人脐带间充质干细胞治疗放射性肺损伤的研究

目的探讨分离、培养、标记人脐带间充质干细胞（u-MSCs）的方法及其对放射性肺损伤的治疗作用。方法无菌取得健康孕妇并剖宫产胎儿的脐带,按照贴壁培养法分离培养获取第三代u-MSCs,并用BrdU标记。将大鼠随机分为对照组（A组）、单纯照射组（B组）、u-MSCs治疗组（C组）,利用细胞培养技术检测u-MSCs对放射性肺损伤的治疗作用,对比检测各组大鼠TNF-a的含量,肺组织的病理改变。结果可通过贴壁培养法从人脐带分离、培养生长状态良好的u-MSCs,且这些细胞更为原始,更为年轻。BrdU是u-MSCs的良好标记物,阳性标记部位在细胞核,成功率较高。与A组比较,B组肺泡腔内有渗出,间隔增宽,有纤维化样变,血浆TNF-a水平显著增高。与B组比较,C组肺泡间隔增宽不明显,未见纤维化样改变,TNF-a水平在各时相均低于B组,肺组织损伤程度较B组明显改善。结论从人脐带可以分离、培养出生长状态良好的u-MSCs。经尾静脉注射u-MSCs后对放射性肺损伤有一定的保护作用。     

人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性

目的探讨C57/BL6J小鼠重复多次尾静脉输注人脐带间充质干细胞后的免疫反应和毒性。方法将SPF级别的32只C57/BL6J小鼠随机分为阴性对照组、细胞移植组,每组16只,雌雄各半,细胞移植组小鼠尾静脉注射分离培养的第5代人脐带间充质干细胞,一次5×106/只,每周注射一次,连续注射4周;阴性对照组每次注射相同容积的PBS。注射后后观察小鼠的一般症状,末次注射后1周、4周进行血细胞计数、血生化、免疫反应指标、脏器质量测定和组织病理学检查。结果细胞移植组小鼠血细胞计数、血生化、脏器重量和脏器系数与对照组无显著性差异(P>0.05),脏器组织病理学在光镜下检查结果与对照组无形态学差别,以及免疫结果测定(T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论人脐带间充质干细胞重复多次尾静脉输注C57/BL6J小鼠是安全可行的,对受者无明显免疫反应和毒副作用。     

脐带间充质干细胞治疗脑梗死的安全性与有效性

目的:观察人脐带间充质干细胞(UC-MSC)治疗脑梗死的临床效果和安全性。方法:脑梗死患者1 20例,随机分为2组:对照组、UC-MSC治疗组,每组60例。对照组采用常规药物治疗+康复训练;UC-MSC治疗组在对照组治疗的基础上,给予UC-MS治疗。采用FIM评分及FMA评分对2组患者治疗前及后神经功能进行评定,并对患者年龄、病程、治疗前FMA评分与治疗后症状改善程度进行相关性分析。结果:治疗后1周、1月、3月FIM评分及FMA评分与治疗前相比,对照组差异均无统计学意义(P>0.05).治疗组中治疗前与治疗后1周比较,FIM评分及FMA评分差异无统计学意义(P>0.05);治疗前与治疗后1月比较,FMA评分升高(P<0.05),FIM评分差异无统计学意义(P>0.05);治疗前与治疗后3月比较,FIM评分、FMA评分升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3月,对照组与治疗组比较.FlM评分、FMA评分升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组中患者年龄、病程与治疗后改善程度呈负相关(P<0.05),FMA评分与治疗后改善程度无相关性(P>0.05)。治疗组中在治疗后有16例患者出现轻度不良反应(发生率为26.67%):主要是轻度发热,轻度头昏头痛,腰部酸痛。36例(随访率60%)患者随访超过了1年,未见与细胞治疗相关的不良反应发生。结论:US-MSC鞘内注射联合静脉滴注治疗脑梗死后运动功能障碍疗效明显,同时具有良好的安全性。     

人脐带间充质干细胞多次输注食蟹猴安全性研究

目的 评估人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)多次输注食蟹猴的安全性,为hUC-MSCs临床应用的安全性提供支持.方法 取第5代(P5)hUC-MSCs进行形态学、三向分化及免疫表型鉴定后静脉输注食蟹猴,分为低剂量组和高剂量组,每组3只,共输注5次,1次/周.在规定的时间点测量体温、体重、血压、血常规、血生化、血清I...     

