大鼠小肠分泌胰岛素基因水平研究

目的:明确小肠内胰岛素的存在情况及其表达水平。方法:8周龄雄性Wister大鼠,禁食24 h,灌胃50％葡萄糖溶液、牛血清白蛋白溶液、油脂悬液各2 mL,分别灌胃后在第0、5、10、15、20、25 min时脱臼处死,按不同时间段分为6组,取其胰腺、十二指肠。提取各组织总RNA,反转录成cDNA,普通PCR检测胰岛素mRNA的存在,实时荧光定量PCR检测不同时刻胰腺和十二指肠胰岛素mRNA的相对表达量。结果:反转录普通PCR在大鼠十二指肠中扩增出胰岛素基因片段（经测序证实与胰岛素基因序列完全一致）;十二指肠与胰腺胰岛素mRNA的相对表达量有显著差异（P<0.05）,远远低于胰腺组织。灌胃后胰腺和十二指肠分泌胰岛素的表达水平呈动态表化,且十二指肠分泌胰岛素的表达高峰晚于胰腺。结论:该实验证实了除胰岛β细胞外十二指肠组织具有分泌胰岛素的功能,灌胃后十二指肠胰岛素mRNA的相对表达量呈动态表化,从而推测糖尿病的一种可能发病机制。     

糖尿病小鼠小肠黏膜胰岛素受体的研究

目的利用免疫组化方法观察糖尿病小鼠小肠黏膜上胰岛素受体是否改变,为进一步研究糖尿病的消化系统并发症提供证据。方法分别选取3、5、6、8、10月龄db/db糖尿病小鼠及相应年龄段的db/＋m正常小鼠,每组6只。标本用4%多聚甲醛灌流固定后,灌流固定后,从距Treitz韧带约10cm处切下一段空肠,用于免疫组化。结果胰岛素受体（insulin receptor,IR）在糖尿病组（DM）比同月份正常对照组（N）IR的表达量明显减少。结论糖尿病小鼠存在着胰岛素抵抗。     

小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性

[目的] 探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性.[方法] 培养小鼠骨髓干细胞,采用含 GLP-1和 nicotinamide的无血清培养液诱导分化,在培养过程中,检测有关基因的表达.[结果]培养的小鼠骨髓干细胞具有与文献报道相似的生物学特性;在诱导分化第 7天,有 ngn3和 pdx-1基因表达;在诱导分化第 14天,有 nkx2.2、 pdx-1和 ins2基因表达.[结论] 小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性,值得进一步研究.     

以硬脂酸纳米粒为载体的胰岛素小肠吸收部位研究

目的：为了研究以硬脂酸纳米粒作为载体的胰岛素在小肠各部位的吸收。方法：采用在体大鼠小肠段回流实验,HPLC法测定药物浓度,依据药物在小肠段中的减少量来确定药物的吸收,同时彩和糖尿病模型大鼠小肠段内直接给药测定其血糖值。结果：胰岛素在回肠中的吸收明显高于其他肠段,其降血糖作用因给药部位的不同而不同（回肠60．34％、空肠48．38％、十二指肠46．75％）。结论：回肠是以硬脂酸纳米料作为载体的胰岛素的最佳吸收部位。     

小鼠异位小肠移植手术方式的改进

目的建立良好的小肠移植动物模型,用于进一步作小肠移植免疫及相关研究.方法采用显微外科技术,获取带门静脉和腹主动脉的供体小鼠小肠,移植物腹主动脉离体修剪成带肠系膜上动脉的动脉袖片(Carrel's patch),将移植物门静脉和Carrel's patch分别与受体下腔静脉与腹主动脉作端侧吻合.移植肠的远端与受体近端空肠作端侧吻合,近端结扎封闭.结果实验初期移植成功率为37.9%,后期技术成熟后移植成功率为81.9%,供体手术时间为(60±10)min,移植肠冷保存时间为(20±5)min,受体与移植物血管吻合时间为20～25min.结论采用改进手术方式制作的肠道内引流小鼠小肠移植模型稳定,是研究小鼠同种异体小肠移植免疫有用的实验工具.     

小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性

【目的】探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。【方法】培养小鼠骨髓干细胞，采用含GLP-1和nicotinamide的无血清培养液诱导分化，在培养过程中，检测有关基因的表达。【结果】培养的小鼠骨髓干细胞具有与献报道相似的生物学特性；在诱导分化第7天，有ngn3和pax-1基因表达；在诱导分化第14天，有nkx2．2、pdx-1和ins2基因表达。【结论】小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性，值得进一步研究。     

小鼠原位小肠移植模型的建立

目的:探索原住小肠移植的手术技术,为研究移植小肠功能及排斥反应提供良好的动物模型.方法:采用小肠供体的门静脉与受体下腔静脉端侧吻合,供体带主动脉片的肠系膜上动脉与受体腹主动脉端侧吻合,受体相应长度肠管切除,供体近、远端肠管与受体相应肠管切除后近、远端以端端吻合的方式建立原位小肠移植模型.术后禁食4d,不禁饮,每天分2次...     

