miR-10b-5p通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性★

目的 探讨miR-10b-5p在乳腺癌细胞放疗敏感性中的作用及相关机制。方法 采用qPCR和Western blotting检测正常乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231中miR-10b-5p mRNA、SUFU mRNA和蛋白的表达。在MDA-MB-231细胞中转染miR-10b-5p inhibitor对miR-10b-5p进行敲减，6 Gy ⁶⁰Co γ-射线照射2 h，分别采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡水平；双荧光素酶报告实验验证靶基因SUFU，回补实验验证miR-10b-5p是否通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性。结果 3种乳腺癌细胞系中miR-10b-5p的表达均显著高于正常乳腺细胞MCF-10A（P<0.05）。与miR-NC组相比，miR-10b-5p inhibitor组细胞增殖水平明显下降（P<0.05），凋亡水平显著上升（P<0.05）。敲减miR-10b-5p可增加野生型SUFU 3''UTR的荧光强度（P<0.05），而对突变型SUFU 3''UTR的荧光强度无明显影响（P>0.05）。此外，miR-10b-5p inhibitor组SUFU蛋白表达水平显著高于miR-NC组（P<0.05）。与miR-NC+si-NC组相比，miR-10b-5p inhibitor+si-NC组细胞增殖水平显著降低（P<0.05），miR-10b-5p inhibitor+si-SUFU#2组细胞增殖水平明显回升，且高于miR-10b-5p inhibitor+si-NC组（P<0.05）。结论 乳腺癌细胞中miR-10b-5p呈高表达，敲减miR-10b-5p可增强乳腺癌细胞对放疗的敏感性，其机制可能与靶向抑制SUFU相关。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

p53/miR-34a通路介导羽扇豆醇的抑制人膀胱癌T24细胞增殖作用

摘 要 目的：探讨羽扇豆醇对人膀胱癌T24细胞增殖的影响及对p53/miR-34a通路调控机制。方法: 运用CCK-8法检测不同浓度羽扇豆醇（5~120 μmol·L^-1）分别作用24 h和48 h对T24细胞增殖的影响;运用CCK-8法结合Caspase抑制药确证参与羽扇豆醇诱导细胞死亡的Caspase亚型;分别运用荧光定量PCR（qPCR）和蛋白免疫印记评价羽扇豆醇对miR-34a及p53蛋白表达的影响;运用qPCR评价羽扇豆醇对miR-34a下游靶基因Bcl-2、CD44、c-Myc的mRNA表达的影响。结果: T24细胞经羽扇豆醇处理后,其细胞增殖受到明显抑制,且呈一定的剂量依赖性;药物作用24 h和48 h时羽扇豆醇的半抑制浓度（IC₅₀）分别为（77.23±6.78）,（64.58±4.23）μmol·L^-1。与对照组相比,羽扇豆醇能够使T24细胞中p53蛋白表达上调,还能够增加miR-34a表达水平,差异具有统计学意义（P<0.01）;羽扇豆醇处理后细胞内Bcl-2、CD44、c-Myc的mRNA表达量下调,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:羽扇豆醇具有抑制膀胱癌T24细胞增殖能力,其作用机制与调控p53/miR-34a通路有关。     

