附子、黄芩和穿心莲水提物对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的药性学比较研究

目的:研究附子、黄芩和穿心莲水提物对四氢吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予附子、黄芩和穿心莲水提物干预。应用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:0.5mmol·L-1MPP+作用于SH-SY5Y细胞60h可诱导细胞凋亡,MTT值降低至(30.43±2.69)%,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,凋亡率增加至(40.52±1.68)%。附子水提物能明显改善以上凋亡特性,显著升高MTT值,降低凋亡率;黄芩和穿心莲水提物则对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡几无影响。结论:附子对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著保护作用,而黄芩、穿心莲却无此保护作用,中药药性不同,其抗凋亡作用亦不同。     

左金方与反左金方抗MPP~+诱导SH-SY5Y细胞凋亡作用的对比研究

目的研究左金方和反左金方水提物对四氢吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予左金方和反左金方水提物干预。应用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest染色观察凋亡细胞形态学的改变。结果0.5 mmol·L-1 MPP+作用于SH-SY5Y细胞60 h可诱导细胞凋亡,细胞存活率降低至(50.87±2.31)%,凋亡率增加至(43.38±1.49)%,Hochest 33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光。左金方和反左金方水提物与0.5 mmol·L-1 MPP+同时处理SH-SY5Y细胞后,能够明显改变细胞的凋亡学特性,当药物浓度增加到2.0 mg·m L-1时,细胞存活率分别升高至(63.16±1.89)%和(75.19±1.97)%,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其凋亡率由模型组的(43.38±1.49)%分别降低到(20.17±1.43)%和(9.41±1.27)%(P<0.01),反左金方(热性)抗凋亡的作用更强。结论左金方(寒性)和反左金方(热性)均能对抗由MPP+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡,而反左金方(热性)抗凋亡作用更强,中药药性不同,其抗凋亡作用亦不同。     

基于细胞凋亡表达的中药四性模式识别系统研究——西洋参和红参抗MPP~+诱导SH-SY5Y细胞凋亡的药性学对比研究

目的:研究不同药性的中药,属凉性的西洋参水提物(WEAG)和属温性的红参水提物(WERG)对四氢吡啶离子(MPP+)诱导神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡的影响。方法:将细胞分4组,对照组为常规加入完全培养基,模型组为加入0.5mmolMPP+,西洋参组和红参组同时加入0.5mmolMPP+和不同浓度的WEAG及WERG。给予WEAG和WERG进行干预。应用Hoechst33258染色观察细胞形态变化,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:与模型组比较,WEAG和WERG能显著改善模型组SH-SY5Y细胞的凋亡特性,显著升高其吸光度值,降低凋亡率,且WERG保护作用强于WEAG。结论:WEAG和WERG均对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有不同程度的保护作用,而温性中药抗凋亡作用更强,药性不同,其抗凋亡作用亦不同。     

6-羟基-1H-吲唑抑制Tau磷酸化对MPP~+诱导凋亡的SH-SY5Y细胞保护作用的研究

目的研究6-羟基-1H-吲唑通过抑制Tau磷酸化对MPP+诱导凋亡的SH-SY5Y细胞的保护作用。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,以MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡作为帕金森病的细胞模型。MTT分析法检测提前2 h加入6-羟基-1H-吲唑对细胞的保护作用;Hoechst 33258荧光染色法检测神经元凋亡情况;免疫细胞化学方法检测多巴胺能神经元内Tau的磷酸化水平。结果 200μmol·L-1MPP+可以使SH-SY5Y细胞存活率下降至(47.80±0.84)%(P<0.01),并且升高Tau磷酸化水平,出现典型的凋亡。而6-羟基-1H-吲唑抑制MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性,并通过抑制Tau蛋白过度磷酸化而减少神经元凋亡,使TH-阳性细胞数目增加。结论 6-羟基-1H-吲唑可以通过抑制Tau磷酸化而对MPP+诱导凋亡的SH-SY5Y细胞发挥保护作用,提示Tau蛋白可能可以作为药物治疗帕金森等神经退行性疾病的新靶点。     

红参水提物对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的 探讨红参水提物对Aβ25-35诱导人神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用.方法 用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,模拟阿尔茨海默病患者脑内神经元的病理损伤模型,以不同浓度的红参水提物进行干预;用倒置显微镜观察其形态学的变化;MTT法测定细胞的存活率;流式细胞技术检测细胞的凋亡率以及线粒体膜电位的变化.结果 50 μmol·L-1Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆、聚集,其存活率为39.26%土3.16%、凋亡率为37.30%±0.69%,线粒体红绿荧光强度比值为0.45±0.10;而Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞与不同浓度(1、5、10 mg·ml-1)红参水提物同时孵育后,明显减少了细胞损伤,升高了细胞存活率、降低了凋亡率,并升高了线粒体红绿荧光强度比值.结论 红参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.     

