新疆5种臭阿魏对小鼠宫颈癌U14细胞的体内外抑制作用研究

目的 研究新疆5种臭阿魏乙醇提取物的体内及体外对鼠源性宫颈癌U14细胞的抑制作用。方法 制备新疆5种臭阿魏根的乙醇提取物，MTT比色法检测5种臭阿魏乙醇提取物的不同浓度组(9.375、18.75、37.5、75、150、300μg/mL)对小鼠宫颈癌U14细胞的增殖抑制作用。建立宫颈癌U14小鼠荷瘤模型，随机分组后连续灌胃给药12 d,剥取肿瘤组织，计算各组抑瘤率。检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血肌酐(Cre)、胱抑素C(Cyc C)的值。HE染色观察各组肿瘤病理组织形态。结果 大果阿魏、新疆阿魏、托里阿魏、阜康阿魏、圆锥茎阿魏乙醇提取物对小鼠宫颈癌U14细胞的IC₅₀分别为50.84、59.55、133.4、181.7、202.2μg/mL,提示大果阿魏抑制作用最强，新疆阿魏次之，托里阿魏、阜康阿魏、圆锥茎阿魏的抑制作用较差。大果阿魏与新疆阿魏高、低剂量组小鼠的瘤重与模型组相比较明显减轻(P<0.05)。5种臭阿魏均有一定抑瘤作用，其中大果阿魏高、低剂量组及新疆阿魏高、低剂量组的抑瘤效果更好，抑瘤率分别为47.12%、45.19%、49.1...     

丁香活性组分体外抗结肠癌活性及对细胞自噬的影响

目的 体外实验评价丁香活性组分(active fraction from clove,AFC)的抗结肠癌活性,探讨AFC对敏感结肠癌细胞自噬的影响。方法 采用Cell Counting Kit-8 assay检测AFC对多株结肠癌细胞LOVO、HCT116、HCT8、SW620增殖的抑制作用,体外筛选敏感的人结肠癌细胞。GFP-LC3转染后荧光显微镜检测自噬水平的强弱,透射电镜观察自噬体和自噬溶酶体的形成,Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达。结果 AFC对LOVO、HCT116、HCT8、SW620细胞的IC₅₀分别是280.90±12.61、113.50±7.83、211.71±7.29、174.92±9.52μg/mL,最敏感的细胞是HCT116,最佳干预时间为48 h。AFC处理细胞48 h后,荧光显微镜观察到HCT116细胞GFP-LC3转染后出现明显自噬斑点,透射电镜观察到HCT116细胞大量的自噬体和自噬溶酶体形成。Western blot结果表明,HCT116细胞AFC处理组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Becl...     

瑶药小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨瑶药小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖的影响,评价其体外抗肿瘤活性。方法制备不同终浓度(200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL)小钻80%乙醇提取物及顺铂。取对数生长期人乳腺癌细胞MCF-7、人结直肠癌细胞LOVO、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16,采用四甲基噻唑蓝法检测不同浓度小钻乙醇提取物及顺铂作用48 h后4种肿瘤细胞的增殖情况,计算增殖抑制率及半数抑制浓度(IC₅₀)。结果各浓度小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖均有一定抑制作用,抑制率随浓度的增加而升高(均P<0.05),但终浓度最高为200μg/mL时抑制率<80%。小钻乙醇提取物对4种细胞的IC₅₀值均>20μg/mL,而顺铂的IC₅₀值均<10μg/mL,小钻乙醇提取物对4种细胞的抑制作用均低于顺铂(均P<0.05)。结论小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞的体外增殖有一定的抑制作用,但其致死作用不明显,活性低于顺铂。     