黄芩苷联合奥沙利铂调控miR-433-3p/SRC对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探究黄芩苷联合奥沙利铂调控miR-433-3p/SRC对胃癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 将SGC-7901细胞分为对照组、黄芩苷（100、200、300 μmol·L^-1）组、奥沙利铂（33 μmol·L^-1）组,联合用药（300 μmol·L^-1黄芩苷+33 μmol·L^-1奥沙利铂）组,miR-433-3p组、miR-NC组、anti-miR-433-3p组、anti-miR-NC组、pcDNA-SRC组、si-SRC组,miR-433-3p+联合用药组、anti-miR-433-3p+联合用药组、pcDNA-SRC+联合用药组、si-SRC+联合用药组、miR-433-3p+pcDNASRC+联合用药组。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR （qRT-PCR）检测细胞中miR-433-3p表达;双荧光素酶报告检测miR-433-3p和SRC的靶向关系;Westernblotting检测细胞中SRC蛋白表达。结果 与对照组相比,黄芩苷（100、200、300 μmol·L^-1）组、奥沙利铂组、联合用药组细胞增殖抑制率、凋亡率和miR-433-3p表达显著增加（P<0.05）,细胞侵袭数目、SRC蛋白表达显著减少（P<0.05）;与黄芩苷300 μmol·L^-1组、奥沙利铂组相比,联合用药组细胞增殖抑制率、凋亡率显著增加,细胞侵袭数目显著减少;与黄芩苷300 μmol·L^-1组比较,miR-433-3p表达显著增加（P<0.05）;与奥沙利铂组比较,SRC蛋白表达显著减少（P<0.05）。与对照组比较,miR-433-3p组细胞中miR-433-3p表达显著升高,SRC蛋白表达显著降低,anti-miR-433-3p组细胞中miR-433-3p表达显著降低,SRC蛋白表达显著升高（P<0.05）;miR-433-3p+联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于联合用药组,细胞侵袭数目显著少于联合用药组（P<0.05）,anti-miR-433-3p+联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率显著低于联合用药组,细胞侵袭数目显著多于联合用药组（P<0.05）。miR-433-3p组SRC-WT荧光素酶活性显著低于miR-NC组（P<0.05）。si-SRC组细胞中SRC蛋白表达显著低于对照组（P<0.05）,pcDNA-SRC组细胞中SRC蛋白表达显著高于对照组（P<0.05）;与pcDNA-SRC组相比,miR-433-3p+pcDNA-SRC组细胞中SRC蛋白表达显著降低（P<0.05）。si-SRC+联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于联合用药组,细胞侵袭数目显著少于联合用药组（P<0.05）,pcDNA-SRC+联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率显著低于联合用药组,细胞侵袭数显著高于联合用药组（P<0.05）。与pcDNA-SRC+联合用药组相比,miR-433-3p+pcDNA-SRC+联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率显著降低（P<0.05）,细胞侵袭数目显著升高（P<0.05）。结论 黄芩苷联合奥沙利铂可通过miR-433-3p靶向调控SRC抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,诱导胃癌细胞凋亡。     

miR-206调节的血清IGF-1水平与2性糖尿病伴发帕金森病的相关性研究

目的 研究血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平在2型糖尿病（T2D）、帕金森病（PD）及T2D伴发PD（T2D-PD）患者之间的差异并探讨其转录后调控机制。方法 收集T2D患者21例、PD患者20例、T2D-PD患者17例以及正常对照25例，应用ELISA法检测血清IGF-1蛋白含量；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测血清相关microRNAs的表达水平；miRanda分析软件预测miR-206可能靶向IGF-1 mRNA表达的作用位点。结果 T2D-PD患者血清IGF-1水平较PD组下降，但差异不显著，与正常对照组比较差异不显著，而较T2D组显著升高（P<0.001）；T2D-PD组血清miR-206相对含量显著低于T2D组（P<0.01），与正常对照组和PD组比较无显著性差异；miRanda软件预测miR-206可以靶向性结合IGF-1 mRNA的3''-非编码区（3''-UTR），mirSVR评分为-1.285，PhastCons评分为0.6561。结论 miR-206介导的IGF-1表达增加可能是糖尿病伴发PD重要的病理生理机制，提示血清IGF-1水平可能成为糖尿病伴发PD早期临床诊断的关键指标之一。     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

地西他滨诱导miR-200c/141表达抑制肾癌细胞侵袭迁移

目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨对人肾细胞癌786-O和769-P细胞侵袭迁移能力的影响,并进行相关机制的研究。方法 实时荧光定量PCR法检测肾癌及其癌旁组织中miR-200c/141的表达量及2.5 μmol·L^-1地西他滨对肾癌细胞系miR-200c/141的诱导作用;Transwell试验、划痕试验分别检测地西他滨、miR-200c/141对细胞侵袭迁移的影响;实时荧光定量PCR法、蛋白印迹法检测786-O和769-P细胞系钙黏蛋白表达量。结果 与正常肾癌旁组织相比,miR-200c/141在肾癌组织中的表达量显著下调。2.5 μmol·L^-1地西他滨能诱导786-O和769-P细胞系中miR-200c/141的表达增加。地西他滨、miR-200c/141均能抑制细胞的侵袭迁移能力。786-O和769-P细胞经地西他滨处理后,与上皮间充质转化相关的钙黏蛋白表达水平显著上调。结论 地西他滨可以通过上调miR-200c/141的表达水平减弱肾癌细胞系的侵袭迁移能力。     

