人β2—肾上腺素能受体基因第64位密码子突变频率的检测

建立一种简便，准确，实用的人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子突变的检测方法。方法应用聚合酶链反应特异性扩增β３－肾上腺素能受体基因含编码６４位氨基酸的基因 列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｔＯＩ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性图谱。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测维生素D受体基因型

目的建立一种简便、实用、准确的人维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型的检测方法，以利于ＶＤＲ基因变异在骨质疏松研究中的应用。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ＶＤＲ基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｍⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果应用ＰＣＲＲＦＬＰ法检测了１１０名健康汉族人ＶＤＲ基因型，ｂｂ、Ｂｂ、ＢＢ基因型分布频率分别是９４％（１０３例）、６％（７例）、０。结论该方法简便、准确、重复性好，适用于一般实验室及流行病学调查。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因型

目的建立一种简便、准确、实用的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因型的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ａｐｏＥ基因含编码１１２位和１５８位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＨｈａⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＩＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１１３名健康人ａｐｏＥ基因型，频率分别为ε３／３６９．０％，ε３／２１６．８％，ε４／３１１．５％，ε４／２１．８％，ε４／４０．９％；ε２、ε３和ε４等位基因频率分别是９．３％、８３．２％和７．５％。结论该方法简单、快速、准确，对人体无害，适合于一般实验室开展及大规模人群调查     

胆固醇酯转运蛋白基因15显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＥＬＰ）的方法检测１１０例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）基因１５外显子Ｄ４２Ｇ错义突变。首先用聚合酶链反应行异性扩增包含人ＣＥＴＰ基因１５外显子第１５０６位碱基的基因序列，扩增产和用限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。１１０例脑动脉粥样硬化患者中发现４例杂俣突变。突变率３．６％，与对照组４％比较无明显差异。该     

PCR—RFLP检测NADH—细胞色素b5还原酶缺陷基因杂合子突变

目的；分析导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶基因突变类型，方法：ＰＣＲ扩增５ｂ还原酶基因第３和第４外显子；限制性片断长度多态分析扩增产物。结果：发现患者家系成员存在第５７密码子杂合子突出。结论：ＲＦＬＰ－ＰＣＲ可望成为遗传性高铁血红蛋白症的基因诊断方法之一。     

3型血管性血友病的基因突变与临床研究

目的：研究３型血管性血友病（ｖＷＤ）的分子病理机制。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选了３型ｖＷＤ患者ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因编码区的基因突变，对ＰＣＲ－ＤＧＧＥ行为发生改变的片段直接进行ＤＮＡ序列分析。结果：检测到１例基因突变，在ｖＷＦ基因外显子３第２１２号核苷酸，发生了Ｃ→Ａ的替换，使Ｓｅｒ７１突变为终止密码子。该突变创造了ＸｂａⅠ酶切位点，消除了原有的ＴａｑⅠ位点。结论：ＰＣＲ－ＤＧＧＥ和酶切分析均证实，患者为该突变的纯合子，其父母则均为该突变的携带者。     

快速检测乙型肝炎病毒C基因启动子联合点突变

研究滞酶链反应－限制性片段长度多态性分析法检测乙型肝炎病毒Ｃ基因启动子区Ｔ１７６２／Ａ１７６４联合点突变的有效性。方法将４４例慢性乙型肝炎患者的血清ＰＣＲ－ＲＦＬＰ结果同测序结果进行综合分析。结果４４份忆性乙型肝炎患者的血清中，有１２份血清ＰＣＲ－ＲＦＬＰ的结果为单纯突变株感染；１０份为突变株与野生株混合感染；２２份在单纯野生株感染与测序结果相吻合。结论ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测ＨＢＶ／Ｃ基因启动子区Ｔ     

血小板同种抗原P1A基因型检测及其与突发性耳聋的关系探讨

建立一种简便，易行，适于一般分子生物学实验室操作的检测血小板同种抗原Ｐ１＾Ａ基因型的方法并对Ｐ１＾Ａ２基因型与突发性耳聋之间的相关性进行初步研究。设计一对引物，用ＰＣＲ方法特异扩增血板ＧＰⅢａ基因上包含造成Ｐ１＾Ａ基因多态性的碱基在内的２４７ｂｐ片段，ＰＣＲ产物用ＭＳＰⅠ酶切。电泳后观察酶切位点的限制性片段长度多态性。用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ的方法检测了４０例对照和４０例突发性耳聋患者，结果均为Ｐ１＾Ａ     