硬脂酰辅酶A去饱和酶1在结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药中的作用

目的 通过建立结肠癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药细胞株,探讨硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl CoA desaturase 1,SCD1)在结肠癌细胞5-FU耐药中的作用.方法 采用5-FU浓度间歇性递增与高浓度反复诱导筛选的方法建立对5-FU耐药的结肠癌细胞株HCT116(HCT116/5FU).CCK-8实验检测HCT116、HCT116/5FU、HCT116-Control、HCT116-OE-SCD1 各组细胞在5-FU 作用下的存活率以及半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,1C50).制作结肠癌组织和癌旁组织芯片并以免疫组化方法检测SCD1的表达.定量PCR及Western blot检测各组细胞SCD1的表达;CCK-8实验、平板克隆形成及结晶紫染色实验检测各组细胞存活状况.Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.HCT116-Control、HCT116-OE-SCD1裸鼠皮下成瘤实验观察SCD1对肿瘤生长的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达.结果 HCT116的5-FU IC50为(0.90±0.06)μg/mL,HCT116/5FU的5-FU IC50为(15.02±0.81)μg/mL,耐药倍数约为16.7倍.SCD1在耐药结肠癌组织内的表达高于普通结肠癌组织和对应的结肠癌癌旁组织.HCT116/5FU中SCD1的表达显著高于HCT116(P＜0.01).过表达SCD1能降低结肠癌细胞的凋亡率.裸鼠皮下成瘤实验显示过表达SCD1能增加结肠癌细胞对5-FU的抵抗.在5-FU处理48 h后,HCT116-OE-SCD1组细胞凋亡相关蛋白bcl-2、caspase3的表达低于HCT116-Control组(P＜0.01).结论 成功建立了5-FU获得性耐药的结肠癌细胞模型,SCD1促进结肠癌细胞对5-FU的抵抗.     

黄连素对人结肠癌细胞株THC-8307奥沙利铂耐药性的影响

目的探讨黄连素对人结肠癌细胞株THC-8307奥沙利铂(OXA)耐药性的影响。方法 (1)人结肠癌细胞株THC-8307和耐OXA结肠癌细胞株THC-8307/OXA均分为空白对照组、黄连素5μg/mL组、黄连素10μg/mL组、黄连素20μg/mL组进行实验,除空白对照组(不加入任何药物)外,各组加入相应浓度的黄连素进行干预。干预48 h后,观察各组细胞形态并检测各组细胞存活率。(2)THC-8307细胞和THC-8307/OXA细胞均分为OXA对照组、黄连素5μg/mL+OXA组、黄连素10μg/mL+OXA组、黄连素20μg/mL+OXA组进行实验,给予相应的药物进行干预48 h后,观察各组细胞形态,检测各组细胞存活率,并计算各组的半数抑制浓度(IC₅₀)及逆转倍数。结果 (1)空白对照组、黄连素5μg/mL组、黄连素10μg/mL组、黄连素20μg/mL组的THC-8307细胞和THC-8307/OXA细胞形态和生长状态无明显差异,各组细胞存活率比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。(2)在THC-8307细胞中,OXA对照组、黄连素5μg/mL...     

载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116的杀伤作用

目的:探讨载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116的杀伤作用。方法:设HCT116组、细胞囊泡组(EVs混悬液5mL、10⁶个/mL)、5-氟尿嘧啶组(5-氟尿嘧啶5mL、30μg/mL)、5-氟尿嘧啶载药囊泡组(EVs混悬液5mL、10⁶个/mL+5-氟尿嘧啶5mL、30μg/mL),以上各组细胞每孔设6个平行样,培养72h。培养结束后,测定细胞增殖侵袭、凋亡水平,RT-PCR法及蛋白印迹法测定各组细胞miR-128、PIK3水平。结果:细胞囊泡组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、迁移距离、凋亡率、miR-128水平、PI3K mRNA和蛋白水平与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组、5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、迁移距离、PI3KmRNA和蛋白水平明显低于HCT116组、细胞囊泡组(P<0.05),凋亡率、miR-128水平明显高于HCT116组、细胞囊泡组(P<0.05);5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、迁移距离、P...     