黄腐酚对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的影响及其机制★

目的 探讨黄腐酚降低人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的机制。方法 将KOV3/DDP细胞分为卵巢癌组（无干扰）、10 μmol·L^-1黄腐酚组（10 μmol·L^-1黄腐酚培养）、20 μmol·L^-1黄腐酚组（20 μmol·L^-1黄腐酚培养）、40 μmol·L^-1黄腐酚组（40 μmol·L^-1黄腐酚培养）、80 μmol·L^-1黄腐酚组（80 μmol·L^-1黄腐酚培养）、160 μmol·L^-1黄腐酚组（160 μmol·L^-1黄腐酚培养）。采用CCK-8检测SKOV3/DDP细胞存活率；克隆形成实验检测SKOV3/DDP细胞克隆数目；流式细胞仪检测SKOV3/DDP细胞凋亡率；CCK-8检测黄腐酚对SKOV3/DDP细胞DDP耐药性的影响；免疫印迹检测SKOV3/DDP细胞中耐药蛋白ABCB1、MDR-1和P-gp的表达。结果 与卵巢癌组相比，10 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞存活率无明显变化（P>0.05）；与10 μmol·L^-1黄腐酚组相比，20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞存活率均显著降低（P<0.05）。卵巢癌组及10、20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞克隆数目分别为（86±12）、（82±10）、（61±11）、（46±9）、（29±11）及（20±7），组间比较，差异有统计学意义（F=43.270， P<0.001）。卵巢癌组及10、20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞凋亡率分别为（2.56±0.20）%、（3.20±0.36）%、（15.21±1.22）%、（26.30±1.60）%、（33.20±2.25）%及（45.63±2.10）%，组间比较，差异有统计学意义（F=775.200， P<0.001）。与DDP相比，DDP联合黄腐酚对SKOV3/DDP细胞的活性抑制率较高，差异有统计学意义（P<0.05）；与卵巢癌组相比，10 μmol·L^-1黄腐酚组ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达水平无显著差异（P>0.05）；与10 μmol·L^-1黄腐酚组相比，20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞中ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。结论 黄腐酚可降低卵巢癌SKOV3/DDP细胞的耐药性，抑制细胞活性，促进细胞凋亡，可能与下调ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达相关。     

青蒿琥酯对人白血病K562，K562 /ADM细胞凋亡的作用及对NF-κB p65表达的影响

摘 要 目的:观察青蒿琥酯对人白血病K562、K562 /ADM细胞凋亡以及对p65表达的影响。方法: 采用流式细胞仪检测青蒿琥酯在不同浓度和不同时间段对K562、K562 /ADM细胞凋亡的影响,采用Western blot法检测15 μmol·L^-1青蒿琥酯在不同时间对K562细胞NF-κB p65表达的影响。结果 青蒿琥酯对K562细胞凋亡影响不明显,但对阿霉素耐药K562 /ADM细胞影响较大,青蒿琥浓度为7.5 μmol·L^-1和15 μmol·L^-1时,K562 /ADM细胞的调亡率明显高于K562细胞（P<0.01）,15 μmol·L^-1青蒿琥酯作用后4 h后,K562 /ADM细胞的调亡率明显增加（P<0.01）;经15 μmol·L^-1青蒿琥酯作用后, p65表达随时间的增加而明显降低（P<0.01）。结论 青蒿琥酯通过下调P65的表达而诱导白血病细胞凋亡。     

2',4'-二羟基-3'-甲基-3-甲氧基查耳酮上调p21抑制人肝癌HepG2细胞的生长

目的 探讨2'',4''-二羟基-3''-甲基-3-甲氧基查耳酮(C20)对人肝癌HepG2细胞的体外抗肿瘤作用及其潜在的作用机制。方法 通过CCK-8法、集落形成实验、5-乙炔基-2''-脱氧尿苷(EdU)染色法检测C20对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;通过彗星实验检测C20(10 μmol·L^-1)对HepG2细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测C20(5、10 μmol·L^-1)对HepG2细胞周期阻滞的影响;通过Hoechst染色和流式细胞术检测C20(5、10 μmol·L^-1)对HepG2细胞凋亡的影响。借助Western blotting法检测C20(5、10 μmol·L^-1)处理对HepG2细胞中与凋亡、DNA损伤、细胞周期阻滞相关蛋白表达水平的调控作用。结果 与对照组比较,C20显著抑制HepG2细胞的活力(P<0.001),给药48 h的半数抑制浓度(IC₅₀)为7.937 μmol·L^-1;5 μmol·L^-1 C20能够显著抑制HepG2细胞的集落形成能力(P<0.01);EdU染色结果显示5、10 μmol·L^-1的C20能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖能力;5、10 μmol·L^-1的C20显著诱导HepG2细胞G₂/M期阻滞(P<0.001);5、10 μmol·L^-1的C20显著促进HepG2细胞凋亡(P<0.001),并显著上调Caspas-3、Caspase-9以及PARP的剪切水平(P<0.01);10 μmol·L^-1的C20能够诱导HepG2细胞发生DNA损伤,并且5、10 μmol·L^-1的C20显著上调γH2AX、p21的蛋白水平(P<0.01)。结论 C20能够造成HepG2细胞发生DNA损伤,上调p21蛋白水平,导致细胞G₂/M期阻滞,并进一步诱发凋亡,发挥体外抗肝癌作用。     