小鼠原位小肠移植模型的建立

目的:探索原住小肠移植的手术技术,为研究移植小肠功能及排斥反应提供良好的动物模型.方法:采用小肠供体的门静脉与受体下腔静脉端侧吻合,供体带主动脉片的肠系膜上动脉与受体腹主动脉端侧吻合,受体相应长度肠管切除,供体近、远端肠管与受体相应肠管切除后近、远端以端端吻合的方式建立原位小肠移植模型.术后禁食4d,不禁饮,每天分2次经皮下分别给予5％葡萄糖生理盐水2 mL,术后不使用抗生素和免疫抑制剂.小鼠存活超过5d认为手术成功.结果:行原位小肠移植30次,术后5d存活率达60％(18/30).手术失败的12例小鼠主要死亡原因为动脉吻合口部位狭窄及吻合口处血栓形成5例,吻合口出血导致出血性休克2例,术后肠瘘导致腹腔内感染5例.供体手术时间(40±4.5)min,热缺血时间约0.5min,供体肠段肠系膜上动脉组织片修整时间约为3min,供体冷保存时间为(30±7.5) min,受体手术时间(95±8.0)min,其中腹主动脉及下腔静脉阻断时间为(38±3.5) min,静脉吻合时间(10±2.0)min,动脉吻合时间(15±3.0)min,成活小鼠受体手术平均出血量约0.2mL.结论:良好的供体肠段的获取、高质量的血管吻合和肠道吻合及供、受体补液是提高小鼠小肠移植手术成功率的关键.     

小鼠小肠上皮细胞的体外原代培养

目的探讨小鼠小肠上皮细胞原代培养的原理和方法。方法取胎龄为17~19d的昆明鼠的小肠,通过3种不同的小肠上皮细胞分离方法进行原代培养。结果体外培养出圆形、多角形单层生长,呈"铺路石样",核周可见许多小空泡并且CK18、碱性磷酸酶染色阳性的细胞。结论应用中性蛋白酶Ⅰ和粗胶原酶Ⅺ消化可获满意的上皮细胞分离效果,细胞贴壁良好。小肠上皮在体外的增殖分化有赖于分离的细胞器中干细胞及短暂分裂细胞的多少以及一些间质细胞的存在。     

脑肠肽与胰岛素分泌

脑肠肽是胃肠道和神经系统双重分布的一些肽类的统称,它们生理作用广泛,其中多体现在对胃肠功能的调节上。已有的诸多研究表明脑肠肽可以影响胰岛素的分泌,如ghrelin具有抑制胰岛素释放的功能,obestatin、肽YY对胰岛素的分泌有调节作用,但作用效果尚不明确,而胰高血糖素样肽1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）和抑胃肽（gastric inhibitory polypeptide,GIP）可以促进胰岛素的分泌。     

BALB/c 小鼠小肠乳糖酶活性双糖酶法测定条件的优化

目的建立一种方便、准确测定小鼠小肠乳糖酶活性的方法.方法采用不同pH的底物溶液与肠黏膜提取物反应,计算相应的酶活性;取不同反应时间(45 min,60 min,75 min),不同显色时间(45 min,60 min,75 min)和不同显色剂用量(2.0 ml,2.5 ml,3.0 ml)按L9(34)正交实验设计方法,测定不同条件下的底物溶液与肠黏膜反应的A值作为正交实验的评分标准.结果与结论由正交实验得出,该方法的最佳反应条件为pH 4.6,水浴75min,显色时间45 min,显色剂用量3.0 ml;批内酶活性(0.029±0.003)U/ml,CV=2.49%,批间酶活性(0.032±0.004)U/ml,CV=4.19%.该方法具有很好的重复性和可靠性.     

糖尿病大鼠小肠Cajal间质细胞超微结构的改变

目的　明确糖尿病大鼠小肠Cajal间质细胞 (interstitialcellsofCajal,ICC)超微结构的变化 ,探讨糖尿病小肠运动功能改变原因。方法　用链尿佐菌素建立大鼠糖尿病模型 ,3个月后测定小肠传输速度 ,对小肠组织进行透射电镜观察。结果　糖尿病大鼠小肠传输速度明显延迟 ,Cajal间质细胞与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散 ;细胞器变性、减少 ;胞质广泛溶解 ;核周间隙增宽。结论　糖尿病Cajal间质细胞变性可能是导致小肠运动功能低下的一个重要原因。     

围术期维持活体部分移植小肠血供的措施

目的：探讨围术期维持移植小肠血液灌注的方法，方法：男，18岁，短肠综合征患者，全麻下接受其父亲供给末段回肠150cm，行活体部分小肠移植，围主期维持出入量平衡，中度等容血液稀释，选用扩血管药，防止血管痉挛，以及抗凝治疗，结果：术的31d脱离肠外营养，至今已术后34mo，未发生移植小肠明显缺血性改变。结论：采用上述方法匀是维持围术期移植小肠血供的重要措施。     

