牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐静脉内皮细胞MMP-9表达影响的研究

目的采用牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphysomanas gingivalis lipopolysaccharide,P.gingivalis-LPS)感染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察感染的内皮细胞中金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的变化,探讨P.gingivalis与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的关系。方法体外培养HUVECs,将不同浓度的P.gingivalis-LPS分别加入到单层融合后的HUVECs中,共同培养6、18、24 h,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HUVECs表达MMP-9的量。MTT法检测P.gingivalis-LPS对HUVECs增殖的影响。结果本研究条件下,应用不同浓度的P.gingivalis-LPS刺激HUVECs6、18、24 h后,细胞表达MMP-9的量升高(P<0.05)。经P.gingivalis-LPS处理后,HUVECs增殖活力较对照组明显下降(P<0.01)。结论 P.gingivalis-LPS能够上调HUVECs表达MMP-9的水平,进而加速AS的发生与发展。     

牙龈卟啉单胞菌GroEL对人脐静脉内皮细胞影响的研究

目的:探究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)的代谢产物GroEL对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖活性、凋亡及炎症反应的影响,以期为探讨P.g致心血管疾病的发病机制提供理论依据。方法:用不同浓度的P.g GroEL(2、4、6、8、10μg/mL)处理HUVEC 24 h,观察处理前后细胞形态的变化。通过CCK-8法检测HUVEC的增殖活性,流式细胞学检测细胞凋亡,RT-qPCR和ELISA法分别检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附因子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)的表达。结果:P.g GroEL处理HUVEC 24 h后,显著降低了细胞活力并增加了细胞凋亡率(P<0.05),且随着P.g GroEL浓度的增加,对细胞活性的抑制作用和细胞凋亡数量也逐渐增加。P.g GroEL还显著刺激了HUVEC分泌IL-6、IL-8、ICAM-1、VCAM-1、E-selectin(P<0.05)。结论:P.g GroEL以浓度依赖性方式抑...     

牙龈卟啉单胞菌感染对人脐静脉内皮细胞表达IL-8影响的研究

目的 研究牙龈卟啉单胞菌(porphyrmonas gingivalis,P.g)感染时人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelialcell,HUVEC)表达趋化因子白介素-8(interleukin-8,IL-8)的变化,了解P.g对其趋化功能的影响。方法 建立P.g侵入HUVEC的体外模型,采用酶联免疫吸附法(ELISA)研究P.g381和P.g33277菌株感染HUVEC 6、24 h后的培养上清液中IL-8的浓度。结果 ELISA结果显示当P.g381感染HUVEC 6、24 h和P.g33277感染HUVEC 6、24 h时,HUVEC分泌IL-8的水平明显升高(P<0.01);感染24 h时P.g381促进HUVEC表达IL-8的水平高于P.g33277(P<0.01)。结论 P.g侵入HUVEC后可促进其表达IL-8,从而上调其趋化功能,可能与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生发展相关。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖引起牙周炎症的机制和特点

革兰阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌和牙周炎密切相关，脂多糖是革兰阴性菌外膜中的主要结构成分，具有广泛的生物学活性，被认为是革兰阴性菌的主要毒力因子之一。本文就牙龈卟啉单胞菌脂多糖的化学组成和结构，所启动炎症信号通路及其起始受体，引起牙周炎症的机制和特点作一综述。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖引起牙周炎症的机制和特点

革兰阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌和牙周炎密切相关,脂多糖是革兰阴性菌外膜中的主要结构成分,具有广泛的生物学活性,被认为是革兰阴性菌的主要毒力因子之一。本文就牙龈卟啉单胞菌脂多糖的化学组成和结构,所启动炎症信号通路及其起始受体,引起牙周炎症的机制和特点作一综述。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐静脉内皮细胞表达趋化因子RANTES和分形素的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达调节活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子（RANTES）和分形素的影响。方法 应用不同质量浓度（200、500、1 000 ng·mL^-1）的Pg-LPS分别处理HUVEC 1、6、12、24 h,利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）及酶联免疫吸附（ELISA）法检测RANTES及分形素mRNA及蛋白质的表达变化。结果 在Pg-LPS与HUVEC共同培养1、6和12 h时,除培养时间为12 h、Pg-LPS质量浓度为200 ng·mL^-1组的RANTES mRNA和1 h、200 ng·mL^-1组RANTES蛋白表达与对照组无明显差异外,其余各实验组RANTES蛋白和mRNA表达量及分形素mRNA表达量均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;6 h时,二者mRNA表达量达到峰值,分别为对照组的4.88倍和6.20倍;刺激6 h后,RANTES蛋白和mRNA表达量及分形素的mRNA表达量均降低,24 h时,仅Pg-LPS质量浓度为500 ng·mL-1组与对照组相比有统计学差异（P<0.05）;分形素蛋白的表达量则仅在Pg-LPS浓度为1 000 ng·mL-1刺激6、12 h时与对照组相比有统计学差异（P<0.05）。结论 Pg-LPS感染具有上调HUVEC表达趋化因子RANTES和分形素的作用,可能在牙周炎促进动脉粥样硬化发生、发展的过程中起一定作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对泡沫细胞中NF-κB信号通路的影响