人脐带间充质干细胞对急性肺损伤大鼠的血清炎性因子及肺组织TRB3 mRNA表达

为了研究人脐带间充质干细胞对急性肺损伤大鼠的血清炎性因子及肺组织TRB3 mRNA表达的影响。我们将60只成年SD大鼠分组造模后,治疗组予以气管内滴注人脐带间充质干细胞悬液治疗。用ELISA法测定三组肺组织白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TGF-α)水平,实时荧光定量PCR检测肺组织TRB3 mRNA表达量,称量计算大鼠肺组织湿/干质量比。研究发现应用干细胞治疗后,肺组织内IL-6、IL-10、TGF-α水平显著降低,TRB3 mRNA表达量也降低,肺组织湿/干质量降低,水肿明显缓解。说明人脐带间充质干细胞可有效降低急性肺损伤大鼠的血清炎性因子及肺组织TRB3 mRNA表达水平,并减少肺组织湿/干质量比。     

人脐带间充质干细胞对新生SD大鼠肺损伤的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的新生SD大鼠急性肺损伤的作用.方法:人脐带间充质干细胞的分离、培养和鉴定.将30只新生SD大鼠随机分成生理盐水(NS)对照组、LPS模型组和HUCMSCs移植组,每组10只.显微镜观察各组大鼠肺组织病理变化,ELISA检测血清中炎性细胞因子的表达差异.结果:与对照组相比,LPS模型组肺湿/干重比(W/D)和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性升高,血清中TNF-α和IL-6的表达显著增加(P＜0.05).与LPS模型组相比,HUCMSCs移植组W/D和MPO活性有所下降,血清中TNF-α和IL-6的表达明显降低(P＜0.05).结论:在LPS诱导的新生大鼠肺损伤模型中,人脐带间充质干细胞移植能够减轻肺组织损伤,并抑制炎性因子的表达.     

人脐带间充质干细胞移植治疗小鼠慢性输卵管炎

摘 要： 【目的】 观察人脐带间充质干细胞（ｈＵＣ－ＭＳＣ）移植对小鼠慢性输卵管炎的治疗作用,为慢性输卵管炎的临床治疗提供新策略。【方法】 从脐带中分离培养人脐带间充质干细胞,流式细胞术鉴定其免疫表型,并诱导成脂、成骨分化验证其多向分化潜能。通过阴道内接种沙眼衣原体建立小鼠输卵管炎模型,感染后４周随机分成ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组及对照组。ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组小鼠阴道内接种人脐带间充质干细胞,对照组小鼠阴道内注射等体积ＰＢＳ。感染后８周,观察小鼠输卵管有无阻塞、积水等慢性输卵管炎表现,病理切片观察组织形态学改变。【结果】分离培养的人脐带间充质干细胞符合间充质干细胞的一般生物学特性。感染后８周,对照组小鼠均出现输卵管阻塞、积水等慢性输卵管炎表现,而ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组仅２例出现输卵管阻塞及积水,对照组小鼠慢性输卵管炎的发生率明显高于ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组,差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０１）。ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组输卵管病理切片显示,输卵管周围炎症细胞浸润较少。【结论】 ｈＵＣ－ＭＳＣ移植可明显减少小鼠慢性输卵管炎的发生和减轻其炎症程度,有可能为输卵管性不孕的临床治疗提供新的途径。     

骨髓间充质干细胞对小鼠急性肺损伤治疗作用的研究

目的探讨输入外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(AL)I的治疗作用.方法实验随机分为3组(n=10):对照组、ALI组和MSCs治疗组.健康小鼠LPS气管滴入方法建立ALI模型,尾静脉输入全骨髓培养法分离纯化的MSCs.流式细胞分析鉴定MSCs.HE染色组织切片观察输入MSCs前后肺组织病理形态学改变,W/D比值和髓过氧化物酶(MPO)活性评价肺水肿和炎症反应程度.ELISA检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量.结果流式细胞分析鉴定:培养MSCs表面标记CD105为阳性,CD34为阴性.肺组织病理学显示:ALI组小鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,包括肺泡充血、出血、水肿,肺泡腔和血管壁中性粒细胞浸润,肺泡壁增厚等肺损伤性病变;MSCs治疗组小鼠肺组织损伤程度明显减轻.肺W/D比值、肺组织MPO活性及TNF-α和IL-6含量:ALI组小鼠肺W/D比值、肺组织MPO活性及TNF-α和IL-6含量高于对照组(P<0.05);MSCs治疗组肺W/D比值、肺组织MPO活性及TNF-α和IL-6含量低于ALI组(P<0.05).结论输入MSCs能够减轻脂多糖致急性肺损伤程度,其作用可能与降低肺W/D比值和肺组织MPO活性、IL-6及TNF-a含量有关.     