小肠血管瘤的诊断和治疗

目的探讨小肠血管瘤的有效诊断方法，减少误诊。方法回顾性分析该院1981年6月～2004年9月收治的小肠血管瘤患者20例。结果全组患者有轻重不等的贫血，临床主要表现为呕血、便血或黑便，部分患者有腹痛、腹胀，容易误诊。发病部位十二指肠、空肠各7例，回肠5例，空旧肠交界1例。剖腹探查并手术治疗18例，单纯胃镜检查、血管造影检查确诊各1例。结论小肠血管瘤发病部位隐蔽，多种检查方法存在其局限性，手术探查并结合纤维内镜检查是一最有效的确诊手段。     

人胎小肠内胰多肽免疫反应细胞的分布及形态学观察

目的探讨胰多肽免疫反应细胞(PP-IR细胞)在人胎小肠中的个体发生及分布。方法用免疫组织化学PAP法观察24例11～27周人胎小肠内PP-IR细胞的形态及定位。结果胎期小肠的PP-IR细胞主要见于十二指肠，偶见于空肠上皮，回肠中未见。11～13周时PP—IR细胞数量很少，单个分散在十二指肠绒毛上皮间。14周后，PP-IR细胞呈增多趋势，除分散在小肠腺和绒毛上皮外，在十二指肠腺上皮中也可见该细胞。17～27周时，PP-IR细胞数量未见明显增减。胎期小肠的PP-IR细胞形态多样。结论胰多肽在人胎小肠的内分泌细胞中已有表达。PP-IR细胞随着胎儿的发育而发生变化。     

原发性小肠肿瘤47例临床分析

目的：探讨原发性小肠肿瘤的临床表现、诊断方法及预后。方法回顾性分析47例原发性小肠肿瘤患者的临床资料。结果47例原发性小肠肿瘤临床表现无特异性,术前确诊率为34．0％（16／47）。良性肿瘤占12．8％（6／47）,病理以腺瘤为主,预后好。恶性肿瘤占70．2％（33／47）,贫血是其较为突出的临床表现,病理主要为腺癌（29例,失访3例）,好发于十二指肠,预后差。26例腺癌患者1、2、3、5年生存率分别为67．4％、42．4％、29．4％、22．8％,中位生存期为20．3个月。间质瘤占17％（8／47）,主要来源于空肠,以腹部包块为主要表现,术后使用靶向药物有助于改善患者预后。结论小肠肿瘤发病率低,但以恶性为主,预后差,采取有效的检查手段尽早发现病灶并行手术切除是治疗的关键。     

小肠肿瘤87例

[背景 ]探讨小肠肿瘤的诊断和治疗 .[病例报告 ]87例小肠肿瘤的主要临床表现有消化道出血、腹痛、黄疸、腹部肿块、肠梗阻及肠穿孔等 ,其中良性肿瘤为 30例 ,恶性肿瘤为 5 7例 ,术前确诊率为6 1% ,其中十二指肠肿瘤均术前确诊 ,而空回肠肿瘤术前确诊率仅为 32 % .胃镜、十二指肠镜、十二指肠气钡双重造影、B型超声波及CT检查对十二指肠肿瘤的确诊率较高 ,小肠气钡双重造影、选择性肠系膜动脉造影检查对空回肠肿瘤的诊断率较高 .[讨论 ]胃十二指肠镜检查结合病理活检是诊断十二指肠肿瘤的首要手段 ,而小肠气钡双重造影、选择性肠系膜动脉造影检查则有助于空回肠肿瘤的早期诊断     

多层螺旋CT血管造影在诊断小肠扭转中的价值

目的探讨多层螺旋CT血管造影(MSCTA)在诊断小肠扭转中的价值。方法搜集行全腹CT增强扫描且经手术证实的小肠扭转患者9例,采用容积再现(VR)血管生长技术(AV)行肠系膜上动脉(SMA)、肠系膜上静脉(SMV)成像,分析其在小肠扭转中的表现。结果 9例小肠扭转患者中,6例全组小肠扭转,AV重建显示SMA左侧的空肠动脉呈螺旋状或圆弧形向右侧旋转,分支远段位于右侧,SMV及分支与同名动脉伴行;3例部分性空肠扭转显示上端局部空肠动脉分支由SMA左侧呈圆弧形向右旋转,SMV及分支未能明显显示异常。小肠扭转诊断准确率100%(9/9)。结论 MSCTA能根据空、回肠动脉的走行、分布等,为快速、准确诊断小肠扭转提供依据。     

溃疡性结肠炎患者小肠黏膜病变研究

目的 探讨溃疡性结肠炎患者小肠黏膜病变情况. 方法 30例溃疡性结肠炎和25例健康体检者分别作为观察组和对照组,应用胶囊内镜检查评估两组间小肠病变的差异,并分析胶囊内镜检查评分与溃疡性结肠炎疾病活动指数的相关关系. 结果 30例溃疡性结肠炎患者中,16例有小肠病变,9例有糜烂,明显高于对照组的5例与1例(P＜0.05).胶囊内镜检查评分与溃疡性结肠炎疾病活动指数呈正相关(r=0.861,P＜0.01). 结论 溃疡性结肠炎是一种慢性炎症性肠道疾病,不仅局限于结直肠黏膜病变,也可累及小肠.