牛蒡苷元对H89诱导的SH—SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：考察牛蒡苷元对H89诱导的人神经母细胞瘤SH—SY5Y细胞损伤的保护作用。方法：用蛋白激酶A抑制剂H89处理SH—SY5Y细胞．建立细胞损伤模型。将SH—SY5Y细胞分成正常组（正常细胞）、模型组（经H89处理的细胞）、H89＋牛蒡苷元组（经H89处理后给予牛蒡苷元处理的细胞）和H89＋丹酚酸B组（阳性对照组,经H89处理后给予丹酚酸B处理的细胞）。采用MTT法检测细胞活力、免疫荧光细胞化学法检测细胞中β-淀粉样肽和神经营养因子-3的表达以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果：H89诱导的细胞损伤模型造模成功。牛蒡苷元在低浓度（0．5μmol·L-1）用最佳,与模型组相比,H89＋低浓度显著提高（P〈0．01）,细胞中β-淀粉样肽的表达下调5．17％（P〈0．05）,而神经营养因子-3的表达上调80．54％（P〈0．01）．凋亡细胞百分比也显著降低（P〈0．05）。结论：低浓度牛蒡苷元对H89诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用。     

葫芦素B抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖机制的初步研究

目的研究葫芦素B对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响及其作用的分子机制。方法通过MTT法检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞增殖的影响,流式细胞仪检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞凋亡和生理水平上活性氧含量、线粒体膜电位的影响。Hoechst 33258染色检测药物处理前后细胞形态的变化。Westernblot检测葫芦素B处理SH-SY5Y细胞24 h前后Bcl-2、Bax、p21、p53等蛋白合成的变化。结果实验浓度范围内,葫芦素B可时间与浓度依赖性地抑制SH-SY5Y细胞增殖;浓度依赖性地诱导SH-SY5Y细胞凋亡、活性氧水平升高和线粒体膜去极化;在蛋白水平上,葫芦素B能诱导凋亡抑制蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax、p21、p53上调。结论葫芦素B在体外能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,这一影响可能通过诱导细胞凋亡、ROS积累、线粒体膜去极化及其相关蛋白表达变化来实现。     

梓醇对乳胞素诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的探讨梓醇对蛋白酶体抑制剂乳胞素诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法梓醇10μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞1 h后,加入乳胞素10μmol·L-1继续处理24 h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,酶联免疫吸附检测细胞内20S蛋白酶体含量。结果与正常对照组相比,梓醇10μmol·L-1对细胞存活率、形态和凋亡及20S蛋白酶体含量无显著差异;乳胞素10μmol·L-1组细胞存活率为(72.0±1.8)%,明显降低(P<0.05),细胞凋亡率为(64.7±2.6)%,明显增高(P<0.05)。Hoechst33258染色发现梓醇细胞核形态改变,出现凋亡小体;细胞内20S蛋白酶体含量降低60%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与乳胞素10μmol·L-1组相比,梓醇10μmol·L-1预处理组细胞存活率(87.9±2.2)%明显增高(P<0.05),细胞凋亡率为(51.4±1.5)%,明显降低(P<0.05)。Hoechst33258染色发现,梓醇细胞核形态明显改善;细胞内20S蛋白酶体含量升高了1.9倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论梓醇对乳胞素诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与梓醇提高SH-SY5Y细胞内20S蛋白酶体含量有关。     

五味子甲素对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的初步研究不同浓度的五味子甲素(Schisandra A,Sch A)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP^+)引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,1 mmol/L MPP^+染毒同时分别给予1、3和5μmol/L Sch A处理48 h,Muse^(TM)细胞分析仪检测凋亡细胞数的变化;hoechst33342染色后激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞形态的改变;Western-blot检测各组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1 mmol/L MPP^+染毒48 h可引起SH-SY5Y细胞凋亡细胞数明显增多;1、3和5μmol/L Sch A干预可明显抑制1mmol/L MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,且随着Sch A浓度的升高,凋亡细胞数明显减少。Western-blot实验结果显示,MPP^+组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,而Sch A干预组cleaved caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 1 mmol/L MPP^+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,而一定浓度的Sch A能有效抑制MPP^+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,且该作用可能是通过抑制caspase-3蛋白活化实现的。     

基于细胞凋亡表达的中药四性模式识别系统研究——红参、生晒参和西洋参抗Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的药性学比较

目的:研究不同药性中药——红参(温性)、生晒参(平性)和西洋参(凉性)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法:用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,复制阿尔茨海默病(AD)患者脑内神经元的病理损伤模型,以不同浓度的红参水提物(WERG)、生晒参水提物(WEG)和西洋参水提物(WEAG)进行干预,以倒置显微镜观察其形态学变化;MTT法测定细胞存活率;流式细胞技术检测细胞凋亡率;蛋白印迹法测定兔抗人B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2连接X蛋白(Bcl-2)的表达。结果:50μmol.L-1Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72h后,细胞变圆、聚集,细胞存活率显著降低(P<0.01)、凋亡率显著升高(P<0.01)。Aβ25-35与不同浓度的WERG、WEG和WEAG同时孵育后,可显著减少细胞损伤,使细胞存活率升高、凋亡率降低,同时Bax与Bcl-2比值显著降低。结论:不同药性的红参、生晒参和西洋参对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有不同程度的保护作用,其中红参作用较强。     

