不同盐的左氧氟沙星体外抗乙型肝炎病毒的作用及机理的研究

目的：研究不同盐的左氧氟沙星抗外抗HBV的作用及其机理。方法：以HBsAg,HBeAg及细胞存活率为指标,评价药物体外抗HBV效果;检测HBV DNA、RNA的拷贝数,结合Southern杂交,推测其体外抗HBV的作用机理。结果：磺酸左氧氟沙星对HBsAg和HBeAg的ID50分别为63．1μg/ml及81．3μg/ml,CD50为182．0μg/ml,TI＞2;对细胞内,外HBV DNA及细胞内HBV RNA均有剂量依赖性抑制作用（P＜0．05）;Southern杂交显示,其对细胞内HBV DNA及复制中间体有抑制作用,对scDNA有部分抑制作用,结论：磺酸左氧氟沙星有抗HBV作用,作用位点在HBV DNA及scDNA水平。     

PPN抑制HBV-DNA表达及复制的体外实验

目的：体外观察PPN对HBV－DNA表达、复制的抑制效果及其细胞毒性作用。方法：取10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml PPN水溶液分别加入2.2.15细胞株培养悬液中，8天后用放射免疫法检测上清液中HBeAg的含量，并计算HBeAg抑制率、细胞存活率、HBeAg抑制率为50％时的药物浓度（ID50）、实验组存活细胞为对照组的50％时的药物浓度（CD50）和治疗指数（TI）。PCR技术检测HBV－DNA阳性血清中加入160μg/ml PPN水溶液后对HBV－DNA复制的抑制作用。结果：当加入的PPN浓度为160μg/ml和80μg/ml时，HBeAg抑制率分别为89．8％和82．4％，细胞存活率分别为98．7％和99．2％；HBV－DNA阳性血清中加入PPN后可有效抑制其复制。结论：PPN可有效抑制HBV－DNA的表达和复制，且对靶细胞（肝细胞）无细胞毒作用，有进一步研究和推广应用的价值。     

叶下珠复方在体外细胞培养中抗HBV活性的研究

目的体外观察叶下珠复方抗HBV作用。方法以不同．农度的药物作用HePG2．2．15细胞，收集培养上清，用ELISA法测定HBsAg、HBeAg，并计算药物对抗原的抑制率、半数有效浓度（IC50）和治疗指教（TI），用荧光定量PCR测定HVB—DNA。结果在半数毒性浓度下，叶下珠复方浓度为250μg／ml、125μg／ml、62．5μg／ml、31．25μg／ml、15．6μg／ml时对HePG2．2．15细胞分泌HBsAg的抑制率分别为54．8％、43．6％、37．4％、26．7％、14．6％，其Ⅱ值为6．1；对HBeAg的抑制率分别为78．6％、72．9％、67．1％、56．8％、51．5％，其11值为24．6。叶下珠复方对HePG2．2．15细胞分泌的HBV—DNA有直接抑制作用，随着药物浓度的增加，HBV—DNA定量逐渐降低。结论叶下珠复方在体外显示具有抗HBV作用。     

五种药物对汉坦病毒的体外抑制作用的比较

目的 比较利巴韦林等五种药物对汉坦病毒（HV）的体外抑制作用。方法 利用HV76—118株感染传代培养的Vero—E6细胞,采用免疫荧光法分别评价五种药物的抗病毒效果。结果 五种药物均对汉坦病毒的入侵无阻断作用;利巴韦林对汉坦病毒增殖有明显的抑制作用,其最大无毒浓度（TD0）为500μg／ml、最小有效浓度（MTC）为31．2μg／ml,干扰素α-1b（赛若金）TD0为10万U／ml、MTC为0．5万U／ml,阿昔洛韦TD0为625μg／ml、MTC为156μg／ml,更昔洛韦、膦甲酸钠各浓度均未见对病毒增殖有抑制作用。结论 在一定浓度范围内利巴韦林、赛若金、阿昔洛韦对出血热病毒均具有抑制作用。     

中药大黄的生化学研究 ⅪⅩ 蒽醌衍生物对线粒体呼吸链的抑制部位

本实验观察了大黄中活性较强的三种蒽醌衍生物如大黄素、大黄酸和芦荟大黄素对大鼠肝线粒体呼吸链四个电子传递复合体的影响。实验结果表明:上述三种蒽醌衍生物是线粒体呼吸链电子传递的抑制。1.大黄酸、大黄素和芦荟大黄素对NADH脱氢酶(复合体Ⅰ)有不同程度的抑制作用。浓度为60μg/ml时,抑制率分别为83.5%、66.0%和45.1%。50%抑制的药物浓度分别为22μg/ml、38μg/ml和72μg/ml。2.大黄素对琥珀酸脱氢酶(复合体Ⅱ)有较强的抑制作用。50%抑制的药物浓度为55μg/ml。而大黄酸和芦荟大黄素对此酶     