人胎盘间充质干细胞降低肺泡上皮屏障通透性缓解小鼠急性肺损伤

目的 探讨人胎盘间充质干细胞（hPMSCs）对急性肺损伤（ALI）小鼠肺泡上皮屏障通透性的影响。方法将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分成对照组、ALI组、hPMSCs组,每组8只,气管滴注脂多糖（LPS）制备ALI模型,12 h后,hPMSCs组尾静脉注射hPMSCs,对照组尾静脉注射等量DMEM,24 h后处死小鼠,收集肺组织。苏木-伊红（HE）染色观察各组小鼠肺组织病理改变并评分,检测肺组织湿干重比（W/D）,计算肺泡灌洗液（BALF）与血清中伊文思蓝的比值检测肺泡上皮屏障通透性,免疫组化、Western blot检测肺组织紧密连接蛋白occludin的表达。结果 hPMSCs成脂及成软骨诱导分化培养后染色均呈阳性,其表面特异性抗原CD73高表达,未检测到造血标记物CD34的表达。与对照组相比,ALI组肺组织病理损伤严重,肺损伤评分、W/D值、肺泡上皮屏障通透性均增加（P均<0.01）,免疫组化和Western blot显示occludin蛋白表达降低（P<0.001）。与ALI组相比,hPMSCs组肺组织病理损伤减轻,肺损伤评分、W/D值、肺泡上皮屏障通透性均降低...     

人脐带间充质干细胞治疗IgA肾病模型小鼠后VEGF的表达变化

目的研究IgA肾病模型小鼠经人脐带间充质干细胞治疗后VEGF的表达变化,从而探讨人脐带间充质干细胞对IgA肾病的治疗机制。方法 SPF级雄性昆明小鼠60只,按随机数字法随机分为空白组、阴性对照组和人脐带间充质干细胞治疗组。利用牛血清白蛋白灌胃和皮下注射CCl4并联合应用脂多糖的复合方法造出小鼠IgA肾病模型。10周造模成功,尾静脉注射人脐带间充质干细胞,于第7、21、56天处死小鼠取材,做HE染色,免疫组化检测VEGF。结果 15只小鼠出现镜下血尿,25只小鼠肉眼血尿;人脐带间充质干细胞治疗后,免疫组化观察VEGF表达增强。结论人脐带间充质干细胞注入IgA肾病小鼠模型后,可以通过VEGF的表达增强来促使新生血管生成,修复受损肾小球系膜组织,使IgA肾病的一系列症状得到改善。     

人脐带间充质干细胞治疗IgA肾病模型小鼠后VEGF的表达变化

目的研究IgA肾病模型小鼠经人脐带间充质干细胞治疗后VEGF的表达变化,从而探讨人脐带间充质干细胞对IgA肾病的治疗机制。方法 SPF级雄性昆明小鼠60只,按随机数字法随机分为空白组、阴性对照组和人脐带间充质干细胞治疗组。利用牛血清白蛋白灌胃和皮下注射CCl4并联合应用脂多糖的复合方法造出小鼠IgA肾病模型。10周造模成功,尾静脉注射人脐带间充质干细胞,于第7、21、56天处死小鼠取材,做HE染色,免疫组化检测VEGF。结果 15只小鼠出现镜下血尿,25只小鼠肉眼血尿;人脐带间充质干细胞治疗后,免疫组化观察VEGF表达增强。结论人脐带间充质干细胞注入IgA肾病小鼠模型后,可以通过VEGF的表达增强来促使新生血管生成,修复受损肾小球系膜组织,使IgA肾病的一系列症状得到改善。     

