测细胞内纤维形肌动蛋白（Factin,Fibrous Actin）重组及观察细胞形态变化。结果：与对照组比较,TGF-β1组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白的表达水平均明显增加,细胞形态发生明显改变,胞内可见大量F-actin聚合形成的应力纤维（stress fiber）（P〈0.01）;与对照组比较,单纯加入Sal B对细胞增殖、α-SMA表达、细胞形态和F-actin重组均未产生影响（P〉0.05）;与单纯TGF-β1组比较,TGF-β1＋Sal B两组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白表达水平均下降,发生形态改变的细胞减少,胞内F-actin聚合形成的stress fibers减少（P〈0.05）,且10μmol/L Sal B对TGF-β1抑制效应优于1μmol/L Sal B,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：Sal B体外能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞增殖和向肌纤维母细胞分化。     

雌二醇对大鼠肝星状细胞TGF-β1、CTGF表达的影响

目的 探讨雌二醇对肝星状细胞(HSC)的影响及其可能的作用途径.方法 培养大鼠HSC,初次传代后,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的雌二醇,加药后72小时,噻唑蓝(MTT)法检测雌二醇对HSC增殖的影响;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析其对HSC的转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达的影响;免疫细胞化学分析其对HSC的α-SMA蛋白的表达的影响.结果 MTT法发现雌二醇抑制HSC的增殖;RT-PCR分析雌二醇干预组HSC TGF-β1mRNA、CTGFmRNA的表达明显下降;免疫细胞化学分析雌二醇干预组HSC α-SMA蛋白表达明显下降;并且都随浓度增加抑制作用增强,差异有显著性(P＜0.05).结论 雌二醇具有抑制肝纤维化作用是因为:①可以抑制HSC的增殖、活化;②抑制了致纤维化生长因子TGF-β1及其下游信号CTGFmRNA表达.     

姜黄素衍生物抗大鼠肝纤维化的作用及其机制

目的观察姜黄素衍生物(Curc-OEG)抗肝纤维化作用及其机制。方法将雄性SD大鼠共分成4组:正常组、模型组、姜黄素衍生物组和姜黄素组。用四氯化碳诱导大鼠形成肝纤维化模型,2个治疗组分别尾静脉注射100 mg·kg-1Curc-OEG和灌胃400 mg·kg-1姜黄素。10周后,测肝功及肝纤维化指标、肝组织羟脯氨酸(Hpy)水平;HE、天狼星红染色,免疫组化法观察TGF-β1及α-SMA表达;RT-PCR法测TGF-β1 mRNA水平;Western blot测TGF-β1及α-SMA蛋白表达。结果与模型组比较,Curc-OEG能改善肝功及降低肝纤维化指标,降低Hpy含量及肝纤维化程度,抑制TGF-β1及α-SMA的表达。结论 Curc-OEG具有明显的抗肝纤维化作用。     

姜黄素衍生物对原代大鼠肝星状细胞作用的体外研究

目的：观察姜黄素衍生物（Curc-OEG）抑制原代肝星状细胞（HSC）增殖、活化以及诱导其凋亡的作用,探讨其可能的作用机制。方法：采用IV型胶原酶、DNA酶消化SD雄性大鼠肝脏,percoll梯度离心得到纯化的肝星状细胞。细胞分离后1d分别加入0、6.25、12.5μg/mL的姜黄素衍生物,作用7d后用RT-PCR及Western blot检测细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2的mRNA水平和蛋白表达量。活化的肝星状细胞在第14天分别加入0、6.25、12.5、25、50、75μg/mL的姜黄素衍生物,作用24h后RT-PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2的mRNA水平和纤维化相关基因TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA水平。结果：药物作用7d后,6.25μg/mL和12.5μg/mL浓度药物处理组与对照组相比,细胞数目分别减少了56%和86%。在12.5μg/mL浓度药物作用下,原代肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及Smad2的mRNA表达水平分别下调83%、85%及75%,蛋白表达水平分别下调94%、92%及73%（P〈0.05）。25μg/mL浓度药物作用24h后,细胞凋亡明显。在50μg/mL浓度药物作用下,活化的肝星状细胞Bax的mRNA表达水平上调约2.3倍,Bcl-2的mRNA表达水平下调约5.6倍;TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA表达水平分别下调90%、83%、74%、65%（P〈0.05）。结论：姜黄素衍生物可以明显抑制原代肝星状细胞的增殖和活化,促进活化的肝星状细胞凋亡及减少细胞外基质的沉积。