胡椒碱对SF-21细胞株的杀伤作用及对其形态影响的研究

目的检测胡椒碱对草地贪夜蛾SF-21细胞的毒性作用和生长抑制作用,以便进一步研究其对昆虫细胞离子通道的影响。方法胡椒碱处理SF-21细胞后,用MTT微量酶反应比色法、改良微波Giemsa染色法检测细胞死亡率及形态学改变,用冲击式测试法检测细胞生长率及受损细胞的恢复。结果胡椒碱处理24h后,对SF-21细胞的半数毒性浓度(IC50)为95.37μg/ml,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强。胡椒碱浓度在10μg/ml以上时可诱发SF-21细胞形态学改变,表现为细胞呈多形性、细胞间有间隙、胞质内充满颗粒,以后随药物浓度的升高,胞质出现空泡、染色质凝成粗大颗粒或无结构大块、大片细胞脱落、崩解、死亡。低浓度胡椒碱(5μg/ml)对SF-21细胞增殖没有影响,较高浓度胡椒碱(10、20、40μg/ml)则对SF-21细胞增殖有明显的抑制作用,抑制作用强度随药物浓度的增加而增加,去除药物作用后,受抑制的细胞又重新恢复生长、分裂。结论胡椒碱对昆虫细胞有较强的毒性作用和生长抑制作用,可作为新型杀虫剂的功能物质。     

22种药物抑制HBV-DNAP和HBV-DNA的体外实验研究(摘要)

从抗病毒角度对抗HBV药物进行研究是临床上迫切需要解决的问题。但因临床动物模型十分困难,组织培养未成功,对研究造成一定限制。我们利用对DNAP阳性血清体外抑制实验及对HBV-DNA降解实验研究药物抗HBV作用。以磷羧基甲酸钠(PFA)     

积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人胚胎成纤维细胞的影响

目的研究积雪草甙（asiaticoside,Ad）和羟基积雪草甙（madecassoside,Md）对体外培养人胚胎成纤维细胞（Human embryonic skin fibroblasts,HESFb）增殖过程的影响。方法在不同浓度（0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）Ad和Md的环境下对人胚胎细胞进行体外培养,用CCK-8试剂盒通过酶标仪检测不同培养时间（0、1、2、3、4、5d）HESFb的OD值,用SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果在实验时间内Ad和Md在10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度时均对人胚胎成纤维细胞的增殖有促进作用,200μg/ml浓度时最明显,且Ad比Md作用强。两组在400μg/ml浓度时均有抑制作用。结论在一定浓度和培养时间内一定剂量的Ad和Md对体外培养的HESFb增殖有促进作用,同剂量相比Ad比Md明显。而较高剂量的时候均可出现抑制作用。     

环孢素和他克莫司在体外对乙型肝炎病毒复制影响的对比研究

目的比较分析环孢素和他克莫司(FK506)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法采用HBV DNA永久转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞为体外实验模型,经四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验确定环孢素及FK506对HepG2.2.15细胞生长无抑制作用的药物安全浓度后,将不同安全浓度的环孢素(0.6~20.0μg/ml)或FK506(5~100ng/ml)作用于该细胞系,每24小时换相应浓度新鲜含药培养基,药物作用4d后收集培养上清液和培养细胞待测。采用酶联免疫吸附试验检测上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平,采用狭缝印迹杂交法半定量分析细胞内HBV DNA水平,综合评价环孢素和FK506对HBV病毒复制的影响。结果MTT结果显示环孢素的药物作用安全浓度为0~40.0μg/ml,FK506的安全浓度为0~400ng/ml。在安全浓度范围内,随着环孢素作用浓度的增加,其对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,细胞内HBV DNA复制水平下降;当1.3、2.5及5.0μg/ml环孢素作用4d时,对HBsAg的抑制率分别为16.5%±9.4%、21.5%±8.9%和33.1%±5.3%,对HBeAg的抑制率分别为7.8%±2.2%、11.0%±2.3%和20.8%±1.5%,HBV DNA的表达量仅为对照组的56.1%±16.5%、41.7%±10.9%和39.5%±9.5%。在安全浓度范围内,FK506对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达分泌,以及细胞内HBV DNA复制无明显抑制作用。结论环孢素在体外能呈剂量依赖性地抑制HBV复制;而FK506则无此作用。     