载脂蛋白E基因多态性检测技术的对比性研究

目的建立并比较载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性检测技术,为ＡｐｏＥ基因分型提供良好的方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测技术对１１０例患者及相同人数的正常人进行ＡｐｏＥ基因型检测和分析。结果应用ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ技术测得正常对照组：ε２／２（０,０．０２０）,ε３／３（０．７００,０．７６０）,ε４／４（０,０．０４０）,ε２／３（０．１００,０．０６０）,ε２／４（０,０．０２０）,ε３／４（０．２００,０．１００）,ε２（０．０５０,０．０６０）,ε３（０．８５０,０．８４０）,ε４（０．１００,０．１００）。经χ２检验,ＡｐｏＥ基因型频率和等位基因频率的差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。上两种检测技术与既往两种检测技术（ＩＥＦ,ＷｅｓｔｅｒｐＢｌｏｔｉｎｇ）的结果经χ２检验,其ＡｐｏＥ等位基因频率的差异也无显著意义（Ｐ＞０．０５）,均符合中国汉族人ＡｐｏＥ基因频率分布。结论ＰＣＲＲＦＬＰ方法是一种稳定可靠的ＡｐｏＥ基因多态性分析方法,多重ＰＣＲＳＳＣＰ技术更加简便有效,使ＡｐｏＥ基因多态性的研究更加完善。     

中国人凝血因子Ⅸ基因MseⅠ多态性

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶ＭｓｅⅠ酶解分析，发现我国人群凝血因子ＩＸ（ＦｌＸ）基因５’侧翼－６９８位核苷酸存在ＭｓｅＩ多态性，该多态性由８３ｂｐ／５８ｂｐ＋２５ｂｐ组成。在受检的１１８个ＦＩＸ基因中，二者基因频率分别为０．６３５和０．３６５，多态性信息量为０．４６３。此系我国人群中发现的第二种限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ），有助于血友病乙携带者的检测及产前基因诊断。     

中国汉族人群vWF基因MspⅠ和RsaⅠ限制性片段长度多态性研究

目的：研究我国汉族人群ｖＷＦ基因的多态性特点。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术结合ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ酶切分析研究了５２名汉族人１０４条染色体ｖＷＦ基因ＭｓｐⅠ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和４８名汉族人９６条染色体的ＲｓａⅠＲＦＬＰ。结果：在我国汉族人中，等位基因ＭｓｐⅠ＋／ＭｓｐⅠ－的频率为０．２０∶０．８０，理论杂合频率为３６％；ＲｓａⅠ＋／ＲｓａⅠ－的频率为０．９３∶０．０７，理论杂合频率为１３％。结论：在我国汉族人中，在ｖＷＦ基因的５′端存在ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ的多态性位点，可用于血管性血友病的遗传咨询和产前诊断。     

在HeLa细胞中表达人βIVS-Ⅱ-nt 654C→T突变基因

目的：建立一个能表达人βＩＶＳ－Ⅱ－ｎｔ６５４Ｃ→Ｔ突变基因（β６５４基因）的ＨｅＬａ细胞模型。方法：应用长片段多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术从一例β６５４突变基因纯合子的基因组ＤＮＡ中扩增出β６５４基因全长片段，重组进ｐｃＤＮＡ３．１真核表达载体质粒中。经ＤＮＡ测序证明序列中确实含有β６５４突变后，将重组表达质粒用脂质体方法转化ＨｅＬａ细胞，用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测β６５４突变基因在转染细胞中表达的ｍＲＮＡ。结果：该重组表达质粒能在ＨｅＬａ细胞中转录β６５４突变基因，并剪接成正常和异常两种ｍＲＮＡ（对应于１８３ｂｐ和２５６ｂｐ两种ＲＴ－ＰＣＲ产物），而对照组无扩增条带出现。结论：重组表达质粒转化的ＨｅＬａ细胞能表达β６５４基因。     

血栓栓塞症患者抗活化的蛋白C的研究

目的 探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）现象在中国人血栓栓塞症发病中的作用。方法 用ＡＰＴＴ法检测ＡＰＣＲ敏感比率（ＡＰＣＲ－ＳＲ）来研究４０例深静脉血栓症（ＤＶＴ）患者、５２例脑血栓形成患者和１００例正常人的ＡＰＣＲ发生率;用多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）来检测ＦＶ Ｌｅｉｄｅｎ突变;用免疫火箭电泳测血浆总蛋白Ｓ和游离蛋白Ｓ。结果 正常人的正常化ＡＰＣＲ－ＳＲ（ｎ－ＡＰＣＲ     

上海地区深静脉血栓形成患者抗活化的蛋白C及FⅤLeiden突变的初步调查

应用抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）试验、多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析及ＤＮＡ序列分析对上海地区深静脉血栓形成（ＤＶＴ）患者ＡＰＣＲ及ＦⅤＬｅｉｄｅｎ突变进行调查。正常人群正常ＡＰＣＲ敏感比值（ｎ－ＡＰＣ－ＳＲ）的５％百分位数为０．７５，在被调查的３１例ＤＶＴ患者中有５例患者的ｎ－ＡＰＣ－Ｒ低于此值，ＤＶＴ患者ＡＰＣＲ的发生率为１６％，且ＤＶＴ患者与正常人的ＡＰＣＲ发生率有显著差异（Ｐ＜０．０５）。用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检查了１４１例排除ＤＶＴ的个体和３５例ＤＶＴ患者的Ｌｅｉｄｅｎ突变情况，发现所有样本的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ均显示了同样的代表野生型基因型的电泳条带，未发现Ｌｅｉｄｅｎ型突变。ＡＰＣＲ试验阳性的２例ＤＶＴ患者之多聚酶链反应（ＰＣＲ）产物测序结果进一步证实了实验中ＰＣＲ反应和ＭｎｌＩ酶切反应的特异性。结果说明ＡＰＣＲ现象可能是中国人群ＤＶＴ发病的一个危险因素；但我们与西方调查者实验结果的差别，说明在不同种族中，ＤＶＴ的致病机制可能不同     