目的:研究牙龈卟咻单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P. gingivalis LPS)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞过程中和形成泡沫细胞后对NF-κB信号通路的影响.方法:用oxLDL诱导THP-1人单核细胞源性巨噬细胞形成泡沫细胞,在巨噬细胞和泡沫细胞中加入P. gingivalis LPS和oxLDL,利用免疫细胞化学技术检测NF-κB p65亚单位核转位情况,Western blot检测细胞质内IκB-α变化.结果:P. gingivalis LPS能促进巨噬细胞和泡沫细胞中p65亚单位核转位,在2 h时达到最高水平;也能降低细胞质内IκB-α水平,在2 h时达到最低水平;在2 h时,10 μg/ml比10、100 ng/ml、1μg/ml P. gingivalis LPS更能提高p65核转位率.结论:P. gingivalis LPS可以促进泡沫细胞形成过程中和形成后NF-κB信号通路的激活,促进动脉粥样硬化进展.     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞表达ICAM-1影响的研究

目的:分别观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)和大肠杆菌(E.coli)LPS对人主动脉内皮细胞(HAECs)在转录和翻译水平表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:在体外分别以P.gingivalisLPS和E.coliLPS刺激HAECs,实时荧光定量PCR技术检测ICAM-1基因表达,蛋白质印迹技术检测ICAM-1膜蛋白表达。采用SPSS18.0软件包中ANOVA对数据进行分析。结果:P.gingivalisLPS作用6 h后开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而E.coliLPS作用2 h后即开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。两种LPS均能在蛋白水平上调ICAM-1的表达,这种上调作用呈浓度和时间依赖,且P.gingivalisLPS的作用较之E.coliLPS要缓和。结论:P.gingivalisLPS能够在转录和翻译水平上调HAECs表达ICAM-1,提示P.gingivalisLPS在动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中可能发挥了重要作用。E.coliLPS可能与急性炎症性疾病有关而与AS无关。     

牙龈卟啉单胞菌与动脉粥样硬化发病的关系

慢性牙周炎是心血管疾病特别是冠心病的危险因素之一,然而其相关的生物学基础目前尚不清楚.笔者下面就与慢性牙周炎关系最为密切的牙龈卟啉单胞菌与动脉粥样硬化的相关性和牙龈卟啉单胞菌致动脉粥样硬化的可能机制以及Toll样受体在牙龈卟啉单胞菌与动脉粥样硬化相关性中的作用作一综述.     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌IL-1β和IL-6的影响研究

目的:研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)上清液对人脐静脉内皮细胞(hu-man umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分泌IL-1β、IL-6的影响。方法:酶消化法原代培养HUVECs,并对细胞进行来源鉴定,用5×106CFU/mL的Pg上清液刺激HUVECs 6、12、18、24 h后,RT-PCR检测IL-1β、IL-6 mRNA的表达;同时ELISA方法测定IL-1β及IL-6蛋白的水平。结果:Pg上清液刺激HUVECs后,IL-1βmRNA水平在12、18 h时蛋白明显高于对照组(P<0.05);IL-6 mRNA水平在12 h的表达明显高于对照组(P<0.05)。IL-1β蛋白在18、24 h的表达明显高于对照组(P<0.05);IL-6蛋白在12、18、24 h 3个时点均明显高于对照组(P<0.05)。结论:5×106CFU/mL Pg上清液可促进人脐静脉内皮细胞IL-1β和IL-6的基因及蛋白表达,提示Pg感染可能在As的发生发展中起一定作用。     

牙龈卟啉单胞菌的研究进展

牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis,P. gingivalis)是牙周感染最重要的致病菌,与慢性牙周炎的发生发展密切相关。其致病性归因于一系列毒力因子如菌毛、荚膜、脂多糖、牙龈蛋白酶等。相关毒力因子的致病机制引起了国内外学者的广泛关注和重视。本文就牙龈卟啉单胞菌表面结构菌毛、荚膜及菌体分泌脂多糖、牙龈蛋白酶等重要致病因子的致病机制研究进展做一综述,以期为牙周炎的防治提供新的靶点和思路。     