拟康氏木霉胞外多糖联合奥沙利铂可体外协同抑制结直肠癌细胞的增殖

目的 探讨拟康氏木霉胞外多糖（EPS）联合奥沙利铂（Oxa）用药对结肠癌细胞HCT116的协同抑制作用。方法 实验分为Control组（0 μg/mL）、Oxa组（8 μg/mL Oxa）、EPS组（100 μg/mL EPS）、EPS+Oxa组（8 μg/mL Oxa+100 μg/mL EPS）。CCK-8检测细胞活力，CompuSyn软件拟合Fa-CI曲线评价联用效果。流式检测凋亡和周期、划痕实验和transwell实验检测细胞迁移能力，Oxa和EPS相关基因与结直肠癌相关基因取交集进行PPI分析以及GO和KEGG富集分析。结果 Oxa单用或与EPS联用处理HCT116细胞，均可使HCT116细胞活力受到抑制，并呈现剂量与时间依耐性，两者联用有明显的协同作用（CI<1）。两药联用组的细胞总凋亡率与Oxa组以及对照组比较均显著升高（P<0.05）；联合用药组处于S期的比例高于其他各组。EPS和Oxa均具有抑制HCT116细胞迁移的作用，两者联用后抑制作用更为明显。KEGG分析显示主要涉及耐药、凋亡、血管新生等通路。结论 EPS联合奥沙利铂可协同抑制HCT116细胞增殖，促进该细胞凋亡和细胞S周期阻滞、抑制细胞迁移，铂耐药、PI3K-Akt、MAPK等信号通路发挥了关键作用。     

鱼藤素对结肠腺癌HCT116细胞ACL表达、上皮间质化及生物学行为的影响

目的 探讨鱼藤素对结肠腺癌HCT116细胞ACL表达、上皮间质化及增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 选未加药NCM460细胞作为空白组,通过药物毒性实验检测鱼藤素对人正常结肠NCM460细胞无毒性作用的最大浓度(TC₀),将TC₀稀释为3个梯度浓度作用于结肠腺癌HCT116细胞为鱼藤素组,设置正常培养HCT116细胞为对照组,另培养HCT116细胞予以白杨素8μmol/L培养设为阳性对照组。通过噻唑蓝(MTT)法、平板细胞克隆形成实验、划痕实验及Transwell小室检测各组细胞增殖能力、克隆能力、迁移能力及侵袭能力;Western blot检测各组细胞中ACL、N钙黏蛋白(N-cadherin)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及Snail蛋白表达。结果 鱼藤素对人正常结肠NCM460细胞TC₀为40μmol/L,以鱼藤素40μmol/L为最高浓度,梯度递减为10、20、40μmol/L作用于HCT116细胞。与对照组比较,鱼藤素组(10、20、40μmol/L)及阳性对照组细胞增殖抑制...     

昆明山海棠总生物碱对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究昆明山海棠总生物碱(total alkaloids of tripterygium hypoglaucum hutch,THHta)对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测THHta对HCT116细胞增殖的抑制作用;用倒置及荧光显微镜观察THHta作用后HCT116细胞形态的变化;流式细胞术检测THHta对HCT116细胞周期及凋亡的影响,Western bolt检测凋亡相关caspase-3及PARP蛋白表达.结果 THHLa能显著抑制HCT116细胞增殖,抑制率与剂量和时间呈依赖关系.THHta作用HCT116细胞48、72 h的IC_(50)值小于20 μg/ml.THHta(10μg/ml)能诱导HCT116细胞G_0/G_1期比例增加及细胞凋亡,caspase-3活化及PARP蛋白剪切显著增强.结论 THHta能显著抑制HCT116细胞增殖,并可诱导HCT116细胞G_0/G_1期阻滞及细胞凋亡.     