脐带间充质干细胞外泌体缓解LPS诱导的急性肺损伤

目的 ：研究脐带间充质干细胞来源外泌体（MSC-exo）对急性肺损伤大鼠模型的作用。方法 ：利用超速离心法提取脐带间充质干细胞来源的外泌体,通过透射电镜、动态光散射及蛋白印迹实验鉴定外泌体。用脂多糖（LPS）诱导大鼠发生急性肺损伤动物模型,将动物分为阴性对照组、脂多糖（LPS）组和脂多糖+外泌体（LPS+exo）组。观察动物的精神状态并通过ELISA、QPCR、Western blot和组织化学分析等方法检测关键炎症因子的变化,分析外泌体对脂多糖（LPS）引起的急性肺损伤中炎症的调控作用。结果 ：用脂多糖（LPS）成功诱导大鼠产生急性肺损伤动物模型,外泌体治疗可缓解急性肺损伤模型大鼠的体重减轻、缓解肺水肿、改善炎症因子蛋白水平、减少炎症细胞的浸润。结论 ：脐带间充质干细胞来源外泌体能有效缓解脂多糖诱导的急性肺损伤表型及炎症水平。     

脐带间充质干细胞治疗橄榄桥脑小脑萎缩的安全性及有效性

目的:观察人脐带间充质干细胞(UC-MSC)治疗橄榄桥脑小脑萎缩(OPCA)的临床效果及不良反应。方法:2010年7月至2011年5月,对武汉大学中山医院神经内科及细胞治疗研究中心收治的OPCA患者25例,给予UC-MSC静脉滴注联合鞘内注射治疗,每次静脉滴注约3×107个细胞,鞘内注射约7×107个细胞,1次为1个疗程。采用世界神经病联合会国际合作共济失调评分量表(ICARS)、统一多系统萎缩评估量表(UMSARS)及Bar-thel指数对患者治疗前及疗程结束后1月、3个月时神经功能进行评定,对比治疗前及治疗后上述各项指标的变化。并对患者年龄、病程、神经损伤程度(UMSARS评分)与治疗后改善程度相关性进行分析。结果:本组患者治疗1月、3个月时与治疗前比较,ICARS、UMSARS评分指数均明显降低,Barthel指数升高(均P<0.05)。患者运动性共济失调、书写困难、吞咽困难、构音障碍等临床症状得到明显改善,改善程度与患者年龄和病程均没有明显关系性(P>0.05),与病情严重程度呈负相关(r=-0.356,P<0.05),病情越重改善越轻微。治疗后3月,患者疗效稳定,ICARS评分、UMSARS评分、Barthel指数较治疗后1月无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。不良反应及并发症主要集中在治疗后3d内,主要为:发热、腰痛、头痛,经相应处理,症状很快缓解。极个别患者出现暂时的小便潴留;未见严重不良反应。结论:UC-MSC静脉滴注联合鞘内注射治疗OPCA可以一定程度地改善患者的临床症状,提高患者生活质量,在一定程度上延缓病情进展,未见严重不良反应。     

间充质干细胞治疗急性肺损伤的研究进展

急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是一种常见的危重症,是重症患者发生急性呼吸衰竭的主要原因,也往往是多器官功能障碍综合征（multiple or-gan dysfunction syndrome MODS）中最早出现的器官功能障碍。     

人脐带间充质干细胞过敏性试验

目的：观察人脐带间充质干细胞对豚鼠的过敏性反应,为临床使用人脐带间充质干细胞的安全性提供参考。方法：培养扩增人脐带来源的间充质干细胞,制备成细胞生理盐水混悬液。将30只豚鼠分成3组,分别是模型1组、模型2组和对照组。2个模型组隔日肌注细胞生理盐水混悬液3次,实验1组于首次注射后第14天,实验2组于首次注射后第21天分别静脉注射混悬液进行攻击。观察动物有无过敏反应症状。结果：动物无明显过敏反应症状,反应级数为0级。结论：人脐带间充质干细胞免疫原性低,不易导致过敏反应。     