冠心病患者血清同型半胱氨酸、miR-1、miR-126和 miR-208的相关性分析

目的：结合冠状动脉狭窄程度,探讨冠心病患者血清同型半胱氨酸（ Hcy）与微小RNA（ miR-1、miR-126及miR-208）之间的相互关系。方法选取行冠脉造影术的患者共102名,根据造影结果分为对照组和观察组,检测Hcy、miR-1、miR-126及miR-208水平,同时对冠脉造影结果进行评价并计算Gensini积分,应用相关及线性回归分析Hcy、miRNA（ miR-1、miR-126、miR-208）以及Gensini积分的相互关系。结果观察组血清Hcy、miRNA（miR-1、miR-126、miR-208）水平均高于对照组,血清Hcy、miR-1和miR-126水平分别与Gensini积分呈正相关[相关系数（r）分别为0．575、0．649、0．499,P均＜0．01],偏相关分析校正后它们之间仍然呈正相关（ r’分别为0．693、0．621、0．532,P均＜0．05）;而血清Hcy与miR-1、miR-126水平亦呈正相关（r分别为0．513、0．56,P均＜0．01）,偏相关分析校正后排除年龄,体重指数,高血压和高脂血症病史的影响,其间仍然呈正相关（r’分别为0．599、0．614,P均＜0．05）,而与miR-208无显著相关性。结论血清Hcy、miRNA（miR-1、miR-126、miR-208）均是评价冠心病的独立危险因素,其水平均随着冠脉病变严重程度的加重而增加。     

非吸烟女性肺腺癌组织中 miRNAs 的表达与表皮生长因子受体关系的研究

目的 探讨非吸烟女性肺腺癌(ADC)组织中 miR-155、miR-16、miR-25 及 miR-133a 的表达与表皮生长因子受体（EGFR）的关系及其临床意义。 方法 112 例非吸烟女性 ADC 患者按 EGFR 类型分为 EGFR 野生型组（n= 51）和 EGFR 突变型组（n=61）。 用实时荧光定量 PCR 定量检测 2 组 ADC 组织中 4 种 miRNAs 的表达量, 比较 2 组 4 种 miRNAs 表达水平的差异。 4 种 miRNAs 表达量以平均数分层为高表达组和低表达组, 比较 2 亚组患者间的生存差异。 按年龄（≤60 岁, ＞ 60 岁）、EGFR 类型和 miRNAs 的表达量分层, 进行 Kaplan-Meier 生存分析和 Cox 比例风险回归模型检验。 结果 EGFR 突变型组 miR-25 的表达水平高于 EGFR 野生型组（P < 0.05）。 不同年龄分层、不同 EGFR 类型组、miR-155、miR-16 及 miR-133a 表达量患者的生存率差异无统计学意义, miR-25 低表达者的生存率较高表达者更高（P < 0.05）。 在 EGFR 突变型组中 4 种 miRNAs 的表达量与 ADC 预后无关（P > 0.05）; 在 EGFR 野生型组中 miR-16、miR-25、miR-133a 低表达者较高表达者生存率更高（P < 0.05）。 Cox 比例风险回归分析显示, miR-25 高表达是非吸烟女性 ADC 患者预后死亡的独立危险因素（P < 0.05）。 结论 miR-25 是非吸烟女性 ADC 的独立预后指标。 miR-25 在非吸烟女性 ADC, 特别是在 EGFR 野生型的患者中表达升高, 可能提示患者预后不佳。     