紫草素体外对人结肠癌生长抑制的作用

目的研究紫草素对体外培养的人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,并初步探讨其潜在的调节作用机制。方法体外正常培养的HCT116细胞分别给予不同浓度的紫草素刺激,MTT法检测HCT116细胞的增殖情况,AnnexinV-FITC/PI双染后,流式检测HCT116细胞凋亡,q RT-PCR检测细胞中Bcl-2、Bax的m RNA表达,Western blot检测HCT116细胞中Akt蛋白磷酸化水平。结果 10～80μg/m L浓度的紫草素对HCT116细胞增殖均有明显的抑制作用,并能促进凋亡;随紫草素浓度增加,HCT116细胞Bcl-2的m RNA表达逐渐下降(P<0.05),Bax的m RNA表达水平逐渐升高(P<0.05),p-Akt蛋白表达逐渐减少(P<0.05)。结论紫草素可以诱导体外培养的人结肠癌细胞HCT116发生凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活,进一步降低Bcl-2mRNA表达,增加Bax的m RNA表达有关。     

白花蛇舌草提取物对结肠癌细胞抑制作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株增殖的抑制作用.方法采用甲基噻唑蓝(MTT)法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).结果在同一浓度下,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制作用随着作用时间的延长而增强,0.08 mg/mL的白花蛇舌草乙醇提取物作用CT-26细胞24 h、48 h、72 h,细胞抑制率分别为(16.67±9.35)%,(34.66±9.23)%,(40.07±9.16)%.白花蛇舌草乙醇提取物作用24 h、48 h、72 h的IC50值分别为0.315,0.155,0.115.在同一作用时间内,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制率随着药物浓度的增加而增加,在72 h内不同浓度药物(0.06 mg/mL,0.08 mg/mL,0.10 mg/mL,0.12 mg/mL,0.14 mg/mL,0.16 mg/mL,0.18 mg/mL,0.20 mg/mL)作用下,细胞抑制率分别为(35.46±3.59)%,(40.07±9.16)%,(40.77±6.92)%,(52.81±1.87)%,(54.22±2.35)%,(68.72±3.71)%,(70.04±8.03)%,(71.84±3.12)%.结论白花蛇舌草乙醇提取物可以抑制BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株的增殖,其对CT-26细胞增殖的抑制作用呈现时效和量效的关系.     

叶黄素联合氟尿嘧啶对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察叶黄素联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人绒癌JEG-3细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用CCK-8法检测药物的IC₅₀值；平板克隆实验检测各组药物对JEG-3细胞的抑制作用；流式细胞术检测细胞周期以及凋亡情况。结果 CCK-8实验结果显示，叶黄素的IC₅₀值为26.3μmol/L,5-FU的IC₅₀值为10.6mg/L,联合用药后，IC₅₀值降为0.8mg/L。克隆形成实验显示当与10μmol/L叶黄素合用时对JEG-3细胞有显著抑制作用。流式细胞周期实验结果表明，单药与联合用药对细胞周期没有明显的影响。细胞流式凋亡实验结果显示：相较于单独用药，联合用药对JEG-3细胞的杀伤作用明显增强。结论 叶黄素显著提高5-FU对JEG-3细胞的杀伤作用。     

积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖及自噬水平的影响

目的:观察积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖和自噬水平的影响。方法:用10、30、60、90μmol/L的积雪草酸作用于结肠癌HCT116细胞24、48 h,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率;用MDC自噬特异性荧光染料观察自噬囊泡的形成情况;蛋白质印迹法检测30、60、90μmol/L的积雪草酸作用12 h和90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h的细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62、p-m TOR、p-4EBP1的表达。结果:积雪草酸90μmol/L对结肠癌HCT116细胞有明显抑制作用;30、60、90μmol/L积雪草酸均可以诱导结肠癌细胞发生自噬,90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h,自噬蛋白LC3-Ⅱ生成明显增加;90μmol/L积雪草酸与氯喹5μmol/L共同作用于癌细胞12 h,能促进自噬潮的产生;积雪草酸可抑制p-m TOR、p-4EBP1的表达。结论:积雪草酸能明显抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性地抑制m TOR-4EBP1通路来诱导自噬潮的产生。     