大鼠实验性牙周炎中牙龈卟啉单胞菌rgpB和kgp变化的研究

目的:通过建立大鼠实验性牙周炎模型,检测不同时段大鼠上颌第一磨牙龈下人工定植的牙龈卟啉单胞菌、牙龈素rgpB和kgp相对含量的改变,动态观察牙周炎发展不同阶段牙龈卟啉单胞菌致病基因的变化。方法:选择6周的成年雄性大鼠13只,应用钢丝结扎法和细菌种植法建立大鼠实验性牙周炎模型。分别在4周和8周取上颌第一磨牙龈下菌斑,提取细菌DNA,应用PCR方法进行牙龈卟啉单胞菌、牙龈素基因rgpB和kgp特异引物扩增,应用SPSS13.0统计软件,分析大鼠牙周炎不同时段rgpB和kgp的相对变化。结果:大鼠实验性牙周炎模型,龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的相对含量实验组明显高于对照组,8周组高于4周组;实验组牙龈卟啉单胞菌牙龈素rgpB和kgp明显高于对照组,4周组和8周组rgpB和kgp相对含量无显著性差异。结论:rgpB基因和kgp基因与牙周炎的致病性有关而与牙周炎的严重程度可能无直接相关。     

牙龈卟啉单胞菌PG1055基因在临床菌株中的表达

目的应用基因芯片技术检测PG1055基因在不同人群的牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)中分布,探讨这些基因与牙周临床指数之间的关系。方法取龈下菌斑进行细菌分离培养,以临床采集样本提取的DNA为探针,以抑制消减杂交技术获得P.gingivalisW83的特异基因片段PG1055为目标序列,采用Cy5荧光标记目标序列。应用基因芯片技术检测PG1055基因在牙周病患者及健康人群的牙龈卟啉单胞菌中的分布。结果PG1055基因在牙周病患者及健康人群中的检出率有统计学差异,并且与牙周临床指数相关。结论PG1055基因与P.gingivalis的致病性有关。     

槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激的人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响研究

目的研究槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g LPS)刺激的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学行为的影响。方法采用DNA片段凝胶电泳、CCK-8法、细胞划痕法观察不同浓度槲皮素(10、20、50、100μmol/L)对体外培养HGFs的毒性作用,以及对HGFs增殖与迁移的影响。采用P.g LPS刺激HGFs来建立体外炎症刺激模型,通过流式细胞术、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测、酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进一步观察槲皮素对HGFs凋亡、ROS的产生及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)表达的影响。结果槲皮素对HGFs无毒性作用,且对HGFs的增殖无影响(P>0.05)。各组细胞迁移率总的比较,差异有统计学意义(F=9.973,P<0.05),在处理48 h后,20μmol/L槲皮素处理组细胞迁移率大于10、50μmol/L槲皮素处理组以及对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。槲皮素对P.g LPS刺激的HGFs凋亡具有抑制作用,且其能够抑制并预防P.g LPS刺激的HGFs中ROS相对产生量增加现象(均P<0.05)。槲皮素处理显著抑制了P.g LPS诱导的TNF-α表达增加现象(P<0.05),而槲皮素处理组PGE2的表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论浓度为20μmol/L的槲皮素能够促进体外培养HGFs的迁移,且具有抗氧化、抗炎保护作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对高脂血症兔腹腔巨噬细胞炎症相关因子基因表达的影响

目的 比较牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis on lipopolysaccharide,Pg-LPS)对健康和高脂血症兔腹腔巨噬细胞炎症相关因子基因表达的影响.方法 将健康新西兰兔12只随机分为2组,分别给予普通饲养喂养(健康兔)和高脂饲料喂养,6周后建立高脂血症模型(高脂兔).采用腹腔灌洗法分别获得健康和高脂兔巨噬细胞,将健康和高脂兔巨噬细胞均随机分为对照组、Pg-LPS组(1μg/mL)及阳性对照组大肠杆菌-脂多糖(Escherichia,E.coli-LPS)组(1μg/mL),24 h后采用实时PCR法分别检测各组巨噬细胞中C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、白介素8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA的表达水平.结果 高脂兔对照组巨噬细胞的CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于健康兔对照组巨噬细胞;相较于对照组,高脂兔和健康兔Pg-LPS组巨噬细胞的CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达均升高,且高脂兔Pg-LPS组巨噬细胞以上因子的表达水平高于健康兔Pg-LPS巨噬细胞(P<0.05).结论 Pg-LPS可增强高脂血症兔巨噬细胞炎症相关因子mRNA的表达.     

牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶的研究进展

牙周炎是一种牙齿支持组织的慢性炎症性疾病,能引起结缔组织和牙槽骨的破坏而导致渐进性附着丧失,最终可能导致牙齿脱落.革兰氏阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周炎的重要致病菌,具有包括脂多糖、菌毛、血细胞凝集素和胞外蛋白酶在内的多种毒力因子,其中牙龈蛋白酶提供的蛋白水解活性占该生物体产生的一般蛋白水解活性的大部分(85％),...     

DHA对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导巨噬细胞炎症的抑制作用

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)对牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症的抑制作用.方法 用CCK-8方法检测DHA对P.g-LPS诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞的毒性.将P.g-LPS与RAW264.7细胞共培养24 h后,更换含有DHA的培养基培养24 h,实时荧光逆转录定量PC...