白藜芦醇对MPP+所致MES23.5细胞损伤的保护作用

目的 探讨植物雌激素白藜芦醇对MPP<'+>所致MES 23.5细胞损伤的保护作用及其机制.方法 培养大鼠黑质多巴胺能神经细胞(MES23.5),分为3组:空白对照组、MPP<'+>处理组、白藜芦醇预处理组,分别采用甲基噻唑基四唑(MTT)法、细胞内乳酸脱氩酶(LDH)测定法、Hoechst染色等综合实验手段测定细胞损伤和凋亡情况.结果 MES 23.5细胞经MPP<'+>处理后,细胞存活率下降、LDH释放量增加、细胞核出现浓缩深染,与空白对照组差别具有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇预处理后再经MPP<'+>处理,细胞存活率增加、LDH释放量减少、细胞核变化减轻,与MPP<'+>处理组差别具有统计学意义(P<0.05).结论 白藜芦醇对MPP<'+>所致MES 23.5细胞损伤具有保护作用,机制与抗凋亡有关.     

13-甲基十四烷酸对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的：探讨13-甲基十四烷酸（13-MTD）对过氧化氢（H2O2）诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的影响。方法：采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。光镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,AO/EB双重染色法检测细胞凋亡,MTT法检测线粒体活性。结果：与正常对照组相比,H2O2损伤模型组细胞出现明显病理改变,细胞存活率、线粒体活性均显著下降（P〈0.01）,细胞凋亡率显著升高（P〈0.01）;13-MTD10、20、40μg/mL可显著提高细胞存活率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20μg/mL可显著下调细胞凋亡率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20、40μg/mL可显著提高细胞MTT代谢率（P〈0.01）;且存在一定量效差异（P〈0.05,P〈0.01）。结论：不同剂量的13-MTD对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤具有保护作用。     

左旋黄皮酰胺对冈田酸和β淀粉样肽25-35神经毒性的保护作用

探讨左旋黄皮酰胺对冈田酸(okadaic acid，OA)诱导的人神经瘤细胞(SH-SY5Y)和去卵巢(ovariectomy，OVX)及单侧侧脑室注射Aβ_25-35所致神经元损伤的保护作用。通过MTT试验、LDH释放测定试验、Hoechst 33258荧光染色试验以及SH-SY5Y细胞检测，考察左旋黄皮酰胺拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用。通过避暗试验、电镜检测、Nissl体染色及HE染色，考察左旋黄皮酰胺对去卵巢及侧脑室注射Aβ_25-35大鼠神经元的保护作用。左旋黄皮酰胺可明显拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用，提高去卵巢及侧脑室注射Aβ_25-35大鼠的学习记忆能力，保护海马及皮层神经元。左旋黄皮酰胺可拮抗冈田酸及Aβ_25-35诱导的神经毒性，具有神经保护作用。     

复方脑康胶囊对β-淀粉样肽诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用研究

目的:研究复方脑康胶囊对β-淀粉样肽(Aβ)25-35(Aβ25-35)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用。方法:将SH-SY5Y细胞接种后分为对照、Aβ25-35(25μmol.L-1)和复方脑康胶囊(0.725g.mL-1)+Aβ25-35(25μmol.L-1)组。通过测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞轴突长度、胞体面积,观察复方脑康胶囊对Aβ导致神经毒性的保护作用。结果:与对照组比较,Aβ25-35组SY5Y细胞的轴突长度和胞体面积均较小,MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,而加入复方脑康胶囊水提液后,可使上述指标恢复或接近正常。结论:复方脑康胶囊具有神经保护作用,可减轻Aβ导致的神经毒性。     

姜黄素对人神经母细胞瘤细胞作用的体外试验研究

目的:研究姜黄素对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡与侵袭能力的影响。方法:人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y与不同浓度(1.25、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0μmol.L-1)的姜黄素共孵育48h。MTT法检测细胞存活率;用流式细胞仪和Hoechst33258染色检测细胞凋亡,并观察细胞形态学改变;应用Transwell细胞侵袭试验检测细胞侵袭能力。结果:各浓度姜黄素能够不同程度地抑制人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的生长,其对SH-SY5Y细胞的半数抑制浓度为15μmol.L-1,随着姜黄素浓度的增加,SH-SY5Y细胞数量逐渐减少;姜黄素对SH-SY5Y细胞有促凋亡和减弱细胞侵袭能力的作用。结论:姜黄素治疗神经母细胞瘤具有应用价值。