20种真菌抑制HBV的实验研究

本文研究了20种吉林长白山区产的真菌对HBV的抑制作用。使用体外试管法测定对HBV DNAP的抑制、细胞生物学方法及在感染乙肝病毒的幼鸭上行整体实验。结果证明:某些真菌有抑制HBV作用,以冬虫夏草及树舌作用较强。它们对HBV-DNAP抑制率可达85％,抑制PLC/PRF/5细胞分泌HBsAg作用超过50％,并能抑制鸭体内的鸭乙肝病毒(DHBV)感染。通过实验提出一种系统研究抑制HBV药物的实验方法。     

儿茶素衍生物对人免疫缺陷病毒逆转录酶及DNA聚合酶的抑制作用

在体外观察绿茶提取物(GTE)及其中3种成份──没食子酰表没食子儿茶素(EG-CG)、没食子酰表儿茶素(ECG)及表没食子儿茶素(EGC)对克隆的人免疫缺陷病毒1型逆转录酶(HIV-1 RT)、鸭乙型肝炎病毒复制复合体逆转录酶(DHBV RCs RT),单纯疱疹病毒1型DNA聚合酶(HSV-1 DNAP)及牛胸腺DNA聚合酶α(CT DNAPα)活性的抑制作用,结果4种化合物的IC_(50)浓度分别为EGCG0.0066μmol/L,ECG0.084μmol/L、GTE0.1μg/ml和EGC7.2μmol/L。动力学研究发现EGCG对HIV-1 RT的外源性模板(rA)·(dT)_(12-18)为混合型抑制,对底物dTTP为非竞争性抑制。牛血清白蛋白可显著降低儿茶素衍生物对HIV-1RT的抑制作用。     

拉米夫定等六种药物的体外抗乙型肝炎病毒作用

目的：观察拉米夫定（3TC）等6种药物对抗乙型肝炎病毒（HBV）体外药效评价及不同指标之间的关系。方法：利用乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2．2．15细胞,检测细胞培养上清液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg)及乙肝病毒DNA（HBV－DNA）的含量作为药物抗HBV效果的观察指标。结果：（1）6种药物在一定浓度范围内对2．2．15细胞分泌的HBsAg和HBeAg抑制作用很弱或无抑制;（2）HBV－DNA定量检测拉米夫定和2′3′－二脱氧－3－氟鸟苷（FLG）对HBV DN水平有明显抑制作用,其半数有效剂量（IC50）分别为0．31μmol/L,0．53μmol/L,阿昔洛韦（ACV）和α－干扰素（α-IFN）之IC50分别为0．33mmo/L、96．18U／ml,膦甲酸钠（PFA）和利巴韦林（RBV）最大无毒浓度无任何抑制作用。结论：抑制HBsAg与HBeAg的病毒蛋白表达活性与抑制HBV DNA活性无一致相关性,以HBV DNA指标更能反映化合物的抑制作用。     

淫羊藿多糖等四种药物对人IL_2活性影响的研究——小鼠胸腺细胞MTT比色分析法

本文报道了用小鼠胸腺细胞MTT比色分析法检测淫羊藿多糖、猪苓多糖与羧甲基茯苓多糖及微量元素锌对正常人外周血单个核细胞产生白细胞介素2(IL_2)的影响,结果表明,淫羊藿多糖在100μg/ml和1000μg/ml剂量对人IL_2的产生有显著的增强作用,在2500μg/ml和5000μg/ml表现出抑制作用;猪苓多糖与羧甲基茯苓多糖合用在一定浓度下也有显著的增强作用;微量元素锌在0.153～765μmol/L均有显著的增强作用。并证明,各药对IL_2产生的作用并非药物的直接作用所致,淫羊藿多糖高浓度的抑制作用亦非该药的细胞毒作用所致。本文建立了用小鼠胸腺细胞做靶细胞的MTT比色分析法并与~3H—TdR掺入法进行了比较,获得较好的一致性。     

小檗碱对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用

目的观察小檗碱对人鼻咽癌CNE2细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用。方法以人鼻咽癌细胞株CNE2作体外试验,以MTT法检测小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE2生长抑制作用。结果在体外抗癌细胞增殖试验中,小檗碱对CNE2的浓度分别为6 0 0μg/ml、4 0 0μg/ml、2 0 0μg/ml、1 0 0μg/ml,作用7 2 h后以MTT法进行检测,对CNE2增殖抑制率分别为8 5.0%、74.4%、67.3%、59.0%。结论小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE2有生长抑制作用,与药物浓度有依赖性。     

骆驼蓬碱抗肿瘤作用的体外研究

本文对从骆驼蓬种子里提取出来的生物碱(2A-1、2B-2)进行了体外抑癌试验。其结果表明:骆驼蓬总碱(2A-1、2B 2)对瘤细胞L-1210和K-562均有明显的抑制作用,半数抑制浓度分别为45.71μg/ml、139.63μg/ml,36.40μg/ml和70.55μg/ml。其抗肿癌作用的强度和药物浓度呈正相关。其中2A-1对两种瘤细胞的作用效果比2B-2的抗肿瘤作用效果更为明显。     