人脐带间充质干细胞连续静脉注射对大鼠的安全性及肝脏的影响

探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）多次注射对大鼠的安全性及肝脏的影响,为hUC-MSCs临床应用的安全性提供支持。方法 取SPF级健康SD大鼠50只,随机分成阴性对照组（生理盐水）、溶媒对照组（白蛋白）、hUC-MSCs高剂量（1.0×107 cells/kg）、中剂量（5.0×106 cells/kg）、低剂量组（2.5×106 cells/kg）,每组10只,尾静脉注射给药4次,1次/周。在末次给药后24 h,采集大鼠血样,检测血生化指标（TBIL、AST、ALT、GGT）、血清细胞因子(IFN-γ、IL-17、TNF-α)以及T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+);观察大鼠肝脏重量、脏体比指数及组织病理学变化;提取大鼠肝脏组织总RNA,qRT-PCR分析Act1、IL-17A、Hsp90aa1基因水平的表达情况。结果 hUC-MSCs高、中、低剂量组多次静脉注射后,大鼠血生化、血清细胞因子IFN-γ、IL-17、TNF-α以及T淋巴细胞亚群、肝脏重量、脏体指数及组织病理学变化与阴性对照组、溶媒对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。hUC-MSCs可明显降低肝组织中IL 17A mRNA表达水平,对Act1、Hsp90aa1 mRNA表达未见明显影响（P＞0.05）。结论 hUC-MSCs在1.0×107、5.0×106、2.5×106 cells/kg剂量下多次静脉注射大鼠安全性好,可下调IL-17A水平     

脐带间充质干细胞治疗肌萎缩侧索硬化的安全性与有效性研究

目的观察人脐带间充质干细胞（UC—MSC）治疗肌萎缩侧索硬化（ALS）的临床效果及不良反应。方法ALS30例,给予UC—MSC静脉滴注联合鞘内注射治疗,每次静脉滴注约3×10^7个细胞,鞘内注射约7×107个细胞,1次为1个疗程。采用ALSFRS评分量表及APPEL评分对患者治疗前及疗程结束后1周、1个月、3个月时神经功能进行评定,对比治疗前及治疗后上述各项指标的变化,并对患者年龄、病程、治疗前病情严重程度（ALSFRS评分）与治疗后改善程度相关性进行分析。结果治疗后1周、1个月、3个月与治疗前相比ALSFRS评分升高（P〈0．05）,APPEL评分降低（P〈0．05）。治疗后1个月与治疗后1周相比ALSFRS评分升高（P〈0．05）,APPEL评分降低（P〈0．05）。治疗后3个月与治疗后1个月相比,ALSFRS评分升高（P〉0．05）,APPEL评分降低（P〉0．05）,差异无统计学意义。患者年龄、病程、性别与症状改善程度无明显相关性（P〉0．05）;治疗前神经损伤程度与改善程度呈负相关（P〈0．05）。结论US—MSC鞘内注射联合静脉滴注治疗ALS,在一定程度上可延缓病情进展,未出现严重不良反应。     

骨髓间充质干细胞对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用

目的 观察经尾静脉输注的骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用.方法 采用密度梯度单个核细胞分离培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第4代时观察细胞形态、流式细胞仪检测细胞表面标志,定向诱导检测分化能力后备用.36只小鼠随机分为对照组,PBS治疗组,MSC治疗组.对照组气管内滴注生理盐水50 μl,PBS和MSC治疗组气管内滴注LPS制备急性肺损伤模型.造模后lh后经尾静脉输注MSC5× 106(MSCs治疗组)或PBS 100 μl(PBS治疗组或对照组).24h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞数、蛋白含量、细胞因子水平和肺组织中的MPO表达量.结果 与对照组比较,PBS治疗组肺组织病理损伤严重,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6和IL-10水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著升高.与PBS治疗组比较,MSCs治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著降低,但仍高于对照组水平,IL-10水平显著高于PBS治疗组和对照组.结论MSCs移植在LPS诱导的急性肺损伤早期阶段可有效改善肺组织病理损伤,减轻肺部炎症反应,降低肺水肿程度,这种治疗作用不依赖于MSCs移植后在肺内的定植数量.     

人脐带间充质干细胞在帕金森病的应用进展

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种复杂的神经系统疾病,其典型病理特征为与黑质多巴胺能(DA)神经元丢失有关的运动系统功能受损.目前尚无有效的治疗方法逆转DA神经元的进行性损失阻止PD的恶化.近年来,干细胞移植意逐渐被临床用于治疗神经退行性疾病,包括间充质干细胞(mesenchvmal ste...     

人脐带间充质干细胞在临床治疗中的研究进展

人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)是指存在于新生儿脐带中的一种多功能干细胞,其具有自我更新及多向分化潜能。与其他组织来源的干细胞相比,hUCMSCs具有来源丰富、易于分离、生物学形状稳定、增殖率高、低免疫原性和不违背伦理道德等优点,被认为是再生医学领域中一种具有广泛临床应用前景的细胞。经过多年来的大量研究和实验后,hUCMSCs被应用于人类临床疾病的治疗,且取得了不错的成效,为临床疾病的治疗提供了新思路。