T淋巴细胞检测及PS外翻评估GVT效应抗结肠癌的实验研究

目的：构建鼠源CT-26细胞结肠癌模型评估移植物抗肿瘤(GVT)效应,通过检测磷脂酰丝氨酸(PS)外翻及T淋巴细胞的变化进行判断。方法：通过BALB/c小鼠构建的CT-26结肠癌模型分为A组、B组、C组,其中A组在接种鼠源CT-26结肠癌细胞后不予处理;B组在构建模型后,于第7天输注数量0.5×10⁷/只脾淋巴细胞、第14天输注数量0.5×10⁷/只脾淋巴细胞、第21天输注数量1.0×10⁷/只脾淋巴细胞;C组在小鼠CT-26结肠癌腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg(20 mg/mL),同时分别在第7、14、21天输注细胞数量分别为0.5×10⁷/只、0.5×10⁷/只、1.0×10⁷/只脾淋巴细胞。通过流式细胞仪检测外周血CD3⁺T细胞和腹水中PS外翻表达阳性率。结果：C组CD3⁺T细胞较A、B组增多(P<0.05);第21天检测PS外翻结果发现,A组PS外翻表达阳性率高于B组(t=2.12,P<0...     

对香豆酸诱导弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞内质网应激介导的凋亡

目的 探讨对香豆酸诱导弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞内质网应激介导的凋亡。方法 选择弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY1),以不同浓度对香豆酸(0、0.4、0.8、1.6、3.2 mmol/L)作用于OCI-LY1细胞,采用CCK8法检测其抑制率及半数抑制浓度(IC₅₀);随后设置分组：(1)空白对照组、对香豆酸(1/2 IC₅₀组、IC₅₀组、2 IC₅₀组);(2)空白对照组、对香豆酸IC₅₀组、4-PBA组(5 mmol/L)、4-PBA+IC₅₀组,采用CCK8检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞GRP78、ATF6、CHOP、p-PERK、p-IRE1α蛋白相对表达量。结果 对香豆酸以剂量依赖性方式抑制OCI-LY1细胞增殖,其IC₅₀值为2.601 mmol/L;与空白对照组相比,1/2 IC₅₀组、IC₅₀组、2 IC_5...     

丙泊酚对结肠癌细胞增殖、迁移及Wnt1和β-catenin表达的影响

目的 探讨丙泊酚对不同分化程度人结肠癌细胞体外增殖、迁移及肿瘤细胞中Wnt1、β-catenin mRNA表达的影响。 方法 选取2株分化程度不同的人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)和LoVo(低分化),分别按丙泊酚浓度分为P₀(0 μg/mL)、P_6.25(6.25 μg/mL)、P₂₅(25 μg/mL)、P₁₀₀(100 μg/mL)组,CCK-8法检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞生长增殖的影响,Transwell迁移实验检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞迁移的影响,比较不同分化程度结肠癌细胞对丙泊酚的敏感性。Real-time PCR检测丙泊酚处理后Caco-2和LoVo细胞中Wnt1和β-catenin基因mRNA的表达。 结果 CCK-8检测结果显示,对于高分化Caco-2细胞,P₁₀₀组处理24 h与P₀组相比细胞存活率差异有统计学意义(P<0.001),P₂₅组处理48 h与P₀组相比,差异有统计学意义(P<0.05);对于低分化LoVo细胞,P₁₀₀组处理24 h与P₀组相比,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),P₂₅组处理48 h与P₀组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明,Caco-2细胞系P_6.25、P₂₅、P₁₀₀组与P₀组OD_{570 nm}值比较,差异有统计学意义(P<0.001);LoVo细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组OD_{570 nm}值比较,差异有统计学意义(P<0.001)。Real-time PCR结果表明,Caco-2细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),LoVo细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001);Caco-2细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001),LoVo细胞系P₁₀₀组与P₀组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001)。 结论 丙泊酚呈剂量和时间依赖性抑制人结肠癌细胞Caco-2和LoVo的生长增殖及迁移。Caco-2较LoVo对丙泊酚的抑制作用更敏感。     

Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的 建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法 采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC₅₀值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC₅₀值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果 成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC₅₀值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论 RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。     

TBBPA-DHEE暴露对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞的影响及机制

目的:研究四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚[tetrabromobisphenol A bis(2-hydroxyetyl) ether, TBBPA-DHEE]对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响及潜在的作用机制。方法:将PC12细胞随机分为5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(0.05%二甲基亚砜)、TBBPA-DHEE低剂量组(5μg/mL)、中剂量组(20μg/mL)和高剂量组(35μg/mL),按分组对应处理48 h;通过MTT实验分析TBBPA-DHEE对PC12细胞的半数抑制浓度(IC₅₀);采用试剂盒检测PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛和活性氧含量,以及细胞培养液中NO和Ca²⁺含量;采用ELISA法检测PC12胞内电压门控钙离子通道(voltage-gated calcium channel, VGCC)含量;采用蛋白质免疫印迹法测定钙离子信号通路相关蛋白表达。结果:TBBPA-DHEE(≥20μg/mL)暴露显著抑制PC12细胞活力,半数抑制浓度为33.4μg/mL;与对照组相比,5、20和35μ...     

靶向结直肠癌的小白菊内酯脂质体纳米颗粒诱导程序性坏死并改善T细胞耗竭

目的 研究小白菊内酯(PTL)诱导结直肠癌细胞程序性坏死,并通过调节T细胞耗竭抑制结直肠癌的发展的机制,并通过构建其靶向脂质体改进其临床应用。方法 通过CCK8实验检测不同结直肠肿瘤细胞经PTL处理后的增殖能力。利用ROS与LDH检测分析PTL诱导MC38细胞死亡的方式并进行蛋白免疫印迹分析。将24只小鼠随机分成对照组(等量生理盐水)、低剂量PTL组(5 mg/kg)与高剂量PTL组(15 mg/kg),通过在小鼠腹股沟皮下注射MC38细胞构建皮下瘤模型,给药后检测各组小鼠皮下瘤的重量与CD8⁺T细胞的浸润情况,分析CD8⁺T细胞耗竭表型的变化。构建PTL脂质体并对其进行表征。通过在小鼠回盲部移植肿瘤构建结直肠癌原位移植瘤模型,将32只小鼠随机分成对照组(等量生理盐水)、PTL处理组(100μg/mL)、低剂量靶向脂质体TCP-1-PTL-LNPs组(100μg/mL)和高剂量TCP-1-PTL-LNPs组(200μg/mL),尾静脉注射给药,通过免疫组化分析CD8在肿瘤中的表达情况。结果 多种结直肠癌细胞(SW480、DLD1、HCT116...     

姜黄素对人视网膜色素上皮细胞增殖和VEGF表达的影响

目的 探讨姜黄素对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 (1)采用不同浓度(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL)的姜黄素干预hRPE细胞1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d,同时设置空白对照组(不给予姜黄素干预)。采用CCK-8法检测各时间点不同浓度姜黄素对hRPE细胞增殖的影响，采用流式细胞仪检测各时间点各组细胞周期时相分布情况。(2)将hRPE细胞分为姜黄素组和对照组，姜黄素组加入10μg/mL的姜黄素，对照组加入等体积培养液，采用实时荧光半定量PCR检测各组hRPE细胞VEGF mRNA的表达水平。结果 (1)各浓度姜黄素对hRPE细胞均有抑制作用(均P<0.05),且随着药物浓度的增大、作用时间的延长，其抑制率呈升高趋势，整体呈现剂量和时间依赖性。(2)不同浓度姜黄素干预后，G₀/G₁期细胞比例均大于空白对照组，S期细胞比例和G₂/M期细胞比例均小于空白对照组(均P<0.05)。(3)姜黄素组hRPE细胞VEGF mRN...