硼合水杨酸钠的合成及其对真菌抑制作用的初步研究

硼合水杨酸钠是由水杨酸与硼砂在40—50℃时反应生成的一种络盐。经薄层层离可得三个斑点,Rf值为0.72、0.58、0.48。紫外分光扫描(20μg/ml)在300μm处有一最大吸收峰。 不同浓度的硼合水杨酸钠抑菌试验,结果在1250μg/ml以上对浅部真菌有良好的抑制作用,对深部真菌则浓度在2500μg/ml以上始能达到抑制生长的作用。     

PAOA对小鼠脾细胞IL2产生的影响

本文报道了PAOA水提物对小鼠脾细胞IL_2产生的显著抑制作用(P<0.01)。以10μg/ml的PAOA浓度对Con-A诱导的IL_2广生的抑制效应最为明显(IP=116％),1000和100μg/ml的浓度也有显著的抑制作用,而1μg/ml的浓度未发现有抑制作用。采用Con-A-and-PAOA-free方法,四种浓度对IL_2对的产生均有显著的抑制作用(P<0.01),其中也是以10μg/ml的浓度作用最强(IP=72％)。PAO人为扶正固本、养阴润燥类中草药,它对机体免疤功能的作用尚未确定,实验初步表明该药可能是一种新型免疫抑制剂。     

复尔康注射液体外抗肿瘤实验研究

目的：研究复尔康注射液对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法：以阿霉素为阳性对照,采用MTT法检测复尔康注射液对4种不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。结果：复尔康注射液对人白血病HL-60、人红白血病K562、小鼠黑色素瘤B-16及人肝癌BEL-7402细胞的半抑制浓度（IC50）分别为42.80μg/ml、146.65μg/ml、463.37μg/ml和945.37μg/ml,在浓度为520μg/ml时,对4种细胞株的抑制率分别为89.12%、80.68%、63.40%和34.92%。结论：复尔康注射液在体外对4种肿瘤细胞株均具有明显的抑制作用,具有开发成抗癌新药的潜力。     

槲皮素治疗慢性光化性皮炎的体外研究

目的:研究槲皮素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用及其对人表皮细胞株HaCaT的增殖影响,探讨槲皮素用于治疗慢性皮肤炎症的潜在可能。方法:常规培养大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌株及HaCaT细胞系,结晶紫染色法检测不同浓度槲皮素处理后24h大肠杆菌及金黄色葡萄球菌生物膜生长水平,公式计算其抑制率;MTT法检测不同浓度槲皮素处理后0,24,48,72h后细胞增殖水平,公式计算其抑制率。结果:槲皮素对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制率均随浓度增大而升高,在400μg/ml和800μg/ml浓度时抑菌效果明显增强,可在24h内达到78%-89%;200,400,800μg/ml浓度的槲皮素对HaCaT细胞生长增殖均无明显抑制作用。结论:适当浓度的槲皮素可明显抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌生物膜生长,且对HaCaT细胞增殖无明显抑制作用,有望成为光敏性皮肤疾病替代或联合用药的有效药物。     

紫杉醇、顺铂及康莱特对Lewis肺癌细胞株抑制作用的实验研究

目的:研究紫杉醇、顺铂、康莱特单用及联用对Lewis肺癌细胞株的增殖抑制作用。方法:以不同浓度的紫杉醇、顺铂、康莱特单独及联合处理Lewis肺癌细胞株,24小时后MTT法测定细胞生长抑制作用,应用金氏公式进行联合用药分析。结果:紫杉醇、顺铂、康莱特对Lewis肺癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用(P<0.05),但当康莱特的浓度增加到20μl/ml时抑制率不再增加,因此联合用药组中康莱特浓度固定为20μl/ml。作用24小时后紫杉醇、顺铂的IC50分别是15.42、2.59。两种或三种药物联用后对Lewis肺癌细胞株的抑制率显著增加,明显高于单一用药组(P<0.05),其中6μg/ml的紫杉醇与15μl/ml的康莱特联用时,其抑制率接近于12μg/ml的紫杉醇单用药;2μg/ml的顺铂与15μl/ml的康莱特联用时,其抑制率接近于4μg/ml的顺铂单用药,但紫杉醇联用顺铂组与三药联用组的作用差异无显著性(P>0.05)。结论:紫杉醇、顺铂能明显抑制Lewis肺癌细胞的增殖,与康莱特联合用药时可产生较好的协同作用,并且能够减少常规化疗药物的用量。