上海地区深静脉血栓形成患者抗活化的白蛋C及FV Leiden突变的初…

应用抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）试验、多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析及ＤＮＡ序列分析对上海地区深静脉血栓形成（ＤＶＴ）患者ＡＰＣＲ及ＦⅤ Ｌｅｉｄｅｎ突变进行调查。正常人群正常ＡＰＣＲ敏经值（ｎ－ＡＰＣ－ＳＲ）的５％百分位数为０．７５，在被调查的３１例ＤＶＴ患者中有５例患者的ｎ－ＡＰＣ－Ｒ低于此值，ＤＶＴ患者ＡＰＣＲ的发生率为１６％，且ＤＶＴ患者与正常人的ＡＰＣＲ发生率     

我国长春地区正常人c－abl等位基因分型及其物理图谱的鉴定

我们以完整的ｖ－ａｂｌ癌基因为探针，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交方法在长春地区随机正常人群中检测到ｃ－ａｂｌ癌基因位点存在限制性片段长度多态性（ＰＦＬＰ）。ＲＦＬＰ的产生是由于ｃ－ａｂｌ位点存在ａ、ｂ、ｃ三个等位基因所致，ｂ等位基因是在ｃ－ａｂｌ基因酪氨酸残基受体位点下游一个内含子内发生大约５００ｂｐ缺失所致，ｃ等位基因是在同一位置缺失大约４ｋｂ。ａ等位基因频率为９４．７％；ｂ为１．９％；ｃ为３．４％。与白种人群ｃ－ａｂｌＲＦＬＰ比较，ａ、ｂ等位基因相同，频率相似，但我们首先发现一新的等位基因：ｃ等位基因。     

我国长春地区正常人c—abl等位基因分型及其物理图谱的鉴定

我们以完整的ｖ－ａｂｌ癌基因为探针，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交方法在长春地区随机正常人群中检测到ｃ－ａｂｌ癌基因位点存在限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）。ＲＦＬＰ的产生是由于ｃ－ａｂｌ位点存在ａ、ｂ、ｃ三个等位基因所致，ｂ等位基因是在ｃ－ａｂｌ基因酪氨酸残基受体位点下游一个内含子内发生大约５００ｂｐ缺失所致，ｃ等位勘城是在同一位置缺失大约４ｋｂ。ａ等位基因频率为９４．７％；ｂ为１．９％；ｃ为３．４     

β-纤维蛋白原-455G/A基因多态性的检测

应用多聚酶链反应限制性酶切法，分析中国广东籍人β－纤维蛋白原－４５５Ｇ／Ａ（β－ＦＢＧ－４５５－Ｇ／Ａ）基因多态性。２６６例广东籍人ＤＮＡ样品的β－ＦＢＧ－４５５－Ｇ／Ａ多态性中，发现β－ＦＢＧ－４５５－Ａ／Ａ纯合子１０个，基因型频率０．０３８；β－ＦＢＧ－４５５－Ｇ／Ｇ野生型１３８个，基因型频率为０．５１９；β－ＦＢＧ－４５５Ｇ／Ａ杂合于１１８个，基因型频率为０．４４４，Ａ等位基因频率为０．２５     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR—EFLP）分析维生素D受体（VDR） …

聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型可以早期预测骨质疏松，为探讨便捷、可靠的实验条件供一般临床实验室使用，本文对比常规ＰＣＲ效果、不同ＮＤＡ模板量对ＰＣＲ和限制性内切酶酶切结果的影响。结果显示：热启动消除了引物错配和二聚体形成的机遇，使特异性条带大量扩增；模板量控制在２００～８００ｎｇ最佳，可避免太低不出现扩增条带，太高造成某些结果的误判。据此认为：     

肝细胞癌p53基因杂合缺失的检测

目的建立快速、简便及敏感的ｐ５３基因杂合缺失的检测方法。方法采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术对２８例肝细胞癌ｐ５３基因外显子４和内含子６的杂合缺失进行检测。结果发现２８例肝细胞癌患者肝组织外显子４上存在较高的ＢｓｔＵＩ酶切位点多态性（６１％），肝细胞癌杂合缺失率为５３％；而内含子６上ＭｓｐⅠ酶切位点多态性低，不适于分析肝细胞的杂合缺失。结论杂合缺失是肝细胞癌ｐ５３基因失活的重要机制；ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术检测ｐ５３基因杂合缺失方法简单、快速经济，值得推广