微小 RNA-520g、微小 RNA-532在 80例多发性骨髓瘤骨髓组织中的表达

目的 观察多发性骨髓瘤病人骨髓组织中微小RNA-520g(miR-520g)和微小RNA-532(miR-532)的表达,并探讨其临床意义.方法 选取2015年7月至2019年7月西安市中心医院收治的多发性骨髓瘤病人80例为观察组,同时选取同期进行骨髓穿刺并明确骨髓功能无异常的非血液病病人80例为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组骨髓组织中miR-520g、miR-532的表达水平;分析两者与多发性骨髓瘤临床病理特征的关系;采用Pearson法分析miR-520g、miR-532表达的相关性;通过受试者工作特征曲线(ROC)检测miR-520g、miR-532的表达对多发性骨髓瘤的诊断价值.结果 观察组病人骨髓组织中miR-520g表达水平(3.70±0.70)均显著高于对照组(2.79±0.65),观察组miR-532表达水平(0.90±0.24)显著低于对照组(1.32±0.31)(P<0.05).观察组病人骨髓组织中miR-520g、miR-532表达水平与病人临床分期、分化程度、是否发生淋巴结转移相关(P<0.05).ROC结果显示miR-520g诊断多发性骨髓瘤曲线下面积(AUC)为0.827,敏感度为73.8％,特异性为80.0％,miR-532诊断多发性骨髓瘤的AUC为0.855,敏感度为82.5％,特异性为75.0％,二者联合诊断多发性骨髓瘤的AUC为0.922,敏感度为81.3％,特异性为91.2％.结论 多发性骨髓瘤病人骨髓组织中miR-520g呈高表达,miR-532呈低表达,两者呈负相关,且与临床分期、分化程度、是否发生淋巴结转移相关,骨髓组织miR-520g、miR-532表达对多发性骨髓瘤具有一定的诊断价值.     

MiR-199a-5p and miR-375 affect colon cancer cell sensitivity to cetuximab by targeting PHLPP1

Objectives: We aimed to analyze the differentially-expressed miRNAs in colon cancer cells in order to identify novel potential biomarkers involved in cancer cell resistance.

Design and methods: We investigated the miRNA expression profile of GEO human colon carcinoma cells, sensitive to the EGFR inhibitor Cetuximab (CTX) and their CTX-resistant counterpart (GEO CR) by using a miRNA chip.

Results: We found 27 upregulated and 10 downregulated miRNAs in GEO CR compared with GEO cells with a fold change ≥ 2. Among the upregulated miRNAs, we focused on miR-199a-5p and miR-375. We report that their enforced expression promotes CTX resistance, whereas their silencing sensitizes to the same drug. The ability of miR-199a-5p and miR-375 to target PHLPP1 (PH domain and leucine-rich repeat protein phosphatase 1), a tumor suppressor that negatively regulates the AKT pathway, accounts, at least in part, for their drug-resistance activity. Indeed, restoration of PHLPP1 increases sensitivity of the GEO cells to CTX and reverts the resistance-promoting effect of miR-199a-5p and miR-375.

Conclusion: This study proposes miR-199a-5p and miR-375 as contributors to CTX resistance in colon cancer and suggests a novel approach based on miRNAs as tools for the therapy of this tumor.     

灵芝孢子油对人肺腺癌LTEP-a2细胞凋亡的影响

目的 观察灵芝孢子油对人肺腺癌细胞LTEP-a2增殖、凋亡与miR-16及其靶基因表达的影响,从miRNA角度揭示灵芝孢子油的抗肿瘤机制.方法 灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞LTEP-a2 24和48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,real-time PCR 检测miR-16及其靶基因bcl2和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 灵芝孢子油呈剂量、时间性地抑制人肺腺癌LTEP-a2细胞的增殖;当灵芝孢子油浓度达到2 μL·mL-1,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油可显著上调LTEP-a2细胞中miR-16的表达并相应下调bcl2和VEGF基因的表达.结论 灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞LTEP-a2细胞增殖,引起细胞形态学改变.其作用机制之一是上调miR-16的表达、下调Bcl2和VEGF的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的效果.     

MicroRNA-mediated suppression of P-glycoprotein by quantum dots in lung cancer cells

The interactions between adenosine triphosphate-binding cassette (ABC) transporters and nano-sized materials are attracting increasing attention, due to their great potential in overcoming the multidrug resistance (MDR) phenomena in cancer treatment. However, the inner mechanisms involved in the interactions are largely unknown. In this study, two commercial quantum dots (QDs), CdSe/ZnS-MPA and CdSe/ZnS-GSH, were tested for their interactions with P-glycoprotein (P-gp), as well as the relating mechanisms in lung cancer (A549) cells. Both QDs significantly suppressed the gene and protein expressions of P-gp in A549 cells. To explain this, the gene expressions of nine relating microRNAs (miRNAs) were evaluated. The results indicated a shared up-regulation of miR-34b and miR-185 by both QDs. Furthermore, mimics and inhibitors of miR-34b and miR-185 significantly enhanced and suppressed the gene and protein expressions of P-gp, respectively, confirming the modulatory function of these two miRNAs on P-gp. Interestingly, expressions of both miRNAs were suppressed during treatment with Cd²⁺ and doxorubicin, which induced the expression of P-gp, indicating the universality of these miRNAs-related mechanisms. Thus, as miR-34b and miR-185 participated in the suppression of P-gp functions in A549 cells they could be interesting targets for the treatment of lung cancer.     

Circulating miRNA-126, -145 and -155 levels in Mexican women exposed to inorganic arsenic via drinking water

The aim of this research was to investigate circulating expression levels of three miRNAs (miR-126, miR-155, and miR-145) proposed as predictive CVD biomarkers in Mexican women exposed to inorganic arsenic via drinking water. Mean UAs concentration of 19.5 ± 14.0 μg/g creatinine was found after urine samples were analyzed (n = 105). Significant associations between UAs levels and serum expression levels of miR-155 (p < 0.05) and miR-126 (p < 0.05) were observed after adjustment for assessed co-variables. Alterations in the serum expression levels of miR-155 and miR-126 may be associated with the onset and development of cardiovascular diseases, hence miRNAs could be proposed as prognostic CVD biomarkers. Data found in this study are of concern and risk reduction plans are necessary for the assessed communities to prevent cardiovascular events in this population of women.     

miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响以及对Bcl-2表达的调节

目的研究miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-143对宫颈癌HeLa细胞系Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用。方法将miR-143,anti-miR-143以及microRNA空对照高表达质粒用脂质体转染进宫颈癌He-La细胞中,MTT法检测宫颈癌HeLa细胞增殖的变化,His-tone/DNA ELISA检测细胞凋亡;Western blot和RT-PCR检测Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况;双荧光素酶报告基因法检测miR-143的靶位点。结果 MiR-143抑制HeLa细胞的增殖,促进细胞凋亡,而anti-miR-143促进HeLa细胞增殖,抑制细胞凋亡;高表达的miR-143抑制Bcl-2蛋白的表达,anti-miR-143增加Bcl-2蛋白的表达量,而Bcl-2 mRNA的变化很小;miR-143抑制Bcl-2 3'端的荧光素酶的活性,突变miR-143与Bcl-2的预测结合位点后,荧光素酶的活性恢复。结论 MiR-143至少部分通过打靶Bcl-2抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并且促进HeLa细胞凋亡。     

人子宫内膜细胞中 miRNAs 的表达及功能分析

摘要： 目的 探索微小 RNAs （miRNAs, miR） -125b、 miR-30b 和 miR-424 在子宫内膜中的表达及功能。方法 收 集自然周期患者（增殖期和分泌期）和促排卵周期患者（高孕组和非高孕组）的子宫内膜标本, 体外分离培养子宫内 膜上皮细胞和间质细胞, 并用免疫荧光验证。实时定量 PCR 检测 miR-125b、 miR-30b 和 miR-424 的表达。结果 增 殖期, 间质细胞中 miR-125b、 miR-30b 和 miR-424 的表达高于上皮细胞; 分泌期, 间质细胞中 miR-125b 和 miR-424 的表达仍高于上皮细胞, 而 miR-30b 的表达低于上皮细胞。上皮细胞中, 分泌期 miR-125b、 miR-30b 和 miR-424 的 表达显著高于增殖期, 而间质细胞中 3 种 miRNAs 的表达差异无统计学意义。HCG 日高孕组上皮细胞中 miR-125b 的表达高于非高孕组, 间质细胞中 miR-30b 的表达高于非高孕组。miR-125b、 miR-30b 和 miR-424 的靶基因功能 分析发现, 其涉及的生物过程主要有细胞迁移、 运动、 细胞间黏附连接等, 主要富集的信号通路包括胰岛素信号通 路、 VEGF 信号通路、 MAPK 信号通路、 焦点黏附和 Wnt 信号通路。结论 miR-125b、 miR-30b 和 miR-424 在子宫内 膜不同细胞类型、 不同时期和 HCG 日高孕酮患者中的表达存在差异, 可能参与子宫内膜容受性的调节。